胃癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的:探讨胃癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞的变化及临床意义。方法:应用流式细胞仪检测52例胃癌患者(胃癌组)和24例健康对照者(健康组)的CD4 CD25 调节性T细胞水平。结果:胃癌组外周血CD4 CD25 调节性T细胞较健康组明显升高,胃癌Ⅲ Ⅳ期患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平比Ⅰ Ⅱ患者明显升高。结论:胃癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平明显升高,可能是机体免疫功能受抑制的重要机制,并可成为胃癌患者机体免疫状态临床监测的指标。     

骨髓瘤患者外周血中CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞及淋巴细胞亚群的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中CD4~+CD25~+CD~(127low/-)调节性T细胞(Treg)及淋巴细胞亚群的比例,初步探讨其在MM患者发生免疫抑制机制中作用。方法采用流式细胞术分别检测65例MM患者和20例健康对照组外周血中CD4~+CD25~+CD~(127low/-)Tregs以及淋巴细胞亚群的比例。结果 MM患者外周血中CD4~+CD25~+CD~(127low/-)Treg比例[(10.85±2.19)%]高于健康对照组[(7.48±1.66)%],差异有统计学意义(P0.01);MM患者外周血中CD3~+CD4~+(Th)细胞的比例[(31.39±5.19)%]低于健康对照组[(36.55±3.02)%],差异有统计学意义(P0.01);MM患者外周血中CD3~+CD8~+(Tc)细胞的比例[(34.80±4.29)%],高于健康对照组[(28.93±3.61)%],差异有统计学意义(P0.01);同时,MM组外周血中Th/Tc的比值(0.95±0.24)低于健康对照组(1.29±0.27),差异有统计学意义(P0.01)。结论 MM患者存在淋巴细胞亚群的比例异常,导致MM患者更易产生免疫功能失调;同时,由于MM患者CD4~+CD25~+CD~(127low/-)Treg细胞比例的增加可能进一步加剧骨髓瘤患者的免疫抑制,促进了肿瘤细胞的免疫逃逸。     

肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义.方法:采用流式细胞术检测肺癌患者60例、良性肺部疾病者20例、健康体检者20例的外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平,同时用电化学发光法检测癌胚抗原、细胞角蛋白19片断-1和神经元特异性烯醇化酶水平.结果:肺癌组外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞比例(20.93±4.47)%,明显高于良性肺病组(15.14±4.79)%和健康对照组(15.42±3.44)%,差异有统计学意义(P<0.01).外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺癌病理类型、临床分期无明显相关性,但外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平较低者比增高者预后好.外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞比例对肺癌的预测价值与癌胚抗原、细胞角蛋白19片断-1相似.结论:肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平明显增高,有可能成为肺癌预测及免疫治疗的靶点.     

外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)调节性T细胞在恶性肿瘤患者免疫功能评估中的作用

目的观察恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(CD4+CD25+CD127lowTreg)的数量变化,探讨外周血CD4+CD25+CD127lowTreg检测在恶性肿瘤患者免疫功能评估中的作用。方法以35例正常人作为对照组,采用流式细胞术检测74例肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg在CD4+T细胞的比例,分析不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127lowTreg占CD4+T细胞的百分比,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测PBMC转录因子Foxp3表达水平。结果肿瘤患者外周血中CD4+CD25+CD127low Treg占CD4+T细胞百分比为(6.19±1.82)%,明显高于对照组(3.12±1.16)%,差异具有统计学意义(P0.05)。其中Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg百分比分别为(6.08±2.14)%、(6.88±2.65)%,明显高于Ⅰ-Ⅱ期患者(5.65±1.86)%,P0.05;病理分型为低分化者CD4+CD25+CD127lowTreg百分比为(6.72±2.60)%,明显高于高分化者(5.94±2.11)%,P0.05;有淋巴结转移者CD4+CD25+CD127lowTreg百分比为(6.95±3.12)%,明显高于无淋巴结转移者(5.02±2.09)%,P0.05。结论恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg占CD4+T细胞的比例明显升高,监测CD4+CD25+CD127lowTreg有利于评估肿瘤患者的免疫功能和辅助判断肿瘤患者的病情进展及预后。     

慢性丙型肝炎患者中CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达及意义

目的：探讨 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在慢性丙型肝炎（HCV）患者中的表达及其临床意义。方法收集 HCV 患者67例,并根据是否吸毒分为吸毒丙肝组35例和非吸毒丙肝组32例;健康体检人员32例作为对照。采用流式细胞仪检测患者外周血中 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达;应用实时荧光定量 PCR 的方法检测其HCV RNA 含量。结果慢性 HCV 患者中的吸毒感染组与非吸毒感染组的外周血中 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在 CD4+ T 细胞中所占比率分别为：3.84±1.95%、4.44±1.67%,明显低于对照组6.10±1.65%（ P <0.01）;而吸毒组与非吸毒组慢性 HCV 患者血液 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值相比差异无统计学意义;HCV 患者抗病毒治疗前血液 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值明显低于治疗后和正常对照组（ P <0.01）。结论 HCV 患者治疗前患者外周血 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值较正常对照组明显降低,而在治疗有效后升高,说明CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞参与了 HCV 患者的机体免疫过程,而 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在外周血中的表达水平可能成为监测 HCV 患者体内细胞免疫状态和机体抗病毒免疫应答的指标。     

溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative coitis,UC)患者外周血CD4+CD25+ Foxp3+T细胞的表达及意义.方法:采用流式细胞术检测UC患者22例及健康对照组20例外周血CD4+ CD25+ Foxp3+在T淋巴细胞的单独或联合表达比例.结果:UC患者外周血T淋巴细胞表达CD4+的比例为(34.76±5.40)%,与健康对照组的(33.23±11.38)%比较无差异(P>0.05);CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例为(8.27±1.46)%,显著低于健康对照组的(11.4±2.17)%(P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例为(0.87±0.25)%,显著低于健康对照组的(1.55±0.55)%(P<0.05).结论:UC患者CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,可能打破了自身免疫耐受,发生了针对肠道抗原的自身免疫反应,参与了UC的发病.     

CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞异常表达与多发性骨髓瘤的关联性分析

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者和良性单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)患者外周血及骨髓组织中CD4+CD25+CD127low/-调节性T(Treg)细胞表达水平,初探MM中调节性T细胞免疫功能状态以及与疾病发生、发展的关联性.方法 采用流式细胞术分别检测33例MM患者、44例MGUS患者和30例健康者外周血以及6例MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平.分别采用溴甲酚绿法、免疫散射比浊法检测MM患者血清清蛋白(Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)水平.结果 MM组外周血中CD4+CD25+CD127low/-细胞表达高于MGUS组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MM中稳定期患者组外周血细胞水平较初诊患者组和复发、难治患者组升高,差异有统计学意义(P<0.05);但不同ISS分期的MM患者外周血细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);而进展期MM患者中,CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达在Ⅲ期高于Ⅰ期+Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05);进一步研究发现,同一初诊MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-T细胞水平低于其外周血T细胞水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达异常可辅助鉴别良、恶性单克隆丙种球蛋白血症;监测MM的进展以及疾病的活跃程度,并为进展期MM患者及时进行临床干预提供实验依据.     

再生障碍性贫血患者CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞及Notch1表达水平的变化

目的 测定再生障碍性贫血(AA)患者治疗前后外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(Treg)的数量及叉头翼状螺旋转录因子(FOXP3)mRNA、Notch1 mRNA的表达水平,探讨Treg在AA发病中的作用及其机制.方法 流式细胞术检测29例初发AA患者、14例环孢素(CsA)治疗后恢复期及11例治疗后未恢复期患者外周血中CD4+ CD25+ CD127low T细胞、CD4+ CD25+ T细胞的数量,并与正常对照比较;采用RT-PCR检测FOXP3 mRNA和Notch1 mRNA的表达水平,分析两者相关性.结果AA初发组及治疗后未恢复组患者外周血中活化CD4+ CD25+ T细胞占CD4+ T细胞比例分别为(4.3±0.7)%、(4.2±0.6)%,明显高于正常对照组[(2.4±0.8)%](P＜0.05).CsA治疗后恢复组患者比例下降为(2.6±0.7)%(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义.AA初发组及未恢复组CD4+ CD25+ CD127low T细胞在CD4+ T细胞中的比例分别为(2.4±1.2)%、(2.5±1.1)%,较正常对照组[(7.1±2.7)%]及恢复组[(5.3±1.0)%]明显降低(P值均＜0.01);但后两组比较差异无统计学意义.AA初发组患者FOXP3 mRNA及Notch1 mRNA分别为(0.260±0.011)和(0.018±0.005),较正常对照[(1.307±0.011)和(0.308±0.028)]表达明显下调(P值均＜0.01),治疗后分别为(1.287±0.012)和(0.281±0.013),表达较初发组显著提高(P值均＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P值均＞0.05).AA患者CD4+ CD25+ CD127low T细胞、FOXP3均与Notch1表达呈正相关性(P值均＜0.01).结论AA患者外周血CD4+ CD25+ CD127low Treg减少,其抑制作用减弱,导致自身反应性T细胞过度活化,抑制造血.其作用机制之一可能与靶细胞表面Notch1分子表达降低相关.     

卵巢癌患者外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的比例变化及其可能的机制。方法利用流式细胞仪检测20例卵巢癌患者外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)及肿瘤相关淋巴细胞(tumor associated lymphocytes,TALs)中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tcells,Tregs)所占的比例。10例健康人外周血PBLs中Tregs所占的比例。同时检测卵巢癌患者CD4+外周血淋巴细胞中CD69+细胞的比例。健康人PBLs在含有卵巢癌细胞株SKOV3培养上清的RPMI1640培养液(有或没有血清植物血凝素)中培养72小时后,检测Tregs所占的比例。结果卵巢癌患者外周血淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占比例与健康人相比明显增加.卵巢癌患者外周血肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占比例高于在外周血淋巴细胞和肿瘤相关淋巴细胞中的比例,但是没有统计学意义。卵巢癌患者CD4+外周血淋巴细胞中无CD69表达。结论卵巢癌患者外周血淋巴细胞中、肿瘤浸润淋巴细胞及肿瘤相关淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占的比例增加,这可能与卵巢癌细胞分泌的可溶性分子上调有关。     

消化道肿瘤患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测

CD4 CD25 调节性T细胞(regulatory T,Treg)是一类维持机体免疫动态平衡的T淋巴细胞亚群,具有免疫无能性和免疫抑制性特点[1-2]。本文对不同的消化道肿瘤、组织类型及治疗前后外周血CD4 CD25 Treg细胞的变化进行观察,以探讨CD4 CD25 Treg细胞的临床意义。1对象与方法1.1研究对象     

老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的表达及其临床意义

目的:通过对CD4+CD25high调节性T细胞(CD4+CD25high Treg)在老年消化道肿瘤患者外周血中表达情况的研究,探讨其与肿瘤发生、发展的关系.方法:采用流式细胞术检测26例健康青年人、26例健康老年人及41例老年消化道肿瘤惠者外周血CD4+CD25high Treg的水平,并进行统计学分析.结果:与健康青年人相比,健康老年人外周血CD4+CD25high Treg水平升高[(1.98±0.50)%vs(1.73±0.22)%,P＜0.05];而老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg水平比健康老年人显著升高[(3.53±1.83)%vs(1.98±0.50)%,P＜0.01];进一步的分层分析显示:随着疾病的进展,外周血CD4+ CD25high Treg水平升高,在肿瘤进展期(Ⅲ～Ⅳ期)尤其明显,与Ⅰ～Ⅱ期比较,差异有统计学意义[(4.06±1.24)%vs(2.82±0.76)%,P＜0.05].结论:老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg比率升高,可能在老年消化道肿瘤的发生、发展中起重要作用.     

急性冠脉综合征患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义

目的 探讨急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）患者的外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）和CD4^＋CD25^＋曲T细胞（CD4^＋CD25^＋^high Treg）的水平及其临床意义。方法 采用流式细胞术检测15例急性心肌梗死患者、20例不稳定性心绞痛、11例稳定性心绞痛和16例健康体检者（对照组）的外周血CD4^＋CD25^＋Treg和CD4^＋CD25^＋^high Treg的水平。结果 ACS患者CD4^＋CD25^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例较稳定性心绞jjl;和对照组显著减少,CD4^＋CD25^＋high Treg占CD4^＋T细胞比例的差异无显著性。结论 ACS患者外周血具有免疫负调节作用的CD4^＋CD25^＋Treg水平减低,可能促进了动脉粥样硬化的进展。     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4~+CD25~+Foxp3~+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞在妊娠合并ITP患者中的表达及意义

目的 初步探讨外周血CD4+CD25+调节性T(T reg)细胞在妊娠合并原发免疫性血小板减少症(I T P)中的作用.方法 选取2020年1-12月在北部战区总医院就诊的妊娠合并I T P患者100例作为试验组,其中急性I T P患者36例、慢性I T P患者64例,对照组为100例年龄、孕周相仿的正常产检孕妇.采用...     

CD4+CD25+CD127Low调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血的表达及临床意义

目的观察原发性肝癌患者经治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127(CD127Low)调节性T细胞(Treg)的数量变化。方法采用流式细胞术检测30例原发性肝癌患者外周血CD4^+CD25^+CD127^LowTreg在CD4+T细胞的比例,以180例体检健康者作为健康对照组,分析肝癌患者治疗前、后CD4^+CD25^+CD127^Low Treg细胞表达的变化。结果原发性肝癌治疗前CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞百分比为(6.21±1.53)%(<50岁)和(6.68±1.53)%(≥50岁),均显著高于健康对照组(同年龄段),差异有统计学意义(P=0.001、0.000),原发性肝癌患者治疗1个月有效者CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P=0.001)。结论CD4^+CD25^+CD127^LowTreg水平异常增高可能与原发性肝癌免疫功能调节紊乱有关,且其变化水平与临床病情的进展存在一定的相关性。     

恶性梗阻性黄疸患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨恶性梗阻性黄疸患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulatoryTcell,Treg)的变化及其意义。方法:采用流式细胞术对35例恶性、29例良性梗阻性黄疸患者和30例健康对照者外周血Treg数量进行检测,观察Treg数量与黄疸时间、黄疸程度的关系。结果:(1)与健康对照者比较,梗阻性黄疸患者(包括良性、恶性患者)Treg水平显著上升(均P<0.01);恶性梗阻性黄疸患者Treg水平较良性为高(P<0.01);(2)重度黄疸患者(总胆红素>171μmol/L)外周血Treg数量明显高于轻度黄疸患者(P<0.01);(3)Treg水平与CD3+、CD4+、CD8+T细胞值及NK细胞呈非常显著负相关,而与总胆红素之间呈非常显著正相关。结论:恶性梗阻性黄疸患者外周血CD4+CD25+Treg数量明显升高,存在免疫调节紊乱,可能是其机体细胞免疫受抑制的重要机制。     

CD4+ CD25+调节性T细胞

机体的免疫系统维持着对感染性抗原的反应和自身耐受的平衡,而对自身抗原产生免疫耐受则是防止发生自身免疫病的关键。阴性选择中的克隆清除、免疫无能和克隆忽略被认为是控制自身反应性T细胞的主要机制。近些年随着研究的深入,CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）在维持自身耐受中的作用得到进一步的认识。     

肺癌患者外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞的变化及意义

目的：探讨肺癌患者外周血中CD4＋ CD25＋调节性T细胞的变化及意义。方法：采用流式细胞术检测肺癌患者60例、良性肺部疾病者20例、健康体检者20例的外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞水平,同时用电化学发光法检测癌胚抗原、细胞角蛋白19片断-1和神经元特异性烯醇化酶水平。结果：肺癌组外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞比例（20.93±4.47）%,明显高于良性肺病组（15.14±4.79）%和健康对照组（15.42±3.44）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞水平与肺癌病理类型、临床分期无明显相关性,但外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞水平较低者比增高者预后好。外周血CD4＋ CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞比例对肺癌的预测价值与癌胚抗原、细胞角蛋白19片断-1相似。结论：肺癌患者外周血中CD4＋ CD25＋调节性T细胞水平明显增高,有可能成为肺癌预测及免疫治疗的靶点。     

哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3表达的变化

目的 探讨哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的变化及相关转录因子Foxp3表达的变化.方法 24只5周龄C57BL/6小鼠随机分为哮喘模型组和对照组,每组12只,于第0天和第14天,哮喘组以腹腔注射致敏液[0.1%的鸡卵蛋白(OVA)0.1ml与等体积液态铝混合]0.2ml致敏,对照组注射等体积生理盐水,第24、25、26天开始雾化吸入1%的OVA(哮喘组)或生理盐水(对照组)进行激发,连续3 d,于最后1次激发后48 h处死小鼠.取脾脏,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例.取脾脏组织以RT-PCR和Western blot分别检测脾脏Foxp3 mRNA和蛋白的表达.数据结果以Levene法行方差齐性检验后,进行独立样本的t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例哮喘组为(7.03±2.19)%,对照组为(9.70±2.80)%,哮喘组低于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.016);脾脏Foxp3 mRNA的表达水平哮喘组为(0.37±0.11),对照组为(0.237±0.118),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.009);脾脏Foxp3蛋白的表达水平哮喘组(0.692±0.171),对照组(0.515±0.135),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.01).结论 哮喘时抗原对CD4+CD25+T细胞的激活不足,可能在哮喘发病机制中起一定作用.     

流式细胞术检测表达FoxP3的CD4+CD25+调节性T细胞

目的 探讨转录因子FoxP3在外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)内的表达特性.方法 取正常人外周血单个核细胞(PBMC),经固定/透膜处理进行细胞内染色,用流式细胞术(FCM)检测T细胞内FoxP3.以抗人CD3/CD28诱导T细胞活化,再用定量PCR及FCM术分别检测FoxP3 mRNA及蛋白质表达水平.结果 FoxP3主要表达于CD4 T细胞,尤其是CD25高表达的CD4 T细胞,达97%左右;中等程度表达CD25的细胞中也含有少量FoxP3阳性细胞.T细胞活化后,表达FoxP3的CD4 CD25 T细胞比例显著增高,FCM检测结果与定量PCR结果一致.结论 FoxP3不仅参与维持Treg细胞的功能,也与T细胞的活化有关.FCM检测细胞核内表达的FoxP3分子为研究Treg细胞提供了一种快速、简便的方法.