淀粉样蛋白A在人下肢闭塞性动脉硬化的表达及其激活Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白3炎性体的机制

目的 观察血清淀粉样蛋白A( SAA)、Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白3( NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)在人下肢闭塞性动脉硬化症(ASO)中的表达,并通过SAA激活NLRP3炎性体的体外实验分析在ASO中NLRP3炎性体激活的可能机制.方法 免疫组织化学方法检测SAA、NLRP3、IL-1β在ASO血管壁中的表达.SAA处理巨噬细胞,Western blot检测成熟型IL-1β和裂解型Caspase-1,检测细胞中IL-1β前体蛋白、Caspase-1前体蛋白的表达.RNA干扰技术下调单核细胞(THP-1)细胞中NLRP3的表达.免疫荧光技术检测SAA对人巨噬细胞中核因子(NF) -κB p65入核的影响.结果 ASO下肢血管壁中SAA、NLRP3、IL-1β的表达较正常动脉壁上调倍数分别为10.19 ±0.29、7.11 ±0.14、5.06 ±0.15,与正常动脉比较差异有统计学意义(P＜0.01),各蛋白表达呈现出共区域化;SAA处理巨噬细胞,SAA各剂量组(1、2、5、10 mg/L)较对照组比较,NLRP3上调倍数相应为(2.49±0.34、3.19 ±0.22、3.61 ±0.29、4.46±0.20,P＜0.01),Caspase-1p20上调倍数相应为(1.32 ±0.11、4.59±0.28、17.55±1.40、25.69±1.71,P＜0.01),IL-1β p17上调倍数相应为(1.24±0.09、2.48 ±0.22、15.59±0.96、23.57±0.80,P＜0.01),下调THP-1巨噬细胞中的NLRP3表达后,SAA诱导的IL-1β分泌明显减低.SAA可以上调人巨噬细胞中IL-1β前体蛋白的表达,而且被NF-κB特异性阻滞剂Bay1 1-7082所抑制,上调倍数分别为17.64 ±2.07、6.45±1.78,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).免疫荧光显示SAA促进巨噬细胞中NF-κB p65入核.结论 SAA在ASO血管壁中广泛沉积,并上调了NLRP3和IL-1β的表达.SAA可以激活NLRP3炎性体,引起IL-1β的分泌.SAA可以上调IL-1β前体蛋白的表达,从而起到NLRP3炎性体激活致IL-1β分泌的预启动功能.因此在ASO中SAA可能通过激活NLRP3炎性体而促进动脉硬化炎症的发生、发展.     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在心肺转流大鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在心肺转流(CPB)大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。方法成年雄性SD大鼠30只,体重350～450 g,进行Morris水迷宫训练5 d后随机分为三组,每组10只:假手术组(S组)、CPB组(C组)和CPB+NLRP3炎性小体抑制剂Ac-YVAD-cmk组(Y组)。S组进行双侧隐动脉、右大隐静脉和右颈内静脉穿刺置管,但不进行CPB;C组穿刺置管后行CPB 60 min;Y组在CPB前30 min给予Ac-YVAD-cmk 8 mg/kg腹腔注射,穿刺置管后行CPB 60 min。术后第3天采用Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能,ELISA法检测血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度,Western blot法检测海马组织NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)蛋白含量,TUNEL法检测海马组织凋亡情况,计算凋亡指数。结果与S组比较,C组和Y组逃避潜伏期明显延长(P0.05),120 s穿越原平台次数明显减少(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显升高(P0.05)。与C组比较,Y组逃避潜伏期明显缩短(P0.05),120 s穿越原平台次数明显增多(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显降低(P0.05)。结论 CPB后大鼠PND可能与NLRP3炎性小体的激活有关,使用NLRP3炎性小体抑制剂可减轻大鼠PND的发生。     

尿毒症维持性血液透析患者外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平与血管钙化的相关性分析

目的:探讨分析尿毒症维持性血液透析患者外周血NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平与血管钙化的相关性。方法:选取2019年12月—2020年12月在我院进行维持性血液透析的86例尿毒症患者，使用腹部侧位平片评估血管钙化情况，将患者分为血管钙化组34例和无血管钙化组52例，采用酶联免疫吸附法检测其外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平，分析其水平变化与血管钙化的关系。结果:2组患者年龄、透析龄、血磷、超敏C反应蛋白、NLRP3、IL-1β、IL-18等差异存在统计学意义，提示其变化与血管钙化有关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示，外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平异常升高是尿毒症维持性血液透析患者血管钙化发生的独立影响因素(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示，外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平与血管钙化成正相关关系(P<0.001)。结论:外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平是尿毒症血管钙化的独立影响因素，其水平与患者血管钙化程度呈正相关关...     

基于转录组学分析降尿酸方对痰浊瘀阻型尿酸性肾病患者NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的:探讨降尿酸方对痰浊瘀阻型尿酸性肾病患者PBMCs中NLRP3/IL-1β的影响。方法:从一项单中心随机对照试验中随机选取6例受试者,其中试验组(降尿酸方联合非布司他治疗)和对照组(降尿酸方安慰剂联合非布司他治疗)各3例受试者。对试验组和对照组治疗前后与3例正常人群共15例样本的外周血白细胞进行mRNA-seq分析;提取试验组和对照组患者治疗前后的外周血单个核细胞,Western blot检测PBMCs中NLRP3、IL-1β蛋白水平差异,RT-qPCR检测PBMCs中NLRP3、Caspase-1、IL-18基因表达水平。结果:KEGG分析降尿酸方治疗后涉及到的通路有NOD样受体信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路等。试验组干预12周后PBMCs中NLRP3、IL-1β蛋白水平降低,NLRP3、Caspase-1、IL-18基因水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:降尿酸方可以抑制痰浊瘀阻型尿酸性肾病患者NLRP3/IL-1β信号通路,减轻对肾脏的炎性损伤。     

乌头汤对膝骨关节炎大鼠软骨细胞焦亡相关基因表达的影响

目的：探讨乌头汤通过调控软骨细胞炎性焦亡途径延缓膝骨关节炎软骨退变的作用与机制。方法：将36只SD大鼠(雄性,8周龄)随机分为空白对照组、模型对照组和乌头汤组,每组12只。空白对照组不造模,模型对照组和乌头汤组采用改良Hulth法造模。空白对照组与模型对照组采用生理盐水(3 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,乌头汤组采用乌头汤(生药浓度4.2 g·mL^-1)灌胃。干预8周后,麻醉状态下摘取大鼠膝关节软骨。采用Western blot检测不同组别关节软骨中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的蛋白含量表达;采用Real-time PCR检测不同组别关节软骨中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18的基因相对表达变化。结果：模型对照组和乌头汤组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白含量与基因相对表达量均上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0.01);乌头汤组能够下调NLRP3、Caspa...     

乙型肝炎病毒X蛋白通过下调微RNA-223靶向NLRP3炎症小体促进乙型肝炎病毒相关性肾炎足细胞焦亡

目的探讨微RNA(microRNA, miRNA)-223在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)X蛋白(HBV X protein, HBx)诱导的HBV相关性肾炎(HBV-associated glomerulonephritis, HBV-GN)足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法采用人肾足细胞中过表达HBx基因来模拟HBV-GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白[核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)]及炎性因子[白细胞介素1β、白细胞介素18]mRNA和蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-223的下游靶标;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况;免疫荧光检测足细胞损伤标志物...     

丁苯酞通过下调NF-κB信号通路抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤

目的  探讨丁苯酞对大鼠肾缺血-再灌注损伤（IRI）的作用机制。方法  将40只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（IRI组）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组、丁苯酞低剂量组（NBP-L组）及丁苯酞高剂量组（NBP-H组）,每组8只。检测各组大鼠血清肌酐（Scr）、血清胱抑素C（Cys-C）、血尿素氮（BUN）和血清白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平,苏木素-伊红（HE）染色观察各组肾组织病理损伤情况,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测肾组织中炎症因子、核因子（NF）-κB信号通路及细胞焦亡相关蛋白表达水平。结果  与Sham组比较,IRI组肾组织损伤较为严重,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-1β、IL-18水平均升高,蛋白质印迹法结果显示NOD样受体蛋白（NLRP3）、Gasdermin D（GSDMD）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1、IL-18、IL-1β、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白相对表达量均增加,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均增多。与IRI组比较,PDTC组、NBP-L组和NBP-H组肾组织的损伤程度均减轻,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-18、IL-1β水平均下降,蛋白质印迹法结果显示NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均减少,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均下降。与NBP-L组比较,NBP-H组肾组织的损伤程度减轻,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-18、IL-1β水平均下降,蛋白质印迹法结果显示NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均减少,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均下降。结论  丁苯酞可下调NF-κB/NLRP3信号通路的活性,降低肾IRI后焦亡相关蛋白的表达水平及炎症因子水平,进而抑制细胞焦亡,减轻肾IRI。     

乳脂球表皮生长因子8通过抑制活性氧簇/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体信号通路减轻移植肺缺血再灌注损伤

目的从活性氧簇(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抗移植肺缺血再灌注损伤的作用机制。方法健康雄性SD大鼠50只, 随机分为对照组、移植组和MFG-E8组, 袖套改良法建立大鼠左肺移植模型。MFG-E8组受体鼠术前30min经尾静脉注射rhMFG-E8 20 μg/kg, 对照组和移植组受体大鼠尾静脉注射同等量生理盐水。肺移植再灌注2 h后阻断右肺门5min, 全自动血气分析检测仪检测动脉血中氧分压(PaO2)和二氧化碳分压(PaCO2)。苏木精-伊红(HE)染色观察移植肺组织显微病理改变, 原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测移植肺组织细胞凋亡指数。组织活性氧检测试剂盒(DHE)检测肺组织中ROS水平, 干/湿法测量肺湿质量/干质量(W/D)比。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)、和凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)蛋白表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介...     

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎性体的调控机制研究进展

背景 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和酶解活化半胱氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)相互结合形成,通过活化caspase-1来间接调控IL-1β的成熟和分泌,在细胞质内发挥对外源性微生物或内源性危险信号感受器的作用. 目的 对NLRP3炎性体的调控机制研究进行综述. 内容 分别描述热蛋白结构域(pyrin domains,PYD)、泛素化、一氧化氮(nitric oxide,NO)、干扰素(interferon,IFN)、线粒体、活性氧(reactive oxygen species,ROS)等对NLRP3的调节机制. 趋向 为NLRP3相关疾病的诊疗提供参考.     

常规手术加负压吸引疗法治疗慢性下肢静脉溃疡效果观察

目的：探讨负压吸引疗法（NPWT）控制慢性下肢静脉溃疡（VLU）炎症反应,为溃疡创面自体皮肤移植创造条件的机制。方法：2018年6月至2021年12月,29例慢性下肢静脉溃疡患者,分为对照组（n=13）和观察组（n=16）。对照组采取常规静脉曲张手术加清创术,术后溃疡创面隔日常规换药;观察组除同对照组治疗外,术后溃疡创面持续负压引流1周。采集两组患者溃疡创面组织标本行组织学观察;ELISA检测IL-1β和IL-18蛋白水平变化;Western blotting检测凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-1）蛋白水平变化;生存曲线分析评估溃疡创面可行植皮时间。结果：术后7 d,观察组溃疡创面组织炎症反应较对照组明显减轻;观察组IL-1β和IL-18水平和ASC、NLRP3及Caspase-1水平均明显低于对照组;观察组溃疡创面可行植皮术的时间明显低于对照组。结论：NPWT通过抑制慢性下肢静脉溃疡创面组织炎症反应,为短时间内行创面自体皮肤移植创造条件。     

血清白细胞介素1β、半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3水平与颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的关系

目的 探讨血清白细胞介素1β(IL-1β)、半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平与颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的关系。方法 选取2020年1月至2022年1月于北京市平谷区医院及首都医科大学附属北京天坛医院拟行介入栓塞术手术治疗的80例颅内动脉瘤患者,根据术后脑血管痉挛发生情况将其分为发生组（n=33）和未发生组（n=47）。收集所有患者的基线资料,记录所有患者的实验室指标,采用Pearson相关性检验分析血清IL-1β、Caspase-3之间的相关性,采用Logistic回归模型分析颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的影响因素,绘制受试者工作特征曲线（ROC）分析血清IL-1β、Caspase-3对颅内动脉瘤患者术后发生脑血管痉挛的预测价值。结果 发生组患者血清IL-1β、Caspase-3水平、白细胞计数均高于未发生组患者,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。多因素分析结果显示,血清IL-1β、Caspase-3及白细胞计数水平升高均是颅内动脉瘤患者术后脑血管痉挛发生的危险因素（OR﹥1,P﹤0.05）。Pearson相关性检验结果显示,血清IL-1β与血清Ca...     

亚甲蓝对大鼠机械通气相关肺损伤中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体的影响

目的评价亚甲蓝对大鼠机械通气相关损伤(VILI)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠36只,8周龄,体重240～260 g,采用随机数字表法分为三组:自主呼吸对照组(C组)、大潮气量模型组(H组)和大潮气量+亚甲蓝组(MB组),每组12只。三组大鼠均行气管切开插管术,MB组经腹腔注射1%亚甲蓝50 mg/kg,10 min后以V_T 20 ml/kg行机械通气;C组经腹腔注射等容量生理盐水后保持自主呼吸;H组经腹腔注射等容量生理盐水,10 min后以V_T 20 ml/kg行机械通气。通气参数:FiO_2 21%,I∶E 1∶1,RR 80次/分,PEEP 0,通气时间4 h。于基础状态、通气结束时经颈总动脉取血行血气分析,通气结束后颈总动脉放血处死大鼠,收集肺组织标本、支气管肺泡灌洗液(BALF)。光镜下观察肺组织病理学改变,记录肺损伤评分,计算肺组织湿/干重比值(W/D)。采用ELISA法测定BALF中总蛋白含量以及血清、BALF中白细胞介素(IL)-1β、IL-18浓度;鲁米诺化学发光法检测肺组织中活性氧(ROS)含量;RT-PCR法及Western blot法分别检测肺组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA表达量及蛋白含量。结果与C组比较,H组肺损伤评分、W/D明显升高(P0.01),BALF中总蛋白以及血清、BALF中IL-1β和IL-18浓度明显升高(P0.01),肺组织中ROS含量、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量及蛋白含量明显升高(P0.01)。与H组比较,MB组肺损伤评分、W/D明显降低(P0.05),BALF中总蛋白以及血清、BALF中IL-1β和IL-18浓度明显降低(P0.05),肺组织中ROS含量、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量及蛋白含量明显降低(P0.05)。结论亚甲蓝通过抑制大鼠肺组织中NLRP3炎性小体的激活,阻碍促炎因子IL-1β及IL-18的形成,减轻大鼠VILI。     

青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤

目的  探究青蒿琥酯对大鼠肾缺血-再灌注损伤（IRI）的作用及机制。 方法  将25只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（IRI组）、低剂量青蒿琥组（ART-L组）、高剂量青蒿琥酯组（ART-H组）和NLRP3炎症小体抑制剂组（INF39组）,每组5只。分析各组大鼠血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平及肾组织病理损伤情况;检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6水平;用免疫组织化学染色法检测各组大鼠肾组织IL-1β的表达;免疫荧光染色和蛋白质免疫印迹法检测焦亡相关蛋白的表达。 结果  与Sham组比较,IRI组Scr和BUN水平升高,肾组织损伤较重,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,肾损伤分子（KIM）-1及焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1、Gasdermin D（GSDMD）、IL-1β蛋白表达水平均升高;与IRI组比较,ART-L组、ART-H组和INF39组Scr和BUN水平均下降,肾组织损伤均较轻,TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平均降低,KIM-1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达水平均下降。 结论  青蒿琥酯可抑制NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡,减少肾IRI后焦亡相关蛋白的表达及炎症因子的释放,减轻肾IRI。     

IL-1α和IL-1β在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:通过检测胃癌组织和癌旁组织中白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)和IL-1β的表达水平并分析其与临床病理特征的关系,探讨IL-1α和IL-1β在胃癌发生、发展中的作用。方法:取73例原发性胃癌新鲜的肿瘤和对应远离肿瘤切缘(≥5 cm)的癌旁组织。用RIPA裂解液提取组织中的总蛋白,BCA法测定各组织的蛋白浓度,酶联免疫吸附实验检测组织中IL-1α和IL-1β的含量,细胞因子含量与蛋白浓度的比值为相对细胞因子含量,分析相对细胞因子含量与临床病理资料的关系。结果:胃癌组织中IL-1α的含量较癌旁组织明显升高[(3.450比2.665)ng/g,P<0.05]。结论:炎性因子IL-1α和IL-1β在胃癌的发生发展中有重要作用。     

异氟醚诱导的老龄小鼠术后认知功能障碍中海马神经炎性反应及机制

目的探讨异氟醚麻醉/手术后认知功能障碍的发生机制。方法 18个月龄雄性C57BL6小鼠随机分为对照组和麻醉/手术组(1.5%～2.0%异氟醚麻醉2 h+腹腔探查术);Morris水迷宫实验检测两组小鼠麻醉/手术前和麻醉/手术后3 d认知水平变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测两组海马组织Nod样受体家族包含Pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1]、补体C1q结合蛋白(C1QBP)、兴奋性突触后蛋白(PSD95)的表达水平;免疫荧光(Immunofluorescence)法观察两组海马组织小胶质细胞中NLRP3炎症小体活化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组血清促炎因子白细胞介素(IL)-1b和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平;投射电镜技术观察两组海马线粒体的形态变化;活性氧(ROS)检测试剂盒检测两组海马组织ROS表达水平。采用独立样本t检验或Mann-Withney检验分析两组间差异。结果 Morris水迷宫结果显示, 麻醉/手术组中小鼠逃避潜伏...     

高浓度胆汁合并感染在炎症小体平台触发前炎症反应

目的 观察高浓度胆汁成分触发前炎症反应的途径.方法 分离培养大鼠外周血单核细胞,分别与5％胆汁、内毒素(LPS)、三磷酸腺苷(ATP)、高K+培养液接触,采用乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞毒性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β含量,Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)、炎症小体NALP3表达并定量分析.结果 单纯5％胆汁未能诱导IL-1β、Caspase-1、NALP3表达.LPS+胆汁组及ATP+胆汁组IL-1β浓度分别为[(769.8 ±29.4)、(788.6±32.4) ng/L],均远高于单用LPS组[(88.1±6.7) ng/L] (P＜0.01).培养6h后LPS预处理组IL-1β浓度均明显升高(871.1 ±69.7) ng/L.LDH值与IL-1β的变化间无相关.LPS+胆汁组在1.0 ×104和1.2 ×105附近见Caspase-1和NALP3蛋白表达条带.通过图片的定量研究显示LPS+胆汁组Caspase-1和NALP3明显升高(0.69±0.10、1.86±0.33).高K+培养基培养6h后,LPS+胆汁组IL-1β浓度降至(638.2±26.2)ng/L.结论 进入血循环的高浓度胆汁合并细菌感染通过炎症小体途径触发早期炎症反应,细胞外高K+能抑制此过程.     

Ghrelin通过调控NF-κB/NLRP3焦亡信号通路抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡的机制研究

目的 探究胃饥饿素（Ghrelin）调控核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法 前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α（tumor necrotic factor-α，TNF-α）炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组，通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase-1）、白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）、白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、消皮素D（gasdermin D，GSDMD）的表达，q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD mRNA表达水平，Western Blot检测磷酸化P65（p-P65）和NLRP3的表达。结果 绘制CCK-8结果曲线，确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL，TNF-α干预浓度为20 ng/mL，干预时间都为48 h；与对照组相比，TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白表达显著增高（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著增高（P＜0.05），Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高（P＜0.001），细胞焦亡相关蛋白显著降低（P＜0.05），p-P65和NLRP3的表达显著降低（P＜0.05）。结论 Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡，改善其迁移能力，这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。     

电针通过NLRP3/caspase-1通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症大鼠急性肺损伤

目的:观察电针足三里穴和肺俞穴是否通过NLRP3/caspase-1通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症诱导的大鼠急性肺损伤。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法分为5组:对照组、模型组、电针组、电针+NLRP3激活剂组、非经非穴电针组,每组6只。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型。电针组选取双侧足三里穴和肺俞穴给予疏密波电针刺激(模型制备前5 d每天进行1次,模型制备过程中每6 h进行1次,30 min/次);非经非穴电针组以相同的参数电针刺激足三里穴和肺俞穴旁开5 mm非经非穴处。于模型制备前30 min电针+NLRP3激活剂组腹腔注射100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐。建模后24 h时处死大鼠取肺组织,计算肺湿重/干重(W/D)比值,观察病理学结果并行肺损伤评分;采用ELISA法测定肺组织白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;采用Western blot法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cleaved-Caspase-1)、N端消皮素-D(gasdermin D,GSDMD-N)蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,模型组、电针组、电针+NLRP3激活剂组和非经非穴电针组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均升高,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,电针组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均降低,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P＜0.05);与电针组比较,电针+NLRP3激活剂组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均升高,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:电针刺激足三里穴和肺俞穴减轻大鼠脓毒症急性肺损伤的机制可能与抑制NLRP3/caspase-1通路介导的经典细胞焦亡途径有关。     

七氟醚后处理对脑缺血/再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的探究七氟醚后处理对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠的脑保护作用及对活性氧(reactive oxygen species,ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NOD-like receptor associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、I/R组、七氟醚后处理组(SP组),每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备脑I/R模型,SP组造模后即刻吸入2.4%七氟醚30 min。对各组大鼠进行神经功能缺损评分;获取大鼠脑组织,H-E染色和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察组织病理学变化和脑梗死体积;分析大鼠脑水肿程度及血脑屏障通透性;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡率;检测血清炎性因子(IL-1β和IL-18)及脑组织氧化应激指标[ROS、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)]的水平;Western blot法检测TXNIP/NLRP3通路相关蛋白[TXNIP、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(apotosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)]的表达。结果与sham组比较,I/R组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积明显升高(P<0.05),脑组织水肿程度及血脑屏障通透性也明显增加,脑细胞凋亡率升高(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显升高(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而GPx和SOD活性降低(P<0.05);与I/R组比较,SP组神经功能缺损评分和脑梗死体积降低(P<0.05),脑水肿程度及血脑屏障通透性下降,脑细胞的凋亡率降低(P<0.05),血清IL-1β和IL-18含量明显降低(P<0.05),脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05),而GPx和SOD活性升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理能够有效减轻大鼠脑I/R损伤,可能与其对ROS/TXNIP/NLRP3信号通路的抑制有关。     

脊柱骨折伴急性脊髓损伤NOD样受体蛋白3炎症小体及相关因子变化及其与预后的相关性

目的：研究脊柱骨折伴急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)患者 NOD 样受体蛋白 3(NOD like receptorprotein 3,NLRP3)炎症小体及相关因子与预后的相关性。方法：选择 2019 年 6 月至 2022 年 3 月收治的 86 例脊柱骨折伴急性 SCI 患者作为 SCI 组,其中男 48 例,女 38 例,年龄 33~56(43.48±6.58)岁;同期体检的 100 例健康志愿者作为对照组,男 56 例,女 44 例,年龄 34~53(45.13±6.43)岁。收集外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,PBMC)并检测 NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的 mRNA 表达,收集血清并检测白细胞介素-1β(interleukin,IL-1β)、IL-18 的水平。根据 Frankel 分级将 SCI 组分为完全损伤患者和不完全损伤患者,根据日本矫形外科学会(Japanese Orthopaedic Association,JOA)评分将 SCI 组分为预后良好组和预后不良组。比较各组间 NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 的差异,采用 Logistic 回归分析 SCI 组患者预后不良的影响因素。结果：SCI 组及对照组的 PBMC 中 NLRP3 mRNA[(1.41±0.33) vs (1.00±0.19)]、Caspase-1 mRNA[(1.44±0.35) vs (1.00±0.16)]表达水平及血清中 IL-1β[(45.34±13.22) pg·ml^-1 vs (16.58±4.24) pg·ml^-1]、IL-18 含量[(40.95±8.77) pg·ml^-1 vs(12.57±3.68) pg·ml^-1],SCI 组均高于对照组(P<0.05)。SCI 组中完全损伤患者的 PBMC 中 NLRP3 mRNA(1.63±0.34)、Caspase-1 mRNA(1.67±0.27)表达水平及血清 IL-1β(51.09±11.10) pg·ml^-1、IL-18(47.65±7.93) pg·ml^-1 高于不完全损伤患者[(1.31±0.27)、(1.34±0.33)、(42.85±13.36)、(38.05±7.48) pg·ml^-1](P<0.05);SCI 组中预后不良患者的 NLRP3mRNA(1.66±0.31)、Caspase-1 mRNA(1.72±0.31)、血清 IL-1β(51.21±11.31) pg·ml^-1、IL-18(45.70±7.25) pg·ml^-1、完全损伤(21 例)、脊髓水肿或出血 (15 例)高于预后良好患者[(1.28±0.26)、(1.37±0.36)、(42.79±13.25) pg·ml^-1、(38.90±8.63) pg·ml^-1、5 例、20 例],(P<0.05);完全损伤、PBMC 中 NLRP3 mRNA 表达是 SCI 组预后不良的影响因素(P<0.05)。结论：脊柱骨折合并急性 SCI 患者 NLRP3 炎症小体的激活与损伤加重、预后不良有关,NLRP3 表达可作为评价预后的标志物。