高铁环境下成骨细胞增殖和凋亡与氧化应激的关系

目的了解高铁环境对人成骨细胞(hFOB1.19)增殖和凋亡的影响,观察其与氧化应激的关系。方法 34℃条件下体外培养hFOB1.19,以不同浓度(50、100、200μmol/L)枸橼酸铁铵(FAC)干预48h后,用MTT法检测成骨细胞增殖活性;用流式细胞仪检测成骨细胞凋亡情况;分别用丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒检测成骨细胞MDA含量及SOD、GSH-PX活性。结果用不同浓度FAC干预成骨细胞48h后,FAC50、100和200μmol/L干预组细胞增殖活性分别为(0.63±0.02)、(0.55±0.03)和(0.46±0.04),均显著低于对照组(0.69±0.04),呈剂量依赖性;FAC50、100和200μmol/L干预组细胞凋亡率分别为(6.98±0.84)%、(11.82±0.66)%和(15.78±0.95)%,均显著高于对照组[(3.71±0.43)%],呈剂量依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05);成骨细胞脂质过氧化物MDA水平呈剂量依赖性升高,成骨细胞抗氧化物酶SOD及GSH-PX活性呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高铁环境可抑制成骨细胞增殖,促进成骨凋亡,其作用机制与氧化应激有一定相关性。     

高铁环境对成骨细胞生物活性的影响

目的探讨高铁环境对人成骨细胞(hFOB1.19)活性指标的影响。方法采用细胞贴壁法培养成骨细胞(hFOB1.19)后,将不同浓度枸橼酸铁铵(50、100、200μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增生活性;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡情况;Vonkossa染色法行钙结节染色;用RT-PCR和Western blotting分别检测Ⅰ型胶原(COL1)的基因及蛋白表达变化。结果用不同浓度枸橼酸铁铵干预成骨细胞后,与对照组相比,48 h与72 h组成骨细胞增生活性呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(P0.05);48 h组成骨细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);不同浓度枸橼酸铁铵干预10 d和14 d时各组成骨细胞碱性磷酸酶活性均随枸橼酸铁铵浓度增高而降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,枸橼酸铁铵干预17 d后钙结节染色结果显示,矿化面积和钙结节形成随铁离子浓度增加而减少;枸橼酸铁铵干预3 d后呈剂量依赖性下调Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达。结论高铁环境使成骨细胞成骨活性指标均受到抑制。     

铁离子对人成骨细胞(hFOB1.19)生物活性影响

目的探讨铁离子对成骨细胞株(hFOB1.19)生物活性,包括碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase activity,APA)、细胞凋亡、钙结节、Ⅰ型胶原(type 1 collagen,COL 1)和骨钙素(osteocalcin,OC)的影响。方法成骨细胞(hFOB1.19)于5%CO234℃培养箱内培养,将不同浓度枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)50、100、200μmol/L和去铁胺(deferoxamine,DFO)5、10、20μmol/L分别加入细胞培养基中,MTT法检测成骨细胞增生活性;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Von kossa染色法行钙结节染色;RT-PCR和Western blotting法分别检测COL1和骨钙素(bone gla protein,BGP)的基因及蛋白表达。结果 (1)48 h后增生活性:FAC组细胞增生活性随FAC干预浓度的增加呈剂量依赖性降低(P0.05),DFO组在5μmol/L浓度组时促进成骨细胞增生,在10、20μmol/L浓度组时抑制成骨细胞增生。(2)10 d时碱性磷酸酶活性:FAC组碱性磷酸酶活性随FAC干预浓度的增加而降低,DFO组碱性磷酸酶活性随DFO干预浓度的增加而升高(P0.05);(3)48 h时凋亡:FAC组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高(P0.05),DFO组在5、10μmol/L浓度时抑制细胞凋亡(P0.05),在20μmol/L则促进成骨细胞凋亡(P0.05);(4)21 d时钙结节染色:FAC组随铁离子干预浓度增加,成骨细胞矿化面积、钙结节形成数量均减少,DFO组在5、10μmol/L浓度时促进成骨细胞矿化功能,而20μmol/L浓度时对成骨细胞矿化有抑制效应;(5)3 d时基因及蛋白表达:FAC组COL1、BGP基因和蛋白的表达呈剂量依赖性下调(P0.05);DFO组COLⅠ、BGP基因的表达呈剂量依赖性上调(P0.05),DFO在5、10μmol/L浓度时促进COL1、BGP蛋白表达,在20μmol/L浓度时抑制COL1、BGP蛋白表达。结论不同浓度枸橼酸铁铵均抑制成骨细胞功能活性,提示高铁环境不利于成骨细胞的成骨功能。低铁环境对成骨细胞有双重效应,低剂量去铁胺对成骨细胞活性有促进作用,而高剂量去铁胺则对成骨细胞活性有抑制效应。     

骨髓间充质干细胞共培养对肝星状细胞增殖、凋亡和RohA表达的调控

目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养对肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡和RohA表达的影响,探讨BMSCs旁分泌HGF在其中的作用机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分4组:空白对照组、阴性对照组、BMSCs实验组、预处理实验组(c-met多克隆抗体预处理).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSCs细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PGR、Western blot检测BMSCs与HSCs共培养后HSCs内RohA mRNA和蛋白的表达.酶联免疫吸附法(ELISA)检测BMSCs与HSCs共培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)浓度.结果:BMSCs对HSCs增殖具有抑制作用,BMSCs与HSCs共培养后24 h、48 h的增殖抑制率分别为12.21%,35.43%,与空白对照组、实验对照组和C-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).Annexin-V-FITC/PI双染法检测BMSCs与HSCs共培养48 h后HSCs的凋亡率为25.80%,与空白对照组、实验对照组与c-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h,BMSGs组RohA mRNA的表达抑制明显,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h RohA蛋白的表达明显抑制,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).ELISA检测BMSCs与HSCs共培养24 h、48 h上清液中HGF浓度分别为250 ng/L与570 ng/L,明显高于单独BMSCs培养和单独HSCs培养,有显著性差异(P<0.01).结论:BMSCs与HSCs共培养能抑制HSCs的增殖,促进凋亡,抑制RohA表达,其机制可能是通过BMSCs旁分泌HGF发挥抑制大鼠HSCs增殖,促进凋亡的作用.     

脱氢表雄酮对离体大鼠成骨细胞的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对离体大鼠成骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,取传一代细胞,分别给予10-5、10-7、10-9mmol/L DHEA培养72h,以10-8mmol/L雌二醇(E2)为阳性对照,另设空白对照组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,PNPP法测定ALP活性。行矿化结节染色,低倍镜下测量矿化结节面积并计算面积比,观察DHEA对矿化能力的影响。结果和空白对照组相比,不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力均有上升,其中以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),其作用和E2相似(P>0.05);不同浓度DHEA组ALP的活性均升高,亦以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),10-7、10-9mmol/L DHEA的作用和E2相似(P>0.05);10-9mmol/L DHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组(P>0.05)。不同浓度DHEA组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P<0.01),其作用和E2相似。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高ALP活性,并促进骨矿化物质在骨内沉积。     

血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)对肝星状细胞(HSC)增殖、迁移活性的影响.方法:体外培养HSC,在不同浓度的ANGⅡ作用下,观察HSCs生长情况并绘制生长曲线,采用MTT法测定细胞增殖、Transwell小室检测细胞迁移.结果:1,2,4,8,10 umol/L ANGⅡ可显著促进HSC增殖,与空白对照组相比有显著差异(F= 2.305,P<0.05;F=4.003,6.833,8.855,21.066,P<0.01).随作用浓度的增加,细胞增殖活性显著提高,相关分析显示呈正相关(r=0.917,P<0.01).10,8,4μmol/L的ANGⅡ可显著诱导HSC迁移,与空白对照组相比差异显著(F= 22.084,15.155,10.392,P<0.01).随ANGⅡ浓度的增加,细胞迁移率显著升高,相关分析显示呈正相关(r=0.952,P<0.01).结论:ANGⅡ可显著诱导HSC增殖与迁移,并随剂量的增加作用加强.     

氧应激对大鼠肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用

目的:探讨氧应激对肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用.方法:分别用不同浓度的次氮基三乙酸铁(Fe-NTa)培养大鼠肝星状细胞,在6,12,24和48h用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测氧应激对肝星状细胞增殖的影响,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;并用不同浓度的还原型谷胱甘肽与Fe-NTa共同培养细胞,再检测SOD活性.结果:Fe-NTa作用12h与同一时间点的空白对照组比较,500和1000μmol/L组细胞增殖明显增多(A:0.369±0.124,0.485±0.101vs0.285±0.044,P<0.01),作用24和48h各浓度组与同一时间点的空白对照组比较差异显著(P<0.01).无Fe-NTa干预的空白对照组12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖明显增多(A:0.285±0.044,0.253±0.033,0.278±0.037vs0.111±0.005,P<0.01),随着Fe-NTa剂量的增加,作用12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖亦明显增多(P<0.01).200和500μmol/LFe-NTa组与对照组比较,SOD活力明显降低(156.95±21.17,100.92±10.02μkat/Lvs197.74±17.59μkat/L,P<0.01);MDA含量明显升高(1123±217,1549±182mmol/Lvs580±332mmol/L,P<0.01).预先加入GSH的各组与模型组(200μmol/LFe-NTa)比较,SOD活力明显升高(5.42±0.58,6.67±0.18,8.75±0.58μkat/Lvs2.25±0.35μkat/L,P<0.01).结论:氧应激促进HSC增殖有剂量和时间依赖性;且可导致脂质过氧化损伤,还原型谷胱甘肽有抗氧化作用,可对抗脂质过氧化损伤.     

精氨酸血管加压素在成骨细胞增殖分化中的作用及机制

研究精氨酸血管加压素(AVP)对小鼠成骨细胞增殖和分化的影响及作用机制。(1)原代分离的小鼠成骨细胞中,加入100 nmol/ L 的 AVP 培养72 h 后检测其对成骨细胞增殖作用的影响。(2)培养2、4、6、8、10 d 收集细胞培养液,并收集培养第10天的细胞裂解液,检测 AVP 对碱性磷酸酶(ALP)分泌的动态影响及细胞内 ALP 含量变化。(3)利用茜素红染色法检测 AVP 对培养8 d 和20 d 的成骨细胞形成钙结节的影响。(4)AVP 作用20 min,裂解细胞,利用放免法检测 AVP 对成骨细胞内 cAMP 的影响。结果显示,与对照组相比较,100 nmol/ L 能够促进小鼠原代成骨细胞增殖(P<0.01)。 AVP 能够使 ALP 的分泌量随着时间推移有显著增加(P<0.01);并增加成骨细胞形成钙结节数量和面积(P<0.01)。同时 AVP 能够促进胞内 cAMP 水平的增加(P<0.01)。结果提示 AVP 可能通过 cAMP 信号通路促进小鼠成骨细胞的增殖与分化。     

硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响

目的: 观察硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响.方法: 不同浓度梯度(12.5-200 nmol/L)的硼替佐米作用于HCT8细胞后, 用MTT检测细胞增殖抑制作用; 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h后, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率; Western blot检测E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和NF-κB表达.结果: 硼替佐米对HCT8细胞的增殖抑制作用有时间和浓度的依赖性. 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h诱导细胞的凋亡, 凋亡率为12.3%,显著高于对照组( P<0.05), 上调了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达, 下降了NF-κB和cyclinD1蛋白的表达.结论: 硼替佐米可以抑制HCT8细胞的增殖,诱导细胞凋亡. 抑制NF-κB通路的激活有可能为其作用机制之一; 并有可能增加细胞之间的黏附, 降低肿瘤的远处转移.     

在内皮素-1诱导增殖的血管平滑肌细胞中骨桥蛋白的表达

目的观察在内皮素-1(ET-1)诱导增殖的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)中骨桥蛋白(OPN)表达的变化.方法组织贴块法培养HUASMC后;随机分成5组,组1、组2、组3分别给予ET-1 100nmol/L、10 nmol/L、1 nmol/L刺激48 h,组4为不加ET-1的对照组,组5给予10 μmol/L BQ123(ET-1 A型受体的特异性拮抗剂)预处理后,再用10nmol/L ET-1刺激48 h,MTT比色法检测细胞在490 nm的吸光度值(OD490),组间进行比较;免疫细胞化学方法检测OPN在不同组之间的表达,计算并比较表达的阳性率;分析OPN表达与HUASMC增殖的相关关系.结果 ET-1剂量依赖性刺激HUASMC增殖,组间OD490比较有统计学意义(P<0.01),BQ123可以抑制ET-1的作用;随ET-1浓度的升高,OPN表达阳性率升高(P<0.01),给予BQ123预处理后,OPN表达的阳性率亦显著低于单独ET-1刺激组(P<0.01)和对照组(P<0.05);OPN表达阳性率与OD490值之间存在直线正相关(r=0.962,P<0.01).结论 ET-1剂量依赖性刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,在ET-1诱导增殖的VSMC中OPN表达增加,OPN表达和HUASMC增殖之间存在直线正相关关系,检测VSMC中OPN的表达,对于VSMC增殖情况有一定预测价值.     

高铁与低铁环境对成骨细胞hFOB1.19膜铁转运蛋白1表达的影响

目的观察细胞培养液中加入铁离子或铁离子螯合剂后成骨细胞(hFOB1.19)膜铁转运蛋白1(FPN1)表达的变化,探讨铁离子浓度对成骨细胞FPN1表达的影响。方法将不同浓度的枸橼酸铁铵(FAC,50、100、200μmol/L)和去铁胺(DFO,5、10、20μmol/L)分别加入人hFOB1.19培养基,24h后用共聚焦显微镜(CLSM)测定细胞内铁离子浓度,用定量PCR、Westernblotting和免疫荧光法测定不同组别成骨细胞FPN1的表达并进行统计比较。结果用不同浓度的FAC和DFO干预20h后,成骨细胞内铁离子浓度随FAC浓度增加而增加,随DFO浓度增加而降低,组间差异有统计学意义(P<0.05);FPN1基因和蛋白表达随FAC浓度增加而增加,随DFO浓度增加而降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论高铁环境可上调FPN1表达,低铁环境可下调FPN1表达。FPN1表达量的改变可有效维持成骨细胞内铁离子浓度的平衡。     

蛇床子素骨靶向药物对体外培养大鼠成骨细胞护骨素、核因子-κB受体活化因子配基表达的影响

目的观察蛇床子素骨靶向药物(NSC-OST)对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)护骨素(OPG)及核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达的影响。方法不同浓度的NSC-OST作用于成骨细胞7 d,采用ELISA法检测成骨细胞OPG、RANKL的表达。结果终浓度为10-6mmol/L和10-5mmol/L组促进成骨细胞OPG的表达作用高于空白对照组(P<0.01);10-7、10-6mmol/L和10-5mmol/L组具有抑制大鼠成骨细胞表达RANKL的作用(P<0.01);终浓度为10-6、10-5mmol/L的NSC-OST可显著上调OPG/RANKL的比值(P<0.01)。结论适当浓度的NSC-OST可促进成骨细胞OPG的表达,抑制RANKL分泌,上调OPG/RANKL的比值。     

铁离子对人成骨细胞RANKL/OPG基因及蛋白表达的影响

目的研究人成骨细胞(hFOB1.19)在不同铁离子状态下RANKL/OPG基因及蛋白的表达。方法成骨细胞株(hFOB1.19)在DMEM/F-12培养基培养传代至第3代后,用不同终浓度枸橼酸铁铵(50、100、200μmol/L)加入细胞培养基中干预24h,用RT-PCR方法和免疫印迹法(WesternBlot)检测干预后成骨细胞的RANKL、OPGmRNA和蛋白表达并计算RANKL/OPG比率。结果RT-PCR检测结果显示,对照组、50、100、200μmol/L组RANKL/OPGmRNA表达比分别为0.56±0.13、0.58±0.01、0.69±0.01、1.84±0.92;Westernblot结果显示,对照组、50、100、200μmol/L组RANKL/OPG蛋白表达比分别为0.82±0.66、0.82±0.64、1.09±0.11、1.25±0.14。统计学分析显示,在mRNA和蛋白水平,100和200μmol/L浓度的枸橼酸铁铵干预后RANKL/OPG比值明显高于对照组(P0.05),50μmol/L枸橼酸铁干预后与对照组差异无统计学意义。结论不同浓度枸橼酸铁铵可以影响人成骨细胞RANKL/OPG基因及蛋白的表达,进而可能影响骨形成和骨吸收。     

雷公藤甲素对人结肠癌HCT116细胞Bcl-2/Bax和活性Caspase 3表达的影响

目的研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对人结肠癌HCT116细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)/B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)和活性Caspase 3表达的影响,从而研究TP对结肠癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法用不同浓度的TP(5、10、20、30、40、80 nmol/L)和空白对照组(0 nmol/L)处理HCT116细胞24、48、72 h,用MTT法检测TP对结肠癌细胞增殖的抑制作用.流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3、cleaved Caspase 3蛋白表达水平的变化.结果TP可显著抑制HCT116细胞的增殖,且细胞的存活率随着TP浓度和作用时间的增加而下降,呈浓度和时间效应.5、10、20、30、40 nmol/L浓度的TP分别作用HCT116细胞48 h,细胞凋亡率分别为4.25%、13.6%、34.4%、43.8%、44.5%,呈剂量依赖关系(P0.01).10、20、30、40 nmol/L TP处理T116细胞48h,随TP浓度的增加,Bcl-2的蛋白水平不断降低,Bax在细胞质的蛋白水平下降,而在线粒体的蛋白水平升高,呈剂量依赖关系;Caspase 3的蛋白水平不断降低,促进cleaved Caspase 3的蛋白水平升高,呈剂量依赖关系.结论TP可显著抑制HCT116细胞的增殖,可能通过抑制Bcl-2表达水平,促进cleaved Caspase3表达水平,使其诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡抵抗能力减弱.     

雷公藤内酯醇抗单核细胞白血病细胞株THP-1的实验研究

目的:探讨雷公藤内酯醇对人类单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响。方法:运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对THP-1细胞株增殖和凋亡的影响。结果:雷公藤内酯醇能明显抑制THP-1细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用48 h时其半数抑制浓度IC50为18 nmol/L,且经雷公藤内酯醇处理后THP-1细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用后48 h的变化与THP-1细胞凋亡率具有相关性,r=0.97,P<0.05,而作用24 h,其无明显诱导凋亡的作用。结论:雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰THP-1细胞周期,上调细胞G1/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

PPARγ、脂联素抑制肝星状细胞增殖

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对大鼠肝星状细胞(HSC)-T6生物学特性、脂联素表达的影响。方法将大鼠肝星状细胞培养后分成空白对照组;罗格列酮组;GW9662阻断组;罗格列酮+GW9662组。检测各组细胞的增殖情况;同时检测脂联素、PPARγm RNA及其蛋白表达情况。结果 MTT实验结果显示罗格列酮组的肝星状细胞增殖率较其他组明显减弱(P<0.01),脂联素、PPARγm RNA及蛋白表达量较其他组明显升高(P<0.01);且脂联素、PPARγ表达存在显著相关关系(P<0.01)。结论 PPARγ能上调脂联素的表达,抑制HSC增殖,抑制肝纤维化的发展。     

活血化瘀中药对人永生化角质形成细胞株活血的影响及作用机制

目的观察中药活血化瘀复方对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导人永生化角质形成细胞株Ha-cat增殖、凋亡的影响。方法 TNF-α诱导Ha-cat在体外模拟银屑病表皮角质细胞的过快增殖为模型组,将20、25、30 g/L浓度的活血化瘀复方水提物分别作用于模型组细胞24 h,以全程仅用DMEM完全培养基为空白对照组。倒置显微镜下观察各组细胞形态学改变,CCK8法和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;RT-PCR和Western印迹技术分别检测细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达情况。结果活血化瘀复方各剂量组对Ha-cat细胞增殖抑制率均明显高于空白对照组和模型组(P<0.05);其中25 g/L、30 g/L剂量组对Ha-cat细胞增殖抑制程度明显高于20 g/L剂量组(P<0.05)。模型组Ha-cat细胞凋亡率明显低于空白对照组(P<0.05);活血化瘀复方各剂量组细胞凋亡率均明显高于空白对照组和模型组(P<0.05);其中30 g/L剂量组对Ha-cat细胞凋亡的促进程度明显高于20 g/L、25 g/L剂量组(P<0.05)。模型组Ha-cat细胞Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的相对表达量均明显低于空白对照组(P<0.05);活血化瘀复方组各剂量组Bax mRNA和蛋白的相对表达量均明显高于模型组,且随剂量的增加逐渐提升(P<0.05);活血化瘀复方组各剂量组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量与模型组相比虽有提升,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药活血化瘀复方通过上调Bax基因表达,诱导角质形成细胞凋亡,进而抑制TNF-α诱导的Ha-cat细胞增殖,发挥对银屑病的治疗作用。     

铁过载对成骨细胞铁稳态及生物活性的影响

目的了解铁过载对成骨细胞铁稳态及生物活性的影响。方法 34℃条件下体外培养人成骨细胞(hFOB1.19),以不同浓度(50、100、200μmol/L)枸橼酸铁铵(FAC)干预,用RT-PCR检测成骨细胞铁调节基因膜转铁蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体(TfR)和二价金属转运蛋白1(DMT1)表达的变化;用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察成骨细胞铁离子荧光强度;流式细胞仪检测成骨细胞活性氧(ROS)水平;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;Vonkossa染色法行钙结节染色。结果与对照组相比,FAC干预48h后FPN1mRNA的表达随FAC干预浓度增加呈剂量依赖性上调,TfR、DMT1mRNA的表达呈剂量依赖性下调(P0.05);FAC干预48h后成骨细胞铁离子荧光强度剂量依赖性减弱,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);48h后成骨细胞ROS水平随FAC干预浓度增加呈剂量依赖性升高(P0.05);FAC干预10d后各组成骨细胞碱性磷酸酶活性均随FAC浓度增高而降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,FAC干预17d后成骨细胞钙结节染色显示矿化面积和钙结节形成随FAC浓度增加而减少。结论铁过载对成骨细胞生物活性有明显抑制作用,其机制可能与细胞内铁离子浓度增加及活性氧水平升高有关。     

丹参酮ⅡA联合5-FU对低氧下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α和突变型P53表达的关系

目的:观察低氧环境下不同浓度的丹参酮ⅡA(Tan Ⅱ A)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α和突变型P53的表达.方法:用氯化钴(CoCl<,2>)创建低氧模型,采用0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的TanⅡA联合10.0 mg/L的5-FU分别作用于低氧SGC7901细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活力:用上述同样方式作用于低氧SGC7901细胞24、48和72 h后,Hoechst染色法检测细胞凋亡:TanⅡA(0、0.5、2.0、10.0 mg/L)联合10.0 mg/L的5-FU作用于低氧SGC7901细胞48h后,免疫细胞化学二步法检测IHIF-1α及突变型P53的表达.结果:低氧环境下,不同浓度的Tan Ⅱ A联合10.0 mg/L 5-FU呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞的增殖(均P<0.01),10.0 mg/LTan Ⅱ A联合5-FU作用细胞72 h后,其抑制率为67.46%.0.5-10.0 mg/L TanⅡA联合5-FU作用细胞24、48、72 h.TanⅡA呈时间、剂量依赖性地促进SGC7901细胞凋亡(均P<0.01).HIF-1α及突变型P53表达明显高于常氧组(t=22.786,13.914,均P<0.01),不同浓度的Tan Ⅱ A联合10.0 mg/L 5-FU作用细胞48 h后,HIF-1α、突变型P53蛋白表达明显降低(F=182.234,130.062,均P<0.01),且二者呈高度正相关(n=5,r=0.995,P<0.01).结论:在低氧环境下,TanⅡA可能通过抑制HIF-1α及突变型P53蛋白表达从而增强5-FU抑制SGC7901细胞增殖及诱导凋亡作用.     

睾酮通过上调血管内皮生长因子表达促进外周血内皮祖细胞增殖

目的 探讨雄激素对外周血内皮祖细胞(PB-EPC,)增殖能力的影响及其可能机制.方法 将健康志愿者外周血经密度梯度离心法分离的单个核细胞接种至人纤维连接蛋白包被的培养板中,EGM-2MV培养7天后,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记的荆豆凝集素和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色阳性为PB-EPC.将贴壁细胞分为5组,前4组分别加入0、1、10、100nmol/L睾酮,第5组加入10 nmol/L雄激素受体阻断剂氟他胺干预3h后,再加10 nmol/L睾酮干预.培养48 h后,MTT比色法检测各组PB-EPC的增殖能力.实时定量PCR检测血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达变化,ELISA检测VEGF分泌量的变化.结果 睾酮呈浓度依赖性促进EPC增殖,雄激素受体阻断剂氟他胺完全阻断睾酮对EPC的促进作用.与空白对照组相比,睾酮在mRNA和蛋白水平上调PB-EPC的VEGF表达,氟他胺可阻断此作用.结论 睾酮通过雄激素受体途径上调VEGF的表达,促进PB-EPC增殖.