四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

【目的】探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。【方法】γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。【结果】四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G—CSF,GM—CSF,PDGF—α)等,抑制造血抑制因子(M—CIP)的分泌。【结论】四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G—CSF,GM—CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

四物汤及其活性单体对血虚证小鼠的补血作用

目的:研究四物汤及其活性单体芍药苷和川芎嗪对辐射致血虚证小鼠的补血作用。方法:采用3.5Gy60Coγ射线全身1次性照射制备小鼠血虚证模型,外周血白细胞计数,骨髓集落细胞培养,计数CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-mix,测定胸腺指数和脾指数。结果:四物汤10g/kg、芍药苷26.5 mg/kg和川芎嗪11.0 mg/kg均显著升高血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓集落细胞数量,四物汤显著提高胸腺指数;四物汤和川芎嗪显著提高脾指数。结论:四物汤、芍药苷和川芎嗪均具有补血作用,其中四物汤作用最显著,川芎嗪对脾指数的恢复作用最显著。     

四物汤及其各单药对辐射小鼠骨髓造血的调节作用

目的：研究四物汤及其各单药对射线诱发小鼠血虚证骨髓造血的调节作用,方法：采用3．5或5．5Gy^60Goγ射线全身一次性照射,制成血虚证模型小鼠,在不同时间点观察四物汤及单药对NFS－60细胞,外周血象,造血祖细胞集落培养及骨髓细胞凋亡的影响。结果：四物汤,地黄,当归能升高辐射小鼠外周血中的白细胞,增加造血祖细胞集落数,刺激NFS－60细胞增殖;白芍则降低外周血象,抑制NFS－60细胞增殖;川芎能增加造血细胞集落数,抑制骨髓细胞凋亡,结论：四物汤及各单药作用的靶点和强度不同,。其变化规律符合中医的君臣佐使理论。     

辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究

[目的]通过检测辐射损伤所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定辐射损伤所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,基于代谢组学的方法考察血虚证证本质及四物汤的作用机制。[方法]C57小鼠按体质量随机分为正常组、辐射造模组、四物汤反证组。造模7d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物。[结果]主成分分析结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。[结论]四物汤治疗血虚证的机制可能与稳定细胞膜,维持细胞内外渗透压平衡;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢以及增强机体抗氧化能力、免疫力有关。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

四物汤及其单药对血虚证小鼠造血的改善作用及其机制初探

目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单药诱生Peyer’sPatch细胞、NIH3T3细胞上清的活性。结果 :①血虚小鼠骨髓中的CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix较正常组明显减少 ,四物汤及各单药对模型组造血祖细胞集落增殖的作用强度不同 ,四物汤最为明显。②四物汤及各单药能够诱导Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞的增殖。③四物汤、当归、白芍诱生NIH3T3细胞上清能显著促进NFS 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤及各单药对血虚小鼠造血系统的作用机制 ,可能通过刺激Peyer’sPatch细胞、成纤维细胞或产生造血生长因子 ,或与造血因子协同作用 ,促进骨髓干祖细胞增殖分化来实现的 ;四物汤及各单药作用的靶点和强度不同 ,符合中药复方组方的规律。     

四物汤及两味中药组方对γ射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究

[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。[方法]采用60^Coγ射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型，测定外周血象、CD34^ 细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方；(2)两味药组方中，当归相关组对CFU—E，CFU—Mix，CFU—GM的促进作用较好，且有升高白细胞的作用；而地黄相关组对CFU—E有增殖作用；白芍相关组能明显促进NFS60细胞的增殖；川芎相关组增加CD34抗原表达，并促进细胞由G0/1期向S期转化，其作用和所含的川芎嗪有关。[结论]四物汤全方优于两味药组方，各组方的作用靶点和作用强度各有异同。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体26SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H-ras、3-磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。     

四物汤对环磷酰胺和乙酰苯肼致血虚证模型小鼠骨髓细胞凋亡的影响

目的:探讨四物汤对环磷酰胺和乙酰苯肼致血虚证模型小鼠骨髓细胞凋亡的影响及机制。方法:实验动物随机分为正常对照组、模型对照组、四物汤组和阳性药对照组。除正常对照组外,其余三组小鼠分别于给药后第2天、第5天皮下注射乙酰苯肼每日20 mg/kg、40 mg/kg,从第5天起,每日腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg,连续4 d,制备血虚证小鼠模型。利用血细胞计数仪、流式细胞术和蛋白免疫印迹技术分别检测各组小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡率及骨髓细胞Bcl-2蛋白表达。结果:与模型对照组相比,四物汤组血红细胞数升高非常显著(P0.01),白细胞数和血红蛋白含量均无显著变化(P 0.05);四物汤组小鼠骨髓细胞凋亡率下降非常显著(P0.01),Bcl-2蛋白表达量显著增加(P0.05)。结论:四物汤能够促进小鼠骨髓细胞中Bcl-2蛋白的表达,抑制骨髓细胞凋亡,提高外周血象,此可能是其发挥补血作用的机制之一。     

四物汤对辐射致血虚证小鼠血清蛋白质表达的影响

目的 :用蛋白质组技术考察四物汤对血虚证小鼠血清蛋白的影响 ,在分子水平上探讨四物汤补血的作用机理。方法 :⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型 ;二向电泳、图象分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证小鼠血清中有影响的蛋白。结果 :四物汤可使血虚证小鼠血清中 12个下调和 4个上调的蛋白质有所恢复 ,进一步质谱鉴定其中 4个蛋白质可能是DNA依赖蛋白激酶 (DNA -dependent protein kinase catalytic sub unit,P973 13 ) ,肌细胞增强蛋白 (dystrophin ,P11531) ,马达蛋白 (KIF13A ,Q9EQW7) ,肌动蛋白结合蛋白 (dys-tonin ,Q9QX20 )。它们的功能是参与DNA双链损伤的修复 ,与AP-1结合将 6-磷酸甘露糖受体从高尔基体转运到胞浆膜上 ,将细胞骨架铆定在胞浆膜上等。结论 :四物汤可能通过对血虚证小鼠血清中蛋白的影响而促进骨髓造血、减轻辐射引起的损伤。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响

目的：研究四物汤对环磷酰胺（CTX）损伤致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响,旨在分子水平上探讨四物汤促进骨髓造血的作用机制。方法：采用CTX 250 mg·kg^-1腹腔注射制成化学损伤型血虚证小鼠模型,利用蛋白质组学技术研究四物汤治疗后的差异蛋白质组。结果：研究发现CTX使小鼠骨髓中12个蛋白表达上调、3个蛋白表达下调,四物汤可使CTX造模后这些表达改变的蛋白有不同程度恢复。结论：四物汤可能通过影响与细胞凋亡、造血干祖细胞增殖分化有关的蛋白质而促进骨髓造血。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

四物汤中不同组分对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤中不同组分对血虚小鼠模型造血功能的作用及其机理.方法:实验各组采用3.5Gy60Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型,造模后连续灌胃7 d,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养.结果:四物汤的多糖部分及非多糖部分均有补血作用.60%～80%醇沉物、80%醇沉上清部位正丁醇萃提物、80%醇沉上清部位乙酸乙酯、正丁醇萃提后剩余物均能升高辐射损伤性血虚证小鼠外周血中白细胞、红细胞数;但20%～40%醇沉物、40%～60%醇沉物及60%～80%醇沉物的补血作用均不及20%～80%醇沉物.芍药苷具有补血作用.结论:四物汤通过多成分、多环节改善血虚证小鼠的造血功能.     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

综合放血法所致血虚证小鼠模型及 四物汤反证的代谢组学研究

目的:通过检测综合放血法所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定综合放血法所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,从代谢组学角度研究血虚证证本质及四物汤的作用机制.方法:C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、综合放血模型组、四物汤反证组,每组10只.造模10 d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物.用600 MHz超导傅立叶变换核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.01进行分段积分并归一化,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析.结果:与对照组相比,模型组的血清及各组织的内源性代谢物中乳酸、胆碱、牛磺酸、丙氨酸、低密度脂肪酸、甘油、不饱和脂肪酸、肌醉、乙酞乙酸盐、丙氨酸及庄β-羟基丁酸的含量有明显变化,这些变化在四物汤治疗组中有不同程度的回调.上述代谢物可以作为潜在的生物标记物进行相关机制的研究.结论:综合放血法制作的血虚证小鼠的糖有氧氧化受到抑制,无氧酵解减弱,脂肪动员加强,淋巴细胞增殖受到抑制及机体免疫功能受损.四物汤能够对上述血虚证病理结果进行逆转.     

四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术进行辐射损伤致血虚证以及四物汤的方证结合研究,发现辐射致血虚证及用四物汤干预后小鼠内源性代谢物的变化,基于代谢组学的方法考察血虚证的发生及四物汤的作用机制。方法:选用C57小鼠36只,按体重随机分为对照组、模型组及四物汤组。造模方法采用3.5Gy60Coγ射线全身照射制作模型,造模7 d后股动脉取血并摘取脾脏和胸腺,进行处理后用UPLC-ESI-Q-TOF-MS检测,应用Mark-erLynx XS软件对总离子流图进行色谱峰识别,利用主成分分析法对数据进行处理,采用正交偏最小二乘法进行组间数据分析。通过模式识别分析,快速确认标志物。结果:辐射损伤所致的血虚证小鼠血清中溶血磷脂、葡糖苷酸、单酰甘油酯、三羟基丁酸、神经酰胺、天冬氨酸磷酸酯、甘油磷脂等代谢物的含量变化明显;脾脏中变化明显的代谢物有单酰甘油酯、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、棕榈酸、3-羟基硬脂酸、二甲基精氨酸、苯丙氨酸、磷脂酰丝氨酸;胸腺中有甲基腺苷、谷甾醇、肉毒碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、甘油二酯、二甲基精氨酸、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、胆固醇等。结论:通过对这些生物标志物的生理功能分析,推测辐射损伤使小鼠机体的脂类代谢、糖类代谢及部分氨基酸的合成代谢发生紊乱,经典补血方剂四物汤治疗可以使之逆转并调整平衡。     

四物汤对血虚证患者血清蛋白质的影响

目的:用蛋白质组学技术考察四物汤对血虚证患者血清蛋白的影响,在分子水平上探讨四物汤治疗血虚证的作用机制。方法:收集正常、血虚证患者和四物汤用药患者的血清,用二向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证患者血清中有影响的蛋白质。结果:蛋白质组学研究发现,血虚证患者血清与正常相比有15个蛋白质的水平发生改变,其中有11个上调和4个下调,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复。胶内酶切提取蛋白进行质谱鉴定,其中血虚证患者血清与正常相比升高的蛋白质有结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,与正常相比降低的蛋白质有转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。血虚证患者服用四物汤后可降低结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,升高转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。结论:四物汤可以通过增强免疫,减轻基因损伤,增加血红蛋白等途径治疗血虚证。