过表达GCNF对HeLa细胞生物学行为的影响

目的:将成功构建的人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞生物学功能的影响。方法:将重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,通过MTT比色法、基质胶黏附实验和Transwell侵袭试验对转染后HeLa细胞增殖、黏附和侵袭力进行分析。结果:成功获得瞬时转染的pcDNA3.1-GCNF HeLa细胞,转染目的基因组(0.239±0.014)与转染空质粒组(0.198±0.020)及未转染组(0.204±0.012)相比,细胞增殖最快(P<0.05)。转染目的基因后细胞粘附、侵袭力未见明显改变。结论:GCNF基因促进了体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖,但对HeLa细胞粘附、侵袭力没有明显的影响。     

IFITM1基因在HeLa细胞中的功能研究

目的:研究IFITM1基因转染对子宫颈癌HeLa细胞的影响,以及抑制子宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法:应用脂质体法介导IFITM1基因转染子宫颈HeLa细胞,用RT-PCR方法、免疫荧光法、MTT法及流式细胞术检测IFITM1基因转染HeLa细胞的生物学特性。结果:转染后的HeLa细胞:①RT-PCR检测及激光共聚焦显示重组质粒组中mRNA及蛋白表达含量明显高于对照组及空载体组,而对照组及空载体组蛋白表达无统计学差异。②MTT结果显示重组质粒组细胞存活率均明显低于空载体组及未转染HeLa细胞组,而后两组无统计学差异。③AnnexinV/PI双色流式细胞仪检测表明,重组质粒组的HeLa细胞凋亡水平明显高于空载体组和未转染HeLa细胞组,有统计学差异。结论:IFITM1蛋白与子宫颈鳞癌有着密切的关系,该基因可能是一种潜在的抑制子宫颈鳞癌发生的基因。     

GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞Survivin基因表达的影响

目的:探讨稳定转染GRIM-19对子宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡抑制基因Survivin的表达以及细胞增殖的影响。方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染子宫颈癌细胞株HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的HeLa细胞株,采用RT-PCR检测HeLa细胞转染GRIM-19后mRNA水平表达情况,采用WesternBlot检测稳定转染后GRIM-19与Survivin的表达情况,应用细胞计数法观察各组细胞增殖水平。结果:建立稳定的GRIM-19基因表达的HeLa细胞株,命名为HeLa/G19细胞,对照组细胞命名为HeLa/Con细胞。RT-PCR检测显示GRIM-19mRNA表达明显增加,WesternBlot检测显示GRIM-19的蛋白表达显著升高、Survivin蛋白的表达水平显著降低。细胞计数法实验显示HeLa/GRIM-19细胞增殖较HeLa/Con细胞明显减慢(P<0.05)。结论:GRIM-19可以抑制子宫颈癌细胞Survivin的表达,阻滞细胞的生长,可能是子宫颈癌治疗的新靶点。     

RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞增殖迁移的抑制作用

目的:探讨RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞系A2780增殖和迁移的影响。方法:真核表达载体介导靶向沉默EZH2 shRNA的重组质粒转染A2780细胞,Real-time RT-PCR检测EZH2基因的沉默效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室检测细胞迁移。结果:EZH2shRNA转染明显下调EZH2的表达(P0.001)。重组质粒稳定转染至A2780细胞后,细胞增殖速度明显下降(P0.05),G0/G1期细胞增加(P0.01),体外迁移能力下降(P0.01),差异均有统计学意义。结论:EZH2基因沉默能有效抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力,为卵巢癌的表观遗传学治疗提供新靶点。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

促凋亡因子Smac过表达增强胰腺癌Panc-1细胞化疗敏感性研究

目的探讨胞浆过表达促凋亡因子Sm ac对胰腺癌细胞Panc-1化疗敏感性的影响。方法应用RT-PCR获得Sm accDNA(不含线粒体定位序列),定向克隆入pEGFP-N1质粒载体中,经限制性酶切、PCR及测序鉴定。利用脂质体将pEGFP-N1/Sm ac重组体转染胰腺癌细胞株Panc-1,应用荧光显微镜检测Sm ac-EGFP绿色荧光融合蛋白表达;流式细胞仪测定顺铂、5-FU诱导的转染细胞凋亡率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率。结果荧光显微镜下可见转染pEGFP-N1/Sm ac的细胞胞浆自发绿色荧光;在顺铂、5-FU作用下,N1/Sm ac转染组细胞凋亡率分别为(36.8±5.5)%、(47.6±6.9)%,明显高于未转染组(12.3±3.2)%、(19.2±4.7)%及空载体转染组(16.9±3.7)%、(22.5±5.8)%,其差异有统计学意义(P<0.01)。N1/Sm ac转染组细胞的生长抑制率亦明显高于未转染组及空载体转染组(P<0.01)。结论胞浆过表达Sm ac活性分子可明显促进顺铂、5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,增强其对化疗药物的敏感性,为探索基于凋亡的胰腺癌治疗新策略提供实验依据。     

转录因子Foxo1对RAW264.7细胞迁移产生的影响

目的观察Foxo1基因过表达对鼠源性单核巨噬细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2表达的影响,探讨转录因子Foxo1在早期心血管疾病识别及预防中的作用。方法实验分为未转染的对照组、Foxo1基因转染组及空质粒转染组,Foxo1基因转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-Foxo1真核表达载体瞬时转染至RAW264.7细胞中。空质粒转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-3.1质粒瞬时转染至RAW264.7细胞中。通过Western blot检测细胞中Foxo1的过表达情况。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞中MCP-1及CCR2的表达情况。采用transwell小室法检测各组细胞的迁移能力。结果 pc DNA-Foxo1重组质粒转染48 h后,RAW264.7细胞中Foxo1蛋白的表达量为(1.812±0.067),明显高于空质粒转染组的(1.092±0.088)和未转染组的(1.107±0.095),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1 mRNA表达量为(3.331±0.587),明显高于空质粒转染组的(1.125±0.114)和未转染组的(1.121±0.065),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1蛋白的表达量为(2.670±0.117),明显高于空质粒转染组的(1.128±0.107)和未转染组的(1.037±0.096),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中CCR2的mRNA的表达量为(2.099±0.331),明显高于空质粒转染组的(1.027±0.095)和未转染组的(1.018±0.177),差异均有统计学意义(均P0.05)。计数Transwell小室膜下表面细胞数,结果显示Foxo1基因转染组RAW264.7细胞穿过小室的数量为(39.670±2.333)个,明显高于未转染组的(22.000±2.309)个,差异有统计学意义(P0.05)。结论转录因子Foxo1过表达通过促进MCP-1及CCR2的表达从而增强RAW264.7细胞的迁移,参与巨噬细胞的炎症反应,推测Foxo1在心血管疾病早期识别及预防中具有重要作用。     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

靶向H-ras基因的小干扰RNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨脂质体介导的靶向H-ras基因的小发夹状RNA重组质粒对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:实验分4组:正常对照组(仅予脂质体处理)、转染psh RNA/H-ras处理24h组、48h组及72h组。分别于转染后不同时间进行MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测和AO/EB双染实验,观察各组细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。结果:FCM显示转染psh RNA/H-ras 24h及48h后的SKOV3细胞均出现细胞周期的抑制,48h后SKOV3细胞有显著的凋亡发生;转染psh RNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2对SKOV3细胞克隆形成的抑制率分别为51.5%(P<0.05)和63.3%(P<0.01);MTT检测转染psh RNA/H-ras1和psh RNA/H-ras 272h后对SKOV3细胞增殖抑制率分别为62.5%和64.5%。AO/EB实验显示48h细胞的凋亡率为29.3%(P<0.05)。结论:重组质粒psh RNA/H-ras在人卵巢癌SKOV3细胞中有明显抑制细胞增殖的作用,并介导肿瘤细胞的凋亡。     

siRNA表达载体对大鼠心肌H9c2细胞牛磺酸合成限速酶-CSD基因表达的抑制作用

目的研究siRNA对大鼠心肌半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)的抑制作用。方法根据已克隆的大鼠心肌CSD基因序列(EU786150)设计并构建了4个siRNAs及1个阴性对照siRNA表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM2000将构建好的重组质粒siRNA1#、siRNA2#、siRNA3#、siRNA4#及阴性对照质粒分别转染H9c2细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞增殖情况、实时荧光定量PCR和Western-blot检测CSD mRNA和蛋白表达。结果荧光显微镜观察细胞转染效率达70%左右;与阴性对照组、未转染组比较,siRNA1#重组质粒显著抑制了H9c2细胞中CSD mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而siRNA4#质粒对CSD表达无明显抑制效应(P>0.05);MTT检测结果表明转染重组质粒siRNA1#、siRNA2#进入H9c2细胞48 h、72 h后细胞增殖明显受抑制,与阴性对照组、未转染组相比差异均达到显著水平(P<0.05)。结论 siRNA1#重组质粒能有效抑制CSD基因的表达,且显著抑制H9c2细胞增殖,为研究CSD基因及揭示牛磺酸在心肌细胞代谢中的作用奠定基础。[营养学报,2012,34(4):317-321]     

RNA干扰iNOS基因对颊鳞癌细胞凋亡影响的实验研究

目的研究RNA干扰iNOS基因的表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RNA干扰技术,通过脂质体介导,将含有iNOS特异性发夹状小RNA(short hairpin RNA,shRNA)的pGenesil-1质粒转染入颊鳞癌Bca885细胞株。观察pGenesil-1质粒载体转染率、免疫组化检测细胞中iNOS的蛋白表达的改变情况、流式细胞仪检测Bca885细胞的凋亡率。采用SPSS12.0统计软件统计分析。结果在脂质体介导下,将含iNOS特异性shRNA的质粒转染入颊鳞癌细胞后,实验组Bca885细胞中iNOS蛋白表达低于两对照组,具有统计学意义(P<0.01);三组细胞的凋亡率分别为12.05±0.18、3.31±0.12和2.46±0.09,实验组高于两对照组,具有统计学上意义(P<0.01)。结论RNA干扰可以降低iNOS基因的表达,达到基因沉默的效果;沉默iNOS基因可提高Bca885细胞的凋亡,从而降低Bca885细胞的细胞增殖活性。     

β连环蛋白与T细胞抑制物过表达对子宫内膜癌细胞活性的影响

目的探讨β连环蛋白(β-catenin)与T细胞抑制物(ICAT)过表达对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A活性的影响,为临床诊治提供参考依据。方法重组腺病毒载体ICAT转染HEC-1A细胞为ICAT过表达组,空白腺病毒载体转染HEC-1A细胞为空载腺病毒组,同时设置空白对照组,转染48 h后通过RT-PCR和Western blot法鉴定各组细胞ICAT表达情况;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期,并进行Transwell细胞迁移和侵袭试验。结果转染48 h后,ICAT过表达组细胞ICAT mRNA和蛋白相对表达量明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.05),空载腺病毒组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。转染后第3天、第4天ICAT过表达组细胞增殖速度明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01)。转染后第3天,ICAT过表达组G0/G1期细胞比例明显低于空载腺病毒组与空白对照组,S期细胞比例明显高于空载腺病毒组与空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01);G2/M期细胞比例在3组细胞间差异无统计学意义(均P>0.05)。Transwell细胞迁移和侵袭试验显示,ICAT过表达组迁移和侵袭细胞数明显多于空载腺病毒组和空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论HEC-1A细胞过表达ICAT后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强,可能与ICAT过表达影响细胞周期及上皮细胞间充质转化有关。     

核仁素过表达对顺铂诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响

目的观察C23过表达对CDP诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响。方法先构建pRSET-C23重组质粒并将其导入SaOS-2细胞;再将细胞随机分为四组：对照组、单纯用CDP组、转染空载体后再用CDP组与转染C23重组质粒后再用CDP组;用MTT法检测各组SaOS-2细胞增殖率,用Western Blot和RT-PCR方法检测各组C23、Bcl-2与Bax蛋白和mRNA的表达情况;用DAPI染色方法和流式细胞术检测各组细胞凋亡核百分率、细胞凋亡率。结果 pRSET-C23重组质粒构建成功;转染C23重组质粒后再用CDP组的增殖率与单纯用CDP组比较,升高了约16%（P〈0.01）,C23与Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增高,但Bax表达则降低（P〈0.01）;转染C23重组质粒后再用CDP组与单纯用CDP组比较,细胞凋亡核百分率、细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 C23过表达能抑制CDP诱导的SaOS-2细胞增殖抑制和凋亡。     

人端粒酶催化亚单位基因转染人胚胎成纤维细胞后胶原的变化

目的 将重组正义hTERT基因荧光真核表达载体导入人胚胎成纤维细胞(hEF)中，探讨外源性hTERT基因转染对hEF细胞胶原含量变化的影响。方法 应用脂质体法将正义重组pIRES2-EGFP—hTERT质粒及空载pIRES2-EGFP质粒分别转染至原代培养hEF中，western blot检测转染细胞和未转染细胞中I、Ⅲ型胶原表达变化；放免法检测转染细胞和未转染细胞培养液上清中I、Ⅲ型胶原含量。结果 外源性hTERT基因转染细胞(hEF—hTERT)较未转染细胞(hEF)和空载体转染细胞(hEF—EGFP)中I、Ⅲ型胶原表达明显增加；hEF—hTERT细胞培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量也较hEF和hEF—EGFP细胞有显著增加。结论 外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEF细胞胶原合成增加，细胞增殖能力增强。     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3侵袭能力的影响

目的探讨印迹基因H19对滋养细胞侵袭能力的影响,以期从分子遗传学角度来阐明滋养细胞侵袭行为的调控机制。方法含人全长H19 cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染滋养细胞株JEG-3,观察其H19 mRNA表达和细胞侵袭力的变化。结果质粒转染JEG-3细胞的转染效率〉50%,转染目的基因H19后mRNA表达较对照组显著升高;转染目的基因后JEG-3细胞穿膜细胞数明显少于未转染组和空载体转染组。结论H19基因过表达可抑制JEG-3的侵袭能力,为H19调控滋养细胞侵袭行为提供了直接的实验证据。     

MDR1及MDR3基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨MDR1(Multidrug resistance gene-1)及MDR3(Multidrug resistance gene-3)基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:两种质粒一起瞬时转染A2780/DDP细胞,空载体组及未转染组作为对照。Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术、MTT法、RT-PCR、western blot分别检测A2780/DDP细胞早晚期凋亡、细胞增殖活性、MDR1和MDR3 mRNA表达及caspase-3蛋白水平。结果:两种质粒(pSuppressorNeo MDR1 siRNA,MDR3 siRNA)均未能逆转A2780/DDP细胞顺铂耐药:①流式显示转染MDR1 siRNA组、MDR3 siRNA组和pSuppressorNeo空载体组后相比较未转染A2780/DDP细胞凋亡率无显著改变(P>0.05);②在一定药物浓度范围内,转染MDR1和MDR3小分子干扰RNA均未能增强顺铂对A2780/DDP细胞的细胞毒作用;③与空载体组和未转染细胞相比,A2780/DDP细胞的MDR3及MDR1 mRNA表达均低下(P>0.05);④Caspase-3蛋白表达未见增加。结论:顺铂所致的卵巢癌细胞多药耐药与MDR1及MDR3基因过度表达均无关,卵巢癌细胞顺铂耐药为非P-gp     

端粒酶上调与甲状腺鳞癌细胞增殖关系

目的上调甲状腺鳞癌细胞(SW579)的人端粒酶催化亚单位(hTERT)表达,观察细胞增殖情况,检测端粒酶活性变化。方法应用酶切方法获得hTERT序列全长3 453 bp的cDNA片段,克隆入荧光蛋白质粒(pEGFP-N1),构建真核表达载体pEGFP-hTERT,转染SW579细胞中,观察细胞生长状态的变化,检测端粒酶活性。结果稳定转染pEGFP-hTERT的SW579细胞的增殖率为148%,比非转染组增加48%,比空质粒组增加45%,差异均有统计学意义(P0.01);重组质粒转染组G1、S、G2/M期细胞比例分别为68.05%,27.66%和10.45%,与非转染组和空质粒组比较,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05);重组质粒转染组增殖指数(PI)为38.11,明显高于空质粒组的14.22和非转染组的13.60,其端粒酶活性检测梯状条带增加,活性增强。结论上调人端粒酶表达,能够促进SW579细胞增殖。     

核糖核酸酶抑制因子对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用研究

目的:探讨核糖核酸酶抑制因子(RI)在卵巢癌裸鼠移植瘤治疗中的作用。方法:用重组质粒(PLNCX-RI)转化DH5-α感受态细菌,成功转化后以SDS碱裂解法大量制备纯化质粒DNA,同法处理空质粒载体(PLNCX)。通过琼脂糖电泳、紫外分光光度法鉴定R1基因提取的纯度和浓度。体外培养卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长期细胞皮下注射裸鼠,建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。对照组以空质粒载体(PLNCX)为治疗试剂,实验组以质粒DNA(PLNCX-RI)为治疗试剂进行皮下注射。比较两组裸鼠成瘤率、抑瘤率、成瘤时间及瘤体重量。免疫组织化学法分析两组RI基因的表达,HE染色对比观察微血管密度。结果:电泳检测出现了PLNCX-RI和PLNCX的条带。治疗结果显示注射RI基因的实验组与注射空质粒载体的对照组的肿瘤成瘤期分别为(16±3)天、(11±3)天,成瘤率分别为60.00%、80.00%,瘤组织重量分别为(0.27±0.06)g、(2.60±0.59)g,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组肿瘤抑制率为89.60%,RI基因表达水平较高,肿瘤组织血管密度低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:RI抑制了卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能为RI通过抑制Ang活性途径抑制了肿瘤组织的血管形成。     

p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

目的 探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用.方法 构建p38α特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Eca109细胞,运用qRT-PCR、免疫印迹分别检测p38α干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α干扰后Eca109细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变.作为平行反向验证,转染含有p38α全长cDNA的真核过表达质粒,运用免疫印迹检测p38α过表达后在蛋白水平上的表达效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α的变化后细胞迁移能力的改变.结果 p38α基因在受干扰后,测定其蛋白水平表达水平(22.970±2.857)较空质粒组(35.658 ±2.286)降低,差异具有统计学意义(t=-4.475,P＜0.01).观察Eca109细胞的增殖变化,发现干扰48 h后吸光度值(0.951±0.086)大于对照组细胞(0.811 ±0.012)(t=3.20,P＜0.05),表明Eca109细胞增殖加快.观察细胞周期和凋亡变化发现,干扰48 h后凋亡率(17.400±5.495)较空质粒组(1.000 ±0.721)增加(t=40.06,P＜0.01);干扰72 h后细胞迁移速度(0.034±0.031)较空质粒组(0.278±0.021)加快(t=-5.79,P＜0.01),表明浸润能力增加.p38α在过表达后,检测到其内源性p38α蛋白表达水平(41.170±2.357)高于对照组(35.658±2.286)(t=4.41,P=0.005);48 h过表达组吸光值(0.472±0.089)与对照组细胞吸光值(0.811±0.012)相比,细胞增殖受到抑制(t=-7.50,P＜0.01),细胞生长活动在G1期受阻(t=4.80,P＜0.01),并且其细胞凋亡(32.233±1.457)高于空质粒组(1.000±0.721)(t=17.20,P＜0.01),细胞迁移[(0.770±0.054) mm]较空质粒组[(0.278±0.021) mm]减慢并且浸润受到抑制(t=11.00,P＜0.01).结论 p38dMARK抑制食管鳞癌细胞Eca109的发生发展过程.