大黄素对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制

目的:观察大黄素(emodin)对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制.方法:用四道生理记录仪记录豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动;用膜片钳记录豚鼠胃窦环形肌细胞上L型钙电流,观察L型钙电流在大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动中的作用.结果:大黄素在一定的浓度范围内增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动并呈剂量依赖性,给予5、10、15、20、25、50mol/L的大黄素后豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的幅度分别为对照组的108.2%±6.2%、150.6%±8.3%、198.2%±7.6%、200.2%±8.6%、160.0%±6.8%、81.2%±6.2%.预先加入10mol/L的硝苯地平,完全阻断大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动.10mol/L和20mol/L的大黄素明显增强豚鼠胃窦环形肌细胞上钡电流(IBa),用10mol/L的大黄素灌流开始后200s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定,20mol/L的大黄素灌流开始后170s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定.加药后IBa电流峰值分别增加到对照组电流最大值的137.88%±5.79%和158.69%±6.11%.结论:大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩,细胞外钙通过L型钙通道内流入细胞内引起平滑肌收缩是大黄素促进豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的作用机制之一.     

胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响

目的 观察胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响.方法 用全细胞膜片钳技术观察胰淀素作用前后胰岛β细胞电压门控L-型钙通道门控特性、电流变化.结果 在葡萄糖5.5 mmol/L条件下,大鼠胰岛β细胞L-型钙通道电流约在-40 mV激活,+20 mV左右达高峰,峰值约为-120 pA,胰岛素分泌量为(0.76±0.12)μg/L;16.7 mmol/L葡萄糖刺激下峰电流电压左移、峰电流达-140 pA左右,胰岛素分泌量为(1.78±0.13)μg/L.用0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度胰淀素分别孵育胰岛β细胞,在5.5、16.7 mmoL/L葡萄糖条件下,0.5、1.0μmol/L胰淀素浓度的峰电位激活电压、电流、胰岛素分泌最与对照组相比,差异均无统计学意义,在5.5 mol/L葡萄糖条件下,5.0、10.0μmol/L胰淀素浓度的激活电雎增加为-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-60 pA左右,胰岛素分泌量分别降低至(0.49±0.11)、(0.36±0.12)μg/L;在16.7 mmol/L葡萄糖条件下,激活电压由-40 mV增加到-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-40 pA,胰岛素分泌量分别降低至(1.20±0.13)、(0.89±0.14)μg/L,与对照组相比差异具有统计学意义.结论 葡萄糖刺激胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放与胰岛素分泌同步,胰淀素抑制胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放和抑制胰岛素分泌作用同步并与其作用浓度正相关.     

白藜芦醇对脑小胶质细胞缺氧损伤的保护机制研究

目的:研究白藜芦醇对脑小胶质细胞缺氧性损伤的保护作用。方法:使用不同浓度(0μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)的白藜芦醇干预脑小胶质细胞缺氧模型,通过细胞生长曲线及克隆形成实验,检测白藜芦醇对缺氧脑小胶质细胞存活率的影响。结果:白藜芦醇作用2 d后,各浓度组脑小胶质细胞存活率与缺氧组比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。白藜芦醇作用4 d后,随着药物浓度的增加,缺氧脑小胶质细胞存活率分别为(34.17±8.25)%、(55.20±7.55)%、(78.13±6.85)%、(90.07±7.84)%,组间比较差异有统计学意义(均P0.001)。作用6d后,缺氧脑小胶质细胞存活率分别为(39.01±5.54)%、(60.08±7.13)%、(80.37±5.31)%、(92.03±7.62)%,组间比较差异有统计学意义(均P0.001)。脑小胶质细胞克隆存活率随白藜芦醇浓度增加而增高。随药物浓度增加,白藜芦醇干预7 d后,克隆存活率分别为(26.47±5.66)%、(47.92±5.07)%、(66.09±2.93)%、(80.07±1.49)%,组间比较差异有统计学意义(均P0.001)。结论:白藜芦醇可以提高在缺氧条件下脑小胶质细胞的存活率。     

盐酸关附甲素对转染HERG基因表达的快速激活延迟整流钾通道电流的影响

目的 用膜片钳全细胞记录法观察盐酸关附甲素(AHH)对转染HERG基因表达的快速激活延迟整流钾电流(IKr)的影响.方法 使用脂质体介导的瞬时转染法把野生型HERG基因转染人人胚肾细胞(HEK293),采用标准的全细胞膜片钳技术记录IKr通道电流,观察不同浓度的AHH对IKr的影响.结果 AHH对IKr通道的峰电流IHERC具有浓度和电压依赖性抑制作用,半数最大抑制浓度(IC50)为465.95 μmol/L;400 μmol/L的AHH使IHERG的最大峰值电位前移,但不改变激活电位.25、100、400、1000、2500 μmol/L的AHH对尾电流(Itail)抑制率分别为1.53%、13.60%、-5.92%、30.14%、38.51%.100和400 μmol/L的AHH使激活曲线左移并能加快通道的失活.结论 25～400 μmol/L的AHH对IKr的抑制作用不明显;AHH主要是作用于IKr通道的失活态.     

穿心莲内酯对IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制

目的探讨穿心莲内酯(AD)对白细胞介素(IL)-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制。方法采用MTT法检测不同浓度AD和IL-6对人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响;Transwell小室实验检测AD对IL-6诱导的A549细胞侵袭的影响;Western印迹检测A549细胞中转移相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、IκBα的表达。结果 0.5μmol/L、1.0μmol/L和3.0μmol/L低浓度AD和20μg/L、50μg/L和100μg/L IL-6对A549细胞的增殖的无明显影响。给予20μg/L浓度的IL-6处理后,A549细胞的侵袭能力明显增强,A549细胞中MMP-9、Vimentin、p-IκBα蛋白表达升高,而E-cadherin和IκBα蛋白表达降低;而给予0.5μmol/L、1μmol/L和3μmol/L AD处理后,IL-6对A549细胞的上述作用明显减弱,且呈现一定的浓度依赖性。结论 AD可抑制IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

PPAR-γ/FAK信号通路在C57 BL/6小鼠肺成纤维细胞中的抗纤维化作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)配体和粘着斑激酶(FAK)在C57BL/6小鼠肺成纤维细胞中的抗纤维化作用。方法培养C57BL/6小鼠肺成纤维细胞,用TGF-β2 10ng/mL刺激转换为肌纤维母细胞,加入不同浓度PPAR-γ配体罗格列酮(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L及40μmol/L),采用细胞生长计数实验检测罗格列酮对小鼠肺成纤维细胞C57BL/6生长的影响;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐实验(MTT)检测罗格列酮对小鼠肺成纤维细胞C57BL/6增殖的影响;聚合酶链式反应实验(PCR)检测PPAR-γmRNA、FAK mRNA的转录水平。结果生长计数实验发现罗格列酮抑制肌纤维母细胞生长,在72 h罗格列酮浓度40μmol/L时抑制最明显;MTT实验发现罗格列酮抑制肌纤维母细胞增殖,在72 h罗格列酮浓度40μmol/L时抑制最明显;PPAR-γmRNA转录水平随罗格列酮浓度增加而增加,FAK mRNA的转录水平随罗格列酮浓度增加而减少。结论 PPAR-γ配体罗格列酮可能通过抑制FAK表达进而抑制TGF-β2诱导的肺成纤维细胞纤维化形成。     

辣椒素对高盐致大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究辣椒素对高盐诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法组织贴壁法培养原代大鼠血管平滑肌细胞,根据MTT结果绘制大鼠血管平滑肌细胞的生长曲线,大鼠血管平滑肌细胞传至第4代去血清同步化24 h,不同浓度辣椒素(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)进行高盐培养72 h,MTT比色法检测大鼠血管平滑肌细胞增殖情况,选取抑制血管平滑肌细胞增殖的辣椒素浓度进行后续实验。CCK-8检测渗透压对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞增殖周期,免疫荧光染色法和Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位家族香草醛1型受体(TRPV1)mRNA的表达,Western blot检测瞬时受体电位家族香草醛1型受体的蛋白表达。结果 MTT结果显示,辣椒素浓度为10μmol/L时大鼠血管平滑肌细胞增殖开始受抑制,100μmol/L时抑制作用增强(P0.05),选取10μmol/L辣椒素进行后续实验。CCK-8结果显示,高盐组细胞明显增殖,而甘露醇组、正常组和高盐+辣椒素组无差异。流式细胞仪测得高盐组G0/G1、G2/M期细胞比例减少(P0.05),S期细胞比例增多(P0.05);与高盐组比较,高盐+辣椒素组G0/G1、G2/M期细胞比例增加(P0.05),S期细胞比例下降(P0.05)。免疫荧光及Western blot结果显示,高盐组增殖细胞核抗原阳性细胞核增多,蛋白表达增加(P0.05),而高盐+辣椒素组增殖细胞核抗原阳性细胞核减少,蛋白表达减少(P0.05)。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示高盐组瞬时受体电位家族香草醛1型受体mRNA及蛋白表达减少(P0.05),辣椒素组则增加(P0.05)。结论辣椒素可抑制高盐所致的大鼠血管平滑肌细胞增殖,其作用机制可能与激活瞬时受体电位家族香草醛1型受体表达有关。     

芦丁对大鼠离体心脏冠脉流量和血流动力学参数的影响

目的研究芦丁对大鼠离体心脏冠脉流量(CF)及血流动力学参数的影响。方法利用Langendorff实验系统,将36只大鼠随机分为6组,每组6只,观察溶剂及不同浓度芦丁(0.3μmol/L,1μmol/L,3μmol/L,10μmol/L,30μmol/L)对大鼠离体心脏冠脉流量及血流动力学参数的影响。先用正常台式液灌流大鼠心脏,待各指标稳定后,记录冠脉流量(CF)、左心室收缩压(LVDP)、左心室舒张压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)。30min后,用含溶剂或芦丁的台式液灌流大鼠心脏,再记录各参数。观察芦丁对大鼠离体心脏冠脉流量及血流动力学参数的影响。结果 0.3μmol/L,1μmol/L,3μmol/L,10μmol/L,30μmol/L芦丁浓度依赖性增大CF值,使CF值从7.3mL/min±1.2mL/min增大到12.6mL/min±1.1 mL/min;芦丁浓度依赖性增大LVDP值和+dp/dtmax值,使LVDP值从60mmHg±2mmHg增大到73mmHg±4mmHg,使+dp/dtmax值从1 135mmHg/s±102mmHg/s增大到1 427mmHg/s±115mmHg/s;不同浓度芦丁对LVEDP和-dp/dtmax值无显著影响。结论芦丁增加离体大鼠心脏冠脉流量,对离体大鼠心脏有正性肌力作用。     

大蒜素对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞钙电流的作用

目的:观察大蒜素(Gar)对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉平滑肌细胞L-型钙电流(LCa,L)的影响。方法:利用双酶-两步法消化得到单个大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞,用全细胞膜片钳记录钙电流。在细胞池中灌流含Gar的细胞外液,观察药物对LCa,L的作用和门控机制及门控动力学参数的改变。结果:1Gar对ICa,L的抑制效应呈浓度依赖性和电压依赖性特征。刺激电位0 mV时,200μmol/L Gar可使ICa,L峰值密度由(-8.4±0.4)pA/pF降低为(-6.1±0.3)pA/pF;2药物可使ICa,L半激活电压V1/2右移,半失活电压左移及失活后恢复动力学减慢等环节可减少通道的开放和重复开放,从而减少ICa,L峰值密度和窗口电流。结论:Gar可能通过减少细胞的钙电流发挥降压效应。     

依泽替米贝抑制大鼠血管平滑肌细胞荷脂

目的观察依泽替米贝(ezetimibe)对大鼠血管平滑肌细胞内胆固醇蓄积的影响以及相关的作用机制。方法以原代培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)为研究对象,以20 mg/L Chol:MβCD孵育细胞48 h形成荷脂细胞模型。不同浓度的依泽替米贝(3μmol/L、10μmol/L和30μmol/L)处理细胞24 h,或以30μmol/L依泽替米贝分别处理细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h和48 h),高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)的含量,Western Blotting检测小凹蛋白1蛋白的表达。结果不同浓度依泽替米贝(3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L)作用于VSMC源性荷脂细胞不同时间,细胞内TC、FC的含量呈浓度依赖性减少,以30μmol/L依泽替米贝孵育24 h作用最强。Chol:MβCD明显减少细胞小凹蛋白1蛋白表达水平,依泽替米贝能够逆转这种作用。结论依泽替米贝抑制Chol:MβCD诱导的大鼠平滑肌细胞中胆固醇蓄积作用可能与小凹蛋白1有关。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

阿魏酸钠对血小板源生长因子和内皮素1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

为探讨阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响 ,采用组织块外生法体外培养血管平滑肌细胞 ,采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验 ,荧光染料Fura 2 /AM法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现 ,血小板源生长因子二聚体和内皮素 1均可诱导血管平滑肌细胞迁移 ,作用峰值浓度分别为 10 μg/L和 10 - 7mol/L。阿魏酸钠 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移 ,10 - 3mol/L阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的细胞迁移的抑制率分别为 85 .0 4 %和 81.92 %。血小板源生长因子二聚体和内皮素 1促进细胞内游离钙离子浓度升高 (P <0 .0 5 ) ,作用峰值浓度分别为 10μg/L和 10 - 8mol/L。阿魏酸钠明显抑制该作用 ,峰抑制率分别为 80 .14 %和 76 .6 9%。以上提示 ,阿魏酸钠可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度的升高来抑制上述物质诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

芒柄花素对兔离体肠平滑肌舒张作用的影响

目的观察芒柄花素对兔离体肠平滑肌肌张力的影响并探讨其作用机制。方法采用经典的离体小肠灌流技术,观察芒柄花素对肠平滑肌收缩活动以及乙酰胆碱(Ach)、氯化钡(BaCl2)及组胺(HA)所致痉挛性收缩肠平滑肌的影响。应用L型钙通道开放剂Bay K8644、肌浆网ryanodine受体阻断剂钌红(RR)和一氧化氮(NO)合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME),研究芒柄花素舒张肠平滑肌的作用机制。结果芒柄花素(10、20、40、60、80、100μmol/L)能剂量依赖性的抑制家兔离体小肠平滑肌自发性收缩,对Ach,HA和BaCl2所致的兔离体肠痉挛性收缩也具有剂量依赖性抑制作用,且与无刺激肠平滑肌比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。芒柄花素可明显抑制Bay K8644(0.5μmol/L),阻断RR引起肠平滑肌舒张作用,但L-NAME不能够抑制芒柄花素舒张肠平滑肌作用。结论芒柄花素显著抑制家兔小肠平滑肌的收缩活动,其抑制可能与抑制细胞外钙内流和内钙释放,从而使细胞内钙浓度降低有关,但与小肠平滑肌一氧化氮(NO)浓度无关。     

丙泊酚对高糖诱导的H9c2细胞衰老的保护作用

目的研究丙泊酚对高糖诱导的H9c2细胞衰老的保护作用及其机制。方法本实验通过使用高糖长期培养H9c2细胞,在体外建立心肌细胞高糖老化模型,给予不同浓度的丙泊酚(5,10,20,40μmol/L)作用后,分别测定细胞存活率,细胞内活性氧(ROS)释放,细胞β-半乳糖苷酶染色,细胞P16、P53、Rb蛋白表达量。结果预处理丙泊酚(5~20μmol/L)能够明显减轻高糖诱导的细胞损伤;抑制细胞内ROS释放;显著降低细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数目;降低P16、P53和Rb蛋白表达量。结论丙泊酚通过抑制ROS释放,降低H9c2细胞衰老相关基因的蛋白表达量,从而产生心脏保护作用。     

维生素E琥珀酸酯联合化疗药物对胰腺癌细胞的体外抑制作用

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合化疗药物对胰腺癌细胞的体外抑制作用,并初步分析其机制。方法人胰腺癌细胞BxPc-3以VES联合化疗药物处理24h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml。化疗药物的浓度分别为5-FU:100μmol/L,130μmol/L,260μmol/L和400μmol/L;丝裂霉素(MMC):0.5μmol/L,1μmol/L,3μmol/L和10μmol/L以及顺铂:5μmol/L,10μmol/L和20μmol/L,以及不同VES浓度分别与不同浓度不同化疗药物联合应用。以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞表面Fas表达。结果(1)单用不同浓度的VES和化疗药物均可显著抑制胰腺癌细胞的生长,并表现出剂量依赖关系(P<0.05)。二者合用时产生协同效应,抑制作用较单用相应浓度的药物显著增强,并且随相应药物浓度的增加而增强(P<0.05)。(2)BxPc-3细胞的自然凋亡率为0.4%,20μg/mlVES作用24h后凋亡率为21.0%,3种化疗药物最高浓度作用后的凋亡率分别为17.5%,12.4%和18.8%。VES与3种化疗药物最高浓度联合应用后的凋亡率分别为37.5%,30.6%和51.4%。(3)VES联合化疗药物作用后胰腺癌细胞表面Fas表达增强。结论VES联合化疗药物对胰腺癌细胞具有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关。     

P2X受体对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩运动的影响

目的:探讨P2X受体激动剂α,β-methylene ATP (α,β-MeATP)对豚鼠胃窦环行肌运动的影响及其离子通道机制.方法:采用EWG/B豚鼠,制备去黏膜胃窦环行肌条(10×1.5 mm),并将其固定于恒温灌流槽内(37℃),用碳酸氢钠缓冲液连续灌流并通氧(950 mL/L O_2,50 mL/L CO_2).利用SMUP-E生物信号处理系统记录胃窦平滑肌自发性收缩活动,Ⅱ型胶原酶消化法分离豚鼠胃窦环行肌单细胞,传统全细胞膜片钳技术记录急性分离的胃窦平滑肌细胞膜电位和离子电流,包括钙激活钾电流、延迟整流型钾电流及电压依赖性钙电流.结果:嘌呤能P2X受体激动剂α,β-MeATP明显抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,并有明显的量效倚赖关系:5,10,20,40,100μmol/Lα,β-MeATP作用下,环行肌收缩幅度分别由对照组的100%下降到90%±2%.81%±4%,68%±4%,59%±7%和29%±4%(P<0.05).用神经阻断剂Tetrodotoxin (TTX)预处理后,α,β-MeATP对胃窦环行肌自发性收缩的抑制作用仍不受影响;在传统全细胞膜片钳电流钳模式下,500μmol/Lα,β-MeATP不影响细胞膜电位,也对两种外向钾电流,即延迟整流型钾电流和钙激活钾电流没有影响;不同浓度的α,β-MeATP对电压依赖性钙电流没有影响.结论:P2X受体激动剂抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,其作用机制不依赖内在神经,也不依赖细胞膜离子通道以及膜电位改变.     

小鼠胰腺腺泡细胞系MPC-83中功能性G蛋白偶联受体的缺失

目的:研究小鼠胰腺肿瘤细胞系MPC-83细胞中功能性G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR).方法:培养小鼠胰腺肿瘤细胞系MPC-83细胞,检测其刺激前后胞质游离钙离子浓度的变化.结果:ACh 25 nmol/L刺激新鲜分离的正常小鼠胰腺腺泡细胞,胞质钙离子浓度发生规则、振荡样升高;CCK5pmol/L具有类似作用.GPCR激动剂CCK 1 μmol/L、VP 1 μmol/L、P 物质5 μmol/L、组织氨10 μmol/L、PE 10μmol/L和ACh 100 μmol/L分别刺激MPC-83细胞,胞质钙离子没有发生任何增加.地塞米松100 nmol/L与MPC-83细胞共孵育72h,MPC-83细胞增殖速度明显降低,但GPCR配体CCK、VP、P物质仍然不引起胞质钙离子浓度的增加.结论:从昆明小鼠胰腺外分泌部肿瘤分离出来的胰腺腺泡细胞系MPC-83,正常的G蛋白偶联受体完全缺失,处于极度去分化状态.     

赛格列酮能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人内皮细胞表面粘附分子上调

目的研究赛格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1上调的影响。方法以不同浓度的赛格列酮(0.1μmol/L、1μmol/L1、0μmol/L和100μmol/L)预处理人脐静脉内皮细胞24 h,再与10-7mmol/L血管紧张素Ⅱ共孵育12 h。通过半定量逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1 mRNA和蛋白表达的情况。结果与血管紧张素Ⅱ组相比,0.1μmol/L和1μmol/L赛格列酮预处理24 h组对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1 mRNA上调无抑制作用(1.107±0.091比1.104±0.081和1.062±0.051,P>0.05),而10μmol/L和100μmol/L组则有明显的抑制作用(0.814±0.016和0.766±0.026,P<0.01和P<0.001);细胞间粘附分子1蛋白表达分别下调52.9%和55.5%(P<0.01和P<0.001)。而不同浓度的赛格列酮(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)使血管细胞粘附分子mRNA表达分别下调14.2%、19.5%、45.1%和60.7%(0.1μmol/L时P<0.01,余P<0.001);蛋白表达分别下调17.8%、33.8%、54.5%和58.9%(0.1μmol/L时P<0.01,余P<0.001)。结论赛格列酮抑制血管紧张素Ⅱ上调人脐静脉内皮细胞表达血管细胞粘附分子1,并呈浓度依赖效应;但对细胞间粘附分子1无论是mRNA还是蛋白水平,在低浓度(0.1μmol/L和1μmol/L)时无抑制作用,在较高浓度(10μmol/L和100μmol/L)可有较明显的抑制作用。     

溶血磷脂酸对胚胎干细胞分化心肌细胞L型钙通道电流的影响

目的诱导小鼠胚胎干(ES)细胞向心肌细胞分化并观察溶血磷脂酸(LPA)对分化心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法采用悬滴培养法诱导小鼠ES细胞向心肌细胞分化,逆转录-聚合酶链式反应及免疫荧光检测心肌细胞特异性标志物,全细胞膜片钳记录LPA0.1,1.0和10μmol/L对小鼠ES细胞分化心肌细胞ICa-L的影响。结果小鼠ES细胞成功向心肌细胞分化。0.1,1.0和10.0μmol/LLPA使分化心肌细胞ICa-L峰电流密度分别由用药前-6.8±0.7pA/pF增加到-8.9±1.2,-12.6±2.9和-16.6±3.5pA/pF(P<0.01或P<0.05)。结论LPA呈浓度依赖性促进小鼠ES细胞分化的心肌细胞ICa-L。     

雌激素抑制大鼠心室肌细胞L-型钙电流机制的研究

目的 :探讨雌激素抑制大鼠心肌细胞 L -型钙电流 （ICa,L）的可能途径。方法 :通过胶原酶消化得到单个大鼠心室肌细胞 ,膜片钳全细胞电压钳方法记录 ICa,L。结果 :雌激素 （1～ 30μmol/ L ）可剂量依赖性地抑制 ICa,L,雌激素对ICa,L的抑制作用并不能被雌激素受体的阻断剂 Tamoxifen和 ICI 182 780所阻断。细胞外灌流耦联了牛血清白蛋白（BSA）的雌激素 [β- estradiol6 - （o- carboxy- m ethyl） oxime:BSA（EST- BSA） ],不能透过细胞膜 ]也能抑制 ICa,L,但同样浓度的 EST- BSA细胞内灌流对 ICa,L并没有明显的抑制作用。结论 :雌激素可能是通过膜表面上特异的受体介导了其对 L-型钙电流的抑制作用