应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物

目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.     

结直肠癌患者CEAmRNA表达与血清CEA及相关蛋白联合检测的临床意义

为探讨结直肠癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸（CEAmRNA）的表达与血清癌胚抗原（CEA）联合CA19—9、CA242和CA724蛋白检测的临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和化学发光法,检测125例术前和96例术后结直肠癌患者及150名健康对照者外周血中CEAmRNA表达和血清CEA、CA19-9、CA242和CA724蛋白水平。结果结直肠癌患者血清CEA及相关蛋白联合检测的阳性率为79．1％,高于CEAmRNA（53．6％）和健康对照者（2．7％）,有显著性差异（P〈0．01）。两种方法阳性检出率与肿瘤Dukes分期、淋巴结及脏器转移明显相关。血清CEA及相关蛋白联合检测阳性率在分化程度低的患者组中为74．3％,明显高于高分化组（52．8％）,有显著性差异（P〈0．01）,而CEAmRNA表达与肿瘤细胞分化程度无关。术后随访中发现CEAmRNA和血清CEA及相关蛋白水平明显增高的患者,均发生肝、肺和盆腔等远处转移。结果表明,外周血CEAmRNA和血清CEA联合CA19—9、CA242和CA724的检测可作为判断结直肠癌恶性程度、转移及监测疗效的重要指标,血清CEA及相关蛋白联合检测的敏感度优于外周血CEAmRNA表达。     

创伤性股骨头坏死血清差异蛋白质组学的研究

[目的]探讨创伤性股骨头坏死(TONFH)的血清蛋白质组学差异质,寻找并鉴定TONFH的潜在血清生物学标志物。[方法]分别采集TONFH患者(实验组)、正常体检者(对照组)血清各5例,采用TMT联合2DLC-MS/MS技术进行蛋白组学分析,寻找并鉴定差异表达的蛋白质。[结果]质谱共筛选出有意义差异蛋白344个,并鉴定出15种显著性差异蛋白(P0.05),其中与正常组对比,实验组中抗粘蛋白1轻链可变区、补体C5(C5)、冷凝集蛋白FS-2 H链、纤维连接蛋白(FN1)、妊娠区带蛋白(PZP)、β肌动蛋白(ACTB)、甘露糖结合蛋白C(MBL2)等7种蛋白表达上调,Igλ链V区4A、多巴胺β-羟化酶(DBH)、免疫球蛋白重链可变区、CD5抗原(CD5L)、免疫球蛋白J链(JCHAIN)、补充C1r子组件(C1R)、抗凝血酶III (Antithrombin-III)、凝溶胶蛋白(GSN)等8种蛋白表达下调。[结论]采用同位素相对标记与绝对定量技术(TMT)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS),成功筛选出了TONFH的血清差异表达蛋白质,为寻找TONFH特异性标志物及进一步阐明TONFH的发病机制提供了依据。     

结直肠癌患者血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白检测的临床意义

目的探讨结直肠肿瘤患者血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）检测的临床意义。方法收集杭州市第三人民医院2007年12月至2012年12月间100例结直肠癌、125例结直肠腺瘤和133例健康志愿者的血清标本,通过双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清NGAL水平。分析血清NGAL水平与结直肠癌临床病理特征的关系;通过受试者工作特征曲线分析确定血清NGAL诊断结直肠癌的最佳截点值,并与血清CEA和CA19—9的诊断价值进行比较。通过单因素和多因素预后分析,明确血清NGAL水平与结直肠癌患者预后的关系。结果结直肠癌患者血清NGAL水平中位数为67．96μg／L,明显高于结直肠腺瘤患者（32．09μg／L）和健康对照者（23．33μg／L）（均P〈0．01）。血清NGAL水平与结直肠癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及脉管侵犯有关（均P〈0．05）。取49．78μg／L作为血清NGAL诊断结直肠癌的最佳截点值,其灵敏度为81％,特异度为88％。对于Ⅰ期和Ⅱ期结肠癌患者,血清NGAL的灵敏度（78．9％和88．0％）高于CA19．9（31．6％和48．0％）和CEA（36．8％和52．0％）,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。NGAL阳性和阴性患者术后生存期中位数分别为13月和42月,差异有统计学意义（P〈0．05）。多因素预后分析证实,血清NGAL可作为结直肠癌患者的独立预后因素（HR=2．060,95％CI：1．023～4．150,P=0．043）。结论血清NGAL可作为结直肠癌的早期诊断标记物,同时可作为恶性生物表型标记用于结直肠癌的危险度评估,筛选高危患者,其表达上调提示不良预后。     

结直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白表达状态与其临床病理特征的关系

目的： 探索结直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白的表达与各临床病理参数及血清肿瘤标记物水平的关系。 方法： 选取2017年5月—2018年7月行结直肠癌切除手术的1 023例肿瘤组织标本，通过免疫组化法检测PMS2蛋白表达状态；并收集相应患者的血清检测CEA、CA19-9、CA125，分析结直肠癌患者肿瘤组织PMS2蛋白表达状态及其相关因素。 结果： 结肠癌和直肠癌肿瘤组织的PMS2蛋白阴性表达比例分别为14.0%（73/520）、2.9%（13/503），前者PMS2蛋白阴性表达明显高于后者（P<0.000 1）。结肠癌肿瘤组织PMS2蛋白阴性表达的周围神经侵犯阳性率明显低于PMS2蛋白阳性表达者（P<0.001），但前者的肿瘤最大径≥5 cm的比例和肿瘤细胞低分化腺癌比例明显高于后者（P<0.001）。直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白的阴性表达患者的T3+T4分期比率明显高于阳性表达者（P<0.05）。PMS2蛋白表达状态和血清CA19-9水平呈负相关（r=-0.162 3，P<0.01）。 结论： 结肠癌肿瘤组织中PMS2蛋白阴性表达者在神经侵犯阳性率、肿瘤最大径≥5 cm的比例及肿瘤细胞低分化比例均较PMS2蛋白阳性表达者明显增高；直肠癌肿瘤组织中PMS2蛋白阴性表达者T3+T4期比例较阳性表达者亦明显增高。     

结直肠癌肿瘤标记物的筛选及其表达变化

目的筛选结直肠癌肿瘤标记物,探讨其在术前、术后患者血清中的表达变化。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测87例结直肠癌、68例结直肠良性病、56例正常人血清中的差异蛋白,进而检测87例结直肠癌术前及术后15d内血清中的差异蛋白,从而筛选出结直肠癌肿瘤标记物。结果筛选出质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白,与结直肠良性病组和正常人组比较,其在结直肠癌患者血清中高表达（P〈0．01）;与结直肠癌术前组比较,术后1d其表达水平明显增高（P〈0．01）,术后4d已经降至术前水平（P〉0．05）;与术后1d组比较,术后4d至15d其表达水平基本处于下降趋势（P〈0．01）,但术后15d仍未降至正常水平（P〈0．01）。结论质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白可作为结直肠癌肿瘤标记物,其在术前、术后15d内血清中的表达有一定的变化规律。     

结直肠癌患者血清p53抗体与肿瘤p53蛋白表达关系的研究

目的　探讨结直肠癌患者血清p5 3抗体与肿瘤组织p5 3蛋白表达的关系 ,评价其能否间接反映p5 3基因的突变。方法　对 13 2例手术治疗的结直肠腺癌患者和 3 6例非肿瘤患者进行血清p5 3抗体定性检测。结直肠癌标本行p5 3蛋白免疫组化染色。结果　结直肠癌组中 5 3例 (4 0 .2 % )血清p5 3抗体阳性 ,而对照组仅 1例 (2 .9% )阳性 (P <0 .0 1)。在 75例p5 3蛋白染色阳性者中 5 1例 (68.0 % )血清p5 3抗体阳性 ;而 5 7例p5 3蛋白染色阴性的患者中 ,仅 2例 (3 .5 % )血清p5 3抗体阳性。结直肠癌血清p5 3抗体阳性率与肿瘤组织p5 3蛋白免疫组化染色阳性反应有明显关系 (P<0 .0 1)。结论　血清p5 3抗体能反映结直肠癌p5 3蛋白的阳性表达 ;检测血清p5 3抗体是间接判定P5 3基因突变的一种可靠而简便的方法。     

结直肠癌患者血清中瘦素表达的研究

目的 探讨血清瘦素水平与结直肠癌各种临床病理改变的关系.方法 用双抗体夹心ABC-ELISA法检测30例无营养不良的结直肠癌患者(肿瘤组)和24例健康成年人(对照组)血清瘦素水平,分析结直肠癌不同临床病理特征下血清瘦素水平的差异;检测肿瘤组患者的血清CEA及CA19-9水平,用RT-PCR方法 测定肿瘤组肿瘤标本中K-ras、p53、腺瘤性结肠息肉病(APC)基因及结直肠癌缺失基因(DCC)mRNA的表达水平.结果 肿瘤组血清瘦素水平[(3.53±1.72) μg/L]明显高于对照组[(2.27±1.01) μg/L],P＜0.05,且这种差异与性别无关.肿瘤组中不同肿瘤部位、不同TNM分期间的血清瘦素水平差异无统计学意义(P>0.05);但随着肿瘤分化程度的降低,血清瘦素水平呈现下降趋势,其中低分化者的血清瘦素水平明显低于高分化者和中分化者(P＜0.05).肿瘤学的相关性分析结果 显示,血清瘦素水平与结直肠癌患者的血清CEA和CA19-9水平,肿瘤组织的癌基因K-ras以及抑癌基因p53、APC和DCC的表达均无相关性(P>0.05).结论 结直肠癌患者血清中的瘦素水平高于正常人;肿瘤的分化程度影响了血清瘦素的表达,但结直肠癌的TNM分期、部位和血清肿瘤标志物的水平与血清瘦素水平无关,与结直肠癌发生、发展密切相关的各种基因的表达与血清瘦素水平也无关.     

糖链抗原724、癌胚抗原在结直肠癌术后患者血清中的表达及相关性研究

【摘要】〓目的〓检测结直肠癌术后患者血清中糖链抗原724(CA724)、癌胚抗原(CEA)的表达水平并观察两者的相关性。方法〓收集手术治疗后复发的结直肠癌患者38例作为观察组,无复发或转移的结直肠癌术后患者38例作为对照组,晨起空腹抽血,电化学发光法测定血清CEA、CA724含量,同时行Pearson相关系数检验CA724与CEA的相关性。结果〓观察组血清CA724、EA表达水平较对照组均显著升高(P<0.01),差异存在统计学意义;观察组CA724、CEA阳性率较对照组均升高(P<0.05),差异存在统计学意义;且两者显著相关,相关系数r=0.622(P<0.01)。结论〓结直肠癌患者外周血清中CA724、CEA的含量显著升高,并且血清中CA724水平与CEA水平显著相关。CA724作为结直肠癌术后复查指标的价值值得进一步研究。     

利用二维胶内差示凝胶电泳技术检测胃癌的血清学肿瘤标记物

目的 分离胃癌、胃溃疡、正常人之间的差异蛋白质,检测胃癌的血清学肿瘤标记物.方法 从定量比较蛋白质组分析入手,利用二维胶内差示凝胶电泳技术(2D-DIGE)分离包括胃癌、胃溃疡和正常人共27例血清样本,以基质辅助激光解吸附电离串联质谱对差异蛋白点进行检测,检索Mascot数据库.结果 共检测出14个差异表达蛋白.正常人和胃溃疡比较有3种差异蛋白质,2种被鉴定出;胃溃疡和胃癌比较发现1个下调的蛋白质;胃癌与正常人中发现10个差异表达蛋白质,6个点在胃癌患者血清中上调.结论 2D-DIGE技术是一项有效的筛选胃癌患者血清中差异蛋白的技术手段,检测出的蛋白质有可能成为胃癌诊断的分子标记物.     

胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究

目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.     

甲状腺运载蛋白-胆管癌血清中表达下调的蛋白

目的 胆管癌发病率不高,但恶性程度高,早期诊断困难,迄今缺乏临床诊断可用的分子标志物.实验利用SELDI技术寻找胆管癌新的血清标志物.方法 对60例胆管癌、146例肺癌、65例喉癌、58例喉咽癌、49例胆管良性疾病和53例正常人血清样品进行蛋白芯片检测.对候选蛋白进行质谱鉴定,并结合免疫共沉淀和ELISA技术筛选出胆管癌新的候选标志物.结果 通过Biomarker WizardTM软件分析显示13.71×103,13.83×103和13.99×103的蛋白峰在胆管癌患者血清样品中明显低于对照组.通过1-D胶分离、质谱鉴定和免疫沉淀分析,显示这3个差异蛋白峰为野生型甲状腺运载蛋白(native TTR)和它的两个变体(cysTTR和glutTTR).ELISA和SELDI技术分析上述血清样品均发现TTRs在胆管癌血清中的表达下调.结论 采用SELDI技术首次筛选并鉴定出TTRs,表明其可能作为胆管癌诊断的候选血清标志物.

Abstract：

Objective As SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) has been broadly used to screen biomarkers for a variety of diseases, the identification and validation of the revealed biomarkers requires more focused attention.Method In this paper, the serum samples from 60 cholangiocarcinoma, 146 lung cancer, 65 LGC and 58 LPC, 49 benign diseases of hepatobiliary and 53 normal individuals were analyzed by SELDI-TOF-MS. Results Among a set of proteins automatically selected as specific biomarkers by Biomarker Wizard software, three protein peaks, with molecular weights of 13. 71 × 103 , 13.83 × 103 and 13. 99 ×103 , were found significantly decreased in cholangiocarcinoma samples. The candidate biomarkers obtained from Tricine-SDS-PAGE gel bands by matching the molecular weight with peaks on CM10 chips were identified by Mass spectrometry as the native transthyretin(native TTR),cysTTR and glutTTR.These preliminary results were further proven by immunoprecipitation using commercial TTR antibodies. This allowed us to re-measure the TTR levels in all the groups more simply by ELISA assay. It showed a firm consistency between ELISA and SELDI analysis. In addition, while TTR levels in cholangiocarcinoma were found to be lower than those in normal healthy controls, TTR levels in benign diseases of the hepatobiliary system were found to be higher than those in healthy controls.Conclusion TTR could be a biomarker that better discriminates cholangiocarcinoma patients from the benign diseases compared to other biomarkers presently available.     

黏蛋白芯片在诊断胰腺癌中的临床应用

目的　制备黏蛋白检测用蛋白芯片 ,探讨该芯片用于胰腺癌血清学诊断的可行性。方法　利用黏蛋白MUC1、MUC2及MUC5AC的单抗及多抗 ,制备黏蛋白芯片 ,用化学发光原理进行检测 ,并用CEA作为指示指标 ,对 3 0例胰腺癌患者及 3 0例健康人进行黏蛋白血清水平的检测。结果　胰腺癌组与对照组比较 ,3种黏蛋白和CEA血清水平均增高 ,两组间差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。3种黏蛋白中至少两种为阳性的联合诊断敏感性及特异性分别为 80 %和 96.67%。结论　应用蛋白芯片联合检测 3种黏蛋白 ,可以提高胰腺癌诊断的敏感性及特异性 ,并且较CEA的检测结果和临床CA19 9的检测结果为高。     

Effective usage of nutrition assessment proteins in patients with diabetic nephropathy

We investigated the relationship between the levels of serum albumin (ALB), serum transthyretin (TTR) or retinol binding protein (RBP) and those of serum cystatin C or clinical gradings in patients with diabetic nephropathy. Serum samples were obtained from 85 patients with type 2 diabetic nephropathy in our hospital. The levels of serum ALB, TTR, RBP and cystatin C were measured by the Dade Behring assay system using the automated Dade Behring Nephelometer II (BN II). The grades of diabetic nephropathy were classified into five groups according to Report of the Ministry of Health and Welfare, Japan. The serum levels of RBP showed a significant correlation between the serum levels of cystatin C and the grades of diabetic nephropathy. However, the serum levels of TTR were not significantly correlated with those of serum cystatin C or the grades of diabetic nephropathy. In this study, the serum levels of TTR were not influenced by renal function although those of RBP and ALB were influenced by renal function. In spite of clinical usefulness in the nutritional assessment of healthy controls and hemodialysis patients, RBP and ALB are not suitable nutrition marker in patients with chronic renal failure. However, TTR is suitable marker in patients with chronic renal failure.     

Comparison of carcinoembryonic antigen prognostic value in serum and tumour tissue of patients with colorectal cancer

Objective   Carcinoembryonic antigen (CEA) in the serum and the tumour tissue of colorectal cancer (CRC) patients is the most commonly used tumour marker for the diagnosis and evaluation of prognosis or recurrence after treatment, but the role remains controversial. The objective of this study was to compare the prognostic value of CEA both in serum and tumour tissue in CRC.
Method  A total of 173 patients with CRC in stages I–III were retrospectively assessed with the endpoint of recurrence or metastasis after curative operation. CEA was assessed both in serum and tumour tissue.
Results  37.0% (64/173) patients had a high level of CEA in serum (S-CEA) while 39.3% (68/173) had high CEA in tumour tissue (T-CEA). There were no significant differences in clinico-pathological features between the low and high S-CEA or T-CEA groups. The high S-CEA group had a worse prognosis than the low S-CEA group but the difference was not significant. The high T-CEA group had a significantly poorer prognosis than the low T-CEA group ( P  =   0.028) in the univariate analysis. The multivariate analysis demonstrated that the T-CEA was an independent prognosis factor in CRC. Because many factors would affect the concentration of S-CEA, there was no correlation between S-CEA and T-CEA directly.
Conclusion  Our study suggests that a high T-CEA concentration may be a useful and independent predictor for poor outcome after surgery in CRC patients. It may be stronger than a high preoperative serum CEA level.     

克罗恩病患者的血清蛋白质组学研究

目的寻找克罗恩病患者血清中的差异表达蛋白。方法采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例，用不同的CyDye染料交叉标记后依次进行双向胶内差异凝胶电泳（2－D DIGE）、图像分析及基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱（MALDI－TOF－MS）鉴定。结果通过比较二者双向电泳图，发现了克罗恩病患者中存在多个表达异常蛋白质点．其中胶号为1058的蛋白质点，在克罗恩病患者血清中比正常成人组表达升高1．68倍（P〈0．05），该蛋白点经质谱鉴定为结合珠蛋白。结论结合珠蛋白在克罗恩病血清的高表达提示在克罗恩病的病程中免疫系统失衡可能起着一定作用。     

胃癌和大肠癌患者血清肿瘤标志物联合检测的临床意义

目的评价血清肿瘤标记物联合检测对胃癌和大肠癌诊断和监测的价值.方法用PC-12多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统检测179例胃癌和大肠癌患者、82例胃和结直肠良性疾病患者及160例健康人血清中12种常见肿瘤标志物CA19-9、NSE、CEA、CA242、铁蛋白（Ferritin）、Beta-HCG、AFP、free-PSA、PSA、CA125、HGH、CA153的水平.结果肿瘤组的肿瘤标志物水平显著高于良性疾病组及健康组（P＜0.01）,其中CA19-9、CEA、CA242、CA125和CA153 5项在胃癌和大肠癌患者中水平较两对照组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）.采用平行检测法,可以提高检测的敏感度（72.07%）和阴性预测值（79.25%）;采用系列检测,可提高检测的特异度（92.15%）和阳性预测值（84.67%）.肿瘤根治术后,肿瘤标记物水平显著下降.术后未降至正常者,复发或转移率为68.89%,而术后再升高者复发或转移率为77.78%.结论多种肿瘤标记物对胃癌和大肠癌的诊断、监测肿瘤复发和转移有一定的价值.     

前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。