MDR1、GST-π、p53、HER-2／neu基因表达对卵巢癌近期化疗效果的影响（摘要）

目的评价MDR1、GST－π、p53、HER－2／neu基因过度表达在卵巢癌化疗耐药中的临床价值。方法SABC法检测了49例卵巢癌标本MDR1、GST－π、p53、HER－2／neu基因的表达。结果卵巢癌MDR1、GST－π、p53、HER－2／neu表达阳性者近期化疗有效率分别为14．30％、27．3％、41．67％、24．63％,而表达阴性者近期化疗有效率分别为53．60％（P＜0．05）、56．30％（P＜0．05）、48．20％（P＞0．05）、75．00％（P＜0．05）,MDR1、、HER－2／neu基因表达密切相关。结论卵巢癌MDR1、GST－π、HER－2／neu基因表达明显影响卵巢癌的近期化疗效果,MDR1与HER－2／neu表达的相关性提示晚期卵巢癌MDRI表达可能与疾病的进展有关而非仅由化疗所诱发,HER－2／neu似有可能作为卵巢癌耐药评价标志的一个补充,但p53基因突变与卵巢癌化疗耐药的关系尚待阐明。     

胃癌多药耐药基因的表达及其意义

目的：探讨5种多药耐药（MDR）基因在胃癌组织中的表达，建立MDR的基因诊断标准。方法：用逆转录－聚合酶链反应法（RT－PCR）及流式细胞术检测胃癌组织中5种MDR基因的mRNA和蛋白质的表达，用四氯唑蓝快速比色法（MTT）检测抗癌药物对胃癌原代细胞的IC50值。结果：胃癌组织mdr1,MRP，LRP和GSTp1mRNA表过增加，TopoⅡαmRNA表达最减少，5种MDR基因mRNA表达量之间无相关性；胃癌耐药涉及mdr1,MRP,LRP,GSTp1和TopoⅡα基因，mdr1mRNA≥0.4,MRP mRNA≥0.5,LRP mRNA≥0.9,GSTp1 mRNA≥0．8和TopoⅡmRNA≤0．3为耐药联合诊断标准，符合率为98．6％，结论：胃癌组织中存在5种MDR基因，分别介导不同的多药耐药现象，多重MDR是胃癌耐药的主要形成，用RT－PCR方法联合检测5种MDR基因mRNA表灰在胃癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

MDR_1mRNA检测在胃癌化疗方案选择中的意义(附20例分析)

本文对20例胃癌细胞原发性MDR1mRNA水平进行检测，并且对其影响肿瘤细胞mdr－1基因表达的因素采用多因素电子计算机Logistic回归模型进行分析。结果显示：胃癌细胞MDR1mRNA表达与年龄、性别、肿瘤的大小、分期、分化程度等因素之间无统计学关系（P＞0．1）；与肿瘤的淋巴结转移（P＝0．0107）、局部组织浸润（P＝0．0009）关系密切。提示：胃癌病人术后化疗方案的设计应根据肿瘤细胞mdr－1基因检测结果而拟定。对术中肿瘤已有淋巴结转移和（或）已有局部组织浸润的胃癌病人，应尤为重视其MDR1mRNA表达的检测，以选择最适宜的化疗方案，达到满意的化疗目的。     

胃癌病人外周血及肿瘤组织中多药耐药基因表达的相关性

目的 探讨多药耐药基因（MDR1）在胃癌病人外周血中的表达，并观察与肿瘤组织中多药耐药基因（MDR1）表达的相关性。方法 荧光定量RT-PCR法检测胃癌病人外周血及肿瘤组织中MDR1表达水平。结果 病理证实的初治胃癌病人31例，外周血中MDR1阳性率38．7％，肿瘤组织中MDR1阳性率77．4％．肿瘤组织中MDR1阳性者中50％外周血MDR1阳性，而肿瘤组织中MDR1阴性者中外周血MDR1无阳性表达，二者有相关性（P〈0．05）。结论 外周血中MDR1表达与肿瘤组织中MDR1表达具有一致性，前者可作为后者的补充。     

直肠癌组织及外周血中多药耐药基因的表达及其相关性的研究

目的：检测多药耐药相关基因（ MDR1）在直肠癌组织及外周血中的表达及其相关性,探讨其临床意义。方法：采用Real-time RT-PCR法检测62例直肠癌患者手术切除组织及外周血的MDR1 mRNA的表达水平。结果：直肠癌组织及外周血的MDR1 mRNA的阳性表达率分别为77．4％（48/62）和69．4％（43/62）,两者之间呈显著相关（r＝0．686,P＜0．01）。肿瘤组织中MDR1 mRNA表达与分化程度有关,外周血中MDR1与肿瘤大小密切相关。结论：在直肠癌患者的肿瘤组织和外周血中均可检测出MDR1 mRNA较高水平的表达,检测外周血中MDR1 mRNA表达能间接反映癌组织对化疗药物的耐受性。     

恶性胸腹水和实体肿瘤患者多药耐药基因表达的检测及临床意义

目的：探讨多药耐药相关基因表达对肿瘤化学药物治疗（化疗）效果监测的指导意义;了解原发性乳腺癌多药耐药基因1（MDR1）谷胱甘肽S－转移酶（GST－π）mRNA共表达及其与临床和预后的关系。方法：采用半定量RT－PCR方法检测16例恶性胸腹水肿瘤细胞和102例实体肿瘤多药耐药基因MDR1的mRNA的表达,以及其中84例乳腺癌MDR1和GST－π的mRNA共表达。结果：（1）16例恶性胸腹水肿瘤细胞和18例实体肿瘤组织MDR1的mRNA表达的阳性率为79．8％,且中、高表达为33．3％;GST－π的阳性表达率33．3％,而中、高表达仅为4．8％,2组比较差异有非常显著的意义(P＜0．01）;术前化疗组的MDR1mRNA阳性率87．8％,与术前未化疗组的68．6％比较,差异有显著意义（P＜0．05）;MDR1mRNA表达阳性率在腋淋巴结转移组中89．1％,林巴结无转移组中为68．4％,2组比较差异有显著意义（P＜0．05）;在术后有复发转移 组中GST－πmRNA阳性率为71．4％,与无复发转移组的20．6％比较,差异有显著意义（P＜0．05）;GST－πmRNA表达阳性率在雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR0阳性组中,比ER、PR 阴性组高,2组比较差异有显著意义（P＜0．05）。结论：MDR1mRNA表达水平与临床化疗疗效具有较好的相关性,可望作为肿瘤化疗疗效的一项监测指标;MDR1是乳腺癌的主要耐药机制;术前化疗可诱导MDR1mRNA的表达;MDR1和GST－πmRNA表达是乳腺癌有意义的预后指标,对于患者的预后的评估具有指导.意义     

RT－PCR法检测胃癌组织mdr－1基因的表达及临床意义

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了３０例胃腺癌的ｍｄｒ－１基因的表达，结果发现：术前化疗的胃腺癌ｍｄｒ－１表达阳性率为９１％，明显高于术前非化疗组的阳性率（４７％）（Ｐ＜０．０１）。在术前非化疗组中，中分化胃癌的阳性率高于低分化胃癌的阳性率（Ｐ＜０．０５），ｍｄｒ－１基因的表达与胃癌转移的发生率没有明显的关系。临床上检测胃癌的ｍｄｒ－１基因的表达，可以帮助选择术后的化疗方案。     

急性白血病多药耐药性与临床疗效关系的探讨

目的：探讨白血病细胞的多药耐药性与临床疗效及预后的关系。方法：采用逆转录聚合酶链法（RT－PCR）检测65例急性白血病（AL）患者的多药耐药基因（MDR1mRNA)表达。同时采用MTT法对35例患者做体外药物敏感试验。结果：初治组MDR1mRNA阳性表达率为31．1％,复发难治组性表达率为75．0％;MDR1mRNA阳性表达组完全缓解率和总缓解率均低于MDR1mRNA阴性表达组（P＜0．01）。药敏试验与化疗疗效相关,总临床符合率为80．0％。结论：MDR1mRNA表达及体外药敏检测与AL的化疗效果及预后密切相关,可作为判断疗放与预后的重要指标。     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3／mdr1的效率

多药耐药基因（MDRI）编码的P－糖蛋白（Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3．mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－AS）通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3／mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－S）同样导入细胞为对照。经以旨质体介导的1．6μmol/LMDR1-AS转染后,Pgp阳性的细胞百分数从100％降至48．7％,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1－AS转当柏,Pgp阳性细胞的百分数也从100％分别降至52．6％和86．7％,因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率。     

上皮钙黏附素在胃癌中表达的意义及诱导化疗后的改变

目的：探讨上皮钙黏附素（E-cd)在胃癌中的表达与胃癌生物学行为的关系。以及术前诱导化疗后E-cd在胃癌及癌旁组织中的变化，以确定术前应用短程化疗的意义。方法：采用免疫组织化学（S－P）法测定62例胃癌组织及癌旁组织E-cd的表达水平，其中32例以15mg/(kg.d)5－氟尿嘧啶（5－FU）术前进行1－5天的化疗，余30例为对照组，术中收集胃癌及癌旁组织标本。结果：E-cd在正常胃黏膜皆表达强阳性，在胃癌组织弱阳性及阴性表达占70％（21／30），E-cd的表达与胃癌细胞分化相关。5－FU术前化疗可以明显提高胃癌组织的E-cd阳性表达率（与对照组相比，P＜0．01），而且5－FU≥3．0g组与5－FU＜3．0g组之间差异具有显著性（P＜0．025）；在癌旁组织中5－FU≥3．0g组与非化疗 之间E-cd阳性表达率差异有性（P＜0．025），结论：E-cd的存在与否可能决定胃癌细胞的分化程度，术前应用5－FU诱导化疗可以提高胃癌细胞的阳性表达率。可以提高癌旁细胞的阳性表达率，术前诱导化疗可能减弱胃癌细胞的侵袭性。     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

Ｌｉｍｓ Ｅ：一个新的ＬＩＭ同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因.方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定.结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1 164 bp.编码387个氨基酸.结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Liras基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础.     

哺乳动物性别决定基因的研究进展

目的了解哺乳动物性别决定基因的作用与功能。方法查阅本领域国内外文献并进行综述。结果SRY、SOX9、WT1、SF1、AMH及DAX1等基因都参与哺乳动物性别决定。结论性别决定基因的研究对性分化与发育异常等临床疾病的诊断和治疗具有十分重要的意义。     

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。     

穿梭质粒pZH32的构建

以pS189、pSV_2gpt、pMCi5为材料,构建了以EB病毒为基础,以酪氨酸tRNA琥珀突变校正基因SupF为靶基因,以黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因Eco gpt为选择标记基因的穿梭质粒pZH32。pZH32长9.4kb,克服了以SV40为基础的穿梭质粒自发突变率高以及宿主范围局限的缺点。SupF基因遗传背景清楚,长度126bp,便于进行序列分析。gpt基因使转化克隆的筛选更加方便。有利于建立一种化学诱变剂的分子检测系统,研究基因突变的类型和突变机制。     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

Rh(-)献血者128例基因分型

目的：探讨Rh(-)献血者RhD基因分型的临床意义。方法：采用PCR－－SSP技术检测郑州市128例Rh（－）献血者的RhD基因结构，用氯仿／三氯甲烷法放散检测D^u检测，结果：RhD基因多态性存在3种基本形式，其中外显子完整存在32例（25．00％），全部为D^u型，完全缺失85例（66．41％），部分缺失11例（8．59％），其中2例为D^u型。结论：RhD基因的丰富多态性对于确保输血安全具有指导意义。     

肿瘤特异性报告基因载体的构建

目的：将构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤行异性表达的逆转录病毒载体，增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法：PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体P^LXSN中，再将突变型绿色荧光蛋白（mtGFP)基因克隆至该启动子下游。结果：质粒P^LHSN经EcoR I和BamH I酶切后可切出510bp和5.8kb两条片段；质粒P^LHGSN经BamH I酶切可切出520bp和6.7kb两条片段。结论：成功构建了携带HER2基因启动子和mtGFP报告基因的逆转录病毒载体。     

慢性胃炎胃粘膜上皮细胞中bax、fas、p16基因的表达

目的:探讨bax、fas和p16在胃粘膜病变发生发展过程中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法,检测慢性浅表性胃炎(CSG)和轻、中、重度慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜上皮细胞中bax、fas(促凋亡基因)和p16(增殖负调控基因)基因蛋白的表达情况.结果:CSG和轻、中、重度CAG胃粘膜中bax的表达率分别为41.75%、72.41%和78.26%,fas的表达率分别为39.81%、65.52%和78.26%,p16的表达率分别为9.71%、24.14%和30.43%.轻、中、重度CAG与CSG比较,bax、fas、p16的表达差异有显著性意义P<0.05～0.01.轻、中、重度CAG间比较,差异无显著性意义.结论:bax、fas和p16的高表达,使得细胞增殖/凋亡的比例失衡,在胃粘膜病变的发生发展中可能有重要意义.     

应用RNA干扰抑制目的基因在小鼠体内表达

目的研究RNA干扰(RNAi)对体外和体内基因表达的沉默作用。方法以PCR方法从基因组DNA中克隆出依赖于RNA聚合酶Ⅲ的H1启动子,并用于驱动RNAi片段的合成;构建特异性针对目的基因(绿色荧光蛋白,GFP)的RNAi载体(Pi)。将RNAi干扰载体和GFP载体转染NIH3T3细胞,应用荧光显微镜观察、RT-PCR、流式细胞技术(FACS)分析上述细胞中RNAi对目的基因GFP表达的抑制效果,进一步在个体水平将RNAi载体注入小鼠体内,研究RNAi对GFP表达的抑制情况。结果RNAi能有效地使NIH3T3细胞中GFP表达量降低约60%以上,并能有效地抑制GFP在转基因小鼠体内的表达。结论RNAi技术能抑制目的基因在体内外的表达,是一种有效的基因治疗工具。