雌孕激素对大鼠成骨细胞增殖及转化生长因子β_1 mRNA表达的影响—雌激素、孕激素、雌激素加孕激素对骨骼系统的作用机制何在?

目的比较17β-雌二醇(E)、孕酮P对体外培养的大鼠成骨细胞OB增殖及转化生长因子β1TGF-β1mRNA表达的影响。方法分离培养大鼠OB,在培养液中:对照组不含E、P,E组含E10-8molP组含P10-7mol,E P组含E10-8mol P10-7mol。用MTT法检测细胞增殖能力,用RT-PCR方法测定OBTGF-β1mRNA含量。结果P组细胞数、TGF-β1mRNA含量比对照组明显增高P<0.01,P<0.001,E组及E P组与对照组比较两项无明显差异P>0.05。P组细胞数的增加与TGP-β1mRNA表达量增加不同步。结论P促进体外培养的大鼠OB增殖及TGF-β1基因转录,这些可能是P促进骨形成的重要机制之一。     

阿魏酸对大鼠肝纤维化过程中肝细胞的保护作用及其可能机制

目的探讨阿魏酸干预对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肝细胞增殖、凋亡影响及其保护肝细胞具体作用机制。方法体外培养大鼠肝细胞,随机分为:空白对照组,TGF-β1组(2. 5 ng/ml),100μmol/L阿魏酸组(阿魏酸100μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml),200μmol/L阿魏酸组(阿魏酸200μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml),400μmol/L阿魏酸组(阿魏酸400μmol/L+TGF-β1 2. 5 ng/ml)。各组均加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液,实验组按照剂量按要求添加。MMT法检测肝细胞增殖情况;流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测肝细胞Smad3mRNA表达情况; Western Blot检测肝细胞Smad3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果与TGF-β1组相比,MTT实验结果显示阿魏酸促进肝细胞增殖,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。流式细胞仪实验结果显示阿魏酸抑制肝细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P 0. 05)。实时荧光定量PCR结果显示阿魏酸抑制肝细胞Smad3 mRNA表达,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。Western blot结果显示阿魏酸抑制肝细胞细胞Smad3蛋白表达,且呈剂量依赖性(P 0. 05)。并进一步发现阿魏酸增加肝细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制肝细胞纤维化(P0. 05)。结论阿魏酸保护肝细胞的机制可能是抑制TGF-β1诱导肝细胞Smad3表达,促进MMP-2、MMP-9表达,减少肝细胞凋亡,并促进肝细胞增殖,减轻肝脏纤维化,并与阿魏酸呈剂量依赖性。     

OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖及cbfa1,IGF-1 mRNA表达的影响

目的 探讨OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞(OB)增殖、分化及cbfa1,IGF-1mRNA表达水平的影响,以期发现对骨质疏松的潜在治疗价值。方法 采用无血清培养条件,分别观察不同浓度OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠OB增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响;逆转录-聚合酶链反应检测OGP(10-14)及其类似物G48A对无血清培养大鼠三代OB cbfa1,IGF-1 mRNA表达的调节。结果 透射电镜下观察,OGP(10-14),G48A和PTH组OB呈成骨相,而CON组OB呈退化状态; OGP(10-14)和G48A对大鼠OB的增殖和ALP活性调节存在浓度-效应关系,OGP(10-14)和G48A组大鼠OB cbfa1,IGF-1 mRNA的相对表达水平较CON组显著上升(P 0. 05)。结论 OGP(10-14)及其类似物G48A在体外具有促进大鼠OB增殖与分化的作用,OGP(10-14)和G48A干预上调大鼠OB cbfa1,IGF-1mRNA的表达。OGP(10-14)和G48A可能在调节成骨细胞功能方面发挥了重要作用。     

P物质对体外培养大鼠心肌细胞β1-肾上腺素能受体表达下调作用的研究

目的 观察P物质(SP)对体外培养新生大鼠心肌细胞β1-肾上腺素能受体(β1-AR)表达的影响.方法 选择出生1～3 d的SD大鼠.分离、培养心肌细胞,将细胞培养至72 h待用.用6孔培养板将细胞随机分为对照组与10-7mol/L SP组,每组3孔;采用免疫细胞化学技术测定心肌细胞中β1-AR的表达.另取15孔培养板将细胞随机分为对照组(不加药物干预)与SP组(分别给予10-9、10-8、10-7、10-6mol/L SP干预),每组3孔;采用流式细胞术测定心肌细胞膜表面β1-AR的表达.结果 免疫细胞化学结果显示,SP组心肌细胞β1-AR阳性单位和平均吸光度(A)值均低于对照组(阳性单位:179.61±48.18比205.79±117.42,A值:128.26±22.72比157.35±33.11,P均<0.05).流式细胞术结果显示,不同浓度SP组β1-AR表达均低于对照组.除10-9mol/L SP组(158.87±3.12)外,10-8、10-7、10-6mol/L SP组与对照组比较差异有统计学意义(151.85士4.63,135.00±6.84,121.41±5.22比161.35±3.09,P均<0.05),且呈剂量依赖性.结论 SP可以抑制体外培养大鼠心肌细胞β1-R的表达.     

PCI-neo-肝细胞生长因子对脂多糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨PCI-neo-肝细胞生长因子(PCI-neo-HGF)对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达是否有抑制作用,以及这种抑制作用是否与对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的抑制有关。方法体外培养GMCs并分为5组,(1)Ctrl:对照;(2)C+L:GMCs+LPS(10μg/ml);(3)C+L+P-n:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo(2μg);(4)C+L+P-n-H2:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo-HGF(2μg);(5)C+L+P-n-H8:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo-HGF(8μg);用RT-PCR的方法测定α-SMA及β-actin mRNA的表达,用Western方法检测及α-SMA,TGF-β1及β-actin的蛋白表达。结果与Ctrl组相比,C+L及C+L+P-n组α-SMA mRNA及蛋白表达增多(P0.05),TGF-β1蛋白表达增多(P0.05);与C+L相比,C+L+P-n-H2及C+L+P-n-H8组α-SMA mRNA及蛋白的表达均减少(P0.05),TGF-β1蛋白的表达减少(P0.05)。与C+L组比较,加入TGF-β1抑制剂组α-SMA蛋白表达水平下降(P0.05)。结论PCI-neo-HGF可抑制LPS刺激的GMCs的α-SMA的mRNA及蛋白表达,且这种抑制作用可能与其对TGF-β1表达的抑制有关。     

氟伐他汀抑制高糖腹透液诱导人腹膜细胞TGF-β合成及细胞外基质产生的机制研究

目的 观察不同浓度氟伐他汀对高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMC）转化生长因子β（TGF-β）合成及细胞外基质产生的抑制作用.方法 体外培养HPMC,同步化24 h后分组,正常对照组、高糖腹透液组、高糖腹透液＋氟伐他汀（108～106 mol/L）组.RT-PCR方法检测过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPAR-γ）、TGF-β1、I型胶原（Collagen I）、纤维连接蛋白（Fibronectin）mRNA的表达.ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化.结果 高糖上调HPMC刺激后PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的表达,12 h达到最高峰.与高糖组比较,氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的Fibronectin蛋白表达的升高（P〈0.01）.结论 氟伐他汀可以降低高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞PPAR-、TGF-β1、Collagen I的表达进而达到减少纤维连接蛋白表达.     

血红素加氧酶-1对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β_1和纤维连接蛋白表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉(CoPP)+高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP+高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP+高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP+高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP+高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP+高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。     

肾上腺髓质素和转化生长因子β_1对肺成纤维细胞增殖及c-myc表达的影响

目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)促肺成纤维细胞增殖及c-myc基因表达的影响。方法体外原代培养人胚肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblasts,HFLFs),分为对照组、AM组、TGF-β1组和AM+TGF-β1组,采用MTT法观察各组光吸度(optical density,OD)值;各组提取细胞总RNA,采用反转录PCR观察c-myc基因mRNA表达情况。结果 AM+TGF-β1组HFLFs细胞培养24、48、72h时OD值(0.615±0.054、0.483±0.017、0.675±0.014)明显低于TGF-β1组(0.830±0.012、0.753±0.089、0.929±0.039)(P0.05),TGF-β1组HFLFs细胞培养72h时OD值(0.929±0.039)明显高于对照组(0.605±0.274)(P0.05),AM组HFLFs细胞培养24、48h时OD值(0.559±0.019、0.412±0.096)明显低于对照组(0.785±0.081、0.646±0.038)(P0.05);AM组c-myc mRNA相对表达量(0.450±0.025)明显低于对照组(P0.01);TGF-β1组c-myc mRNA相对表达量(1.160±0.100)高于对照组(P0.05);AM+TGF-β1组c-myc mRNA相对表达量(0.340±0.030)低于TGF-β1组(P0.01)。结论 AM能抑制肺成纤维细胞增殖和c-myc基因表达,AM可能具有抗纤维化作用。     

尾加压素Ⅱ对原代大鼠肝脏枯否细胞分泌TGF-β1的影响

目的探讨尾加压素II(UII)对原代大鼠肝脏枯否细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法分离培养的原代枯否细胞接种于24孔板内培养,以不同浓度UII刺激原代大鼠枯否细胞24 h,以1×10-6mol/L UII刺激原代大鼠枯否细胞不同时间,细胞上清液中TGF-β1蛋白含量用酶联免疫吸附试验方法测定;将原代枯否细胞分为对照组、UII组、UII+Palosuran组。各组培养24 h、48 h,检测各组上清液中TGF-β1蛋白含量,以实时定量PCR检测各组TGF-β1及TβRⅠ的基因表达。结果 UII以时间依赖方式促进枯否细胞分泌TGF-β1,在24 h达峰,48 h呈下降趋势(P0.01)。UII以浓度依赖方式促进枯否细胞分泌TGF-β1(P0.01)。UII的促TGF-β1分泌作用能被Palosuran所阻断(P0.01);UII亦可促进TGF-β1及TβRⅠ的基因表达,Palosuran可抑制其高表达(P0.01)。结论UII能够以时间及浓度依赖方式促进大鼠枯否细胞表达TGF-β1,而UII受体拮抗剂Palosuran可阻断其高表达,其机制可能与抑制TβRⅠ的表达有关。     

铁沉积于巨噬细胞对转化生长因子及炎症介质基因表达的影响

目的 探讨铁沉积于巨噬细胞对肝纤维化发生发展的作用机制.方法 以柠檬酸铁胺(FAC)与巨噬细胞株(RAW264.7细胞)共同温育,体外建立铁沉积于巨噬细胞模型.①将RAW264.7细胞分为FAC 1 mmol/L、100 μmol/L组及对照组,每组8孔.观察铁沉积于RAW264.7细胞对转化生长因子-β1(TGF-β1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响.②另将RAW264.7细胞分为对照组、铁沉积组、去铁铵组;对照组为正常培养的RAW264.7细胞,铁沉积组加入100 μmol/L FAC,去铁铵组分别加入100 μmol/L FAC和1 000、200、40、8、1.6、0.32 μmol/L的去铁铵,每组3孔.观察不同浓度去铁铵对铁沉积于RAW264.7细胞表达TGF-β1、iNOS、TNF-α mRNA的影响.结果 ①铁沉积于RAW264.7细胞主要使TGF-β1 mRNA表达明显降低,iNOS、TNF-α mRNA表达显著升高,以100 μmol/L FAC作用显著,与对照组比较差异有统计学意义(TGF-β1 mRNA:0.60±0.18比1.42±0.21,iNOS mRNA:3.79±1.48比1.10±0.33,TNF-α mRNA:1.72±0.37比1.07±0.10,P<0.05或P<0.01).②去铁铵能使RAW264.7细胞出现与铁沉积后相反的基因表达变化,以较高浓度1 000 μmol/L、200 μmol/L(TGF-β1 mRNA:3.13±1.03、2.39±0.29,iNOS mRNA:3.28±0.62、5.36±1.04,TNF-α mRNA:3.04±1.35、3.35±0.52)作用显著,与铁沉积组(TGF-β1 mRNA:0.22±0.09,iNOS mRNA:18.57±8.44,TNF-α mRNA:6.30±1.00)比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 铁沉积于巨噬细胞可能是通过诱导一氧化氮(NO)过度合成,促进炎症的形成并进一步促进肝纤维化的发生发展,而不是通过上调TGF-β1 mRNA表达来实现的.     

辛伐他汀对高糖培养肾小管上皮细胞RANTES和TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖环境中人近端肾小管上皮细胞(HK-2)RANTES(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达变化及辛伐他汀(Sim)的干预作用.方法:原代培养HK-2分为正常糖对照组(NG)、甘露醇组(MG)、高糖组(HG)、HG+ Sim 2 μmol/L干预组(HG+Sim2)、HG+Sim 4μmol/L干预组(HG+Sim4),RT-PCR法测定细胞RANTES和TGF-β1 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中RANTES、TGF-β1蛋白含量.结果:RANTES、TGF-β1的mRNA和蛋白在NG及MG仅有少量表达,而在HG则明显升高(P＜0.05);加入Sim后,上述表达均较前下降(P＜0.05),具有浓度依赖性.各组HK-2表达的RANTES和TGF-β1无论是mRNA还是蛋白之间均存在显著正相关(P＜0.01).结论:高糖促进HK-2 RANTES、TGF-β1的表达,而Sim明显抑制高糖环境中上述因子的过度表达,发挥肾脏保护作用.     

过氯酸铵致肺纤维化作用的研究

目的研究过氯酸铵(AP)致肺纤维化作用。方法 AP染毒大鼠肺泡巨噬细胞(AM)24 h, 取AM上清液培养肺成纤维细胞(FB),检测AM转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平及FB增殖活性、细胞内羟脯氨酸(Hyp)含量。采用气管内注入方式对大鼠进行AP染毒,3 d后处死,测定肺组织中TGF- β1 mRNA的表达。结果 AP低、高剂量组TGF-β1细胞阳性率和AP高剂量组TGF-β1光密度值均显著高于对照组(P<0．01)。各AP染毒组FB增殖活性和FB Hyp含量与对照组比较,差异无显著性(P>0．05)。AP 低、中、高剂量组肺组织TGF-β1mRNA表达水平均高于对照组(P<0．05或P<0．01)。结论 AP增加了 AM和肺组织TGF-β1表达,但尚未表现出致肺纤维化作用。     

免疫性血小板减少症患者CD19~+B细胞的表达及血清Breg在患者发病中的参与作用

目的:研究免疫性血小板减少症(ITP)患者CD19~+B细胞的表达,分析血清Breg在ITP患者中的变化和影响。方法:选取2015年8月至2018年8月期间本院血液科收治的初次诊断为ITP患者68例(ITP组),选取同时段到我院体检中心的30例健康人(对照组),采用流式细胞术测定2组外周血淋巴细胞亚群CD19~+的表达率和外周血Breg细胞表达水平,对比治疗前、后ITP组与对照组之间的差别;采取RT-PCR检测各组IL-10mRNA、TGF-β1 mRNA水平,分析ITP患者外周血Breg细胞比值与IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达的相关性。结果:治疗前,ITP组CD19~+表达率显著高于对照组,两组间差异具有统计学意义。ITP组血清Breg细胞表达水平较对照组血清Breg细胞表达水平低;初诊ITP组IL-10 mRNA水平较对照组明显减低,治疗后其IL-10 mRNA水平较治疗前显著升高,差异具有统计学意义。此外,初诊ITP组TGF-β1 mRNA水平较对照组明显升高,治疗后其TGF-β1 mRNA水平较治疗前有所降低;外周血Breg细胞比值与IL-10 mRNA表达呈正相关(r=0.968,P 0.05),但外周血Breg细胞比值与TGF-β1 mRNA表达无相关性(r=0.502,P0.05)。结论:ITP患者CD19~+细胞表达增强,临床中Breg细胞参与ITP发生发展,Breg细胞表达异常与ITP的发病有关。     

粉防己碱对转化生长因子-β1诱导的人近端小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的拮抗效应及其机制。方法体外培养的HK-2随机分为正常对照组、Tet组(100ng/ml)、TGF-β1(5ng/ml)组和TGF-β1(5ng/ml)+Tet(100ng/ml)组。Westernblot法检测细胞中TβRI蛋白、SnoN蛋白水平、Smad7蛋白水平和Smad2/3磷酸化水平的改变;半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法观察细胞中TβRI mRNA、Smad7 mRNA、SnoN mRNA表达的改变。免疫荧光检测间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 Tet能抑制TGF-β1诱导α-SMA的表达,显著上调SnoN mRNA和蛋白的表达(P<0.01);Tet对TβRI表达、Smad2/3的磷酸化及Smad7的表达没有影响。结论 Tet能抑制人近端小管上皮细胞转分化,其机制与Tet上调SnoN表达有关。     

转化生长因子-β_1对人牙周膜干细胞生物学行为的影响

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-β1)和对照组(培养液),采用CCK-8法检测2组培养第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖能力;培养48h,采用Transwell小室法检测2组细胞迁移能力,Western blot法检测2组Notch1胞内段(Notch1intracellular domain,NICD)蛋白相对表达量。结果 TGF-β1组培养第1天细胞吸光度值(0.45±0.02)与对照组(0.45±0.03)比较差异无统计学意义(P0.05),培养第2、3、4、5、6、7天细胞吸光度值(0.81±0.08、1.82±0.07、2.14±0.09、2.49±0.11、2.69±0.12、2.78±0.08)均高于对照组(0.61±0.04、1.17±0.05、1.47±0.10、1.99±0.11、2.20±0.03、2.29±0.08)(P0.05);培养48h,TGF-β1组迁移细胞数目[(61.40±2.30)%]较对照组[(31.80±1.48)%]多,NICD蛋白相对表达量(0.49±0.01)较对照组(0.35±0.01)高(P0.05)。结论 TGF-β1可激活Notch1信号通路,促进人PDLSCs增殖和迁移。     

基于"肾主骨"理论分析左归丸对大鼠破骨细胞凋亡的影响

目的基于"肾主骨"理论分析左归丸对大鼠破骨细胞(OC)凋亡的影响。方法选取15只雌性健康Wistar大鼠,按照随机数字表法随机将其分为卵巢切除(OVX)加左归丸组、OVX组及对照组各5只,给予相关处理后,制备相应血清。取1日龄Wistar乳鼠制备大鼠OC及成骨细胞(OB)体外分离和培养,并分别分为6组和3组与上述血清共同培养,检测比较前6组OC所引起骨吸收陷窝数目和面积,以及后3组OB骨保护素(OPG)及破骨细胞核因子k B受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达。结果随着培养时间延长,各组骨吸收陷窝数目及面积随之增大。培养第7天时,各组骨吸收陷窝数目及面积总体比较差异均有统计学意义(P 0. 05)。培养第7天时,OC+OVX血清组骨吸收陷窝数目及面积均高于OC+OVX含药血清组及OC+正常血清组,OC+OVX含药血清组骨吸收陷窝数目及面积均高于OC+正常血清组; OC+OB+OVX血清组骨吸收陷窝数目及面积均高于OC+OB+OVX含药血清组及OC+OB+正常血清组; OC+OB+OVX血清组骨吸收陷窝数目及面积均高于OC+OVX血清组,OC+OB+OVX含药血清组骨吸收陷窝数目及面积均低于OC+OVX含药血清组,差异有统计学意义(P 0. 05)。各组OB OPG及RANKL蛋白表达总体比较差异有统计学意义(P 0. 05)。OB+OVX血清组OB OPG蛋白表达明显低于OB+正常血清组,OB RANKL蛋白表达明显高于OB+正常血清组; OB+OVX含药血清组OB OPG蛋白表达高于OB+OVX血清组,OB RANKL蛋白表达低于OB+OVX血清组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论左归丸含药血清可直接抑制OC,还可通过OB间接抑制OC,作用机制可能与调节OB OPG、RANKL蛋白表达相关,提示基于"肾主骨"理论的左归丸可治疗骨质疏松症。     

TGF-β1 mRNA在去卵巢大鼠骨组织中的表达及雷洛昔芬的调节作用

目的：探讨TGF-β1mRNA去卵巢大鼠骨组织中的表达及雷洛昔芬的调节作用。方法：复制大鼠骨质疏松动物模型,用RT-PCR法检测大鼠骨组织TGF-β1mRNA的表达。结果：与O组相比,E组和RL组TGF-β1mRNA表达水平升高（P〈0.05）。E组和RL组与S组相比无显著差异（P〉0.05）。结论：低剂量雷洛昔芬可上调TGF-β1基因的表达。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓间质干细胞TGF-β1和SCF表达变化及意义

目的探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者骨髓间质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cells,BMMSCs)体外干细胞因子(Stem cell factor,SCF)、转化生长因子-β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)基因表达变化及临床意义。方法 5例慢性期CML患者为实验组,5例健康人为对照组,取骨髓单个核细胞行BMMSCs体外培养,RT-PCR法测定两组BMMSCs的SCF、TGF-β1基因表达量,并分析其相关性。结果慢性期CML患者BMMSCs中SCF基因表达水平较对照组明显升高(P0.05),而TGF-β1表达水平较对照组明显降低(P0.01)。实验组内SCF与TGF-β1表达量呈负相关(r=0.948,P0.05),对照组两指标间无相关性。结论 CML患者BMMSCs的SCF高表达和TGF-β1低表达有相互影响并对白血病细胞的增殖与凋亡发生影响,对CML发病有促进作用。     

转化生长因子β1/Smads通路在急性心肌梗死后心肌重塑中的作用及祛瘀生新法的干预研究

目的通过研究祛瘀生新中药对转化生长因子(TGF)-β1/Smads通路的影响,探讨祛瘀生新法对急性心肌梗死后心肌重塑的效应机制。方法清洁级雄性Wistar大鼠50只随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。中药组大鼠术前3 d给药,1次/d。7 d后,检测外周血骨髓间充质干细胞(BMSCs)含量,实时荧光定量RT-PCR检测心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表达,并观察心肌组织HE染色结果及免疫组化检测心肌c-kit细胞数。结果模型组较假手术组心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA表达均增加(P<0.05),Smad7 mRNA表达降低(P<0.05)。中药组心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA表达降低,Smad7 mRNA表达增加,中药组及西药组较模型组c-kit细胞数明显增多,并能减轻心肌组织的病理损伤。中药组与西药组比较,TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA和Smad7 mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论祛瘀生新法能有效抑制急性心肌梗死后心肌重塑。     

雷公藤甲素对大鼠坐骨神经冷保存后细胞活性及异体移植后神经再生的影响

目的探讨雷公藤甲素(T10)对冷保存大鼠坐骨神经生物活性和异体移植后神经再生的影响。方法取对数生长期施万细胞(SCs),CCK-8检测1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L T10溶液对SCs增殖的影响。取Sprague-Dawley大鼠双侧坐骨神经15 mm,分别在含0 mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L T10的DMEM液中,4℃或37℃放置24 h (n=6),Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达。另取大鼠坐骨神经15 mm,随机分成新鲜神经组(A组, n=30)、DMEM保存组(B组, n=30)、T10保存组(C组, n=30)、T10预处理后DMEM保存组(D组, n=30)、T10预处理后T10保存组(E组, n=30),4℃保存4周,Calcein-AM/PI双染激光共聚焦显微镜观察、流式细胞术检测神经活细胞、死细胞数,Western blotting检测主要组织相容性复合体-Ⅰ(MHC-Ⅰ)、MHC-Ⅱ、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)表达。用上述坐骨神经修复Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组, n=10),设立同系移植新鲜组(F′组, n=10)。术后16周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV);取移植段神经,观察神经纤维数和神经超微结构。结果 SCs在浓度为1×10-9～1×10-7mol/L T10溶液下,细胞增殖与对照组无显著性差异(P 0.05)。各浓度T10溶液下,大鼠坐骨神经各神经营养因子表达均37℃明显高于4℃;相同温度时,1×10-8mol/L组各神经营养因子表达均高于其他浓度组(P 0.05)。大鼠坐骨神经冷保存4周后,与B、C、D组相比,E组神经活细胞数量多,MHC-I、MHC-II、ICAM-1表达降低(P 0.05)。移植术后16周,E′组CMAP、MNCV、再生有髓神经纤维数量均优于A′、B′、C′、D′组(P 0.05),E′、F′组有髓神经纤维数量多,粗细均匀,分布广泛,髓鞘厚。结论一定浓度T10体外能诱导大鼠坐骨神经神经营养因子表达,提高冷保存神经生物活性,降低免疫原性,促进异体移植后受体神经再生;冷保存前用一定浓度T10预处理效果更好。