柯萨奇病毒B3感染人宫颈癌细胞株HeLa细胞后Bad mRNA表达的意义

目的探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的Bad mRNA表达的意义。 方法体外培养的HeLa细胞通过CVB3感染建立模型,通过倒置显微镜下观察CVB3感染HeLa细胞后在不同时间点(3 h、6 h、9 h、12 h、24 h)细胞形态学变化,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bad mRNA的表达。采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析,两组Bad mRNA的表达水平采用均数±标准差表示,显著性比较采用t检验。 结果CVB3感染HeLa细胞后对照组各时间点无形态上的变化;病毒组随着感染时间的延长,逐渐出现细胞病变效应,以感染24 h后最明显。对照组各时间点Bad mRNA的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),病毒组各时间点Bad mRNA的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),但感染24 h后病毒组Bad mRNA[(0.61±0.06) s]表达低于对照组[(0.76±0.06) s],差异有统计学意义(t＝－3.445,P<0.05),而3 h、6 h、9 h、12 h后病毒组和对照组Bad mRNA表达量的比较差异无统计学意义(t＝－0.97,－0.43,－3.9,－0.97;P>0.05)。 结论促凋亡基因Bad mRNA在CVB3病毒感染的HeLa细胞中发挥促凋亡作用。     

慢病毒介导的Sema3A基因转染对心肌细胞凋亡的影响

目的：通过慢病毒转染改变心肌细胞Sema3A表达,研究其对原代培养的心肌细胞凋亡的影响。方法：检测0.5-24h缺氧对乳鼠心肌细胞Sema3A的表达的影响。Sema3A慢病毒转染后,蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白酶片段（Cleavedcaspase-3）表达,缺口末端标记法检测凋亡细胞并计算凋亡率。结果：随着缺氧时间延长,Sema3A表达呈下降趋势。增加细胞Sema3A表达,cleaved caspase-3表达上调（P〈0.05）,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。抑制缺氧2h的心肌细胞Sema3A的表达,cleaved caspase-3表达下调（P〈0.05）,细胞凋亡率下降（P〈0.05）。结论：Sema3A对心肌细胞有诱导凋亡作用。心肌细胞缺氧损伤后,可能通过下调Sema3A表达减少心肌细胞凋亡。     

黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的影响

[目的]探讨黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因与蛋白表达的影响.[方法]Balb/C小鼠50只随机分5组（每组10只）,A组空白对照组：腹腔无菌注射不含病毒的Eagle＇s培养基0.1 mL,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;B组病毒性心肌炎对照组：小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含50%组织感染率（TCID50） 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组（分别为C、D、E组）,在腹腔注射0.1 mL内含TCID50 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/（kg·d）]0.1 mL灌胃,共7 d.采用缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.[结果]与A组比较,B组心肌细胞凋亡发生率增高（0.57±0.16vs 0.06±0.02,P〈0.01）;抑制凋亡因子Bcl-2基因（0.52±0.12 vs 0.76±0.11,P〈0.01）及蛋白（6.08±1.15 vs 12.38±3.05, P 〈0.01）表达下降,而促进凋亡因子Bax基因（0.79±0.12 vs 0.61±0.14, P 〈0.01）及蛋白（6.21±1.52 vs 3.01±0.75, P 〈0.01）表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低（0.58±0.14vs0.87±0.12,P〈0.05）.与B组比较,E组CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数（0.09±0.03vs 0.57±0.16,P〈0.05）降低,Bcl-2基因（0.74±0.12 vs 0.52±0.12,P〈0.05）及蛋白水平（11.82±2.96 vs 6.08±1.15, P 〈0.05）表达增强,Bax基因（0.63±0.13 vs 0.79±0.12,P〈0.05）及蛋白（3.15±0.72 vs 6.21±1.52,P〈0.05）水平表达下降.[结论]黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进抑制凋亡基因Bcl-2表达,而抑制促凋亡Bax基因表达.     

刺参黏多糖对人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨刺参黏多糖（Sjamp）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法以0～1.6g/LSjamp分别处理HeLa细胞72h后,以Fluo-3/AM检测宫颈癌HeLa细胞内钙离子浓度的变化,并应用流式细胞仪观察Sjamp对人HeLa细胞凋亡率的影响。结果Sjamp作用后的人HeLa细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系（F=505.71,P〈0.05）;Sjamp作用后的人HeLa细胞内钙离子浓度升高且与药物剂量呈依赖关系（F=247.46,P〈0.05）。结论Sjamp能剂量依赖性地诱导HeLa细胞凋亡,而细胞内钙离子浓度增高可能是其诱导凋亡的机制之一。     

苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制

目的探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以不同浓度（0.5、1.0、1.5、2.0g/L）的苦参碱分别处理HeLa细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）、4E结合蛋白1（4E-BP1）蛋白表达情况;1.0g/L的苦参碱作用HeLa细胞1、3、6、12h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。结果苦参碱明显抑制HeLa细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性：在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=235.035,P〈0.05）;在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=320.207,P〈0.05）;2.0g/L苦参碱作用72h对HeLa细胞增殖抑制率最大,为（65.30±2.17）%。不同浓度苦参碱处理HeLa细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明显变化（F=0.171、0.932,P〉0.05）。1.0g/L苦参碱作用于HeLa细胞不同时间后,细胞中eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性（F=43.48、107.23,P〈0.01）。结论苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌HeLa细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇（Res）对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E（p-eIF4E）、磷酸化4E结合蛋白1（p-4E-BP1）和半胱氨酸蛋白酶蛋白3（caspase-3）的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=93.76~637.22,P〈0.01）;在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=8.79~29.99,P〈0.01）。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少（t=14.93、4.78,P〈0.01）,caspase-3蛋白表达较对照组增加（t=10.68,P〈0.01）。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

同种异基因成骨细胞对混合淋巴细胞反应体系中T细胞的免疫抑制

背景：由同种异基因骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞移植免疫反应各家报道不一致,差别明显。目的：体外观察由骨髓间充质干细胞诱导而成的成骨细胞对T细胞的免疫调节作用及特点。方法：用Ficoll-Hypaque梯度密度离心法分离出兔骨髓单个核细胞,体外扩增,获取第3代细胞,经典化学方法诱导为成骨细胞,将其按照不同的比例加入到T细胞形成双向混合淋巴细胞培养体系中,在第3,5,7天,用MTT比色法检测各组混合淋巴细胞培养体系中的T细胞增殖情况,24h后用流式细胞仪分析各组T细胞亚群凋亡情况。结果与结论：诱导后成骨细胞混合淋巴细胞培养体系中,成骨细胞对T细胞的增殖有抑制作用,在一定范围内,抑制作用具有量效关系。诱导后成骨细胞剂量大,时间延长,抑制程度增强;3次平均抑制率相比：1：20组低于1：80组（P〈0.01）;1：40组低于1：80组（P〈0.05）;诱导后成骨细胞能引起T细胞亚群凋亡,其中CD4＋（凋亡率8.57%）亚群不如CD8＋（凋亡率15.31%）细胞亚群凋亡显著（P〈0.01）。结果显示诱导的成骨细胞在体外能够通过细胞凋亡途径抑制T细胞的增殖,特别是CD8＋。但这种抑制不是特别强,表明诱导的成骨细胞虽有一定的免疫性,但其免疫性较低。     

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株的凋亡作用

目的：探讨三氧化二砷对HL-60的诱导凋亡作用。方法：琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoecst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化。用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：10μmol/L三氧化二砷处理HL-60细胞24~48 h可见到DNA出现梯形条带;处理24~48 h HL-60细胞核呈现细胞核浓缩和核碎裂现象。流式细胞仪测定12、24、和48 h的细胞凋亡率分别为（8.5±2.1）%、（12.8±3.4）%及（21.4±5.8）%,而培养48 h的HL-60细胞自然凋亡率仅为（1.5±0.5）%（P〈0.05）。结论：三氧化二砷可诱导HL-60细胞凋亡。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及凋亡和顺铂化疗敏感性的影响

目的观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和化疗敏感性的影响。方法随机选择雌性BALB/C-nu/nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中survivin蛋白表达情况,TUNEL染色观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0.2cm3时给予顺铂化疗以观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响。结果成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组;观察结束时,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.369±0.043）g和（1.150±0.136）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠survivin蛋白表达显著下降;TUNEL染色结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,凋亡指数（AI）值达（22.73±1.37）%。顺铂化疗后不同检测点接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑;观察结束后,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.323±0.058）g和（1.347±0.173）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa-S2组AI明显升高,分别为：（37.38±1.01）%和（5.19±0.61）%（P〈0.05）。结论 survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加顺铂化疗诱导的细胞凋亡,增强顺铂化疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤对顺铂化疗的敏感性。     

TIEG1对K562细胞凋亡及BCL-2/BAX、PTEN表达的影响

本研究旨在观察TIEG1诱导K562细胞凋亡及BCL-2/BAX、PTEN表达的变化.用TIEGl0、1、5、10和20ng/ml处理K562细胞,MTT法检测细胞生长抑制率.TIEG1 10.00 ng/ml处理K562细胞后流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测BCL-2/BAX及PTEN的表达.结果表明,T1EG1对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈时间及剂量依赖性（r=0.52,P＜0.05）;处理细胞6、12、24和48 h后TIEGl IC50值分别为48.19、18.72、9.5和3.85 ng/ml.TIEG1 10.00 ng/ml处理K562细胞0、6、12、24和48 h后凋亡率分别为（2.13±0.42）％、（7.79±0.71）％、（11.17±1.37）％、（24.66±0.29）％和（48.60±1.38）％,各组凋亡率相比较统计学差异具有显著性（P＜0.05）.在TIEG1诱导K562细胞凋亡过程中,BCL-2表达逐渐减少（r=0.48,P＜0.05）,而BAX（r=0.69,P＜0.05）及PTEN（r=0.57,P＜0.05）表达逐渐增加.结论：TIEG1诱导K562细胞凋亡并抑制其增殖,且呈时间、剂量依赖性.在TIEG1诱导K562细胞凋亡的过程中,BCL-2/BAX及PTEN表达变化与K562细胞凋亡相关.     

siRNA沉默PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡的影响

目的研究PTTG基因沉默对胰腺癌细胞凋亡的影响,初步探讨其调控机制。方法利用阳离子脂质体进行基因沉默实验,将PANC-1细胞分为三组（①.未转染PANC-1细胞、②.转染阴性对照siRNA、③转染siRNA-PTTG）,TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blot技术检测bcl-2,bax基因和蛋白表达;ELISA法检测caspase-3活性。结果组③细胞凋亡明显增多,凋亡率为18.4±2.4%;组①和组②凋亡率分别为7.5±2.0%和6.9±1.1%,差异具有显著性（P〈0.05）;组③bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）;组③、组①和组②间bax mRNA和蛋白表达没有具有统计学差异（P〈0.05）;组③caspase-3活性升高,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 siRNA-PTTG下调PTTG基因表达导致PANC-1细胞凋亡增加,可能与bcl-2表达下调,caspase-3活性升高有关。     

奥曲肽对Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤,喉癌的发病率目前有逐年提高的趋势。近年来的研究表明,奥曲肽对许多实体肿瘤及正常组织有抗增生作用,还具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。本实验旨在研究奥曲肽对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步探讨。方法通过MTT比色试验和测定细胞生长曲线研究奥曲肽对Hep-2细胞增殖的作用,经流式细胞仪检测研究奥曲肽对Hep-2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果奥曲肽浓度在0.05μg/ml-20μg/ml范围内对Hep-2细胞均有抑制作用,48 h时最显著,但血清组与无血清组比较,抑制率明显下降(P0.05)。无血清组奥曲肽浓度在0.1μg/ml的奥曲肽抑制作用最为显著,为24.67%(P0.01,vs con-trol)。在奥曲肽作用下72 h内,Hep-2细胞的生长曲线有明显下降(P0.05),奥曲肽浓度在0.05μg/ml和0.1μg/ml范围内,Hep-2细胞生长曲线较低平。经流式细胞仪检测,Hep-2细胞出现G0/G1阻滞,0.1μg/ml的奥曲肽最显著(73.97±0.48)%(P0.05);实验组G2/M期细胞比例亦有下降(P0.05 vs control);而实验组与对照组S期细胞的比例无显著性差异(P0.05)。结论本研究结果提示奥曲肽抑制Hep-2细胞增殖可能是通过诱导G0/G1阻滞和诱导细胞凋亡而实现的,为喉癌的综合治疗提供了理论依据。     

肝炎病毒感染对抗结核治疗时患者肝功能的影响

【目的】观察合并肝炎病毒感染的结核患者服用抗结核药物后对肝功能的影响。【方法】单纯结核杆菌感染的患者525例,结核杆菌合并肝炎病毒感染43例。两组患者前4个月采用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇治疗,后2个月采用异烟肼、利福平治疗,观察抗结核治疗对肝功能的影响。【结果】单纯结核杆菌感染组发生急性药物性肝炎54（10．3％）例,结核杆菌合并肝炎病毒感染组发生急性病毒型肝炎20（46．5％）例,两组有显著性差异（P〈0．05）。急性病毒性肝炎肝功能损害严重（AST：210．6±77．4vs387．4±90．6,P〈0．05;ALT：207．3±45．3vs372．6±88．1,P〈0．01）,肝功能恢复时间延迟（27．4±13．5vs41．4±18．3,P〈0．05）。【结论】抗结核杆菌的药物对结核杆菌合并肝炎病毒患者的肝脏毒性较强,治疗过程中定期复查肝功能;抗结核治疗前应该常规检测肝炎病毒。     

粒细胞集落刺激因子对亚致死剂量照射后小鼠胸腺细胞周期及近期输出功能的影响

本研究探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞的细胞周期、凋亡及近期输出功能的影响.雌性BALB/c小鼠40只,给予6 Gy60C0 γ线1次性全身照射后随机均分为2组.G-CSF组小鼠给予重组人G-CSF 100 μg/(kg·d),皮下注射,连续14天;时照组小鼠给予等体积磷酸盐缓冲液,皮下注射,连续14天.用流式细胞仪检测照后72小时内胸腺细胞的细胞周期及凋亡细胞比例;应用荧光定量PCR方法检测照后30和60天105个胸腺细胞中T细胞受体重排删除环(sjTREC)拷贝数,以判断胸腺细胞输出功能.结果表明,G-CSF在照后6小时即可使胸腺细胞出现G0/G1期阻滞,G-CSF组vs对照组为(82.0±5.0)％ vs (75.9±2.8)％(P＜0.05),S期细胞比例下降,G-CSF组vs对照组为(10.2±4.8)％ vs( 15.7±2.3)％(p＜0.05),但对G2/M期细胞比例影响不大.胸腺细胞受照后6小时即出现明显凋亡,12小时达高峰.G-CSF组在照后6及12小时胸腺细胞凋亡率分别为(11.5±2.4)％和(15.5±3.3)％,而对照组分别为(16.5±2.2)％和(22.6±0.7)％,两时间点统计学差异明显(p＜0.05).荧光定量PCR结果显示,照后30天G-CSF组胸腺细胞sjTREC拷贝数明显高于对照组(p＜0.01),但照后60天两组胸腺细胞sjTREC拷贝数无统计学差异.结论:G-CSF可调节急性辐射损伤后胸腺细胞周期,减少胸腺细胞凋亡,增加胸腺细胞输出功能,促进中枢免疫恢复.     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

睾丸孤核受体4对前列腺癌PC-3细胞依托泊苷化疗敏感性的影响

目的研究睾丸孤核受体4（TR4）基因对前列腺癌PC-3细胞依托泊苷（VP16）化疗敏感性的影响。方法观察VP16处理后PC-3细胞TR4基因的表达变化;建立TR4过表达的PC-3细胞系,利用MTT法测药物半数抑制剂量（IC50）、细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,观察不同TR4表达水平的PC-3细胞VP16化疗敏感性的差异。结果VP16处理后,PC-3细胞TR4基因表达升高[（0．42±0．02）vs（0．58±0．08）;t=3．30,P〈0．05]。TR4过表达的PC-3细胞VP16IC50升高[（30．83±1．32）μg/ml vs（98．89±4．21）μg/ml;F=20．38,P〈0．05]。VP16作用下,TR4过表达PC-3胞存活率较普通PC-3细胞升高,细胞凋亡则下降[（0．49±0．06）vs（0．18±0．04）;t=7．80,P〈0．05]。结论TR4降低前列腺癌PC-3细胞对化疗药物VP16的敏感性。     

胰岛素联合顺铂对人宫颈癌细胞株HeLa生长的影响

目的：观察胰岛素（INS）联合顺铂（DDP）对人宫颈癌 HeLa 细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法体外培养的人宫颈癌细胞株（HeLa）经INS、DDP单独或联合作用后,MTT检测细胞增殖抑制情况;Annexin V-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡;流式细胞仪检测不同加药处理组的细胞周期时相变化情况;Western blot 印迹方法检测细胞中 JNK2、p-JNK2及caspase-3蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示：INS无抑制细胞增殖作用,DDP单药组与联合用药组均能抑制细胞的增殖,两药联合时细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义（P=0.000）,细胞凋亡结果显示：INS无促细胞凋亡的作用,联合用药组的细胞凋亡率明显高于DDP单药组（P〈0.01）。细胞周期结果显示：DDP、INS单药均能促进细胞由G1期向S期转变;联合用药组HeLa细胞S期比例增加更加明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot 结果显示：实验组与对照组比较,JNK2蛋白水平无明显变化, p-JNK2、caspase-3于DDP组及 DDP＋INS 组中表达增加,联合用药时增加更为明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）,而在INS组中三种蛋白表达变化均不明显。结论 INS 可增强DDP对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与协同DDP促进细胞由G0期步入S期,上调p-JNK2及 caspase-3蛋白表达有关。     

重组腺病毒p53 上调凋亡调控因子通过凋亡通路增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的体外研究

目的 探讨转染p53 上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制.方法 将人脑胶质瘤细胞U87MG 分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感染复数(MOI) ＝50 的空载体腺病毒(Ad-△ BH3)和携带PUMA 的重组腺病毒(Ad-PUMA)转染U87MG 细胞,转染后用MTT 比色法测定各组细胞的存活率并计算替莫唑胺(TMZ)IC50,流式细胞仪检测细胞周期的变化,应用TUNEL 法检测细胞的凋亡情况.Western blot 检测凋亡相关蛋白p53、Bax 的表达.结果 外源性PUMA 基因在Ad-PUMA 转染U87MG 48 h 后,随着时间延长,PUMA 表达使U87MG 细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24 h、48 h、72 h 的生长抑制率分别为17.3%、35.6%、43.3%,凋亡率分别为20.3%、31.4%、45.4%.正常对照组、Ad-PUMA、Ad-△BH3 组细胞的TMZ IC50分别为(15.0 ±1.9)μmol/L、(2.3 ±0.1)μmol/L 和(14.4 ±1.6)μmol/L.PUMA 表达的U87MG 细胞DNA 合成受到抑制,周期阻滞在G2 期;Western blot 检测显示p53 表达在各组中差异无统计学意义(P ＞0.05)、PUMA 和Bax 在实验组中表达较对照组强,差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 Ad-PU-MA 转染可有效增强人脑胶质瘤细胞U87MG 对TMZ 的敏感性,抑制人脑胶质瘤细胞U87MG 的增殖,通过诱导细胞G2 期阻滞促进其凋亡,促凋亡机制不依赖于p53.