可溶性HLA—Ⅰ类抗原及临床意义的研究进展

ＨＬＡ是一类复杂的人类遗传多肽性系统,其研究工作在医学实践中有十分重要的意义,其中,ＨＬＡ－Ｉ类抗原在移植排斥反应中起着重要作用,是组织排斥应答的主要抗原,同时对细胞毒Ｔ细胞起约束作用,ＨＬＡ－Ｉ类抗原除了以膜抗原形式存在于细胞膜表面外,目前也已从人类的血清和淋巴液,尿液及乳汁中检出,称为可溶性ＨＬＡ抗原。本文综述了ｓＨＬＡ－Ｉ分子的分泌、结构、检测,在免疫调节及在自身免疫病、器官移植,感染等生理     

山西汉族可溶性HLA-Ⅰ类抗原检测

目的:定量检测正常人血清中可溶性人白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ),以探讨山西汉族人群的正常参考值.方法:ELISA法检测血清sHLA-Ⅰ类抗原水平.将不同浓度的标准品和待检血清分别加入包被有特异性sHLA-Ⅰ抗体的酶标板,与生物素化的sHLA-Ⅰ、辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素共同孵育,弃上清并用洗涤液洗涤,加底物应用液四甲基联苯胺(TMB)显色,以酶标仪450nm测定吸光度值,根据不同浓度标准品显色后测得的吸光度值绘制标准曲线,测定60例健康山西人的sHLA-Ⅰ含量.结果:ELISA法能够准确检测sHLA-Ⅰ含量,60例健康山西人的sHLA-Ⅰ含量为(382.62±106.68)ng·ml-1.结论:山西汉族人群sHLA-Ⅰ正常值为(382.62±106.68)ng·ml-1.     

HLA-Ⅰ类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-Ⅰ类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片.方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-Ⅰ类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.结果:所有样本的HLA-Ⅰ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分出598个Ⅰ类抗原等位基因,可检出Ⅰ类抗原特异性57个.结论:基因芯片用于HLA-Ⅰ类抗原分型可行.其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查.     

HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用 ,其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件 ,调节HLA Ⅱ类抗原的表达。HLA Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性 ,也可通过多种途径影响HLA Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA Ⅱ类抗原 ,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达     

081 HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA-Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用,其表达调节主要发生在转录水平上.在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件,调节HLA-Ⅱ类抗原的表达.HLA-Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性,也可通过多种途径影响HLA-Ⅱ基因的表达.肿瘤细胞可异常表达HLA-Ⅱ类抗原,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达.     

可溶性HLA-Ⅰ类分子的研究进展

可溶性HLA－Ⅰ奖分子（sHLA－Ⅰ），是以可溶形式存在于血清或其他体液中的HLA－Ⅰ类抗原。健康个体血清中sHLA-Ⅰ浓度为0．5～25μg／ml。不同的个体sHLA-Ⅰ水平的高低与表型相关。sHLA－Ⅰ可抑制免疫应答和诱导免疫耐受，并且与器官移植、肿瘤、HIV等病毒感染、自身免疫病等现象相关。     

可溶性HLA-Ⅰ的检测用于对肾移植排斥反应的动态监控

目的：研究对肾移植术后可溶性HLA-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)的含量进行动态监测的意义。方法：采用：EHSA双抗夹心法测定血清中sHLA-Ⅰ含量，检测60例正常广东人sHLA-Ⅰ值，观察10例肾移植患者术后血清中sHLA-Ⅰ变化及其临床意义。结果：肾移植患者的sHLA-Ⅰ水平在临床出现急性排斥前1-3天显著增高，应用免疫抑制剂时sHLA．I下降；未发生排斥反应者则无明显波动。结论：动态监测sHLA-Ⅰ能预示肾移植排斥的发生，对治疗效果及预后的判断也有重要价值。     

中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA-Ⅰ类抗原之间的相关性

目的：探讨中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA-Ⅰ抗原之间的相关性，找出白血病的易感基因。方法：采用特异性寡核苷酸探针杂交(PCR/SSO)法，初步对43名白血病病人和66名健康对照进行了HEA-Ⅰ抗原分型。结果：经过SSPS10．0统计软件分析，中国甘肃地区汉族白血病患者HLA-A’01和HLA-A‘11基因的统计结果分别为x^2=6．350，P=0．028、X^2=5．574，P=0．018。显示相关性。结论：中国甘肃地区汉族人群中HLA-A01和HLA-A’11与白血病有相关性。     

MHC Ⅰ类分子限制性抗原的加工与递呈

MHC分子限制性抗原的加工与递呈是近年基础免疫学研究热点之一。MHCⅠ类分子将加工后的抗原递呈给CD8T淋巴细胞，此路径的抗原加工与递呈由于其重要性而受到广泛重视，本文就近年来这一领域的研究成果作一综述。     

维吾尔族妇女宫颈病变组织中HLA-Ⅰ类抗原、CD3和CD8的表达

目的通过检测维吾尔族妇女子宫颈病变组织中人类白细胞抗原Ⅰ(human leukocyte antigen classⅠ,HLA-Ⅰ)、CD3和CD8分子的表达,探讨子宫颈病变中HLA-Ⅰ类抗原与CD3和CD8分子表达的关系。方法采用免疫组织化学方法检测HLA-Ⅰ蛋白、CD3和CD8分子在慢性子宫颈炎、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和子宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者石蜡包埋组织中的表达水平。结果 HLA-Ⅰ蛋白在子宫颈炎、CIN和子宫颈癌组织中的阳性表达率分别为96%、70.3%和50.6%,并且随着子宫颈癌病理分级和临床分期的增加其阳性表达率减少(P0.05)。CD3和CD8分子在子宫颈炎、CIN和子宫颈癌组织中的阳性表达率分别为96%、78.1%、66.7%和96%、84.4%、55.6%;CD8分子在子宫颈病变中的表达趋势与HLA-Ⅰ蛋白表达相似,并且与FIGO分期进展和肿瘤分化程度以及淋巴结转移密切相关(P0.05);HLA-Ⅰ类抗原与CD3在CIN和子宫颈癌中表达呈正相关(r=0.422,P0.001;r=0.421,P0.001),HLA-Ⅰ类抗原与CD8分子在子宫颈病变中的表达呈正相关(r=0.422,P0.001;r=0.410,P0.001)。结论 HLA-Ⅰ类抗原、CD3和CD8分子在子宫颈病变中的表达减少可能与子宫颈癌的发生、发展有关。     

HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

非经典MHC Ⅰ类分子与免疫调节

<正> 从线虫到人类,在病原体识别、信号转导途径及效应机制等方面均高度相似,这些防御机制有着共同的进化起源。至今研究过的脊椎动物中,都存在结构与功能相似的主要组织相容性复合体(MHC),即一组紧密连锁的高度多态性基因组成的染色体区域,其产物表达在不同细胞表面。人类MHC,又称白细胞抗原(HLA)系统,位于第6号染色体短臂(6p21.31),跨度3.6 Mb,是免疫功能相关基因最集中、基因密度最高、多态性最丰富、与疾病关联最密切的一个区域,一直是免疫学和遗传     

HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因与HBV感染预后相关性研究

近年来HLA等位基因与HBV相关性研究，相继有所报道，但因被研究人群种族、检测方法、实验设计方面的差异，研究结论也有所不同，因而HLA与乙型肝炎的相关性，目前尚无定论。我们随机选取HBV感染后不同临床类型患者，采用序列特异性引物一多聚酶链式反应（SSP-PCR）方法，进行了HLA—Ⅰ，Ⅱ类基因与HBV感染预后相关性研究，现将结果报道如下。     

可溶性HLA免疫生物学研究进展

可溶性人类白细胞抗原（Soluble Human Leukocyte Antigen,sHLA)与细胞膜表面HLA分子一样，在体内参与免疫应答，具有免疫调节功能，可诱导产生免疫耐受，抑制细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的溶细胞作用。在器官移植、感染性疾病及某些自身免疫性疾病等人血清中，sHLA有明显的变化。健康个体血清中sHLA含量很低，变动范围为0.5-25μg/ml。临床上血清sHLA水平可作为预测移植物排斥反应、评估移植预后、反映感染性疾病及某些自身免疫性疾病活动状态、观察肿瘤分化程度及预后的指标。     

可溶性HLA-Ⅰ的检测及中国人正常值

目的：ｓＨＬＡⅠ可预测器官移植排斥反应及监控某些疾病。为了介绍ｓＨＬＡⅠ类抗原定量检测技术及中国人ｓＨＬＡⅠ正常值。方法：采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法,以Ｗ６／３２ｍＡｂ包被酶标板,加被检血清,再加β２ｍＨＲＰ及底物显色。以不同浓度ｓＨＬＡⅠ标准品的结果绘出标准曲线并测定１１３例正常人ｓＨＬＡⅠ含量。结果：ＥＬＩＳＡ法可以准确定量测定血清中ｓＨＬＡⅠ,中国人ｓＨＬＡⅠ正常值为７８９２７±５０６３２ｎｇ／ｍｌ。结论：ＥＬＩＳＡ法检测ｓＨＬＡⅠ具有特异、敏感及重复性。     

HLA-Ⅱ类基因与人类疾病相关性研究进展

通过DNA分型技术 ,已经明确了多种疾病的发生和发展与HLA Ⅱ类基因相关联。可通过计算相对危险因子 (RR)来判断HLA等位基因的频率。HLA Ⅱ类基因多态性可以改变HLA分子、抗原、T细胞之间相互作用的特性 ,并因此控制对外来抗原 (有时自身抗原 )的免疫应答。HLA Ⅱ类基因的编码的某一氨基酸序列控制着对疾病的易感性和临床性状。构成HLA基因群的各个基因是高度连锁的 ,因而与某一特定疾病关联的易感基因有可能不是单一的 ,而是一些连锁基因的组合。     

HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的关系

妊娠期糖尿病是遗传因素和环境因素共同作用的结果，而人类白细胞抗原（HLA）是其最重要的影响因素之一，多种研究结果表明妊娠期糖尿病的结局可能与其他糖尿病有关联，不同国家不同地区人群各型糖尿病的人类白细胞抗原基因型不同，现就此综述如下。     

MHC-Ⅰ链相关基因最新研究进展

人类MHC I链相关基因 (MHCclassIchain relatedgenes ,MIC)位于第 6号染色体短臂HLA Ⅰ类区域。但这些基因的组成、表达和产物不同于HLA Ⅰ类基因。MIC的编码蛋白被认为是上皮细胞应急 (stress)状态的标志 ,并作为激活NK细胞受体 (NKG2D)的配体。目前 ,已有MIC蛋白与NKG2D结合的分子模型报道。尽管MIC的相关功能和多态性的意义并没有被完全阐明 ,MIC的高可变性和高多态性却是不争的事实[1] 。下面就MIC的表达、蛋白的结构、功能、基因座位、基因多态性和与疾病的关联作一综述。     

不同IL-15转染对NCI-H446 HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型（转染IL-15成熟肽基因的NCI-H446／IL-15mp细胞、转染原型IL-15基因的NCI-H446／IL-15细胞和转染以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因的NCI-H446／IL-2sp-IL-15mp细胞）基础上,以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪（Fluorescence-activated cell Sorter,FACS）分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCI-446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL-15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）对野生株NCI-H446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCI-H446／IL-15、NCI-H446／IL-15mp和NCI-H446／IL-2sp-IL-15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL-15基因对NCI-H446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因,抑制NCI-H446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL-15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL-15基因均可增强NCI-H446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同;以改型IL-15者最高,IL-15成熟肽者次之,原型IL-15者最低。     

018 MHC-Ⅰ链相关基因最新研究进展

人类MHC-Ⅰ链相关基因(MHC class Ⅰ chain-related genes,MIC)位于第6号染色体短臂HLA-Ⅰ类区域.但这些基因的组成、表达和产物不同于HLA-Ⅰ类基因.MIC的编码蛋白被认为是上皮细胞应急(stress)状态的标志,并作为激活NK细胞受体(NKG2D)的配体.目前,已有MIC蛋白与NKG2D结合的分子模型报道.尽管MIC的相关功能和多态性的意义并没有被完全阐明,MIC的高可变性和高多态性却是不争的事实[1].下面就MIC的表达、蛋白的结构、功能、基因座位、基因多态性和与疾病的关联作一综述.