p15~(INK4B)基因对人胰腺癌细胞系BxPC3增殖的影响

目的 探讨p15~(INK4B)(p15)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖的影响.方法 采用脂质体将pCDNA3.1(+)-p15质粒及阴性对照pCDNA3.1(+)-neo质粒转染BxPC3细胞,以亲本细胞作为对照组.应用RT-PCR检测细胞p15 mRNA表达;Western blotting检测细胞p15蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;透射电镜观察细胞超微结构变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 p15转染组细胞恢复p15 mRNA和蛋白表达.培养第2天生长被抑制,至第7天,生长抑制率达47.9%.G_0/G_1期细胞占(61.56±3.96)%,显著高于空质粒转染组的(47.44±6.35)%和对照组的(49.22±7.23)%(P<0.05).出现明显的G,凋亡峰,细胞凋亡率为(5.27±1.04)%,显著高于空质粒转染组的(0.11±0.06)%和对照组的(0.09±0.07)%(P<0.05).透射电镜观察到p15转染组发生细胞凋亡.结论 体外p15基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖,并能诱导其凋亡.     

p21WAF1基因对人胰腺癌细胞系BxPC-3增殖的抑制作用

目的: 探讨p21WAF1( p21)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖的影响.方法: 根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组, p21转染组、空载体转染组和未转染组. 应用RT-PCR和Western blot方法检测转染细胞的p21基因表达变化; 流式细胞仪分析细胞周期变化, 用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.结果: p21转染组细胞存在p21 mRNA高表达和P21蛋白高表达; p21转染组细胞生长速度低于对照空载体转染组和未转染组; 流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使BxPC-3细胞发生G1/S阻滞, G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(59.887%±3.700% vs 47.443%±6.354%, 49.223%±2.226%, P<0.05), S期显著低于空载体组和未转染组(21.277%±2.080%v s 35.247%±3.966%, 36.013%±1.540%,P<0.01), 并出现亚G1峰(凋亡峰). 透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论: p21基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.     

FABP3基因对心肌细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组、FABP3沉默组、FABP3沉默+空质粒组及FABP3沉默+过表达人FABP3组,转染72 h后Western印迹检测各组细胞中FABP3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western印迹检测Cleaved caspase3、Bcl-2蛋白表达。结果空白对照组与阴性对照组及FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组之间FABP3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组FABP3的蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组,FABP3沉默+过表达人FABP3组FABP3的蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01);FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白对照组与阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组FABP3(P<0.01);沉默+过表达人FABP3组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组,Bcl-2蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01)。结论沉默FABP3的表达可促进H9C2心肌细胞凋亡,过表达则抑制细胞凋亡,其机制与调节Cleaved caspase3及Bcl-2蛋白表达有关。     

白细胞介素-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-8基因在鼻息肉组织中的表达及对鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法 Western印迹检测IL-8在鼻息肉组织及下鼻甲组织中的表达;从鼻息肉组织中分离培养人鼻黏膜上皮细胞(HNEC),将IL-8小干扰RNA(IL-8-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,Western印迹检测转染效果;各组转染细胞培养48 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹检测酶切caspase3蛋白表达。结果 IL-8在鼻息肉组织中的表达显著高于下鼻甲组织(P<0.01);siRNA-NC组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组显著低于对照组(P<0.01);siRNA-NC组细胞凋亡率及酶切caspase3蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),IL-8-siRNA组均显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-8在鼻息肉组织中高表达,沉默IL-8的表达能通过上调酶切caspase3蛋白表达促进HNEC凋亡。     

p21WAF1基因对人食管鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨p21WAF1( p21)基因转染对食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组.p21转染组:用脂质体Lipofectamine2000介导将pCDNA3.1(+)- p21质粒转染入EC109细胞; 空载体转染组:同样方法将pCDNA3.1(+)-neo质粒转染入EC109细胞; 未转染组:未转染的EC109细胞.应用RTPCR、Western blot分别检测p21基因mRNA、P21蛋白变化; 流式细胞仪分析细胞周期变化,应用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对EC109细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染细胞中p21 mRNA和P21蛋白高表达; p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组和未转染组; 流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(63.120%±2.893% vs 41.380%±6.536%,42.173%±5.301%,均P<0.01),S期比例显著低于空载体组和未转染组(18.923%±3.084%vs 22.573%±5.463%,26.867%±2.922%,均P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

磷脂酰肌醇3激酶p55γ调节亚基N末端氨基酸表达水平对人乳腺癌细胞的影响及分子机制

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶p55γ调节亚基N末端氨基酸表达水平对人乳腺癌细胞黏附性的影响及其分子机制。方法使用空载体质粒p EGFP-C和重组质粒p EGFP-N24分别对乳腺癌SK-BR-3细胞进行基因转染,建立融合蛋白GFP-N24和GFP稳定表达的SK-BR-3细胞系。显微镜下观察转染细胞的形态变化并鉴定转染细胞中的蛋白表达;细胞黏附实验检测细胞的黏附性;Western印迹法检测转染细胞的细胞黏附分子E-cadherin和钙紧张素表达;酶谱实验检测基质金属蛋白酶(MMP)和尿激酶纤溶酶原活化因子(u PA)表达。结果建立了稳定表达GFP-N24的SKBR-3/p EGFP-C细胞系和表达GFP的SK-BR-3/p EGFP-C细胞系,GFP-N24的表达量明显高于GFP。SK-BR-3/GFP-N24细胞在纤黏连蛋白和鼠尾胶原上的黏附性均明显低于SK-BR-3、SK-BR-3/p EGFP-C细胞(P<0.01)。SK-BR-3/GFP-N24细胞E-cadherin蛋白表达量明显高于SK-BR-3/p EGFP-C细胞和SK-BR-3细胞,钙紧张素蛋白表达量明显低于SK-BR-3/p EGFP-C和SK-BR-3细胞(P<0.01)。SK-BR-3/p EGFP-C与SK-BR-3细胞之间Ecadherin和钙紧张素蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05);3组细胞上清液中均检测到分子量为79 k D的MMP和60 k D的u PA,且MMP、u PA表达量3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论磷脂酰肌醇3激酶p55γ调节亚基N末端氨基酸过表达是通过影响E-cadherin和Wnt通路关键分子钙紧张素表达来抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞的胞黏附性来实现的。     

转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用

目的　研究转染FADD缺失突变体(FADDdel)和WeelHu/GFP的胰岛β细胞株(NIT细胞)抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法　采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu/GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养,利用51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果　转染WeelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化(P>0.05)。转染pCMV-WeelHu/GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞(P<0.01),表达WeelHu或WeelHu/GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义,转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用(P <0.05),但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤,且对胰岛素的分泌及细胞增殖元明显影响。     

p15^INK4B基因对人胰腺癌细胞系BxPC3增殖的影响

目的探讨p15^INK4B（p15）基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖的影响。方法采用脂质体将pCDNA3．1（＋）-p15质粒及阴性对照pCDNA3．1（＋）-neo质粒转染BxPC3细胞,以亲本细胞作为对照组。应用RT—PCR检测细胞p15^INK4B表达;Western blotting检测细胞p15蛋白表达;MTF法检测细胞增殖;透射电镜观察细胞超微结构变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果p15转染组细胞恢复p15^INK4B和蛋白表达。培养第2天生长被抑制,至第7天,生长抑制率达47．9％。G0／G1期细胞占（61．56±3．96）％,显著高于空质粒转染组的（47．44±6．35）％和对照组的（49．22±7．23）％（P〈0．05）。出现明显的G1凋亡峰,细胞凋亡率为（5．27±1．04）％,显著高于空质粒转染组的（0．11±0．06）％和对照组的（0．09±0．07）％（P〈0．05）。透射电镜观察到p15转染组发生细胞凋亡。结论体外p15基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖,并能诱导其凋亡。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α诱导蛋白(TNFAIP)8在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其对肺癌A549细胞增殖和迁移能力的影响。方法用RT-PCR和Western印迹检测非小细胞肺癌组织与癌旁组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的差异。合成TNFAIP8特异性siRNA,转染肺癌A549细胞,RT-PCR和Western印迹检测TNFAIP8-siRNA对细胞中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的影响,MTT检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达情况。结果非小细胞肺癌组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。与空白对照组相比,转染TNFAIP8-siRNA的肺癌A549细胞TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01),细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.01),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。阴性对照组与空白对照组之间各项检测指标无显著差异(P>0.05)。结论 TNFAIP8高表达与非小细胞肺癌的发生密切相关,沉默TNFAIP8的表达能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

TGIF2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响。方法将培养的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞分为对照组(未处理)、高糖组(葡萄糖处理)、空载体阴性对照质粒(NC)高糖组(葡萄糖+转染NC质粒)和TGIF2高糖组(葡萄糖+转染psiC HECK2-TGIF2 3'-UTR质粒),处理24 h和48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖;处理48 h后,以RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达,Transwell法检测细胞迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高糖组、NC高糖组和TGIF2高糖组HUVECs细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、迁移能力均显著降低,凋亡率显著升高(P0.05);与高糖组相比,TGIF2高糖组中TGIF2 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论高糖诱导下,TGIF2在血管内皮细胞中表达下降,上调其表达对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡具有一定的保护作用。     

Visfatin转基因对胰岛β细胞功能和活性的影响

目的 探讨Visfatin基因过表达对胰岛β细胞增殖、凋亡、细胞周期和胰岛素释放的影响.方法 将MIN6细胞分为对照组、绿色荧光蛋白转染组和Visfafin转染组,对照组以空质粒、绿色荧光蛋白转染组以荧光蛋白质粒、Visfatin转染组分别以2、5、10 mg/L Visfatin质粒转染细胞,40、60 h后收集细胞,采用实时聚合酶链反应和Western blot法检测Visfatin mRNA和蛋白表达,应用噻唑蓝法及流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和周期,运用酶联免疫法检测葡萄糖刺激的胰岛素释放.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 与对照组相比,2、5、10 ms/L Visfatin质粒转染40 h及5 mg/L Visfatin质粒转染60 h后细胞增殖率分别升高1.60、1.87、1.75、1.51倍(t值分别为4.98、13.52、11.02、6.14,均P<0.05).棕榈酸诱导的细胞凋亡率降低,与对照组和绿色荧光蛋白转染组相比,质粒转染组细胞凋亡率分别降低42%、48%(F值分别为4.58、6.12,均P<0.05).与对照组相比,Visfatin质粒转染40 h后G_0/G_1期细胞减少12.3%,S期细胞增加13.2%(F值分别为5.25、6.23,均P<0.05).与对照组相比,质粒转染组细胞基础胰岛素分泌无改变,葡萄糖刺激后胰岛素释放有所增加,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Visfatin可促进胰岛β细胞增殖,抑制胰岛β细胞凋亡,对细胞周期有调节作用.     

siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

Galectin-3属于半乳凝素家族成员,参与细胞生长和凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润和转移等多种生理和病理过程,在多种恶性肿瘤细胞中呈高表达。目的:研究siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:合成靶向galectin-3的siRNA并转染SGC-7901细胞,以real time PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Galectin-3siRNA转染24 h后转染效率为83.8%,转染后SGC-7901细胞的galectin-3表达显著受抑,mRNA和蛋白表达量分别较空白对照组降低87.8%和90.4%(P0.01)。转染后24 h、48 h和72 h,galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞增殖抑制率分别为15.57%±1.45%、32.90%±0.76%和57.35%±1.05%,转染后72 h该组细胞凋亡率为46.17%±2.39%,均显著高于同时间点空白对照组、空脂质体组和阴性对照siRNA组(P0.01)。Galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞由化疗药物奥沙利铂诱导的增殖抑制亦较其余三组显著增加(P0.01)。结论:以siRNA干扰galectin-3表达后,SGC-7901细胞增殖减少、凋亡增加,对化疗药物的敏感性增强,表明galectin-3有望成为胃癌基因治疗的有效靶点。     

miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。     

干扰趋化因子CC受体-2调控p38MAPK信号通路抑制人口腔黏膜上皮细胞系增殖的机制

目的探讨干扰趋化因子CC受体(CCR)2基因的表达对口腔黏膜上皮细胞增殖的影响及机制。方法 Western印迹检测CCR2在口腔黏膜下纤维性变(OSF)中的表达;用CCR2的siRNA转染人口腔黏膜上皮细胞系(HOMC)细胞,转染48 h后用Western印迹检测各组细胞中CCR2蛋白表达;细胞增殖与活性检测(CCK8)实验检测细胞增殖;Western印迹检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化(p)-p38MAPK蛋白表达。结果 CCR2在OSF组织中的表达显著高于正常口腔黏膜组织(P<0.01);阴性对照(NC)-siRNA组CCR2蛋白表达、细胞存活率及p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CCR2-siRNA组CCR2蛋白表达、细胞存活率及p-p38MAPK蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01)。结论 CCR2在OSF中高表达,抑制CCR2的表达可通过调控p38MAPK信号通路抑制HOMC的增殖。     

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果 上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌...     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞增殖的影响

目的探索半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞增殖的影响。方法利用细胞转染技术将Galectin-1 siRNA和对照siRNA转染到食管鳞癌EC9706细胞中,细胞分为三组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组,利用RT-PCR、Western印迹分析Galectin-1基因和蛋白的变化;利用CCK-8试剂盒检测下调Galectin-1的表达对细胞增殖的影响。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 mRNA及蛋白表达明显降低。Galectin-1 siRNA组中的EC9706细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05)。结论转染Galectin-1 siRNA后能明显下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达的下调能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖。     

siRNA抑制PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨siRNA抑制人垂体瘤转化基因PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 LoVo细胞分为3组:正常细胞对照组、Lipo2000+ pGenesil-2.1 HK组(HK阴性对照组)、Lipo2000+ pGenesil-2.1-PTTG siRNA组.应用Western印迹法检测转染48 h后各组细胞PTTG蛋白表达,MTT法检测转染24、48和72 h后各组细胞增殖情况,流式细胞术检测转染48 h后各组LoVo细胞凋亡和细胞周期情况.结果 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒转染LoVo细胞后PTTG蛋白表达明显低于正常和HK阴性对照组.MTT比色分析法显示,pGenesil-2.1-PTTGsiRNA质粒转染LoVo细胞后,在24、48和72 h细胞增殖能力均显著低于正常对照组和阴性对照HK组(均P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞Go/G1期细胞百分率均高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01),而S期细胞百分率均低于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01);Annexin V-PI双染结果显示,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞凋亡百分率高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01).结论 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒可明显抑制LoVo细胞PTTG蛋白表达,并进而抑制LoVo细胞增殖,促进其凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期.     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制

目的观察半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制。方法利用脂质体2000转染食管鳞癌EC9706细胞。细胞分为3组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组。采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;运用流式细胞术分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响,采用Boyden小室分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞迁移能力的影响。采用半定量RT-PCR和Western印迹方法检测Galectin-1表达下调对细胞周期相关因子(cdk2、p27和p21)以及细胞迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)-14 mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 siRNA组中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P0.05);细胞周期在G0/G1期的细胞数呈显著升高(P0.05);细胞的穿膜数明显下降。Galectin-1 siRNA组中p27和p21 mRNA和蛋白的表达均显著高于未处理组和对照siRNA组(均P0.05),而cdk2和MMP-14 mRNA和蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组(均P0.05)。结论 Galectin-1 siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达下调能明显抑制食管癌EC9706细胞周期静止在G0/G1期,这可能与p21和p27表达的升高及cdk2表达的下调密切相关;并能降低食管鳞癌EC9706细胞的迁移,这可能与MMP-14表达的下调有关。     

CDK11p58基因过表达抑制INS-1细胞的增殖

目的:研究CDK11p58基因对大鼠胰岛瘤细胞INS-1增殖及周期的影响.方法:INS-1细胞分为3组:实验组转染pcDNA3.0-CDK11p58质粒;空载体组转染pcDNA3.0空载体;空白对照组不加任何干扰.48 h后,Western blot检测细胞CDK11p58基因表达水平;MTT法检测转CDK11p58基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染CDK11p58基因后细胞周期的变化.结果:转染48 h后,与空载体组相比,实验组CDK11p58基因的表达水平显著升高(P<0.01),INS-1细胞存活率下降(P<0.05),G1期细胞比例显著上升(69.87%±1.77%vs 63.03%±2.66%,P<0.01),细胞出现G1期阻滞.结论:CDK11p58基因与INS-1细胞增殖相关.其高表达引起的细胞增殖速度放缓的作用机制可能与其所致的细胞G1期延长有关.