橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制

目的探讨橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制。方法40只8周龄apoE-/-小鼠随机分为4组,即普通饮食组(NC)、动脉粥样硬化高脂饮食组(WD)、橙皮素高剂量(100 mg/kg)组(H-HES)、橙皮素低剂量(50 mg/kg)组(L-HES),各10只。采用灌胃方式给予橙皮素,根据每只小鼠体质量给予不同的剂量,12周后处死小鼠前眶静脉采血,全自动生化分析仪检测血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇浓度,并采用ELISA试剂盒检测apoE-/-小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,麻醉小鼠后左心室灌注多聚甲醛固定,主动脉树油红O染色观察斑块百分比,同时取材主动脉窦采用免疫荧光技术观察斑块巨噬细胞的浸润情况。结果与NC组比较,WD组、H-HES组及L-HES组apoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度显著升高,HDL-C显著降低(P<0.05),且H-HES及L-HES组TC、TG、LDL-C的水平显著低于WD组(P<0.05)。高脂高胆固醇饲料喂养12周后,WD组的主动脉树动脉粥样硬化病变非常显著,其主动脉树的AS斑块面积百分比为(0.1430±0.0604),而H-HES组、L-HES组的主动脉树AS的面积百分比分别为(0.0404±0.0175)、(0.0252±0.0195),与WD组相比,H-HES组、L-HES组主动脉树AS病变显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。WD组的主动脉窦动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞浸润增加,经过橙皮素12周治疗后,H-HES和L-HES组主动脉窦斑块部位CD68巨噬细胞浸润减少(P<0.05)。WD组apoE-/-小鼠血清MCP-1和TNF-α的浓度分别为(807.33±122.46)、(9.87±1.75)μg/L高于H-HES及L-HES组的(365.83±66.31)、(6.34±0.65)μg/L及(405.74±46.21)、(9.48±0.82)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论橙皮素有明显的调脂降血脂作用,同时具有抗动脉粥样硬化效果,其主要通过抗炎发挥药理作用。     

Apo-E基因敲除小鼠中MMP-9的表达研究

目的 通过观察Apo-E(-/-)小鼠主动脉根部血管MMP-9的表达情况,进一步了解MMP-9与动脉粥样硬化斑块形成过程的相关性.方法 本实验采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链技术对MMP-9在基因敲出小鼠动脉中的表达进行研究.结果 正常小鼠冠状动脉中MMP-9有微量表达,动脉粥样硬化斑块中检测到MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表达明显增高.结论 MMP-9可能参与小鼠动脉粥样硬化病变过程,并在小鼠主动脉根部血管壁斑块中表达增高.     

尿毒症ApoE基因敲除小鼠加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系

目的建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,探讨模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系。方法选用C57BL/6J遗传背景的apoE-/-鼠为研究对象,通过右肾皮质电凝加左肾切除术建立尿毒症apoE-/-鼠模型,对照apoE-/鼠行假手术。造模后2周检测肾功能判断造模是否成功。造模后10周采血检测肾功、血清总胆固醇;应用ELISA法检测血清TGF-β1及IFN-γ浓度;应用流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;应用实时荧光定量PCR法检测主动脉组织中Foxp3及IFN-γ mRNA的表达;收集主动脉根部行冰冻切片油红O染色计算斑块相对面积。分析肾功能指标与Treg数量的相关性。结果造模后肾功能检测显示造模成功。造模后10周与对照组apoE-/鼠相比:尿毒症apoE-/-鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块相对面积显著提高,脾脏Treg细胞比率下降,血清TGF-β1浓度降低及IFN-γ、总胆固醇浓度升高,主动脉Foxp3 mRNA表达下调及IFN-γ mRNA表达上调。肾功能指标与Treg数量呈显著负相关。结论成功地建立了尿毒症apoE-/-小鼠模型。模...     

肝X受体激动剂对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁C-反应蛋白和CD40配体表达及平滑肌细胞含量的影响

目的 探讨肝X受体(liver X receptor,LXR)激动剂T0901317对高脂饲养ApoE基因敲除(apolipoprotein E gene knockout,ApoE-/-)小鼠在动脉粥样硬化病变形成的早期动脉壁内C-反应蛋白(CRP)和CD40配体(CD40L)表达及平滑肌细胞含量的影响.方法 8周龄雄性ApoE-/-小鼠12只,按随机数字表法分入LXR激动剂T0901317组和二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组6只.均给予高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予LXR激动剂T090131720 mg·kg-1·d1-或相当剂量的DMSO腹腔注射.麻醉处死小鼠后,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片,采用免疫组化法检测主动脉壁内CRP、CD40L和平滑肌细胞α-actin的表达,以Image Pro Plus 6.0软件进行图像分析.结果 LXR激动剂组动脉壁CRP表达水平较对照组明显减少(P＜0.05),LXR激动剂组动脉壁CD40L表达水平较对照组明显减少(P＜0.05),动脉粥样硬化斑块内平滑肌细胞α-actin表达水平与对照组比较没有统计学差异(P＞0.05).结论 LXR激动剂可能通过抑制ApoE-/-小鼠动脉壁中CRP和CD40L的表达,减轻血管壁的炎症反应,从而发挥抗动脉粥样硬化形成的作用.     

罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血清NOS/NO的影响

目的探讨罗格列酮对apoE基因敲除小鼠血清NOS/NO的影响.方法 20只8周龄apoE基因敲除小鼠分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型组和罗格列酮干预组,另取10只8周龄野生型C57/BL小鼠作为正常对照组,3组均饲喂普通饮食,罗格列酮组给予10 mg·kg-1·d-1罗格列酮,12周后获取静脉血和主动脉标本.用硝酸还原酶法测定NO及NOS.用全自动生化分析仪测定血脂水平.HE染色后镜下观察主动脉病变.结果 AS模型组主动脉形成明显的动脉粥样硬化斑块,罗格列酮干预组病变较AS组轻;AS组血浆NO、NOS含量均显著低于正常对照组(P<0.05),罗格列酮干预组NO、NOS含量均显著高于模型组.结论罗格列酮具有抗AS作用,且其抗AS作用可能与其逆转受损的内皮细胞功能有关.     

两种LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的对照研究

目的研究我校自行研制的LXR激动剂(MHEC)和进口LXR激动剂(T-0901317)在抑制动脉粥样硬化病变形成方面的作用及主要机制.方法以高脂饲养ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠为动脉粥样硬化模型,分为无药对照组、MHEC干预组和T-0901317干预组(10 mg·kg-1·d-1),每组6只,灌胃6周.检测血脂、分析主动脉壁中动脉粥样硬化病变的面积、用免疫组化SP法检测主动脉壁中ABCA1蛋白的表达.结果T-0901317组血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),MHEC组仅HDL-C显著高于对照组(P＜0.01);药物干预组的动脉粥样硬化病变面积均显著降低(P＜0.01),同时动脉壁中ABCA1的表达显著增强(P＜0.01).结论MHEC与T-0901317相比,有更好的血脂改善效果,二者均能显著抑制高脂饲养ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变的形成.这可能与它们能促进动脉壁中ABCA1蛋白的表达,增强胆固醇逆转运有关.     

普罗布考对兔动脉粥样硬化模型主动脉凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的研究

目的观察普罗布考对兔动脉粥样硬化模型高胆固醇血症、主动脉内皮功能及LOX-1表达的影响.方法新西兰大白兔随机分为正常对照组(普通饮食,6只),高脂饮食组(高脂饮食,10只)及普罗布考组(高脂饮食+普罗布考200mg/kg·d,10只).实验开始前及第12周分别耳缘静脉采血测定血清总胆固醇.第12周处死动物,取胸主动脉,制备离体胸主动脉环对乙酰胆碱的反应以检查内皮功能,RT-PCR与免疫印迹检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)基因与蛋白质表达水平.结果普罗布考可以显著降低兔动脉粥样硬化模型血清总胆固醇浓度;防止高脂血症兔胸主动脉对乙酰胆碱引起的内皮信赖性舒张(E-DR)反应明显降低;以及下调模型动脉主动脉明显增强了LOX-1表达.结论兔动脉粥样硬化模型内皮功能损伤的机制与LOX-1表达增强有关,普罗布考保护内皮功能可能的机制是下调LOX-1表达的作用.     

基因芯片检测apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化相关基因的表达节律

目的利用基因芯片筛选apoE-/-动脉粥样硬化小鼠心脏与主动脉内膜中可能受到生物钟调控的动脉粥样硬化基因,并研究其表达情况。方法采用apoE-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,以同品系C57BL/6J小鼠作为对照;使用动脉粥样硬化基因芯片检测在ZT0与ZT12处死的两种小鼠心脏与主动脉内膜中113个动脉粥样硬化相关基因的表达情况;应用Real-time PCR检测在心脏与主动脉内膜中表达均发生改变的ACE与MMP3的昼夜表达节律。结果饲以高脂膳食（含0.15%的胆固醇和21%的脂肪）4周的apoE-/-小鼠主动脉粥样斑块形成;apoE-/-动脉粥样硬化小鼠血清胆固醇与低密度脂蛋白明显高于对照组C57BL/6J小鼠,高密度脂蛋白则明显低于对照组;基因芯片结果显示apoE-/-动脉粥样硬化小鼠与C57BL/6J小鼠心脏与主动脉内膜动脉粥样硬化相关基因表达有较大差异,apoE-/-小鼠心脏与主动脉内膜分别有6个及10个基因在两个时间点表达均下调,此外,心脏与主动脉内膜中分别有15及12个原本在C57BL/6J小鼠表达随时间改变的基因在apoE-/-小鼠中不再随时间改变;Real-time PCR结果显示ACE与MMP3在对照组C57BL/6J小鼠心脏中具有昼夜节律,但在apoE-/-动脉粥样硬化小鼠中,这种表达节律消失,且表达水平降低。结论动脉粥样硬化相关基因表达节律发生改变,这可能在动脉粥样硬化的病理过程中发挥了重要作用,对其机制的研究对我们更好地认识这种心血管疾病将具有重要意义。     

锌指蛋白A20对抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4表达的作用

目的 探讨锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）和toll样受体-4（TLR-4）表达的作用.方法 体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,简单随机化分成4组：A组（对照组）;B组（OX-LDL组）;C组（A20组）;D组（ox-LDL＋A20组）.收集以上各组细胞,用RT-PCR检测LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白,并用western blot的方法检测NF-κ B核易位的量.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达明显增加及核因子κ B（NF-κ B）的活化均明显增加.转染含A20基因质粒的平滑肌细胞TLR-4 mRNA的表达达到正常水平,LOX-1 mRNA的表达及NF-κ B的核移位的量甚至降低到正常水平以下.结论 ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA表达增加,可能由此激活TLR-4/NF-κB信号系统,启动动脉壁的炎症反应,触发动脉粥样硬化发生.A20明显抑制了ox-LDL对平滑肌细胞的上述诱导作用,可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应.阻止了动脉粥样硬化的发展.     

慢性肾功能不全患者血清及硫酸吲哚酚对巨噬细胞脂质聚集的影响

目的观察尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化病变,慢性肾功能不全患者血清和尿毒症毒素硫酸吲哚酚对巨噬
细胞胆固醇转运受体的表达及胞内脂质聚集的影响。方法外科手术法建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,分别收集尿毒症
apoE-/-小鼠、假手术apoE-/-小鼠、C57BL/6J小鼠的主动脉根部,行冰冻切片油红O染色,计算动脉粥样硬化斑块相对面积。收
集慢性肾功能不全患者及肾功正常者血清,以不同浓度的慢性肾功能不全患者血清或不同浓度的硫酸吲哚酚干预巨噬细胞株
12 h,测定不同干预条件下胆固醇转运受体SR-A1、CD36、ABCA1、ABCG1、SR-B1 mRNA的表达;干预24 h后诱导泡沫细胞,
油红O染色测定不同干预条件下细胞内脂质含量。结果尿毒症apoE-/-小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积较假手术
apoE-/-小鼠明显增大。5%的慢性肾功能不全患者血清及250 μmol/L的硫酸吲哚酚可明显诱导巨噬细胞CD36 mRNA的表达
而不影响其余胆固醇转运受体的表达,同时增加巨噬细胞内脂质的蓄积。结论慢性肾功能不全加速动脉粥样硬化的进展,机
制与慢性肾功能不全血清中蛋白结合性尿毒症毒素硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞CD36 mRNA表达上调、促进细胞内的脂质蓄积
有助于巨噬细胞源性泡沫细胞形成有关。
     

巨细胞病毒脑内感染小鼠听觉诱发电位的变化

目的 探讨脑内感染小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）后脑干听觉诱发电位（auditory brainstem response,ABR）的变化,以明确经脑内感染MCMV后小鼠ABR是否出现异常改变,从而验证经脑内感染MCMV能否建立巨细胞病毒（CMV）感染致听力损伤的动物模型,并在此基础上观察更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的干预效果.方法 将24只新生小鼠按窝随机分成正常对照组、模型组、干预组3组,对照组经脑内注射无菌生理盐水10 μl,模型组与干预组经脑内接种TCID50为1×105 U/ml的MCMV病毒悬液10 μl,同时干预组在接种MCMV后第2天开始腹腔注射更昔洛韦60 mg/（kg·d）,连用2周.2周后在小鼠麻醉状态下应用脑干听觉诱发电位仪在电屏蔽装置中检测小鼠的ABR,并记录ABR的波形以及Ⅰ波的潜伏期、波幅.结果 模型组与正常对照组相比潜伏期延长、波幅降低（F=9.151,P=0.011;F=5.095,P=0.043）,更昔洛韦干预组与模型组相比潜伏期缩短、波幅升高（F=13.797,P=0.003;F=14.587,P=0.002）,差异有统计学意义.结论 经脑内感染MCMV可以引起小鼠ABR的异常改变,脑内感染MCMV可建立CMV感染致听力损伤的动物模型,婴幼儿CMV感染后早期应用更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的进行性发展有一定的抑制作用.     

小鼠睾丸巨细胞病毒感染对精子顶体反应与膜功能的影响

目的探讨小鼠睾丸巨细胞病毒(MCMV)感染对附睾尾部精子顶体反应与膜功能的影响。方法随机选择无MCMV感染史的BALB/c雄性小鼠48只作为实验组,睾丸直接接种MCMV,分别于感染后第1、2、4、6、9、14天处死小鼠,用地高辛标记的MCMVM83mRNA寡核苷酸探针对睾丸组织进行原位杂交,检测睾丸MCMV感染情况,同时取附睾尾部成熟精子进行精子顶体反应与精子膜低渗肿胀功能检测。另设平行对照组雄性小鼠30只(同法随机选择),睾丸接种不含MCMV的细胞培养液,其他处理方法同实验组。结果实验组48只雄性小鼠睾丸组织间质及(或)生精细胞中均出现原位杂交阳性信号。实验组精子顶体反应与膜功能在接种病毒后的第2天、第4天,精子顶体反应率(58%±9%、56%±9%)低于平行对照组(71%±6%、70%±7%)(P均<0.05),精子膜尾部低渗肿胀率(48%±9%、38%±8%)低于平行对照组(60%±7%、50%±4%)(P均<0.05)。结论小鼠睾丸MCMV感染模型成功建立。小鼠睾丸MCMV急性感染可导致精子顶体反应与膜功能的显著下降。     

大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠脾细胞TGF-β1和IL-10的抑制作用

目的:研究大蒜新素对巨细胞病毒(CMV)感染鼠的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的影响,探讨大蒜新素的抗CMV机制。方法:建立非免疫抑制性鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散性感染小鼠模型;双抗体夹心ELISA法检测感染后1,3,7,14,28,45,60,75,90,120d正常对照组、病毒感染组和药物治疗组小鼠脾细胞培养上清中TGF-β1和IL-10水平的时序性变化。结果:MCMV感染后,TGF-β1和IL-10分泌均显著升高,并呈现出急慢性期两次高峰的特点。大蒜新素治疗对MCMV感染鼠各时间点TGF-β1水平均有下调作用,且对其急性期分泌高峰的抑制更明显。大蒜新素治疗对IL-10的急性期分泌高峰影响不明显,却显著下调慢性期IL-10的分泌高峰。结论:大蒜新素能显著抑制MCMV感染后TGF-β1和IL-10分泌,进而增强机体细胞免疫功能而有利于机体清除MCMV病毒,这可能是大蒜新素抗CMV的另一作用机制。     

MCMV感染对小鼠脾细胞调节性T细胞比率和Th1/Th2转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的 在整体水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)急慢性感染对小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)比率和Th1/Th2特异性转录因子T-bet/GATA-3蛋白表达的影响.方法 建立MCMV播散型感染模型,60只模型鼠分别于接种病毒后第1、3、7、14、28.45、60、75、90和120天各处死6只,分离脾细胞;另设60只正常小鼠作为模拟感染对照.流式细胞术检测Treg比率,Western印迹法检测T-bet/GATA-3蛋白表达水平.结果 Treg比率在急性感染末期(28 d)明显低于模拟感染对照组[(1.46±0.27)%vs(2.78±0.29)%,P<0.05];在感染慢性期持续表达上调,60 d时显著高于模拟感染对照组[(4.51±0.24)%vs (2.69±0.12)%,P<0.05].T-bet和GATA-3蛋白表达在感染后3 d分别增至(0.618±0.053)和(0.836±0.061),均显著高于模拟感染对照组水平[(0.205±0.026)和(0.398±0.022)];但是进入感染慢性期后均持续表达下调,在75、90和120 d时均明显低于模拟感染对照组水平.结论 感染急性期McMV上调T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期McMV诱导Treg增殖活化,抑制Th1和Th2分化扩增,CMV诱导Treg扩增可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因.     

Treatment of hepatitis caused by cytomegalovirus with allitridin injection—An experimental study

Summary To demonstrate the anti-cytomegalovirus (CMV) activity of allitridin injection (AI), an active anti-infection component of garlic, the invitro effects of AI on human CMV (HCMV) AD169 and 7 newly isolated strains from patients and itsin vivo effect on mice of murine CMV (MCMV) hepatitis were assessed. It was found that plaque reduction rate reached 63. 5 % after infected cells were treated with cell maximal tolerable concentration (7. 5 μg/ml) of AI. Meanwhile, flow cytometric analysis for effect of AI on expression of HCMV immediate-early antigen (IEA) showed that IEA inhibition rate of 7 isolated strains was in the range from 43. 3% to 66. 7%, with a mean of 58. 4 %, similar to that of AD169 strain (60. 5 %). On the other hand,in vivo anti-CMV activity of AI was evaluated in terms of liver pathological changes, liver function and viral replication. Six model mice with MCMV hepatitis received the treatment of AI for 2 weeks. The severity of liver damage, levels of sALT and MCMV IE genes expression in liver tissues in the treated mice were significantly lower than those of the corresponding untreated controls. Our results showed that AI had an obvious anti-CMV activity bothin vitro andin vivo. This project was supported by a grant from Hubei Public Health Bureau (No. 97252012).     

Effects of Murine Cytomegalovirus Infection on Sperm Viability in Mice

In order to explore the effects of testicular infection of murine cytomegalovirus （MCMV） on mature sperm viability at different periods following MCMV inoculation in mice, 91 BALB/c mice without MCMV infection were randomly divided into two groups： an experimental group （n= 56） and a control group （n=35）. The mice in the experimental group were treated by inoculating MCMV intratesticularly, while those in the controlled group were directly inoculated with DMEM without MCMV. The mice in both groups were sacrificed separately on the day 1,1.5, 2, 4, 6, 9 and 14 post-inoculation （D1, 1.5, 2, 4, 6, 9 and 14 PI）. The MCMV M83 mRNA gene was detected in the testis by in situ hybridization （ISH） with MCMV late-mRNA probe labeled with digoxin. Sperm viability of mature sperm in the epididymis cauda was measured. The results demonstrated the positive signal of ISH of MCMV was found mainly in the cytoplasm of the testicular interstitial cells and spermatogenic cells in the experimental group. Compared with that in the controlled group, the sperm viability in the experimental group was decreased significantly on D1 PI and D1.5 PI （P〈 0.05）. No statistically significant difference in the sperm viability was found after D2 PI between two groups （P〉0.05）. This suggested that sperm viability in mice might be descended significantly shortly after MCMV infection and might return to normal with time, indicating that MCMV acute infection might temporarily degrade sperm quality and influence procreation transiently.     

Interleukin-4 induces mouse cytomegalovirus interstitial pneumonia in a latent infection model

To better understand immune mechanisms involved in onset of cytomegalovirus pneumonia, we initially examined the replication of a low virulence strain of mouse cytomegalovirus (MCMV) in nude and BALB/c mice infected by intranasal inoculation. MCMV was detected by plaque assay in the salivary glands of nude mice from days 3 to 16, and in those of BALB/c mice from days 7 to 11. Nude mice became infected with MCMV earlier than BALB/c mice. Moreover, MCMV-DNA was detected in the salivary glands until day 16 after MCMV inoculation in nude and BALB/c mice. However, we did not find evidence of interstitial pneumonia at day 16 in either BALB/c or nude mice. These results suggest that this system represents a latent infection model in BALB/c mice and a persistent infection model in nude mice. We treated latently infected BALB/c mice with methylprednisolone or IL-4 every other day. The mice treated with IL-4 developed interstitial pneumonia, whereas those treated with m-PSL did not. In the present study, we constructed a model of MCMV latent infection that could be used to induce development of interstitial pneumonia. IL-4 appears to be a key cytokine for onset of interstitial pneumonia in mice with latent MCMV infection.     

胎盘感染小鼠巨细胞病毒后的病理学改变

目的:观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)胎盘感染后胎盘病理学改变。方法:酶联免疫法(ELISA)筛选无MCMV感染史性成熟期雌性小鼠,雌雄同笼受孕后随机分为模型组和对照组,模型组孕龄12.5 d时经胎盘显微注射MCMV悬液,18.5 d时处死,观察胎盘组织标本病理改变;对照组胎盘注射细胞维持液。结果:模型组较对照组胎盘感染率高(P<0.05)。其胎盘细胞滋养细胞增生、合体细胞结节增生、纤维素样坏死等病理学变化,与对照组差异均有显著意义(P<0.05)。结论:胎盘感染MCMV后出现的病理改变可能在MCMV宫内感染进展中发挥重要作用。     

鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠精子凋亡的影响,探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制.方法 建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型(n=15),以正常小鼠作为对照(n=15),采用流式细胞术(FCM)与激光扫描共聚焦显微术(LCSM)对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测,同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变.结果 MCMV感染第2天起精子凋亡率开始升高,第4天达最高值(39.3±1.0)%,随后逐渐下降(F=362.822,P＜0.05).而感染第1天的精子线粒体膜电位增加至74.0±1.4,第2天开始下降至63.0±2.2,第4天降至最低40.2±2.3,随后缓慢回升(F=32.257,P＜0.05).MCMV感染可引起精子线粒体超微结构的损伤,以感染第2～6天为重.结论 生殖器官MCMV急性感染可诱导附睾尾部成熟精子的凋亡;精子线粒体主动参与并调控了精子的凋亡过程.     

Long-term impact of intrauterine MCMV infection on development of offspring nervous system

This study examined the impacts of intrauterine murine cytomegalovirus(MCMV) infection on the long-term learning and memory of offspring.Sexually matured male and female BALB/C mice without MCMV infection were identified by ELISA and then mated.Seventy pregnant mice were randomly divided into the virus group(n=40) and the control group(n=30),in which the pregnant mice were subjected to placenta inoculation of MCMV suspension(1 μL,1×106 PFU) or the same amount of cell culture medium,respectively,at gestational age of 12.5 days.Some pregnant mice [virus group(n=20),control group(n=15)] were sacrificed by cervical dislocation at gestational age of 18.5 days,and the head circumference and brain weight of the mouse fetuses were measured,and the MCMV infection in their brain tissues was detected by PCR.The other pregnant mice [virus group(n=20),control group(n=15)] delivered naturally,and the learning and memory capability of the offspring at 70-day-old was analyzed by Morris water maze test.The results showed that 28.57% mouse fetuses in the virus group developed viral infection in the brain.Their head circumference and brain weight were significantly reduced as compared with those in the control group(P<0.01).The Morris water maze test revealed that the mouse offspring in the control group found the platform with straight-line trajectories after training.In contrast,the counterparts in the virus group intended to enter the central area,but looked for the platform with a circular trajectory.And the infected mice exhibited prolonged swimming distance and swimming latency(P<0.01).It was concluded that:(1) placenta inoculation of MCMV can cause fetal brain infection and intrauterine development retardation;(2) the offspring of MCMV placenta inoculation mice showed a long-term decline in learning and memory capability.