改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

横纹肌快速染色法

目前 ,横纹肌染色多选用Ｍａｌｌｏｒｙ磷钨酸苏木精染色法(ＰＴＡＨ) ,但该方法存在着配置染液时间长 ,染色时间长等不足。虽有人加高锰酸钾氧化促其成熟 ,但还是需要几天时间 ,且染色效果也不是很满意。我们摸索出一种性能稳定的快速染色法 ,其试剂配制便捷 ,染色过程快速 ,组织色泽艳丽 ,对比度强 ,横纹显示清晰。一、材料与方法1 材料与试剂配置 :( 1)改良的磷钨酸苏木精染液 :苏木精 0 .1ｇ、磷钨酸 2ｇ、蒸馏水 10 0ｍｌ、黄色氧化汞 0 .1ｇ。Ａ液 :苏木精放入 3 0ｍｌ蒸馏水 ,加热使之溶解。Ｂ液 :取一 2 5 0ｍｌ烧杯 ,放入磷钨酸和…     

PAS—M／PASM—M显示肾小球基膜,红细胞和细胞核的复合染色方法

多年来为了进一步提高肾小球的组化染色效果,我们进行了反复实验,根据染色机理和目的,重新组合PAS-M和PASM-M的二种染色方法,能够较好的显示肾小球毛细血管基膜、红细胞和细胞核的分布及病变程度,对于肾组织的疾病诊断和研究预后效果,具有一定的实用意义.1 材料和方法1.1 PAS—M法的试剂配制和染色方法 (1)试剂配制 ①Periodic acid (过碘酸)氧化液,过碘酸0.5g,蒸馏水98ml.②Martius yellow(马休黄)对比染色液:马休黄 0.5g,无水酒精 98ml,磷钨酸0.2g.③Schiff’s染色液:碱性复红2g,1M盐酸40ml,重亚硫酸钠4g,重蒸馏水400ml.先将蒸馏水煮沸,小火焰后加入碱性复红,再煮沸1分钟,冷却到50℃时加入盐酸,待35℃时加入重亚硫酸钠.将试剂盛棕色瓶中,冷却后入冰箱内备用.(2)染色方法 ①组织切片脱蜡至水.②过碘     

骨骼肌m-ATPase染色改良法

我们在实验中发现 ,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中 ATP酶的活性 ,且 ATP酶对固定非常敏度 ;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象。固定液的张力很重要 ,而蔗糖是把张力提高到足够水平的最适当添加物。我们将原 ATP酶钙钴法作了如下改进 :1.固定 :将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约 1 mm厚的薄片 ,入固定液中固定1 0 min,4℃。固定液配制 :多聚甲醛 4g;二甲砷酸钠 3.0 8g;氯化钙 0 .75 g;蔗糖 1 1 .5 g;双蒸水加至 1 0 0 ml,调节 p H值为 7.2。2 .OCT包埋 ,- 2 0℃恒冷箱切片( 8μm) ,室温下自然干燥 30 min。3.切片预处理 1…     

一种显示网状纤维的方法

网状纤维是一种嗜银纤维 ,如用一般的银浸染 ,纤维难于分辨 ,而采用碳酸铵银法染色网状纤维的结构则显示得异常清晰。因而 ,碳酸铵银法是一种较理想的显示网状纤维的方法 ,现将该方法介绍如下 :1 .用岑克液或 1 0 %福尔马林固定脾、肝标本。 2 .切片脱蜡后蒸馏水洗数次。 3.将切片放入 0 .3%高锰酸钾内 5 min。 4.切片经水洗后入 5 %草酸漂白 ,至切片上的组织呈现为白色为止。 5 .蒸馏水洗数次后 ,置切片于碳酸铵银内 ( 5 0℃ ) 30 min。铵银液配方 :1 0 %硝酸银 1 0 ml,磷酸钾饱和液 1 0 ml,上述二液混合后产生沉淀 ,倾去上层液体 ,将沉淀…     

成纤维细胞复合染料染色法

成纤维细胞是疏松结缔组织中常见的细胞,也是功能较重要的细胞.迄今为止,各种书籍、文献均介绍:在光镜下成纤维细胞轮廓不清,只能从核及胞质上辨别.给教学工作带来了极大的不便.为了改变这种状态,我们尝试用复合染料染成纤维细胞,得到了良好的效果.1 材料和方法(1)取材大白鼠肠系膜.(2)固定100%乙醇50ml,甲醇50ml配成的混合固定液,固定10分钟.(3)染色复合染料染色20分钟(复合染料配制:2%碱性品红,2%偶氮焰红,各50ml分别溶解后,两种溶液混合,滤过、沉淀,取沉淀物在烤箱中烤干,取沉淀物0.5克,加70%酒精100ml,再加三聚乙醛1ml为原液.取原液10ml加70%乙醇30ml,再加0.1     

改良Warthin-Starry染色技术的新用途

我们用改良Ｗａｒｔｈｉｎ Ｓｔａｒｒｙ(Ｗ Ｓ)染色方法检查一些病原体取得较好效果 ,现将我们的工作体会介绍给同行。1　材料和方法1.1　材料　实验材料均取自外检组织 ,包括梅毒螺旋体感染的皮肤粘膜组织、鼻硬结症之鼻腔粘膜 ,侵袭性霉菌病之上颌窦粘膜组织、胃炎粘膜组织及淋病炎性渗出物涂片。组织均经常规处理、石蜡包埋 ,每份切成数张 6 μｍ厚的切片备用。涂片常规固定 1ｍｉｎ后漂洗吹干备用。1.2　染色液的配制和染色程序1.2 .1　 染色液的配制　①明胶原液 :明胶 5 ｇ ,蒸馏水 10 0ｍｌ,加热溶解。②显色剂 :明胶原液 8ｍｌ、2 …     

不同固定液、染色法显示结缔组织肥大细胞效果的比较

本研究用6种固定液、4种染色法,观察对显示小鼠耳廓、舌和背皮肤结缔组织肥大细胞的影响。结果表明:一种固定液固定的组织,用不同的染色法染色或不同固定液固定的组织,用一种染色法染色,显示肥大细胞的效果不同。这可能是由于固定液能影响肥大细胞颗粒对染料的亲合力。本文对不同部位的结缔组织肥大细胞对固定液的反应有差异这一现象,进行了讨论。     

制作疏松结缔组织教学铺片的探索

关于疏松结缔组织铺片的染色技术 ,近年来不少改进 ,能同时显示三种细胞两种纤维的方法也有几种 ,但是仍有不令人满意之处 ,比如巨噬细胞吞噬颗粒太少 ,显示不清楚 ,我们推测与甲醛液固定后水洗使其溶解有关 ,也可能与台盘蓝浓度有关。所以我们经过多次实验 ,作了如下探索和改进 :1将来复红染色法中的 1 %台盘蓝注射液改为 1 .5 % ;2采用了 1 0 %、2 0 %两种不同浓度甲醛固定液固定和 95 %酒精固定进行比较。结果 2 0 %甲醛效果较佳。具体操作如下 :材料和方法 :取 2 5 0 g重大鼠 ,腹腔注射台盘蓝 ,每天 1针 ,共注射 5针 ,第五针注射后两小…     

显示肝、肾上腺脂类油红O方法探讨

油红 O为脂溶性 ,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料 ,在脂肪内能高度溶解 ,从而染色 ,能保存组织中的脂肪滴。配制染料的溶剂是染色成败的关键 ,在此介绍一种油红 O染色的改进。油红 O原配方是由异丙醇 ,我们改用酒精配制效果同样满意。1取材 :小狗肝脏、肾上腺固定于 1 0 %中性甲醛溶液内 1～ 2 d。 2蒸馏水洗冰冻切片 1 0～ 2 0 μm入蒸馏水。 3用 70～ 80 %异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗。 4入油红 O染色 1 5～ 2 5 min。油红 O配方 :油红 O1 g,异丙醇 1 0 0 ml或 70 %酒精 1 0 0 ml,将油红 O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱…     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],由于骨组织致密、坚硬,并含有骨胶等成分,所以要制作一张高质量的切片(和软组织相比)有一定的困难[2].近年来出现的塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术尚不够成熟和稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,制作时采用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当.而将皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下.     

表面活性剂在Wade-Fite法中的应用

由于结核杆菌属抗酸菌,其菌体壁上含有脂质,一般不易着色。常规W ade-F ite法染色使用汽油、松节油混合液代替二甲苯脱蜡,以保存菌体脂质不受破坏。我们通过反复探索,发现通过在染液中加入表面活性剂能有效地提高结核杆菌的检出率,现报道如下。1材料与方法1.1材料收集广东省揭阳市人民医院病理科近2年来所收结核病例标本24例,每例切片2张,分为两组,分别用常规W ade-F ite法和加入表面活性剂的W ade-F ite进行染色。1.2染色剂的配制(1)A液:100 m l石炭酸复红溶液加5m l表面活性剂,混匀。(2)B液:20%硫酸水溶液。(3)C液:亚甲蓝水溶液。1.3…     

胰岛B细胞、A细胞的快速双染

组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中。本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学 SP法在同一张切片上对胰岛 B细胞和 A细胞进行了双重染色 ,取得较好的效果 ,现作简单介绍。取大鼠胰腺 ,Bouin液固定 ,石蜡包埋 ,切 5 μm厚切片。双染步骤如下第一步 ,胰岛 B细胞的醛品红染色 :切片脱蜡到水 ;入 0 .2 5 %浓硫酸和 0 .2 5 %高锰酸钾等量混和液中 3min;蒸馏水洗后入 5 %草酸 2 min;蒸馏水洗 ;再经 70 %酒精后入醛品红染液 1 5 min;70 %酒精分色后 ,蒸馏水洗。第二步 ,胰岛 A细胞的免…     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体LH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用 4%多聚甲醛行全身灌流。取脑垂体 ,Bouin液固定、脱水、石蜡包埋 ,5μm厚切片常规脱蜡处理。用鼠抗人L H抗体 (1∶ 40 0 0 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。40倍接物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用镜下测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其平均值作为细胞的直径。结果如下 :1对照组免疫染色阳性细胞的直径随年龄增长无明显变化。 3个…     

疏松结缔组织铺片染色新法

疏松结缔组织铺片的染色是组织学技术中的难点。常规方法存在着较多的不足 ,如 :两种纤维对比不够鲜明 ,各种细胞成分较难区分 ,铺片厚薄不均等。本文经过反复实验 ,能够显示组织的多种成分 ,特异性强 ,效果稳定 ,是为一种适用于教学和科研的简便可行的新方法。1　材料和方法1.1　动物的处理和取材　健康成年大鼠一只 ,体重2 0 0～ 2 50 g,腹腔注射新配制的 0 .5%台盼蓝生理盐水液 ,每次 5ml,隔日一次 ,共注射 3次。于末次注射的次日 ,断头处死 ,将肠系膜于根部连同肠管剪下 ,用大头针固定肠管于蜡盘上 ,并使肠系膜展平绷紧。用蒸馏水洗去血…     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],通常由于骨组织致密,坚硬,并含有骨胶等成分,所以要切好一张高质量的切片(和软组织相比),有一定的困难[2].近年来推出了塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术,但目前尚不够成熟稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,我们在制作此标本时,用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当,用于教学效果良好.而连着皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下(图1～4).     

普通墨汁对中、小血管行荧光染色

自发荧光的生物物质或经荧光染料标记的物质可在荧光显微镜下发荧光。但市售普通墨汁对组织结构可行荧光染色 ,经查未见报告。我们给小鼠、大鼠、幼兔注射普通墨汁 ,分别取肺、肾、肝、肠系膜 ,均可见其中、小血管显现很强的黑色荧光 ,其他组织无荧光。碘化钾对血管荧光有很强的猝灭作用。现报道如下 :1　材料与方法1 .1　材料　 ( 1 ) A液　即市售普通墨汁原液。( 2 ) B液　取墨汁 1 0 0 ml,明胶 3g,隔水加温 ,使明胶溶解于墨汁中即成。 ( 3) C液蒸馏水 1 0 0 ml,明胶 3g,加温溶解。1 .2　动物　实验动物分三组 ,每组小鼠、大鼠、幼兔各…     

微波滴染法在临床肾穿组织特殊染色中的应用

肾穿标本的光镜病理诊断在临床诊断肾病方面具有重要作用 ,作者采用微波湿盒滴染法 ,应用于肾穿标本的ＰＡＳＭ Ｍａｓｓｏｎ、ＰＡＳ、ＨＥ 3种染色 ,既明显缩短时间 ,又节省大量试剂 ,不用使用染色缸等 ,效果满意 ,现予报道。一、材料与方法1.标本与切片 :临床肾穿标本 ,均经皮肾穿刺活检。经ＰＢＦ Ａ液 (甲醛 乙醇 磷酸盐缓冲液 )固定[1] 1ｄ ,换成 0 .1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ保存 ,然后按石蜡包埋程序包埋 ,每步脱水及透明各 10ｍｉｎ ,浸蜡 1ｈ ,用 5 8～ 6 0℃石蜡包埋。用一次性刀片切片 2 μｍ厚 ,6 0℃烤片过夜 ,脱蜡入水。2 微波炉…     

一种可用于支持细胞功能判定的染色法

在光学显微镜下对支持细胞(Sertoli细胞)的功能进行快速直接的判定,一直缺少客观有效的方法.通过数年的摸索,找到了一种通过特异地对残余体及其前体进行染色来判定支持细胞功能状况的染色方法.具体的染色方法如下:1 材料与方法1.1 动物成年雄性Wilster大鼠.1.2 染色方法1.2.1 染色液的配制天青Ⅱ号0.5g、美蓝0.5g、伊红1g,加少量水顺次溶解后,加水至100ml,于瓶中敝口静置48小时,过滤、留上清液备用.最好于用前1周内配制.1.2.2 染色步骤动物睾丸用Bouin液或4%甲醛固定24～72小时,石蜡包埋,切片4～5μm厚.切片脱蜡至水,置染色液中染色12～24小时.染色后蒸馏水冲洗,晾干,切片置装有五氧化二磷干燥瓶中干燥24～48小时,直接入二甲苯透明,中性树胶封片.