β—榄香烯对胃癌SGC—7901细胞bcl—2基因表达及端粒酶活性的影响

目的 探讨β－榄香烯对胃癌SGC－7901细胞bcl-2基因表达及端粒酶活性的影响。方法 应用β－榄香烯处理人胃癌细胞系SGC－7901后,采用RT－PCR检测bcl-2基因mRNA的变化,采用流式细胞仪检测bcl-2蛋白表达,用PCR－ELISA法检测端粒酶活性。结果 β－榄香烯可下调bcl-2基因表达及抑制端粒酶活性,并且呈药物浓度及作用时间依赖性。结论 β－榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调bcl-2基因表达有关。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

bcl—2反义寡核苷酸诱导小细胞肺癌细胞凋亡

ｂｃｌ２是一类与细胞凋亡相关的癌基因，其过度表达所致细胞凋亡受抑制是肿瘤发生的重要基础，并增加肿瘤细胞对放疗和化疗的抵抗性。本试验以脂质体为载体，对ｂｃｌ２ｍＲＮＡ翻译起始部位的反义寡核苷酸导入小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞，探讨其对ＳＣＬＣ细胞ｂｃ...     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对鼻咽癌细胞癌基因表达的影响

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸（AS-ODN）对鼻咽癌HNE-1细胞株bcl-2及c-myc基因表达的影响。方法：用PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。用免疫细胞化学法检测bcl-2和c-myc基因的表达。结果：鼻咽癌细胞株HNE-1与20μmol/L反义寡核苷酸共同孵育1天，对其端粒酶活性抑制率为61.6%。而同浓度正义寡核苷酸（S-ODN）对细胞端粒酶活性无抑制作用。20μmol/L反义寡核酸作用2天后鼻咽癌细胞c-myc基因表达HSCORE评分由3.65下降为1.98，而bcl-2基因表达HSCORE评分无明显变化。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性。此作用有序列特异性。该反义寡核苷酸抑制了鼻咽癌细胞c-myc基因的表达，而对bcl-2基因表达无明显影响。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌基因表达的影响

目的探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响.方法用PCR-ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性.用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达.结果该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性,此作用有序列特异性和浓度依赖性.40μM反义寡核苷酸抑制了喉癌细胞PCNA的表达,而对P53表达无明显影响.结论靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞端粒酶活性的抑制

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸（AS－ODN）对鼻咽癌HNE－1细胞株端粒酶活性的影响。方法：用PCR－ELISA法检测细胞内端粒酶活性。结果：鼻咽癌细胞株HNE－1与5μmol/L，20μmol/L反义寡核苷酸共同孵育1d，对其端粒酶活性抑制率分别为32．9％，61．6％。而同浓度正义寡核苷酸（S－ODNA）对细胞端粒酶活性无抑制作用。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特异性和浓度依赖性。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸(AS-ODN)对鼻咽癌HNE-1细胞株增殖的影响。方法：用PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。结果：鼻咽癌细胞株HNE-1与5μmol/L，20μmol/L反义寡核苷酸共同孵1d，对其细胞内端粒酶活性抑制率分别为32.9％、61.6％。而同浓度正义寡核苷酸(S-ODN)对细胞端粒酶活性无抑制作用。5μmol/L、20μmol/L反义寡核苷酸与HNE-1细胞共同孵育2d，对细胞增殖的抑制率分别为34.4％，72.9％，同浓度正义寡核苷酸的抑制率为14.4％、15.6％。20μmol/L反义寡核苷酸和20μmol/L正义寡核苷酸对细胞克隆形成能力的抑制率分别为78.39％、23.37％。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特异性和浓度依赖性。该反义寡核苷酸明显抑制了鼻咽癌细胞HNE-1的增殖，此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性。     

端粒酶反义寡核苷酸对SGC-7901胃癌细胞生长的作用

目的 探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（PS－ASODN）对胃癌细胞生长的作用。方法 脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，MTT法计算细胞生长抑制率，流式细胞学观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果 终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比差异有显著性意义（P＜0．01）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。对照寡核苷酸无上述作用。结论 以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸不但明显抑制胃癌细胞的增殖，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

脂质体介导的c-myc反义硫代寡核苷酸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的　探讨c myc反义硫代寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide ,APSODN)对胃癌SGC 790 1细胞凋亡的影响。方法　人工合成c mycAPSODN ,通过脂质体转染法处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,于不同时间收集细胞 ,采用Northernblot、Westernblot检测c myc基因mRNA及蛋白表达 ,采用TUNEL方法检测凋亡指数 ,以流式细胞仪检测细胞周期。结果　TUNEL显示c mycAPSODN可诱导胃癌SGC 790 1细胞凋亡 ,并与APSODN的浓度和处理时间有关。流式细胞仪检测显示细胞阻滞于G0 /G1期。结论　c mycAP SODN可诱导胃癌细胞凋亡。     

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的　观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。　方法　以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。　结果　细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。　结论　联合用药较单独用药对 NCI- H4 4 6细胞株显示出更好的抑制效果     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的：阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性，表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法运用改良的端粒酶活性定量检测法，测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性；用台盼蓝染色法，观察胃癌细胞的活力。结果：三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达，但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下，端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后，MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制，但在同样浓度条件下，MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论：端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性，其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性，其作用机制是通过抑制端粒酶活性，端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。     

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响

目的探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响。方法设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸(S-as ODN)靶序列。应用ELISA方法、MTT比色法、观察S-as ODN对HBsAg、HBeAg抗原表达及Hep G22215细胞毒性的影响。结果不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用,在浓度为20μmol／L时,对细胞无明显杀伤作用。结论S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg的抑制作用为抗HBV治疗提供了新的途径。     

榄香烯乳对胃癌SGC—7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的 探讨榄香烯乳治疗胃癌细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、端粒重复扩增--微孔板杂交法、TUNEL染色研究榄香烯乳对胃癌细胞SGC-7901的细胞生长、端粒酶活性及诱导凋亡的作用。结果 榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞生长具有较强的抑制作用。榄香烯乳抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡有关。榄香烯乳抑制端粒酶活性的效果与浓度及时间相关。结论 榄香烯乳对胃癌细胞生长具有很强的抑制作用,与抑制端粒酶活性、诱导凋亡有关。     

全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响

目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)作用于肺癌细胞NCI-H292,探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞,采用MTT法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测,1.0μmol/LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.86%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果,0.5～1.5μmol/L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,对照组阳性。③流式细胞仪检测结果:端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后,检测到细胞早期凋亡率增加,凋亡率为15.3%,与对照组相比有极显著意义(P<0.01)。PI染色结果细胞被阻止在G1/G0期,S期比率有所降低,降为14.5%。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。     

反义bcl—2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y生长和凋亡的作用

目的：研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH－SY5Y的生长和凋亡的作用。方法：采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine转染SH－SY5Y,经嘌呤霉素筛选,应用RT－PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达,建立细胞株SH－SY5Y／Asbcl-2,应用免疫组化和Western印迹分析Bcl－2蛋白的表达变化;MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况;通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA梯带。结果：RT－PCR证实转染细胞SH-SY5Y/相A－2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达,免疫组化及Western印迹分析显示SH－SY5Y／Asbcl-细胞凋亡形成的DNA梯度更明显。结论：脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞。反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达,抑制SH－SY5Y的细胞的生长,增加SH－SY5Y细胞对CP的敏感性,促进细胞凋亡。     

ppGalNAc-T2对胃癌细胞株SGC-7901生物学性能的影响

目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-T2）对胃癌细胞株SGC-7901细胞性能的影响。方法构建ppGalNAc-T2RNA干扰真核载体（pSilenCircle-SiT2）、正义真核表达载体（pEGFP-C1-T2）及空载体（pEGFP-C1）,分别转染胃癌细胞株SGC-7901细胞。MTT法检测上述各组转染后细胞对SGC-7901细胞增殖的影响;细胞黏附和穿膜实验分别检测其黏附力和迁移力的变化;同时采用RT-PCR和Westernblot检测MMP2、MMP14、TGF-β1等与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果转染正义真核表达载体的SGC-7901细胞,随着ppGalNAc-T2表达量的增加,细胞的生长增殖受到抑制,并对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力降低,但其侵袭迁移能力变化不明显;而转染ppGalNAc-T2RNA干扰载体的SGC-7901细胞,细胞生长最快。ppGalNAc-T2与肿瘤细胞相关因子TGF-β1、MMP2的mRNA表达水平成负相关,但对MMP14无明显影响,Western blot检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致。结论ppGalNAc-T2可影响胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖、黏附能力,并影响与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。     

bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的 探讨bcl-2基因反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞药物敏感性的影响。方法 MTT法测bcl-2 ASODN对U937细胞足叶乙甙(VPl6)敏感性，计算细胞存活率，绘制剂量-效应曲线，直线回归求半数致死量IC50；DNA电泳、AO／EB荧光染色测定细胞凋亡率。结果 VP16与bcl-2 ASODN联合作用比单独用VP16或VP16与SODN细胞存活率显著减少。bcl-2 ASODN作用后VP16对U937细胞的IC50由7．93μoml／L降至2．67μoml／L。与单独VP16作用组相比，bcl-2 ASODN与VP16联合作用后梯状DNA片段明显增加，细胞凋亡率增高。结论 bcl-2 ASODN能促进VP16诱导的白血病细胞凋亡，提高白血病细胞对VP16的敏感性。bcl-2反义寡核苷酸在克服化疗药物耐药性方面，具有良好的应用前景。     

曲古抑菌素A对人胃癌细胞SGC-7901生长及bcl-2、caspase-3mRNA表达的影响

目的研究曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌细胞的增殖、凋亡及bcl-2、caspase-3 mRNA表达的影响及其意义。方法体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,MTT法检测不同浓度TSA作用不同时间后细胞的增殖情况;流式细胞术检测不同浓度TSA作用48 h后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测胃癌细胞中bcl-2、caspase-3 mRNA表达情况。结果不同浓度TSA作用不同时间后,随着时间延长及浓度增高,细胞的增殖抑制明显,呈现明显时间-效应关系及剂量效应关系;与阴性对照组比较,随着TSA浓度的增加,胃癌细胞SGC-7901的早期凋亡率逐渐增高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与阴性对照组比较,胃癌细胞中bcl-2 mRNA随TSA浓度的增高,表达逐渐下调,而caaspase-3mRNA随TSA浓度的增高表达逐渐上调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TSA对人胃癌细胞SGC-7901具有明显生长抑制作用,呈时间与剂量依赖性;能诱导人胃癌细胞SGC-7901发生早期凋亡能诱导胃癌细胞株SGC-7901细胞发生早期凋亡;TSA抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖与诱导凋亡作用可能与bcl-2 mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调有关。