Th1型基因佐剂对新生鼠免疫应答的调节

作者研究了编码 Th1型细胞因子的DNA佐剂对接种表达流感病毒血凝素 DNA( HA- DNA)的新生和成年鼠产生的主要抗体亚型的调节能力。 2 1周龄成年鼠和新生小鼠均肌肉注射 1 0 μg HA- DNA+ 4 0 μg白细胞介素 1 2 ( IL - 1 2 ) - DNA、γ干扰素 ( IFN-γ) -DNA或对照 DNA,或基因枪接种 1μg HA-DNA+ 4 μg IL- 1 2 - DNA、IFN- γ- DNA或对照 DNA。用 EL ISA检测 Ig G抗体 ,制备并刺激产生细胞因子的脾细胞 ,用 ELISA测定IFN- γ和 IL- 5水平。　　结果显示 ,在接种 HA- DNA的成年鼠中 ,肌注组均产生显著的 Ig G…     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。     

吸附于阳离子微粒的HIV-1 gag DNA粘膜免疫延长基因表达并增强局部和全身免疫

迫切需要开发一种安全有效而又廉价的抗人类免疫缺陷病毒 ( HIV)感染的疫苗 ,已经证实开发粘膜投递性疫苗是一良好的选择。作者探讨了用吸附于聚丙交酯 -乙交酯( PLG)微粒表面的 HIV- 1 gag DNA( PLG-DNA)疫苗鼻腔免疫小鼠后所诱导的局部与全身免疫应答的潜力。　　以 1 0 0 μg PL G- DNA或裸 DNA疫苗按2～ 3周间隔 4次鼻腔接种雌性 CB6 F1小鼠 ,于末次免疫后 1周处死小鼠。于处死前 1日采集小鼠血清并以 ELISA检测抗体水平 ;经鼻孔冲洗获得 30 0 μl鼻洗液 ;从每组 5只小鼠收集并混合颈淋巴结和脾脏 ,并将相应器官组织制备…     

肌肉注射卵白蛋白/白细胞介素18融合DNA可有效诱导抗原特异性Th1型免疫应答

Th1型细胞可选择性分泌白细胞介素 2( IL- 2 )、γ干扰素 ( IFN- γ)和 β肿瘤坏死因子( TNF- β) ,调节以补体结合和调理抗体 (如Ig G2 a同种型抗体 )产生为特征的细胞介导免疫。作者构建了一种携带卵白蛋白 ( OVA)和 IL - 1 8( IFN-γ诱导因子 ) c DNA融合基因的哺乳动物细胞表达质粒 p OVA/IL- 1 8,并在 C57BL/6小鼠中研究了其是否能有效诱导抗原特异性 Th1型免疫应答。　　作者首先对含 SV4 0复制起点并表达免疫球蛋白基因的哺乳动物细胞表达质粒进行修饰 ,以去除其中绝大部分免疫球蛋白编码区及新霉素抗性基因 ,随后分别…     

通过去除V3 N306聚糖改变N端糖基化信号效应提高HIV-1 env DNA疫苗的免疫原性

编码 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )包膜 env的 DNA不是有效的 B细胞免疫原 ,可能是大量 gp1 2 0 N端连接的聚糖干扰了 B细胞表位的提呈 ,gp1 2 0中的 N30 6聚糖可保护 HIV- 1免受中和抗体的攻击。　　为了确定聚糖是否影响免疫应答 ,作者构建了缺乏 N30 6糖基化信号 ( T30 8A)的DNA免疫原 ,方法是在表达质粒 p Ci的基础上构建 DNA载体。采用核苷酸定点突变的方法将 30 8位的苏氨酸转变为丙氨酸 ,从而消除位于 gp1 6 0 N端 30 6位的连接糖基化信号。另外构建含有从 BRU株获得的未经突变的完整 HIV- 1 env基因 gp1 6 0及 rev的…     

弓形体SAG1基因DNA诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究

目的 :用重组真核表达质粒 pc DNA3- SAG1直接免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其 DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法 :大量制备重组质粒 pc DNA3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内。抗体滴度用 EL ISA法进行测定 :采用 PCR方法对小鼠的血液组织外源基因进行检测 ;对试验组及对照组进行 RH株攻击感染 ,并对其进行分析。结果 :用 EL ISA法检测的抗体 Ig G滴度为 1∶ 2 5 6 0 ;免疫后三周、六个月从免疫鼠的血液组织中用 PCR仍可检测到特异的SAG1基因的存在 :体外弓形虫攻击感染实验组和对照组 ,可见实验组的存活时间较对照组时间延长 (P<0 .0 5 )。结论 :重组质粒 pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ c小鼠可诱导一定的体液免疫应答和一定的保护性作用     

以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法

作者用减毒沙门菌作为编码白细胞介素4 ( IL - 4)和 IL - 1 8的原核表达质粒传递系统 ,并评估其在不同实验模型中调节免疫应答的能力。　　作者首先将鼠 IL- 4和 IL- 1 8基因的编码序列克隆于由巨细胞病毒 ( CMV)启动子控制的 VR1 0 1 2质粒 ,然后将这些构建体电穿孔入伤寒杆菌 CVD90 8- htr A株和鼠伤寒杆菌 SL 32 6 1株。此外 ,将 3X FL AG序列插入 IL- 1 8序列的 N端构建成 IL- 1 8修饰质粒 ,并将此质粒电穿孔入 CVD90 8- htr A( VR1 0 1 2 - FLAG- IL 1 8)。小鼠鼻腔免疫CVD90 8- htr A( VR1 0 1 2 - FLAG- IL1 8…     

狂犬病病毒用作HIV疫苗的载体

美国 Jefferson医学院的研究人员运用减毒的狂犬病病毒作为表达人类免疫缺陷症病毒 (HIV)包膜蛋白的载体 ,研制 HIV疫苗。这是一种新方法 ,因为狂犬病病毒或不分节段的负链 RNA病毒用于 HIV疫苗尚属首次。　　研究人员将 HIV- 1 gp1 6 0基因插入减毒的狂犬病病毒产生重组病毒。然后将其注射小鼠 ,并加强注射一次 HIV gp1 2 0蛋白以致敏免疫系统。结果该病毒成功地表达出 gp1 6 0糖蛋白 ,并诱导强的抗 HIV- 1包膜蛋白的体液免疫应答。另外 ,在小鼠血清中检出滴度高达 1 :80 0的抗 HIV中和抗体。而一些广泛使用的重组病毒载体 (表达…     

编码曼氏血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sm32)的DNA疫苗在小鼠中诱生的抗血吸虫繁殖能力

本文介绍了运用 DNA疫苗技术在小鼠中诱生针对曼氏血吸虫半胱氨酸蛋白酶——天冬酰胺酰基内肽酶 ( Sm32 )的免疫应答。作者将编码 Sm32的 c DNA,在人巨细胞病毒( CMV)启动子 /增强子的驱动控制下克隆至哺乳动物表达载体中 ,构建成 p RK7- Sm32 ,并转染哺乳动物细胞 COS- 7。将 50 μl DNA构建体 ( 1 mg DNA/ ml)耳廓注射 6～ 1 2周龄雌性 NMRI小鼠 ,免后不同时间点尾静脉采血。为检测体内表达 ,小鼠于胫骨前肌肉注射DNA构建体 1 0 0μl,1 2天后处死小鼠 ,收集肌肉组织。用逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)、蛋白印迹法和免疫荧光…     

HIV-gp160、HIV-1 Env CTL表位肽(E7)与粘膜佐剂LT(R192G)联合鼻腔免疫的效果

大肠杆菌不耐热肠毒素 ( LT)是良好的粘膜佐剂。作者以人类免疫缺陷病毒 ( HIV)gp1 6 0及 E7为抗原与 LT突变体 R1 92 G联合投递 ,测定了对相关抗原的免疫应答及佐剂的效力。　　 2 0 μg gp1 6 0加或不加 R1 92 G5 μg,间隔1周鼻腔接种雌性 BAL B/c小鼠 ,共 3次。末次免疫后 1周采集小鼠支气管肺泡灌洗液及阴道洗液 ,以 EL ISA测定抗原特异性抗体应答。心脏穿刺采血并收集脾脏进行体外抗原再刺激试验。免疫 E7的小鼠 ,间隔 1周鼻腔接种 1 0 0 μg E7(加或不加 R1 92 G5 μg) ,共 4次。于末次免疫后 9天或 82天收获脾细胞进行铬释…     

基因枪接种质粒DNA诱导的免疫应答重复性优于肌肉注射

作者在 BALB/c小鼠中比较了基因枪接种与肌肉注射编码单个细胞毒性 T淋巴细胞 ( CTL )表位或卵白蛋白 ( OVA)的质粒DNA诱导的免疫应答重复性的异同。　　李斯特菌溶血素 O( L LO)的 91 - 99寡核苷酸残基是一个 H- 2 Kd 限制性显性 T细胞表位。含 LL O 91 - 99寡核苷酸的质粒p91 mam可表达 L LO91 - 99多肽。质粒 p CI-OVA是将 OVA的 c DNA插入到表达质粒p CICMV增强子 /启动子区域的 Eco RI酶切位点构建而成的。将 6～ 1 2周龄的 BALB/c小鼠分成两组 ,肌肉注射组小鼠免疫前先注射 5 0 μl0 .2 5 %布比卡因以增强细胞对…     

合成短肽与人类相容性佐剂诱导的抗HIV-1蛋白的CTL应答

全球性预防艾滋病的希望寄托于开发有效的疫苗。诱导抗不同人类免疫缺陷病毒( HIV)表位的抗体应答和广泛的细胞毒性 T细胞 ( CTL)应答可消除感染初期宿主体内的病毒。为使机体产生强有力的免疫应答 ,作者使用合成短肽与免疫刺激剂佐剂一同接种转基因小鼠 ,观察了抗 HIV- 1蛋白 CTL应答的诱导情况。　　作者合成了 6种 HIV短肽 ( RT4 76 -484、 p1 777- 85、 gp1 6 0 31 8- 32 7、 RT346 -354、gp4 1 81 4 - 82 3及 RT956 - 96 4) ,将合成肽同 1 4 k Da( D,L-聚乳酸 -乙醇酸共聚物( PL GA)制成微球。微球的大小通过激光散射技术…     

分散在MF59中的微粒——一种有效的抗HIV-1重组蛋白质疫苗的佐剂结合物

作者对包裹重组抗原的丙交酯乙交酯共聚物 ( PL G)微粒分散于 MF5 9乳剂佐剂中的新佐剂配方进行了评价。使用的重组蛋白抗原为 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 SF2 )rgp1 2 0 (中国仓鼠卵巢细胞表达 )和 HIV- 1 SF22 4gag(酶母细胞表达 )。 PLG/gp1 2 0、PL G/p2 4分别表示包裹有上述抗原的 PLG微粒 ,平均大小为 1μm,约有 2 0 %的抗原于第 1天释放 ,余下的则可持续释放 5 0～ 6 0天。将上述微粒再分散于佐剂 MF5 9中 ( PL G/gp1 2 0+ MF5 9和 PLG/p2 4+ MF5 9) ,给小鼠和狒狒肌肉注射进行免疫学试验。　　结果表明 ,小鼠中 ,…     

小鼠对鼻内及皮下接种编码幽门螺杆菌过氧化氢酶的DNA疫苗的免疫应答

先前已报道皮内注射编码幽门螺杆菌( Hp)热休克蛋白的 DNA疫苗能诱导特异性免疫应答 ,并能减轻小鼠感染。本研究旨在评价编码 Hp过氧化氢酶的 DNA疫苗经鼻内及皮内免疫小鼠后预防 Hp感染的效力。　　提取 Hp基因组 DNA,用特定引物扩增kat基因并纯化后 ,将其亚克隆到 TA质粒再克隆到 pc DNA3.1中 ,最后将 pc DNA3.1 -kat转染人胚肾细胞 2 93T。用能识别 pc D-NA3.1 - kat表达的融合蛋白 N端肽序列的抗表达抗体检测过氧化氢酶的表达。选用 5周龄 C57BL /6雌鼠 ,分别在 0、2、4天皮内注射 0 .1 ml含 1 0 μg pc DNA3.1 - kat的盐…     

结合电穿孔术的肌肉DNA免疫可增强抗结核杆菌抗原的细胞及体液免疫应答

6组 B6 D2小鼠分别注射 1 0 0 μg、1 0 μg或 1μg插入了编码结核杆菌抗原 85B序列( ag85b)的 v1 Jns- tp A质粒或插入了编码牛分枝杆菌抗原 MPB70序列 ( mpb70 )的pc DNA3质粒 ,每个剂量注射两组小鼠 ,其中一组在 DNA注射时结合电穿孔术 ,另一组则不采用电穿孔术。对照小鼠注射盐水并结合电穿孔术。在注射 DNA后 4和 8周分别取小鼠血清 ,用 ELISA法检测其亚类抗体水平。　　取 6只 BALB/c小鼠注射 1 2 0μg插入了编码结核杆菌抗原 85A序列 ( ag85a)的VR1 0 2 0质粒 ,其中 3只结合电穿孔术。同样取 6只小鼠注射 1 0 0 μg编码…     

淋巴结可能最适宜于DNA疫苗接种

瑞士实验免疫学研究所的研究人员发现 ,将小剂量 DNA疫苗直接注入小鼠淋巴系统与肌肉 ( IM)或皮内 ( ID)注射相比 ,能更好地保护小鼠抵抗病毒感染。　　研究人员将含有病毒蛋白编码基因的裸 DNA疫苗免疫小鼠。注射方式为 IM、ID、脾内 ( ISPL)或腹股沟淋巴结内 ( ILN)。疫苗经 ISPL或 IL N注射诱导的免疫应答比 IM或 ID注射强得多 ,而 DNA剂量则小 1 0 0～ 1 0 0 0倍。单次 ISPL 或 ILN注射诱导的免疫应答能完全保护小鼠抵抗感染 ;而经 IM或 ID注射较大剂量 DNA的小鼠仍部分易感。IL N疫苗接种还能破坏已植入小鼠胁腹…     

香菇多糖促BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染的研究

目的:研究香菇多糖预处理对弓形虫感染后BALB/c小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法:将45只周龄、体重相近的雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,即空白对照(无菌生理盐水)、模型(无菌生理盐水)和香菇多糖组(0.5g·L-1).各组小鼠以每次1mL、每天1次腹腔注射给药,连续给药5 d后,第6天模型与香菇多糖组各用3×1...     

接种编码乙型脑炎病毒E糖蛋白的质粒DNA可提供显著保护作用

作者构建了单独编码乙型脑炎病毒(JEV)包膜 (E)糖蛋白的 DNA质粒 p CMX-ENV,该质粒转染 Vero细胞后可在细胞内表达 E蛋白。作者就其在小鼠肌内 (im)和鼻内 (in)接种对脑内 (ic) JEV攻击的防御作用进行了研究。　　对 4～ 6周龄异系交配瑞士雄性小鼠间隔两周在四头肌 im接种 5 0 μg DNA质粒 ;或间隔 1周共五次 in接种 2 0 μg DNA质粒。末次接种后两周 ,用 JEV P2 0 788株作 ic攻击(1 0 0 pfu/鼠 ) ,每日观察至攻击后 1 5天。　　经 im免疫 p CMXENV的小鼠的存活率为 33%～ 70 % ,总体存活率为 5 1± 1 2 %。经 in免疫 p CMX…     

由重组口服沙门菌疫苗载体诱导的长期免疫记忆

编码血凝素的 hag B是一种潜在的毒力因子 ,先前的研究证实表达 hag B基因的鼠伤寒杆菌载体可诱导强烈的血清 Ig G和 Ig A抗体应答及显著的唾液、肠道和阴道 Ig A应答。然而尚未对由这种载体诱导的免疫记忆的持续性进行测定 ,因此 ,作者就这一问题进行研究。　　 6～ 8周龄雌性 BL AB/c小鼠于 0周的第 1、3和 5天免疫 1 0 9鼠伤寒杆菌 X40 72 /p DMD1 3次后 ,第 1组动物于 5 2周再加强免疫 1次 ,第 2组动物于 1 4和 5 2周再加强免疫 2次。采集血清、唾液和阴道洗液以EL ISA检测抗 hag B Ig G和 Ig A抗体水平。　　试验结果表明 ,…     

香菇多糖联合氟尿嘧啶体内外抗肝肿瘤作用的研究

目的:研究香菇多糖与氟尿嘧啶(5-FU)的联合抗肝肿瘤作用。方法:采用MTT法检测香菇多糖联合5-FU对H22细胞增殖抑制作用;PI单染法检测细胞周期;接种H22细胞昆明小鼠为模型,进行体内抑瘤作用的考察,测定抑瘤率、脾/胸腺指数以及脾组织细胞因子白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果:体外研究结果表明,香菇多糖的加入并没有进一步提高5-FU对H22细胞的抑制率,对细胞周期也没有明显的影响;体内抑瘤实验表明,香菇多糖与5-FU具有协同抑瘤作用,与单独使用5-FU比较,香菇多糖25,50 mg·kg-1联合5-FU组抑瘤率显著提高(P<0.05);香菇多糖25、50 mg·kg-1可以纠正5-FU所致的荷瘤小鼠免疫抑制作用,并能提高荷瘤小鼠脾/胸腺指数。结论:香菇多糖与5-FU具有协同抑瘤作用,其机制为非特异性免疫刺激,并非直接杀伤肿瘤细胞。