内源性硫化氢在大鼠截肢术后肺损伤中的变化及意义

目的 研究内源性血浆硫化氢(H2S)/肺胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系在截肢术后肺损伤中的变化及作用.方法 雄性Wistar大鼠63只,构建大鼠截肢模型,按照不同时间点随机分为9组:正常对照组7只;手术后1、2、4、6、12、24、48、72h组,各7只.观察各组大鼠肺湿/干重比值(W/D)的变化及血浆H2S、肺CSE活性的变化.结果 与正常对照组肺湿/干重比(4.931±0.334)比较,术后4 h,肺湿/干重比值即开始明显上升,6 h到最高5.934±0.457(P＜0.01),后逐渐下降,48 h恢复正常5.051±0.251(P＞0.05).血浆H2S水平正常值为55.654±6.334μmol/L,手术后4 h,血浆H2S水平开始明显下降,6 h到最低39.286±6.525μmol/L(P＜0.01),24 h恢复正常50.000±8.244 μmol/L(P＞0.05).肺CSE活性正常对照组为14.006±0.720 pmol·min-1·mg-1,术后2 h明显下降,6 h达最低值11.340±1.436 pmol·min-1·mg-1(P＜0.01);后逐渐回升,4 h恢复正常14.031±0.804 pmol·min-1·mg-1(P＞0.05).结论 截肢术后可造成肺损伤,术后6 h肺湿/干重比最高.内源性血浆H5S/肺CSE体系的下调可能在创伤致肺损伤的病理生理改变中具有重要作用.     

截肢后大鼠血浆及肝肾组织中硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶含量的变化

目的探讨截肢后大鼠血浆及肝、肾等远隔器官组织中内源性硫化氢(hydrogensulfide,H2S)的含量变化规律,以期找到硫化氢在创伤与修复过程中的作用机制。方法通过手术制备大鼠左后肢截肢模型,将雄性Wistar大鼠按手术时间随机分为9组:正常对照组(7只);手术后1、2、4、6、12、24、48、72h组(各7只)。测定血浆中H2S含量及肝、肾组织中CSE活性,分析其随时间变化规律。光镜观察各组组织形态学变化。结果与正常对照组相比,手术后大鼠血浆H2S含量逐渐降低,6h达最低值39.286±6.526(P<0.01),此后逐渐升高,48h后基本恢复正常。肝、肾组织CSE活性变化大体趋势与血浆相同,但下降幅度及到达最低值时间不同,肝在术后12h最低为166.162±10.878(P<0.01),肾在术后6h最低为60.664±7.574(P<0.01)。肝、肾组织出现一定程度组织损伤。结论H2S是一种新的内源性介质,在体内广泛存在,可能参与了组织损伤与修复的一系列病理生理过程。     

截肢后大鼠血浆及肝肾组织中硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶含量的变化

目的 探讨截肢后大鼠血浆及肝、肾等远隔器官组织中内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的含量变化规律,以期找到硫化氢在创伤与修复过程中的作用机制.方法 通过手术制备大鼠左后肢截肢模型,将雄性Wistar大鼠按手术时间随机分为9组:正常对照组(7只);手术后1、2、4、6、12、24、48、72 h组(各7只).测定血浆中H2S含量及肝、肾组织中CSE活性,分析其随时间变化规律.光镜观察各组组织形态学变化.结果 与正常对照组相比,手术后大鼠血浆H2S含量逐渐降低,6 h达最低值39.286±6.526(P＜0.01),此后逐渐升高,48h后基本恢复正常.肝、肾组织CSE活性变化大体趋势与血浆相同,但下降幅度及到达最低值时间不同,肝在术后12 h最低为166.162±1 o.878(P＜0.01),肾在术后6 h最低为60.664±7.574(P＜0.01).肝、肾组织出现一定程度组织损伤.结论 H2S是一种新的内源性介质.在体内广泛存在,可能参与了组织损伤与修复的一系列病理生理过程.     

硫化氢在急性肺损伤发病中的作用

硫化氢是一种毒性气体。急性硫化氢中毒导致死亡的事例时有发生。近年发现硫化氢作为气体信号分子参与急性肺损伤(ALI)等多种疾病的发病过程,但研究结果颇不一致。本文对硫化氢中毒和近年有关硫化氢作为气体信号分子参与A LI等疾病发病的研究进行探析。     

截肢创伤对大鼠心肌硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的研究创伤后新型气体信号分子硫化氢（H2S）血液浓度及心肌胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）活性的动态变化，探讨创伤致心血管系统损伤的机理。方法采用手术的方法建立大鼠左后肢断肢创伤模型，雄性Wistar大鼠63只，随机分为正常对照组和截肢后1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组7只。各组分别于相应的时间点处死，测定血液H2S浓度及心肌CSE的活性。并观察光镜下心肌组织形态学变化。结果肢体创伤后血浆H2s浓度逐渐下降，至创伤后6h达最低值（40．714±7．135μmol／L），与对照组（55．654±6．332μmol／L）比较P〈0．05，而后逐渐恢复；心肌CSE活性创伤后初期变化不明显，而后逐渐下降，至创伤后12h达最低值（14．211±1.311pmol·min^-1·mg^-1），与对照组（16．242±1．220pmol·min^-1·mg^-1）比较P〈0．05，而后逐渐恢复。结论肢体创伤可以导致心肌H2S／CSE体系下调，提示新型气体信号分子H2S可能参与了创伤导致的心肌损伤。     

截肢创伤对大鼠心肌硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的 研究创伤后新型气体信号分子硫化氢(H2S)血液浓度及心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性的动态变化,探讨创伤致心血管系统损伤的机理.方法 采用手术的方法建立大鼠左后肢断肢创伤模型,雄性Wistar大鼠63只,随机分为正常对照组和截肢后1 h.2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72h组,每组7只.各组分别干相应的时间点处死,测定血液H2S浓度及心肌CSE的活性.并观察光镜下心肌组织形态学变化.结果 肢体创伤后血浆H2S浓度逐渐下降,至创伤后6 h达最低值(40.714±7.135μmol/L),与对照组(55.654±6.332μmol/L)比较P＜0.05,而后逐渐恢复;心肌CSE活性创伤后初期变化不明显,而后逐渐下降,至创伤后12 h达最低值(14.211±1.311 pmol·min-1·mg-1),与对照组(16.242±1.220 pmol·min-1·mg-1)比较P＜0.05,而后逐渐恢复.结论 肢体创伤可以导致心肌H2S/CSE体系下调,提示新型气体信号分子H2S可能参与了创伤导致的心肌损伤.     

硫化氢对脂多糖诱发的大鼠急性肺损伤肺组织中细胞凋亡及SOD、MDA水平的影响

目的 探讨硫化氢(H₂S)对脂多糖(LPS)诱发的大鼠急性肺损伤肺组织中细胞凋亡及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平影响。 方法 SPF雄性SD大鼠30只分为3组,依次为对照组、LPS组和NaHS组,每组10只大鼠。LPS组注射LPS,NaHS组注射LPS后4 h后注射NaHS,对照组用生理盐水代替。取各组大鼠肺组织,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA法检测SOD及MDA含量,敏感流电极法检测H₂S含量,Western blot检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)表达。 结果 LPS组细胞凋亡率明显高于对照组(t=30.825,P<0.001)。NaHS组细胞凋亡率明显低于LPS组(t=7.670,P<0.001)。LPS组 SOD、H₂S含量明显低于对照组(t₁=7.536,P₁<0.001;t₂=20.526,P₂<0.001),MDA含量明显高于对照组(t=8.227,P=0.009)。NaHS组 SOD、H₂S含量明显高于LPS组(t₁=6.165,P₁<0.001;t₂=8.858,P₂<0.001),MDA含量明显低于LPS组(t=6.808,P<0.001)。LPS组 TNF-α、IL-1β水平明显高于对照组(t₁=8.443,P₁<0.001;t₂=13.500,P₂<0.001)。NaHS组TNF-α、IL-1β水平明显低于LPS组(t₁=5.895,P₁<0.001;t₂=8.749,P₂<0.001)。LPS组 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 水平明显高于对照组(t₁=17.808,P₁<0.001;t₂=14.621,P₂<0.001)。NaHS组 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 水平明显低于LPS组(t₁=5.702,P₁<0.001;t₂=6.315,P₂<0.001)。 结论 H₂S能够降低脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤中细胞凋亡、炎症因子水平及氧化损伤,从而减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤。     

室内可吸入颗粒物与气传真菌致大鼠肺损伤的实验研究

目的：为研究室内可吸入颗粒物（PM10）和气传真菌对健康的影响。方法：以SD大鼠为实验对象,隔日气管灌注PM10、真菌及二者混合悬液染毒1个月。分析支气管肺泡灌洗液生化成分及细胞组成,并观察肺组织病理改变。结果：染毒组与对照组相比,灌洗液中肺巨噬细胞 数量减少,比例下降,中性粒细胞比例上升;白蛋白、乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶含量升高;肺组织表现炎症性改变。各指标观察到剂量－反应关系。统计分析显示PM10和真菌之间存在联合作用,从生化指标数值判断,是相加作用。结论：PM10和真菌可致肺损伤,它们之间存在相加的联合作用。     

硫化氢急性中毒大鼠肺组织核因子κB变化及乌司他丁的干预作用

目的探讨硫化氢（H2S）急性中毒大鼠肺组织核因子KB（NF-κB）含量、分布的动态变化及乌司他丁（UTI）对其的干预作用。方法将SD大鼠88只随机分为对照组、H2S组和H2S＋UTI组,用免疫组化法观察肺组织NF—κB含量及分布。结果与对照组比较,H2S组2h,6h,12h,24h,48h时间点大鼠肺组织NF-κB蛋白表达均明显升高（P〈0．05）;与同时间点H2S组比较,H2S＋UTI组2h,6h,12h,24h,48hNF—KB蛋白表达均明显降低（P〈0．05）。NF-κB蛋白除可在肺泡上皮细胞表达外,还可分布于气道黏膜上皮细胞、炎性浸润细胞（主要是中性粒细胞和巨噬细胞）中。结论H2S吸入性中毒急性肺损伤大鼠早期肺组织中NF—κB表达增加,而UTI干预治疗能显著降低NF-κB表达。     

铬在大鼠急性肺损伤中变化及葛根素的干预作用

目的了解大鼠急性肺损伤(ALI)铬水平的变化及葛根素对其的影响。方法将ALI实验动物随机分为12组,其中6组为葛根素治疗组,ALI后均立即给予葛根素治疗,依照采集肺组织标本不同时间点分为:6h组、8h组、12h组、16h组和24h组(均12h追加一次葛根素)、36h组(12和24h各追加一次葛根素);用生理盐水替换葛根素为6组对照组。用原子分光光度计检测肺组织铬含量。结果治疗组组间、对照组组间有明显差异(P<0.05);各时间点治疗组与对照组差异明显(P<0.05或P<0.01)。除治疗24h组外,治疗组均低于对照组。结论葛根素可降低ALI大鼠肺组织铬含量。     

硫化氢对大鼠骨骼肌缺血再灌注所致心肌损伤的保护作用

目的研究外源性硫化氢(H2S)对大鼠骨骼肌缺血再灌注后心肌损伤的保护作用。方法选雄性Wistar大鼠31只,随机分为4组:(1)正常对照组(8只);(2)缺血再灌注组(8只),应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型,缺血4h再灌注4h;(3)硫氢化钠(NaHS)组(8只),缺血前及再灌注前腹腔注射NaHS0.78mg/kg;(4)炔丙基甘氨酸(PPG)组(7只),缺血前及再灌注前腹腔注射PPG50mg/kg。观察各组心肌病理、血浆H2S、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(TnT)及心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性的变化。结果与正常对照组比较,缺血再灌注组血浆H2S及心肌CSE活性明显下降,血浆CK-MB、TnT明显升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,NaHS组血浆H2S浓度升高59%(P<0.05),心肌CSE活性升高93%(P<0.05),血浆CK-MB降低29%(P<0.05),血浆TnT降低67%(P<0.05);PPG组血浆H2S浓度下降20%,但无统计学差异,心肌CSE活性降低38%(P<0.05),血浆心肌酶学改变无统计学差异。心肌病理提示,缺血再灌注组心肌明显肿胀、血管充血...     

硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激和Nrf2基因表达及乌司他丁的影响

目的 研究硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激水平及核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)基因表达的变化及乌司他丁(ulinastatin,UTI)的影响.方法 将96只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组(8只)、UTI对照组(8只)、硫化氢染毒组(40只)、UTI干预组(40只).正常对照组和UTI对照组大鼠于染毒柜内吸人与硫化氢同样流量的空气1h,UTI对照组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),2h后处死.硫化氢染毒组和UTI干预组大鼠在染毒柜内吸入硫化氢(浓度为283.515 mg/m3)1h,UTI干预组大鼠立即腹腔注射UTI(10万U/kg),两组大鼠分别于2、6、12、24、48 h处死,每组8只.检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活力和谷胱甘肽(GSH)含量及Nrf2 mRNA的表达,观察肺组织病理学改变并行肺损伤评分.结果 与正常对照组比较,2、6、12 h硫化氢染毒组大鼠肺组织中SOD、CAT活力和GSH含量及2、6、12、24h GSH-Px活力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);2、6、12、24h硫化氢染毒组大鼠肺组织中MDA含量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与相应时间点硫化氢染毒组比较,UTI干预组6、12h时GSH-Px活力,2、6、12h时CAT活力,2、6、12、24h时GSH含量及2、6、12、24、48 h时SOD活力明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);UTI干预组2、6、12h时MDA含量明显低于相应时间点硫化氧染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒后2、6、12、24 h,硫化氢染毒组肺组织中Nrf2 mRNA表达(0.314±0.011、0.269±0.010、0.246±0.011、0.221士0.018)明显高于正常对照组(0.149±0.012),差异有统计学意义(P＜0.01);与相应时间点硫化氢染毒组比较,2、6、12、24、48 h UTI干预组的Nrf2 mRNA表达(0.383:±-0.017、0.377±-0.014、0.425±0.017、0.407±0.011、0.381±0.010)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).光学显微镜下观察可见,硫化氢染毒组染毒后24h大鼠肺组织损害明显,UTI干预组大鼠肺损伤较硫化氢染毒组有所减轻.UTI干预组12、24、48 h时肺损伤评分明显低于相应时间点硫化氢染毒组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 氧化应激和Nrf2活化是参与硫化氢中毒急性肺损伤的重要因素,UTI能抑制氧自由基产生,纠正氧化还原失衡,上调Nrf2 mRNA表达水平,减轻氧化应激损伤,对肺组织损伤有保护作用.     

硫化氢对脂肪肝脂细胞脂联素分泌的调节

目的 观察硫化氢是否调节脂肪肝脂细胞脂联素的分泌。 方法 对32只雄性SD大鼠采用完全随机化法分成正常喂养组 (n=8)、 高脂饮食组 (n=8)、高脂+半胱氨酸组 (n=8)、高脂+炔丙基甘氨酸（胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂）组(n=8)。利用高脂饮食复制脂肪肝动物模型,加用1%L-半胱氨酸和炔丙基甘氨酸（PPG）喂养改变硫化氢的产生,观察8周后动物肝脏脂肪变性和血清内脂联素的含量。取动物大网膜脂肪组织,利用胶原酶Ⅰ消化法分离脂肪细胞,加用NaHS和PPG,体外刺激7 d后,检测细胞上清脂联素的含量变化。结果高脂饮食8周后脂肪肝形成,应用L-半胱氨酸后脂肪变性明显减轻;而应用PPG肝脏脂肪变性加重。高脂饮食组动物血清中硫化氢和脂联素含量分别为（21.13±7.06）mmol/L和（3.16±1.15）mg/L,较正常喂养组（29.13±13.06）mmol/L和 (8.98±2.84)mg/L明显减少（P=0.0229,P=0.0062）。与高脂饮食组比较,高脂+半胱氨酸组两者明显增加为（35.47±9.04）mmol/L和（6.54±1.38）mg/L（P=0.0032,P=0.0131）;高脂+PPG组两者明显减少为（16.65±8.79） mmol/L 和（2.50±0.91） mg/L（P=0.0191,P=0.0021）。正常喂养组与高脂饮食组分离脂肪细胞培养液中的硫化氢含量差异无统计学意义［（26.77±12.65）比(28.76±9.09)mmol/L,P=0.0927］。与高脂饮食组比较,高脂+硫氢化钠和高脂+PPG组的细胞上清液中硫化氢增高和减少明显（P=0.0000,P=0.0000）。高脂饮食组与正常喂养组分离脂肪细胞培养液中的脂联素含量差异无统计学意义［（4.21±1.61）比（4.49±1.09）mg/L,P=0.1076］,加NaHS和PPG细胞上清液中脂联素较高脂饮食组上清液中明显增高和减少［（5.77±0.86） 比 (4.21±1.61)mg/L, P=0.0094;(3.01±1.26) 比 (4.21±1.61)mg/L,P=0.0108）］。 结论硫化氢能促进脂肪肝脂细胞脂联素的分泌。     

硫化氢对大鼠肝窦内皮细胞凋亡影响

目的 观察硫化氢对肝窦内皮细胞(SEC)凋亡的影响.方法 利用胶原酶灌注、Percoll密度梯度离心、选择性贴壁培养去除Kupffer细胞方法分离SEC.原代培养SEC分成为正常对照组、过氧化氢诱导组、硫氢酸钠预处理+过氧化氢组、PPG处理组和PPG预处理+过氧化氢组,各组培养24h再行实验研究.经相应的过氧化氢(200 μmol/L)、硫氢酸钠(200 μmol/L)、PPG(2 mmol/L)处理后,应用流式细胞仪检查各组细胞凋亡、线粒体跨膜电压及easpase-3活化情况.结果 SEC在过氧化氢诱导下,细胞线粒体跨膜电压降低,细胞荧光强度增加(t =5.56,P ＜0.01),caspase-3活化,细胞发生凋亡,并以早期凋亡较为明显(t=4.68、7 26,P＜0.01);硫氢酸钠预处理后,过氧化氢诱导作用降低,细胞荧光强度降低(t=4.391,P＜0.01),caspase-3活化程度降低,细胞凋亡显著减少(t=3.776、5 626,P＜0.01);应用PPG抑制内源性硫化氢产生后,caspase-3轻度活化,SEC凋亡增加,且以早期凋亡增加为主(t=5.109,P＜0.01);加过氧化氢诱导后,细胞线粒体跨膜电压减少,细胞内荧光强度显著增加(t=10.635,P＜0.01),caspase-3活化程度增强,SEC的早、晚期凋亡率均显著增加(t=8.036、9.112,P＜0.01).结论 硫化氢可能通过抑制肝窦内皮细胞的线粒体跨膜电压变化,进而抑制caspase-3的活化而抑制肝窦细胞凋亡.     

氧疗对急性硫化氢中毒大鼠的心肌和肺及肝组织形态学的影响

目的 评价不同氧疗技术(常压下不同浓度吸氧及高压氧)对急性硫化氢(H2S)中毒大鼠的心肌、肺、肝组织形态学的影响.方法 雄性健康Wistar大鼠100只随机分为5组:正常对照组(吸入空气)、染毒组(H2S静式染毒60 min)、33%氧疗组及50%氧疗组(染毒结束后20 min内,将大鼠移置常压下含氧浓度为33%、50...     

奥曲肽对兔肝缺血再灌注后肺损伤的影响

目的 探讨奥曲肽在兔肝缺血再灌注后对远处器官肺损伤的影响.方法 采用Pring＇s兔肝脏再灌注模型,将24只新西兰大白兔随机分为三组：Ⅰ组（假手术组）、Ⅱ组（肝脏缺血再灌注生理盐水组）、Ⅲ组（奥曲肽预适应组）.Ⅲ组于腹腔内注射20μg/kg奥曲肽和皮下注射30μg/kg奥曲肽,均用0.9%的生理盐水稀释至2 ml,其他组在同一时间点用同样途径注射等量生理盐水.观察三组动物肝门阻断前（T1）、阻断后30 min（T2）、再灌注后30 min（Ts）、60 min（T4）、120 min（T5）、240min（T6）平均动脉压和心率的变化,以及T1、T2、T3、T4、T5、T6各时间点肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的变化,再灌注后240rain时处死兔子,取肺组织在透射电镜下观察各组肺细胞超微结构的变化,采用TUNEL法检测其凋亡细胞.结果 MAP和HR在T2至T4时间点Ⅱ组、Ⅲ组明显低于Ⅰ组,而Ⅱ组显著低于Ⅲ组（P〈0.05）;Ⅱ组从T2开始、Ⅲ组从T3开始两组血浆TNF-α、IL-β显著高于Ⅰ组（P〈0.05）,且Ⅲ组从T2开始后各时点血浆TNF-α和IL-β明显低于Ⅱ组（P〈0.01）;透射电镜下Ⅲ组肺的亚细胞结构损伤显著轻于Ⅱ组,采用TUNEL法检测肺组织中的凋亡细胞数在5个高倍镜下Ⅱ组（55.82±4.19）、Ⅲ组（32.17±3.10）明显多于Ⅰ组（3.96±0.87）,而Ⅲ组显著少于Ⅱ组（P〈0.01）.结论 奥曲肽对于兔肝缺血再灌注后远处器官肺的损伤确有保护作用.