番茄红素对过氧化氢诱导的小鼠来源神经瘤母细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察番茄红素(LY)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经瘤母(N2a)细胞损伤的保护作用及可能机制。方法用H2O2处理小鼠来源N2a细胞6h,建立细胞氧化损伤模型。用LY预孵N2a细胞24h后,加入100μmol/LH2O2共同作用6h,以探讨LY的保护作用。实验分对照组、LY组、损伤组及保护组。采用MTT比色法测定N2a细胞活力;Hochest33258染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪测定N2a细胞凋亡率;Western blot法测定细胞质Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,损伤组明显造成细胞损伤(P<0.01),导致细胞凋亡,同时降低Bcl-2表达,增加Bax表达,Bcl-2/Bax比值显著降低,增加Caspase-3蛋白水平(P<0.01)。与损伤组比较,保护组予LY预处理后,N2a细胞活力明显增加(P<0.01),凋亡细胞减少,Bcl-2/Bax比值增高,Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LY能有效保护H2O2对N2a细胞的损伤,并通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制Caspase-3蛋白活化,发挥保护作用。     

脑出血病人神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达与中风闭脱证的研究

目的观察脑出血病人血肿周围组织神经元凋亡和凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达及其与中风闭脱证的关系.方法采用TUNEL法、免疫组织化学法分别检测脑出血病人血肿周围组织凋亡神经元和Bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果血肿周围组织细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡率呈负相关(P<0.01),Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2与细胞凋亡率呈正相关(P均<0.01).闭、脱证之间细胞凋亡率及Bcl -2、Bax蛋白阳性率、Bax/Bcl-2有统计学意义(P<0.05或P<0.01),脱证细胞凋亡率、Bax 、Bax/ Bcl-2大于闭证,Bcl-2小于闭证.结论细胞凋亡机制参与了脑出血后继发性神经元损伤.细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达对中风闭脱证微观辨证有一定的帮助.     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

运动预适应对急性运动性损伤后心肌组织氧化应激及凋亡的影响

目的:观察运动预适应对急性运动性损伤后大鼠心肌组织氧化应激及凋亡的影响,探讨运动预适应对急性运动性心肌损伤的保护作用。方法:30只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为3组(每组10只):安静对照组(C组)、急性力竭运动组(E组)、预适应急性力竭运动组(EP组)。C组不进行任何运动训练,直接处死;E组与EP组通过力竭游泳运动建立大鼠急性运动性心肌损伤模型,并于力竭后立即处死,EP组于力竭运动前进行运动预适应训练。检测各组心肌线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;RT-PCR及免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白基因Bax和Bcl-2的表达水平,原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡率。结果:(1)氧化应激水平:与C组相比,E组和EP组心肌细胞SOD及GSH-Px活性均显著降低,且E组降低更多;MDA水平均升高,且E组升高更多(P均0.01)。(2)凋亡水平:与C组相比,E组和EP组Bax mRNA表达水平明显升高,Bcl-2 mRNA表达水平明显降低,且与E组相比,EP组变化程度较小(P均0.01);TUNEL检测结果显示,与C组相比,E组和EP组大鼠心肌细胞凋亡率明显升高,但EP组较E组明显降低(P均0.01)。结论:运动预适应可减轻力竭运动后大鼠心肌组织氧化应激水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌组织具有保护作用。     

NF-κB-p65、ICAM-1和细胞凋亡在力竭性运动诱发延迟性心肌损伤中的作用

目的:观察反复力竭性游泳运动后,不同时相大鼠心肌组织中核转录因子-κB（NF-κB）-p65、细胞间黏附因子-1（ICAM-1）和细胞凋亡的动态变化,以评价在运动延迟性心肌损伤中的作用。方法: 采用反复力竭性游泳运动建立延迟性心肌损伤大鼠模型。将无训练的80只Wistar雄性大鼠随机分为安静对照组和反复力竭性运动后即刻组、3 h组、6 h组、12 h组、24 h组、48 h组和96 h组。每组10只大鼠(n=10)。分别于末次运动后即刻、3、6、12、24、48 h和96 h快速取出心脏,应用免疫组化染色法和DNA原位末端标记（TUNEL）法检测大鼠心肌组织中NF-κB-p65和ICAM-1表达的水平和细胞凋亡的动态变化。结果: 与安静对照组比较,反复力竭性运动后不同时相大鼠心肌细胞中NF-κB-p65和ICAM-1蛋白的表达及细胞凋亡指数均显著增加（分别为P<0.05和P<0.01）,其中心肌细胞中NF-κB-p65的表达和细胞凋亡于运动后48 h达高峰,ICAM-1蛋白的表达于运动后即刻达高峰,运动后96 h有所减轻。结论: 反复力竭性运动可以造成早期心肌缺血缺氧损伤,刺激心肌细胞中NF-κB-p65和ICAM-1表达的水平的升高,促进炎症反应,并诱导心肌细胞凋亡,进一步加重运动后早期心肌损伤,诱发延迟性心肌损伤。     

α-硫辛酸对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的保护作用

目的 研究α-硫辛酸(α-LA)对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的保护作用.方法 将正常大鼠肝细胞(BRL)分为正常对照组,在含有5％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中培养24 h;H2O2损伤组,在含有5％ FBS的DMEM培养基中培养24 h后,以0.2 mmol/L H2O2作用1 h;α-LA低、中、高剂量组,分别用含有50、100、200 μmol/L α-LA的培养液培养细胞24 h后,以0.2 mmol/L H2O2作用1h.测定各组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量、细胞凋亡率、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 与正常对照组比较,H2O2损伤组的GSH-Px和SOD活性均降低,MDA含量和细胞凋亡率升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量减少,Bax蛋白表达量增多(P＜0.05);与H2O2损伤组相比,α-LA各剂量组的GSH-Px和SOD活性均有所升高,MDA含量和细胞凋亡率下降(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量增加,Bax蛋白表达量降低(P＜0.05).结论 α-LA可以通过抗氧化,上调Bcl-2的蛋白表达水平,下调Bax的蛋白表达水平,对氧化损伤引起的肝细胞凋亡起到保护作用.     

红花注射液对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因的影响

目的探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及红花注射液的干预及机制。方法健康日本大耳白兔84只,随机分为对照组、缺血再灌注1、3、5h组和红花干预1、3、5h组。复制在体肺缺血再灌注损伤模型。采用电镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡情况,并计算凋亡指数;免疫组织化学和原位杂交技术检测各组肺组织Bcl-2和Bax基因表达的变化。结果缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Bcl-2、Bax蛋白及mRNA均显著高于对照组(P<0.01)。红花干预组肺组织凋亡指数、Bax蛋白及Bax mRNA低于缺血再灌注组,而Bcl-2蛋白、Bcl-2mRNA以及Bcl-2与Bax的比值较缺血再灌注组上调(P<0.01或P<0.05)。电镜观察发现,缺血再灌注组肺毛细血管内皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构损伤明显,红花干预组损伤明显减轻。肺组织凋亡指数与Bax蛋白、Bax mRNA呈显著正相关(r分别=0.926,0.913;均P<0.01),与Bcl-2/Bax蛋白、Bcl-2/Bax mRNA的比值呈负相关(r分别=-0.367,-0.375;均P<0.01)。结论肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,红花注射液可能通过下调Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax的比值抑制肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

赤芍总苷对人黑色素瘤细胞株凋亡诱导的作用机制

目的 观察赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 将12.5、25、50、100、200 mg/L TPG分别加入体外培养的黑色素瘤细胞,对照组加等量生理盐水,孵育24、48 h后MTT测定细胞生长抑制率;25 mg/L TPG 孵育细胞48 h,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率;RT-PCR和Western blot分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达水平.结果 TPG抑制A375细胞生长作用明显,25 mg/L TPG孵育黑色素瘤细胞48 h后,细胞凋亡率增高,Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达也明显升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低(均P＜0.05).结论 TPG可诱导黑色素瘤肿瘤细胞凋亡,其机制与上调Caspase-3、Fas和FasL表达水平,下调Bcl-2,降低Bcl-2/Bax比值密切相关.     

大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Bax、FADD表达及对细胞凋亡的影响

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、FADD表达对细胞凋亡的影响.方法 20只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、模型组(n=16).线栓法制备大脑中动脉闭塞模型(MCAO),TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法染色检测Bcl-2、Bax、FADD蛋白.结果与假手术组比较,模型组凋亡神经细胞计数随再灌注时间的延长显著增加,再灌注后24 h表达达高峰,差异有统计学意义(P<0.01).模型组Bcl-2、Bax、FADD蛋白表达随再灌注时间的延长,表达逐渐增强.缺血再灌注6 h后Bcl-2蛋白表达达高峰;缺血再灌注24 h后Bax蛋白表达达高峰;缺血再灌注72 h后FADD蛋白表达达高峰,均有统计学意义(P<0.01).结论 Bcl-2、Bax 、FADD表达在脑缺血半暗带区,随再灌注时间延长,表达逐渐增强,与细胞凋亡表达规律一致.     

姜黄素通过调控JAK2/STAT3信号通路对高糖环境下心肌细胞生物学特性的影响

目的探讨姜黄素对高糖环境下的心肌细胞生物学特性影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分别用高糖和低糖细胞生长液培养心肌细胞,同时在细胞生长液中加入姜黄素。MTT检测作用24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况。流式细胞仪检测48 h的心肌细胞凋亡情况。DCFH-DA探针检测心肌细胞内活性氧水平。Western印迹检测相关蛋白表达水平。结果高糖组心肌细胞增殖与对照组相比明显受到抑制(P<0.01)。实验组中心肌细胞增殖情况明显高于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显低于对照组(P<0.01);高糖组心肌细胞中Bax的表达水平明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显高于高糖组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bax的表达水平明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中荧光强度明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中荧光强度明显低于高糖组(P<0.01)。对照组、高糖组和实验组心肌细胞中JAK2、STAT3表达水平没有明显变化。高糖组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平显著低于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平明显高于高糖组(P<0.01)。结论高糖对心肌细胞增殖具有抑制作用,对细胞凋亡具有促进作用。姜黄素可以通过作用于JAK2/STAT3信号通路改善高糖环境下的心肌细胞损伤。     

细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞凋亡中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化,为阐明血管内皮细胞凋亡对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液(10-6mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hochest33258荧光染色观察凋亡细胞形态学的变化,利用RT-PCR法分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01),与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低;Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,18 h达到高峰(P<0.01),24 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论 ERK1/2信号转导途径参与血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

银杏叶提取物保护胰腺缺血再灌注损伤作用的机制探讨

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对大鼠胰腺缺血/再灌注(IR)损伤的保护作用及其机制。方法制备大鼠胰腺IR损伤模型。取SD大鼠24只,随机分为3组(n=8)假手术组(Sham组)、IR组、缺血/再灌注银杏叶提取物保护组(EGb IR组)。光镜、电镜观察胰腺腺泡细胞结构改变;采用TUNEL方法检测细胞凋亡;流式细胞仪定量检测细胞凋亡;应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果IR组凋亡指数明显大于Sham组(P<0.01),EGb IR组凋亡指数明显小于IR组(P<0.01);EGb IR组Bcl-2蛋白表达明显高于IR组(P<0.01);EGb IR组Bax蛋白表达明显低于IR组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对大鼠胰腺IR损伤起保护作用。     

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的 观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响.方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞.实验分为正常对照组,模型组,左归组.Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化.结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01).与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡.     

自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧过程中的表达及其意义

目的 探讨自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧(OGD)过程中的表达及其意义.方法 将PC12 细胞分为正常对照组、缺糖缺氧1、4和12 h组.MTT法检测细胞存活率,Western印迹法检测各组PC12细胞中BECN1、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 与正常对照组相比,OGD 1及4 h组PC12细胞存活率下降(均P<0.05),BECN1蛋白表达升高,且Bcl-2/Bax比值升高;而与缺糖缺氧1和4 h组相比,OGD 12 h组细胞存活率明显下降(P<0.01),BECN1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值亦明显降低.结论 自噬蛋白BECN1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax参与了PC12细胞OGD损伤过程.在OGD早期,自噬起主要作用,并对OGD PC12细胞起一定的保护作用,随着OGD时间的延长,凋亡在其中占主导地位,促进凋亡蛋白表达,引起PC12细胞的死亡.     

丙泊酚在兔股骨头骨骺缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨丙泊酚在兔股骨头骨骺缺血再灌注损伤中的作用。方法以新西兰兔建立股骨头骨骺缺血再灌注模型,93只新西兰兔分为模型组(n=45)、丙泊酚组(n=45)和正常组(n=3)。模型组45只新西兰兔采用完全随机的方法分为缺血4 h、8 h、12 h组,每组15只兔,3组分别在缺血4 h、8 h、12 h再灌注;在再灌注后即刻、4 h、24 h、72 h、168 h每组分别处死3只兔。丙泊酚组45只新西兰兔分组同前,处理上的区别:仅在缺血前、后加静脉注射适量丙泊酚处理。采集相应标本,HE染色观察缺血再灌注后股骨头骨骺的结构改变; TUNEL法标记凋亡细胞情况; Western印迹法检测Bax/Bcl-2蛋白表达水平。结果正常组骨骺细胞的凋亡率仅为(3. 15±0. 89)%。模型组和丙泊酚组缺血再灌注4 h、24 h、72 h、168 h后骨骺细胞的凋亡率均显著高于缺血再灌注即刻(P<0. 05);与模型组同时刻相比,丙泊酚组骨骺细胞的凋亡率均显著降低(P<0. 05)。正常组Bax/Bcl-2比值仅为0. 16±0. 09。模型组和丙泊酚组缺血再灌注4 h、24 h、72 h、168 h后Bax/Bcl-2比值均显著高于缺血再灌注即刻(P<0. 05);与模型组同时刻相比,丙泊酚组Bax/Bcl-2比值均显著降低(P<0. 05)。结论丙泊酚可以减轻兔股骨头骨骺缺血再灌注诱发的损伤,其机制可能与促进抗凋亡基因Bcl-2的表达、抑制Bax表达,从而减轻细胞凋亡有关。     

阿魏酸钠对大鼠脑损伤后脑组织Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的观察阿魏酸钠对大鼠颅脑损伤后脑组织中Bcl-2、Bax表达的影响和血清超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化产物丙二醛(MDA)的变化,探讨大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡机制。方法选用大鼠45只,按时间段随机分为9组,采用自由落体法建立大鼠脑损伤模型,分别于伤后6、12、24、48 h制备脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax表达,并测定脑组织中SOD和MDA活性。结果颅脑损伤后,阿魏酸钠实验组与对照组相比可抑制Bcl-2、Bax表达,其中12、24、48 h有显著性差异。同时阿魏酸钠可以抑制SOD降低和MDA升高。结论阿魏酸钠可通过促使Bcl-2、Bax表达升高,调节氧自由基的形成,从而抑制了细胞的凋亡。     

不同负荷游泳运动对老龄大鼠心肌细胞形态及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨不同负荷游泳运动对老龄大鼠心肌细胞中Bcl-2、Bax及HIF-1蛋白表达的影响及凋亡机制。方法将48只22月龄雄性健康Wistar老龄大鼠随机分为对照组(C)、大负荷组(H)、中等负荷组(M)和小负荷组(S),每组12只,进行为期8 w的不同负荷的游泳运动;运动干预后解剖取样,HE染色观察心肌细胞形态学变化,免疫组织化学检测心肌细胞Bcl-2、Bax和HIF-1蛋白表达。结果 S组老龄大鼠心肌中Bcl-2表达与C组(P<0.01)差异非常显著,H组与C组(P<0.05)差异显著,S组心肌Bax表达与C组(P<0.01)差异非常显著,H组与C组(P<0.05)差异显著,S组心肌细胞HIF-1α表达与C组(P<0.05)差异显著,H组与C组(P<0.01)差异非常显著。适宜的游泳运动(S组)心肌纤维排列有序,细胞间质减少,心肌纤维肥厚,走向正常,着色比较均匀,且未观察到肌丝断裂,也无充血坏死现象发生。S组促进Bcl-2表达增加,Bax蛋白表达降低,进而抑制心肌细胞凋亡发生;大负荷运动或不适宜(H、M组)利于Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白的表达升高,进而促进心肌细胞凋亡的发生。结论Bcl-2、Bax蛋白表达变化是运动干预心肌细胞凋亡的调控机制之一。     

抑郁对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨抑郁对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 30只SD大鼠随机分为三组,假手术组,心肌梗死对照组,心肌梗死抑郁组,每组10只。制备相应模型并干预后,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果心肌梗死抑郁组和心肌梗死对照组大鼠心肌细胞凋亡率以及心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达均高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01),心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax蛋白表达高于心肌梗死对照组,而心肌细胞Bcl-2蛋白表达低于心肌梗死对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论抑郁可增加急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与促进促凋亡基因Bax表达、抑制抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

高糖环境对乏氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及脑神康胶囊的干预作用

目的 研究高糖环境对体外培养的大鼠海马神经元乏氧损伤时凋亡的影响以及脑神康胶囊对损伤神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤(X)/黄嘌呤氧化酶(XO)组、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低、中、高剂量组.干预后测细胞存活率及凋亡率,采用Real-time PCR法检测各组海马神经元HIF-1α mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及Bc-2/Bax比值.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达水平和Bcl-2/Bax的水平均显著下降,神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达水平均显著升高(均P<0.01);与X/XO组比较,川芎嗪组及脑神康各浓度组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的水平均明显上升,而神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达均明显下降.结论 脑神康胶囊能够明显抑制高糖环境下大鼠海马神经元的凋亡,对高糖环境下海马神经元的乏氧损伤有保护作用,其作用机制之一是下调HIF-1α mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、改善乏氧环境及抗细胞凋亡.     

c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及机制

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在大鼠脑缺血再灌注(CIR)损伤中的作用。方法构建CIR大鼠模型,同时在大鼠脑侧室给予JNK抑制剂-SP600125抑制JNK的激活。采用5分制对造模后的大鼠行为学评分,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色分析大鼠CIR后脑梗死体积。原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况,Western印迹检测大鼠脑组织中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bax、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(酶切-caspase)3、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、JNK蛋白表达水平。结果模型组CIR损伤后3、24、72 h行为学评分均明显高于假手术组(P<0.01),说明成功构建了大鼠CIR模型。实验组CIR损伤后3、24、72 h行为学评分均明显低于模型组(P<0.01)。脑梗死再灌注后3、24和72 h模型组大鼠脑组织中脑梗死体积、细胞凋亡率均明显高于假手术组,实验组均明显低于模型组(均P<0.01)。模型组脑组织中Bax、酶切-caspase3蛋白表达水平均明显高于假手术组,Bcl-2蛋白表达水平明显低于假手术组(P<0.01)。实验组中Bax、酶切-caspase3蛋白表达水平均明显低于模型组,Bcl-2蛋白表达水平明显高于模型组(均P<0.01)。实验组JNK的表达水平低于模型组(P<0.01)。模型组大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α水平均明显高于假手术组,实验组均明显低于模型组(均P<0.01)。结论抑制JNK激活可以减轻大鼠CIR损伤,作用机制可能与Bcl-2、Bax、酶切-caspase3表达有关。