Notch通路在糖尿病肾病大鼠的表达及化瘀通络中药的干预作用

目的探讨Notch通路在糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的表达以及化瘀通络中药对其的干预作用。方法 60只SD雄性大鼠,随机取10只为对照组,其余大鼠给予高糖高脂饲料喂养联合ip小剂量链脲佐菌素(STZ)制备DN模型。成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、化瘀通络中药组,厄贝沙坦组、化瘀通络中药组均ig给药,于16周末检测大鼠24 h尿蛋白定量,Real-time PCR法检测Notch1、Jagged1和Hey1 m RNA的表达,免疫组化及Western blotting法检测Notch1、Jagged1和Hey1蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量及Notch1、Jagged1、Hey1 m RNA和蛋白的表达量明显升高(P0.01)。与模型组比较,化瘀通络中药组及厄贝沙坦组大鼠24 h尿蛋白定量及Notch1、Jagged1、Hey1m RNA和蛋白的表达量降低(P0.01)。结论化瘀通络中药可以减少DN大鼠24 h尿蛋白定量,且能够抑制DN大鼠肾脏Notch通路中Notch1、Jagged1和Hey1的高表达,该作用可能是其减少蛋白尿排泄的主要途径之一。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用。方法 40只大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,将造模成功的36只大鼠按随机数字表法分为模型组、化瘀通络组和厄贝沙坦组,每组12只。另取10只正常大鼠作为正常组。化瘀通络组和厄贝沙坦组分别给予化瘀通络中药和厄贝沙坦灌胃,同时正常组和模型组等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法检测不同时间点各组大鼠24 h尿蛋白定量;连续干预16周后分别检测各组大鼠体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾脏指数(kidney index,KI)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA);光镜和电镜下观察肾组织病理形态学变化;采用Western blot和Real-time PCR法检测肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显升高(P0.01),造模后大鼠BW减轻,KI、FBG、SCr、BUN和UA水平均升高(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显降低,且化瘀通络组24 h尿蛋白定量较厄贝沙坦组减少更明显(P0.05,P0.01);造模后化瘀通络组和厄贝沙坦组BUN水平降低(P0.05,P0.01)。(2)肾脏病理显示:模型组肾脏结构紊乱,基底膜明显增厚,系膜重度增生,足突广泛融合;化瘀通络组和厄贝沙坦组肾脏病理改变均有不同程度减轻。(3)Western blot和Real-Time PCR显示:与正常组比较,模型组大鼠肾组织podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均降低(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均升高(P0.01);化瘀通络组podocin、CD2AP蛋白和CD2AP mRNA表达均明显高于厄贝沙坦组,差异有统计学意义(P0.05)。结论化瘀通络中药可以降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,保护肾功能,改善肾脏病理改变,其机制可能与上调裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的分析化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路相关因子表达的影响。方法糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常对照组、模型组、中药组和厄贝沙坦组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃16周检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24hUTP),肾组织行光镜、电镜观察,Real-time PCR检测肾脏TGF-β_1、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组各项指标均有差异(P0.05);与模型组比较,两治疗组Scr、BUN、24hUTP及TGF-β_1、Smad2 mRNA表达水平明显下降(P0.05),Smad7 mRNA表达水平明显上升(P0.05),病理损伤明显减轻;与厄贝沙坦组比较,中药组24hUTP明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏和AMPK/Nox4信号通路的作用研究

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用以及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,Nox4)信号通路的干预作用。方法随机选取7只SD大鼠作为对照组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合ip链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DN模型,DN大鼠随机分为模型组、化瘀通络中药(4.41 g/kg)组和厄贝沙坦(13.5 mg/kg)组。给予化瘀通络中药16周后,取尿液检测大鼠24h尿蛋白(urinetotalprotein,UTP)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平;考察各组大鼠肾组织病理变化;考察各组大鼠肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛水平;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织8-OHdG和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白表达;采用qRT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)m RNA表达;采用Western blotting法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、AMPKα、磷酸化AMPKα(p-AMPKα)、Nox4蛋白表达。结果与模型组比较,化瘀通络中药组大鼠尿液24 h UTP和8-OHdG水平明显降低(P0.01);肾脏病理损伤缓解,肾组织细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积减少,肾组织胶原面积明显降低(P0.01);肾组织SOD活性明显升高(P0.05),肾组织丙二醛水平显著下降(P0.01);肾组织8-OHd G和FN表达减少;肾组织TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01);肾组织p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高(P0.05),Nox4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药能够通过作用于AMPK/Nox4信号通路,从而抑制DN大鼠氧化应激、减少ECM大量堆积、降低UTP排泄、保护肾脏。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾小球电荷屏障的影响

目的探讨化瘀通络中药治疗糖尿病肾病蛋白尿可能的作用靶点。方法 60只SD大鼠随机选10只做为正常组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型。将成模大鼠随机分为模型组15只、厄贝沙坦组14只、中药组15只。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦片13.5 mg/(kg·d),中药组给予化瘀通络中药颗粒剂4.41 g/(kg·d),正常组及模型组给予等量饮用水灌胃,每日1次,共16周。分别于造模前(0周)及造模后第2、4、8、12、16周行24 h尿蛋白定量检测;第16周末取肾组织行光镜病理学观察,测量肾小球基底膜厚度并计数阴离子位点,检测肾组织硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)、乙酰肝素酶(HPA)、足盂蛋白(PCX)的表达及尿PCX含量。结果模型组第2、4、8、12、16周24 h尿蛋白定量水平较同时间点正常组升高,厄沙贝坦组和中药组在第2、4、8、12、16周24 h尿蛋白定量水平低于同时间点模型组,并且中药组在12、16周24 h尿蛋白定量水平低于同时间点厄贝沙坦组(P0.05或P0.01)。厄贝沙坦组、中药组较模型组基底膜增厚减轻、阴离子位点数量增多(P0.05),病理损伤得以改善。各组大鼠肾组织HSPG蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,厄贝沙坦组、中药组HPA蛋白及mRNA表达减少,PCX蛋白及mRNA表达增加,尿PCX含量下降(P0.05)。结论化瘀通络中药可减少糖尿病肾病尿蛋白,其机制可能是抑制肾组织HPA的过表达,从而减少基底膜阴离子位点丢失,并能上调肾组织PCX的表达,减少尿PCX排泄,维持肾小球电荷屏障的完整性。     

黄精皂苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用单次腹腔注射大剂量链脲佐菌素(55 mg/kg)建立糖尿病肾病大鼠模型,并随机分为模型组,黄精皂苷低(35 mg/kg)、高(70 mg/kg)剂量组及厄贝沙坦(17.5 mg/kg)组,每组10只;另随机选取10只健康Wistar大鼠作为正常组,各组灌胃给药,1次/d,正常组及糖尿病肾病模型组灌胃等体积蒸馏水,给药时间为16周。检测各组大鼠一般状态、肾脏系数、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白总量、肾脏组织病理形态变化、Ⅳ型胶原及Wnt4、β-catenin表达。结果与模型组比较,黄精皂苷组大鼠一般状态及肾脏病理形态均得到一定程度改善;与模型组比较,黄精皂苷组大鼠肾脏系数,尿素氮、血肌酐及第8、12、16周的24 h尿蛋白总量明显减少(P0.05);与模型组比较,黄精皂苷组大鼠Ⅳ型胶原及Wnt4、β-catenin表达均也明显降低(P0.05)。结论黄精皂苷可以通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的激活,抑制肾小管间质纤维化进程,最终发挥肾脏保护作用。     

清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用

目的探讨清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞表型转化即上皮-间质细胞转分化的作用。方法将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、糖尿病肾病组、清热益气化瘀通络组、厄贝沙坦组,每组10只。除正常组大鼠外,其余组大鼠均采用腹腔注射链脲佐菌素方法制作DN模型。造模成功后,清热益气化瘀通络组和厄贝沙坦组给予相应药物灌胃,正常组和糖尿病肾病组给予等量生理盐水灌胃,均连续12周。灌胃结束后,检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量,应用实时定量RT-PCR法检测肾皮质中Wilms肿瘤抑制因子(WT1)、钙黏蛋白(P-Cadherin)、结蛋白(desmin)mRNA表达情况。结果实验结束时,各造模组的血糖水平均明显高于正常组(P均0.05),但各造模组间血糖水平比较差异均无统计学意义(P均0.05);各造模组的24 h尿蛋白定量也均明显高于正常组(P均0.05),但厄贝沙坦组和清热益气化瘀通络组24 h尿蛋白定量均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),且清热益气化瘀通络组明显低于厄贝沙坦组(P均0.05)。WT1 mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)结果显示从高到低依次为正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组、糖尿病肾病组,但4组间比较差异均无统计学意义(P均0.05);正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组P-Cadherin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显高于糖尿病肾病组(P均0.05),desmin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),但3组间比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论清热益气化瘀通络方可增加足细胞P-Cadherin表达而降低desmin表达,具有拮抗糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用。     

活血化瘀中药汤剂对糖尿病肾病大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的观察活血化瘀中药汤剂对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质纤维化的影响,探讨其可能的作用机制。方法选用健康雄性SD大鼠30只,采用高糖高脂饲料喂养、一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病SD大鼠模型,然后平分为DN模型组、活血化瘀组和厄贝沙坦组各10只,活血化瘀组选择活血化瘀中药汤剂灌胃服药,厄贝沙坦组选择厄贝沙坦溶液灌胃服药,模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液,记录三组肾间质纤维化相关指标的变化情况。结果所有大鼠都造模成功,活血化瘀组与厄贝沙坦组大鼠的肾质量都明显低于DN模型组(P0.05)。实验后活血化瘀组与厄贝沙坦组组大鼠BUN、Scr较DN模型组明显降低(P0.05)。实验后DN模型组、活血化瘀组和厄贝沙坦组大鼠尿白蛋白排泄率(UAER)值分别为(16.32±4.29)mg/24 h、(11.50±2.59)mg/24 h和(12.20±3.01)mg/24 h,活血化瘀组和厄贝沙坦组较DN模型组明显降低(P0.05)。TGF-β1主要在肾间质区、肾小管部位及小动脉中表达;FN主要表达在肾小球、细胞外基质和肾小管部位。Western蛋白印迹检测显示活血化瘀组和厄贝沙坦组的FN和TGF-β1蛋白表达水平明显低于DN模型组大鼠(P0.05)。结论活血化瘀中药汤剂能够降低DN大鼠的肾脏肥大,提高肾功能,改善肾组织病变,通过抑制肾组织TGF-βl与FN的表达,延缓肾间质纤维化。     

白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响。方法利用链脲佐菌素一次性注射制作糖尿病肾病模型,40只SD大鼠随机分成白藜芦醇组(5 mg/kg)、氯沙坦组(30 mg/kg)、白藜芦醇联合氯沙坦组(5 mg/kg藜芦醇联合30 mg/kg氯沙坦)和模型组,每组小鼠10只,1次/d,均持续作用8周。检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿蛋白及空腹血糖水平,计算肾脏指数,实时荧光定量PCR、Western blot法及免疫组化法检测Wnt4、β-catenin及TGF-β1、Smad2/3表达。结果与模型组比较,白藜芦醇组、氯沙坦组、白藜芦醇联合氯沙坦组的BUN、Scr、24 h尿蛋白和空腹血糖水平显著降低(P0.05),肾脏指数降低(P0.05),Wnt4、β-catenin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05);与白藜芦醇联合氯沙坦组比较,白藜芦醇组以上指标差异无统计学意义(P0.05),而氯沙坦组以上指标明显增加(P0.05)。结论白藜芦醇能够降低Wnt/β-catenin和TGFβ1-Smad2/3信号通路的表达水平,改善DN肾脏病理进程,减少肾脏受到的损害。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞密度的干预作用

[目的] 分析化瘀通络中药对糖尿病肾病（DN）大肾脏整合素α3β1表达及足细胞密度的影响。[方法] 糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和中药组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃20周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量（24h UTP）,肾组织行光镜观察,分别采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组化（IHC）检测肾脏整合素α3（ITGA3）、整合素β1（ITGB1）、WT1 mRNA及蛋白的表达,计算足细胞密度。[结果] 与正常组比较,模型组各项指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,两治疗组BUN、24hUTP明显下降（P＜0.05）,ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA表达水平及足细胞密度明显上升（P＜0.05）,干预组病理损伤明显减轻,主要表现为肾小球内细胞基质及系膜细胞明显减少;与厄贝沙坦组比较,中药组24h UTP明显降低（P＜0.05）,ITGB1 mRNA及足细胞密度明显上升。[结论] 化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节整合素α3β1表达从而减少足细胞脱落相关。     

参藤三黄汤对糖尿病肾病大鼠的治疗作用研究

目的:探索参藤三黄汤治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制,为糖尿病肾病的治疗提供科学实验依据。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ),复制糖尿病肾病动物模型,按随机数字表法分为模型组、厄贝沙坦组及参藤三黄汤高、中、低剂量组,连续12周后取检测各组大鼠肾脏病理变化、血糖、血尿素氮及24 h尿蛋白定量以及肾组织Nrf2、ARE表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠的血糖、血尿素氮及24 h尿蛋白定量显著增加,体质量显著降低,肾脏病理改变明显,差异有统计学意义。与模型组比较,参藤三黄汤组、厄贝沙坦组大鼠血糖及24 h尿蛋白定量显著降低,肾脏功能有所恢复,差异有统计学意义,说明参藤三黄汤具有调节Nrf2/ARE信号通路分子蛋白表达的作用。结论:参藤三黄汤对糖尿病肾病具有明显的治疗作用,其作用机制与调节Nrf2/ARE信号通路分子蛋白表达有关。     

消渴平合剂对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠TGF-β_1/Smad7信号转导通路的影响研究

目的:观察消渴平合剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠TGF-β1/Smad7信号转导通路的影响,探讨其对DN的防治作用及机制。方法:复制DN大鼠模型,随机分为正常组10只,模型组10只、厄贝沙坦组10只和消渴平合剂组10只。12周时处死大鼠,观察各组大鼠24 h尿蛋白变化情况,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO),大鼠肾组织行HE染色,免疫组化检测肾组织TGF-β1及Smad7蛋白。结果:消渴平合剂可以改善DN大鼠的一般状况,明显降低24 h尿蛋白定量(P0.01),减轻肾组织病理性损害。与模型组比较,消渴平合剂组BUN、Scr、TG含量显著降低(P0.01),NO含量明显升高(P0.01);肾组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:消渴平合剂可用于治疗糖尿病肾病,其机制可能与抑制DN大鼠肾脏TGF-β1/Smad7信号转导通路的激活有关。     

糖肾平胶囊对糖尿病肾病KKAy小鼠肾脏保护作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨糖肾平胶囊(糖肾平)对糖尿病肾病(DN) KKAy小鼠肾脏保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)途径信号通路的影响。方法:雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,用KKAy鼠料诱导10周,以血糖16. 7 mmol·L~(-1),24 h尿蛋白 0. 4 mg确定DN小鼠模型成功。将成模小鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg~(-1))组,10只雌性C57BL/6J小鼠作为正常组。每个治疗组均相应的治疗药物进行灌胃,正常组、模型组小鼠给予等体积的去离子水灌胃,灌胃剂量按0. 01 mL·g~(-1)体质量系数,每天1次。观察小鼠一般情况,每4周称体质量并测24 h尿蛋白定量。第26周,眼球取血并处死小鼠,并测量肾脏的质量,分离血清测中血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),甘油三酯(TG),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量;用原位杂交、免疫组化检测肾组织Wnt4,糖原合成酶激酶3β(GSK3β),β-连环蛋白(β-catenin) mRNA及蛋白的表达。结果:与模型组比较,糖肾平高剂量组体质量、肾重/体质量,24 h尿蛋白显著降低(P 0. 01);肾脏病理损害明显减轻,血清BUN,SCr,TG和MDA含量显著降低(P 0. 01),NO,SOD含量显著升高(P 0. 01),Wnt4,Gsk-3β,β-catenin mRNA及蛋白表达显著减少(P 0. 01)。结论:糖肾平可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,逆转DN KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化,延缓肾间质纤维化的进程,进而发挥肾脏保护作用。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾组织CTGF mRNA表达的影响

观察化瘀通络中药-肾络通对实验性大鼠糖尿病肾病(DN)模型肾功能及肾组织结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响.方法 SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、对照组和中药组,模型组、对照组和中药组应用链脲佐菌素(STZ) 60 mg/kg一次性腹腔注射制备大鼠糖尿病模型.中药组给予肾络通煎剂灌胃25 g/(kg·d),对照组给予贝那普利水溶液10 mg/(kg·d),正常组和模型组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃.检测各组大鼠24 h尿蛋白、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和肾组织CTGF mRNA的表达.结果 模型组24 h尿蛋白、BUN、Cr和肾组织CTGF mRNA的表达均显著高于正常组(P<0.01);对照组和中药组24 h尿蛋白、BUN、Cr和肾组织CTGF mRNA的表达与模型组相比显著降低(P<0.01).结论 化瘀通络中药能够显著减少DN模型大鼠24 h尿蛋白,保护DN模型大鼠肾脏功能,并可从基因水平显著降低肾组织CTGF的表达,提示下调CTGF的表达可能是化瘀通络中药保护DN模型大鼠肾功能的重要机制.     

肾衰泄浊汤及组方对UUO大鼠Wnt4/β-catenin信号通路作用的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨肾衰泄浊及组方抗肾间质纤维化的作用机制及肾间质纤维化中医本虚标实的病机。方法:将72只SD大鼠根据体质量随机分为模型组、假手术组、肾衰泄浊汤组、祛邪方组、补虚方组及贝那普利组,每组12只,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型。模型复制成功后,肾衰泄浊汤组、祛邪方组、补虚方组分别按照肾衰泄浊汤及其组方比例配制,浓缩剂灌胃给药,贝那普利组大鼠给贝那普利灌胃,模型组及空白组大鼠均予生理盐水灌胃,分别于术后7、14 d处死大鼠。检测24 h尿蛋白定量,血清肌酐、尿素氮水平,免疫组化检测Wnt4、β-catenin、E-cadherin含量,原位杂交检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果:与假手术相比,同时期模型组大鼠24 h尿蛋白定量升高(P0.05),与模型组相比,经各组治疗后24 h尿蛋白定量减少(P0.05);与假手术相比,模型组血尿素氮、血清肌酐均升高(P0.05),与模型组相比,经各组治疗后血尿素氮、清肌酐均有所下降(P0.05);与假手术组相比,同时期模型组Wnt4、β-catenin表达升高(P0.05),E-cadherin表达下降。与同时期模型组相比,各治疗组Wnt4、β-catenin表达下降(P0.05),E-cadherin表达升高(P0.05),肾衰泄浊汤组优于其他组(P0.05)。与假手术组相比,同时期模型组及各治疗组Wnt4mRNA、β-cateninmRNA表达升高(均P0.05),与模型组相比,各治疗组Wnt4mRNA、β-cateninmRNA表达下降(均P0.05),尤以肾衰泄浊汤组效果最好。结论:肾衰泄浊汤及其组方可能是通过抑制Wnt4/β-catenin信号通路,达到改善肾功能,延缓肾间质纤维化的进展,且肾间质纤维化中医病机为本虚标实。     

益气养阴消癓通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨益气养阴消癓通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38MAPK信号通路的作用.方法:将SD大鼠随机分为6组:单纯肾切组、模型组、厄贝沙坦组、中药低、中、高剂量组,按各组相应药物剂量灌胃.于第6周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(UPro)量及肾功能水平;肾皮质p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平.结果:厄贝沙坦、中药低、中剂量组与模型组比较Upro量显著下降(P<0.05);治疗组与模型组比较,肾功能明显改善(P<0.05),且p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平显著下降(P<0.05).结论:益气养阴消癓通络中药可能通过抑制p38MAPK信号通路表达,发挥对糖尿病肾病大鼠的治疗作用.     

益气养阴消癥通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨益气养阴消癥通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38MAPK信号通路的作用。方法:将SD大鼠随机分为6组:单纯肾切组、模型组、厄贝沙坦组、中药低、中、高剂量组,按各组相应药物剂量灌胃。于第6周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(UPro)量及肾功能水平;肾皮质p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平。结果:厄贝沙坦、中药低、中剂量组与模型组比较Upro量显著下降(P0.05);治疗组与模型组比较,肾功能明显改善(P0.05),且p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论:益气养阴消癥通络中药可能通过抑制p38MAPK信号通路表达,发挥对糖尿病肾病大鼠的治疗作用。     

祛痰通络汤对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin蛋白表达的影响

目的 观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法 制作大鼠糖尿病肾病模型,分为正常对照组、模型组、贝那普利治疗组及祛痰通络汤低、中、高剂量组,干预8周.观察各组24h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化观察肾组织nephrin蛋白表达的变化.结果 经过祛痰通络汤治疗后,24h尿蛋白定量下降;病理改变减轻;nephrin蛋白表达增加.结论 祛痰通络汤对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin蛋白表达有关.     

保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction UUO）模型大鼠肾脏病理的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控。方法：48只健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组（12.5g·kg-1/天）、保元排毒丸低、中、高剂量组（1.25g·kg-1/天、2.5g·kg-1/天、5.0g·kg-1/天）,每组8只;除假手术组只分离输尿管不结扎外其余均制备右侧输尿管梗阻肾纤维化模型,造模第二天开始予相应的药物灌胃,假手术组和UUO组给予自由进食和生理盐水灌胃,共灌14天。末次灌胃24小时后取右肾进行HE 染色观察肾脏病理改变,Masson 染色观察肾组织胶原沉积情况;Western Blot 法测肾组织E-cadherin、Collagen I、β-Catenin表达水平;Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果：与假手术组比较,UUO组和各给药组肾小管、肾间质病变重、肾纤维化重（P＜0.01）;与UUO组比较,保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组肾小管、肾间质病变明显减轻、肾纤维化减轻（P＜0.01）;UUO组E-cadherin表达较保元排毒丸各剂量组、厄贝沙坦组和假手术组明显减少（P＜0.01）;保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Collagen I、β-Catenin表达明显少于UUO组（P＜0.01）;UUO组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显高于假手术组（P＜0.01）,保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显低于UUO组（P＜0.01）。结论：保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

独活寄生汤水提物对退变大鼠椎间盘软骨细胞功能的影响

目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组(经10 ng/m L浓度IL-1β造模)、实验1组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预24 h)、实验2组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预48 h)。观察4组大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1 m RNA与蛋白的表达及上清液中Sox 9表达。结果 (1)第2代大鼠椎间盘软骨细胞增殖速度快,呈现多边形,胞核清晰,且含有1~2个核仁,融合后出现"铺路石"状,经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;(2)与正常组比较,模型组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显提高(P0.05),DKK-1 m RNA与蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,实验1组、实验2组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显降低(P0.05),DKK-1m RNA与蛋白表达明显提高(P0.05),以实验2组变化最为显著(P0.05)。结论独活寄生汤水提物组可调控退变椎间盘软骨细胞的功能,下调Wnt 4、GSK-3β、β-catenin和上调DKK-1 m RNA与蛋白表达,进而延缓大鼠椎间盘软骨细胞的退变。