肾虚证大鼠尿液的核磁共振谱代谢组学研究

目的：应用1HNMR结合主成分分析(PCA)方法研究氢化可的松诱导的肾虚证大鼠和空白对照大鼠的尿液成分谱差异。方法：使用氢化可的松诱导大鼠建立肾虚证模型,1HNMR分析对照组和模型组大鼠的尿液,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径的可能解释。结果：PCA方法处理肾虚证和空白对照大鼠尿液数据显示,两组大鼠的数据可以在得分图实现分类,与对照组比较肾虚组大鼠由于氢化可的松诱导,大鼠机体进入一个过消耗后衰弱的状态,相关代谢发生显著变化,乳酸(δ 1.37)代谢发生堆积;二甲胺(δ 2.72)的含量增加,提示肾虚与肾功能异常是密切相关的;天冬氨酸(δ 2.83),牛磺酸(δ 3.44,3.28),马尿酸(δ 7.84,7.56,7.64,3.97),肌氨酸(δ 3.87)等的相对积分面积明显下降,这预示糖皮质激素可能引起了肾上腺皮质分泌功能的损害;琥珀酸(δ 2.41)和柠檬酸(δ 2.53,2.68)是三羧酸循环能量代谢及糖酵解的中间产物,其含量的降低,通常是由于线粒体功能紊乱所引起。结论：1HNMR结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,本研究为理解中医的肾虚证和为该类疾病临床诊治的研究提供了证据。     

高血压病肝阳上亢证患者尿液代谢指纹图谱研究

目的:探讨高血压病肝阳上亢证患者的尿液代谢谱特征。方法:采用高效液相色谱质谱联用技术结合主成分分析(PCA)方法分析、比较10例高血压病肝阳上亢证患者和10例健康志愿者的尿液成分谱差异。结果:与健康志愿者相比,高血压病肝阳上亢证患者机体相关代谢发生显著变化,两组的高效液相色谱数据在得分图中实现了较准确的分类。结论:高效液相色谱质谱联用结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,可以为高血压病肝阳上亢证的诊断提供一定的客观依据。     

高血压病肝阳上亢证患者尿液样品的核磁共振谱代谢组学研究

[目的]寻找高血压病肝阳上亢证患者可能的生物标记物,揭示其证候本质。[方法]对2008年7月至2009年10月间山东省中医医院神经内科收治的9例高血压病肝阳上亢证患者与7例健康志愿者,用~1HNMR分析尿液成分,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径解释。[结果]两组~1HNMR谱数据可以在得分图实现分类;与健康志愿者作比较,高血压病肝阳上亢患者机体相关代谢发生显著变化,体内氨基酸、葡萄糖代谢明显异于健康志愿者。[结论]~1HNMR结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证候本质和诊断提供了科学依据。     

腺嘌呤与氢化可的松大鼠肾阳虚模型造模方法比较

目的比较腺嘌呤诱导与氢化可的松诱导的SD大鼠肾阳虚模型的优劣，从而得到临床症状、生化指标更符合中医“肾阳虚”型的动物模型，以供科研、教学使用。方法雄性SD大鼠100只，随机分成正常组、腺嘌呤造模组及氢化可的松低剂量组、中剂量组、高剂量组各20只，造模成功后检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿液中17-羟皮质类固醇（17-OH）和血浆中甲状腺激素（13、T4）、睾丸酮（T）、雌二醇（E2）及模型大鼠骨密度。结果无论从症状主证方面，还是客观指标方面（除骨密度外），腺嘌呤诱导的SD大鼠肾阳虚型动物模型在生化指标研究方面均优于氢化可的松诱导组。结论腺嘌呤诱导的肾阳虚证SD大鼠模型在症状主证方面及其相关的生化研究方面优于氢化可的松组。     

毛细管电泳对大鼠炎症模型的代谢组学研究

目的 建立尿液代谢物组的毛细管电泳分析方法,了解炎症模型大鼠的尿液代谢物轮廓变化.方法 基于代谢组学方法,利用毛细管区带电泳分析正常大鼠、炎症模型大鼠尿液代谢物数据,用计算机辅助相似度评价系统进行峰匹配和数据分析,结合主成分分析方法,研究炎症模型大鼠的尿液代谢轮廓.结果 大鼠尿液毛细管电泳图谱经主成分分析显示炎症大鼠尿...     

基于核磁共振技术的小青龙汤证的证本质研究

目的通过分析各组大鼠尿液代谢物图谱,发现小青龙汤证的生物标志物,为临床诊断和治疗提供客观依据。方法对正常组和模型组大鼠的尿液进行核磁共振氢谱检测,图谱经Me-stRec预处理和积分后,所得数据用SIMCA-P+进行主成分分析(PCA),得到相应的散点图和载荷图,进行比较后找出差异性代谢物。结果与正常组比较,模型组中肌酸酐、胍基乙酸、三甲胺、牛磺酸、尿囊素等代谢物含量升高(P<0.05),琥珀酸、α-酮戊二酸、乳酸、甘氨酸、甲基烟碱等代谢物含量降低(P<0.05)。结论模型组大鼠尿液中与能量代谢有关的小分子化合物与正常组有明显差别,提示基于核磁共振技术和模式识别的代谢组学方法可以揭示小青龙汤证的证本质。     

脾虚水湿不化证大鼠尿液代谢组学研究

目的?以基于液质联用的代谢组学方法对脾虚水湿不化证模型及正常对照组大鼠的尿液进行研究,寻找模型大鼠尿液中差异代谢物,探讨脾虚水湿不化证的分子机制。方法?采用高脂低蛋白饲料加力竭游泳法复制脾虚水湿不化大鼠模型,收集模型组和正常对照组尿液,运用高效液相色谱-四极杆-时间飞行串联质谱仪技术检测2组尿液样本中的小分子代谢产物,对所得到的代谢指纹图谱进行主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,找出具有差异的特征代谢物。结果?与正常对照组相比,模型组大鼠尿液差异代谢物为:α-酮戊二酸、瓜氨酸、乳酸、柠檬酸、5-羟色胺、谷氨酰胺等6种。结论?脾虚水湿不化模型大鼠机体糖、蛋白质代谢均出现紊乱,能量供应不足,胃肠功能下降,抗氧化能力下降,其机制可能与这些小分子代谢产物的变化有关。      

肾阴虚至肾阳虚状态变化的实验研究

目的:通过腹腔注射氢化可的松琥珀酸钠建立小鼠肾虚证模型,探究从肾阴虚证转化为肾阳虚证的时间点。方法:BALB/c雄性小鼠44只,随机分为模型组和对照组各22只,模型组按照每天40 mg·kg~(-1)剂量腹腔注射氢化可的松琥珀酸钠,连续21 d;对照组每天腹腔注射相同剂量的生理盐水。肾虚证造模过程中每天观察记录小鼠的体质量、肛温,测量不同时间段(第1～3天,第11～13天,第19～21天)小鼠的自主活动时间、游泳时间、呼吸代谢及血清环磷酸腺苷(c AMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)值,并于第21天测量小鼠心率、血压。结果:与对照组比较,模型组在第11～13天平均肛温有升高趋势,平均体质量明显下降,差异有统计学意义(P0.01);模型组在第19～21天平均体质量和平均肛温都显著降低,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。与对照组比较,模型组在第1～3天自主活动时间、游泳时间、呼吸代谢均无明显变化;模型组在第11～13天呼吸代谢转换率(REF)和机体实际产热量[H(1)]升高,差异有统计学意义(P0.05),自主活动时间和游泳时间虽然无明显差异,但数据结果有降低趋势,在第19～21天REF显著降低,差异有统计学意义(P0.01);模型组在第21天血压显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:采用腹腔注射氢化可的松琥珀酸钠建立肾虚证BALB/c小鼠模型过程中,小鼠在第11～13天表现为肾阴虚证状态,在第19～21天可出现肾阳虚证状态。     

痛风性关节炎大鼠模型尿液的代谢组学研究

目的 通过代谢组学研究,了解痛风性关节炎大鼠模型尿液中代谢组的变化规律.方法 基于代谢组学方法,以LC/MS为数据采集平台,并结合主成分分析方法等化学计量学手段,研究空白大鼠、痛风性关节炎大鼠尿液中代谢物组时量的轨迹变化.结果 造模后大鼠的代谢状态相对其造模前及空白对照组大鼠出现了偏离,随着时间的推移又逐渐回复到造模前的初始代谢状态,以此代谢组学方法所得的大鼠代谢轨迹变化很好地反映了大鼠痛风性关节炎的发生、发展、恢复的病程状况.结论 模型的整体代谢状态通过代谢组学方法可以得到很好的体现,因而代谢组学技术为痛风性关节炎模型提供了良好的研究手段.     

氢化可的松致SD大鼠肾阳虚证卵巢早衰模型研究

目的 探讨氢化可的松致SD雌性大鼠肾阳虚证卵巢早衰(POF)模型的大体情况、卵巢指数、子宫指数、动情周期紊乱情况、血清生殖激素水平的特征.方法 以8～9周龄SPF级成年性成熟雌性SD大鼠(未孕未产)为研究对象,模型组每日上午后下肢肌注氢化可的松32 mg· kg-1·d-1,1次/d,连续12 d,建立肾阳虚证大鼠POF模型,对照组为未注射氢化可的松的雌性SD大鼠.分两个阶段观察比较在造模结束后第2天、第14天两组在大鼠体质量、卵巢指数、子宫指数、动情周期、血清生殖激素水平的变化.结果 1)模型组大鼠第一阶段和第二阶段注射氢化可的松后体质量均低于对照组和注射前(P＜0.05),第一阶段和第二阶段体质量差异无统计学意义(P＞0.05);2)模型组大鼠动情周期紊乱,阴道涂片显示动情间期持续或延长;3)模型组大鼠第一阶段和第二阶段注射氢化可的松后卵巢指数均低于对照组和注射前(P＜0.05),第二阶段卵巢指数均数低于第一阶段(P＜0.05),子宫指数无明显差异(P＞0.05).4)与对照组和注射前相比,模型组大鼠第一阶段和第二阶段注射氢化可的松后血清E2下降,FSH、LH升高,FSH/LH升高,差异有统计学意义(P＜0.05);5)与模型组第一阶段相比,第二阶段血清E2下降,FSH/LH下降,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组两个阶段的FSH、LH差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氢化可的松致大鼠肾阳虚卵巢早衰模型大鼠体质量下降,呈明显阳虚证型,动情周期紊乱,动情间期延长或持续,卵巢指数降低,在给药结束后生殖激素异常,且在给药结束后14 d肾阳虚证持续.     

糖尿病肾阴虚证模型大鼠尿液的代谢组学研究

目的:研究糖尿病肾阴虚证大鼠模型尿液的代谢表型变化,探讨代谢组学在糖尿病肾阴虚证研究中的应用.方法:将大鼠分为正常组、模型组,模型组采用甲状腺素和链脲佐茵素分别皮下和腹腔注射的方法来制作糖尿病阴虚证大鼠模型;收集造模组大鼠的尿液,进行GC-MS检测.结果:模型组大鼠血糖增高,尿糖、尿蛋白均增高.与正常组比较,模型组大鼠的尿液中包含的甘氨酸、琥珀酸含量显著升高(P<0.05),十六烷酸、胆固醇含量显著下降(P<0.05).结论:大鼠的尿液代谢谱与糖尿病肾阴虚证密切相关,代谢组学在中医糖尿病研究中有广泛前景.     

2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型的建立及其稳定性评价

目的建立2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型及其稳定性评价方法。方法采用灌胃高脂乳结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型,再灌胃糖皮质激素氢化可的松建立2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型,继续高脂乳喂养1个月,检测大鼠模型血液中的血糖值、cAMP水平,考察该模型的稳定性。结果成功建立了高脂乳结合小剂量STZ加氢化可的松诱导的2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型,模型组大鼠空腹血糖值≥16.7 mmoL/L,cAMP水平为(1.32±0.04)mmoL/L,且其日常表现也与中医肾阴虚证相吻合。1个月后,模型组大鼠空腹血糖值≥16.7 mmoL/L,cAMP水平为(1.24±0.02)mmol/L。结论通过灌胃高脂乳结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)再灌服氢化可的松成功复制出了稳定性良好的2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型。     

基于UPLC-Q-TOF的经前期综合征肝气逆证大鼠模型代谢表征研究

目的研究经前期综合征（PMS）肝气逆证大鼠代谢指纹差异,以期为PMS肝气逆证在代谢层次上的发病机制寻找证据。方法用电刺激法复制经前期综合征肝气逆证大鼠模型,UPLC-TOF-MS法检测各组大鼠尿液的代谢指纹变化。结果对照组、造模组在主成分分析中得到了较好的区分,给予白香丹胶囊后代谢网络有修复趋势。结论利用代谢组学能够较好地区分PMS肝气逆证模型大鼠代谢模式及药物调控趋势,该方法可为情志病证发病机制及模型评价研究提供新手段,显示出代谢组学在中医证候研究中的可行性。     

氢化可的松"虚证"模型大鼠的心率变异性研究

目的研究氢化可的松"虚证"模型大鼠的心率变异性(HRV)的变化特征,从"虚证"动物模型,探讨中医证的客观化.方法将36只SD大鼠随机分为正常对照组(对照组)、氢化可的松组(模型组)、氢化可的松+桂附地黄丸组(加药组),模型组和加药组按50 mg·kg-1·d-1氢化可的松剂量灌胃,连续12 d,加药组同时灌桂附地黄丸,模型组予等同剂量的生理盐水.从第13天起,停用氢化可的松,换成等剂量的生理盐水,加药组桂附地黄丸液继续灌胃,再连续12 d.分别测定上述各组第12天、第24天后的HRV.结果第12天后,与对照组比较,模型组TP、VLF、LF、HF、SD均下降,但无统计学差异,而HR明显升高(P＜0.01);与对照组、模型组比较,加药组TP、VLF、LF、HF、SD均明显降低(P＜0.05或P＜0.01).第24天后,与对照组比较,模型组TP、LF、SD显著增加(P＜0.05)加药组HRV各参数均无统计学意义(P＞0.05).结论氢化可的松制备的"虚证"模型大鼠HRV有明显改变,表明交感神经和副交感神经功能受损.HRV检测对"虚证"动物有一定的特征性表现.     

基于NMR代谢组学方法研究高果糖诱导大鼠肝脏组织的代谢变化

目的应用基于核磁共振氢谱代谢组学方法研究高果糖喂养大鼠肝脏组织的代谢变化。方法Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,每组8只。对照组给予纯净水饲养;模型组给予10％果糖水饲养．制备非酒精性脂肪肝模型。实验8周后取大鼠肝脏组织,采集两组大鼠肝脏组织水溶性提取液的’HNMR谱,运用主成分分析法（principal component analysis,PCA）分析。结果与对照组相比,模型组中乳酸、肌酸和牛磺酸升高,异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、胆碱和甜菜碱／氧化三甲胺降低,差异均有统计学意义。结论应用核磁共振和模式识别的代谢组学方法,获得高果糖喂养大鼠的肝脏组织提取液的代谢特征,为理解高果糖引起肝脏脂肪病变过程中的代谢变化提供了依据。     

基于1H核磁共振谱分析的自发性高血压大鼠尿液代谢特征

目的 采用¹H核磁共振谱分析结合偏最小二乘分析（PLS-DA）方法研究自发性高血压大鼠和Wistar大鼠尿液的成分谱差异,寻找可能的生物标记物。方法 选取自发性高血压大鼠和Wistar大鼠,连续4周收集尿液,以¹H-NMR分析两组大鼠的尿液成分,使用PLS-DA方法进行模式识别,通过OPLS-DA的相关系数寻找差异标记物。结果 PLS-DA方法处理高血压大鼠和Wistar大鼠的¹H-NMR谱数据显示,两组¹HNMR谱数据可以在得分图中明显区分,且代谢趋势在连续4周测定均非常稳定,说明自发性高血压大鼠有着特定的代谢模式,通过OPLS相关系数分析出体内部分氨基酸代谢产物和葡萄糖等能量代谢物质明显异于正常大鼠。结论 ¹H-NMR结合PLS-DA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为了解高血压大鼠的代谢特征提供了科学依据.     

基于不同模式识别方法的大鼠尿液核磁共振氢谱分析

目的采用核磁共振波谱技术测试不同性别大鼠尿液代谢物,探讨不同模式识别方法对结果的影响。方法利用主成分分析（principal component analysis,PCA）、偏最小二乘法判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、正交偏最小二乘法判别分析（orthogonal to partial least squares discri minant analysis,OPLS-DA）等方法分析不同性别大鼠尿液中的差异性代谢物。结果数据进行中心化处理后进行PCA和PLS-DA分析可以判别两组尿液中具有差异性的缬氨酸、乙酸、尿囊素、鸟氨酸、肌酸酐、二甲胺、丙氨酸、柠檬酸等代谢物,而进行OPLS-DA分析除了判别出以上具有差异性的代谢物外还确定了氨基马尿酸、甲胺、延胡索酸等两组中有显著差异的代谢物。结论 OPLS-DA分析是代谢组学研究中比较灵明的数据分析方法。     

肾虚型老年痴呆大鼠模型的复制

目的复制肾虚型老年痴呆大鼠模型。方法采用灌胃给予氢化可的松(15mg/kg)复合侧脑室注射β-淀粉样蛋白(25-35)(amyloid beta 25-35,Aβ25-35)10μg复制肾虚型老年痴呆动物模型,每5d记录一次大鼠的体质量,通过体质量变化、自主活动、免疫学指标以及血浆中睾酮和皮质酮含量的变化,评价该模型肾虚的形成情况;通过奖励性操作式条件反射任务和水迷宫实验结合脑组织病理学的变化,评价该模型学习记忆的变化。结果与对照组比较,肾虚组和肾虚型老年痴呆组大鼠体质量增长缓慢,自主活动度显著降低,胸腺和脾指数显著降低,血清中睾酮和皮质酮含量显著降低(P0.05,或P0.01)。在水迷宫实验和奖励性操作式条件反射任务中,与对照组比较,肾虚型老年痴呆大鼠的学习记忆能力显著受损(P0.05,P0.01)。结论灌胃给予氢化可的松(15mg/kg)复合侧脑室注射Aβ25-35(10μg)可以用于复制肾虚型老年痴呆模型,既可以使Wistar大鼠产生一系列肾虚表现,又可以造成其学习记忆功能障碍。     

奶母果对肾阳虚大鼠影响的实验研究

目的:研究奶母果对肾阳虚大鼠影响。方法:50只SD大鼠采用氢化可的松肌注制备肾阳虚大鼠模型后随机分为5组:模型对照组,阳性对照组(淫羊藿0.9 g/kg),奶母果低、中、高剂量组(1.8、3.7、7.4 g/kg),另取10只健康大鼠作为空白对照组。观察肾阳虚大鼠行为、体重和激素水平改变。结果:与模型组比较,奶母果中、高剂量和阳性对照组大鼠的肾阳虚体征明显改善,体重下降趋势得到纠正,且显著延长大鼠负重游泳时间,显著降低血清雌激素(E2)水平和升高血清睾酮(T)水平(P均<0.05)。结论:奶母果可改善肾阳虚大鼠模型症状,该作用可能与其调节激素水平和机体代谢有关。     

中药毒性的代谢组学研究(Ⅱ):吡咯里西啶类生物碱的肝肾毒性

目的 分析经中药千里光中吡咯里西啶类生物碱染毒后大鼠尿液内源性代谢产物的变化,研究该类生物碱的肝肾毒性,为中药毒性评价提供简单可靠的方法.方法 利用生物核磁共振技术分析对照组,吡咯里西啶类生物碱口服给药组的大鼠7d的尿液、结合模式识别技术和主成分分析法评价吡咯里西啶类生物碱对大鼠尿液内源性代谢物的影响,探讨吡咯里西啶类生物碱的肝肾毒性.结果 与对照组相比,口服吡咯里西啶类生物碱引起大鼠尿中牛磺酸,氧化三甲胺以及二甲基甘氨酸含量的持续增高,说明对肝脏及肾脏造成了损伤,提示吡咯里西啶类生物碱存在肝肾毒性.结论 从代谢组学的角度可以诠释中药千里光的肝肾毒性,提示代谢组学方法可为传统中药毒性研究提供新的手段.