化滞柔肝颗粒对酒精联合脂多糖诱导的酒精性肝炎小鼠的保护作用*

目的 观察化滞柔肝颗粒对酒精联合脂多糖诱导的酒精性肝炎小鼠的保护作用。方法 将80只ICR小鼠随机分成正常组、模型组、小、中、大剂量化滞柔肝组和护肝片处理组,通过灌胃给予56%北京红星二锅头（12 ml?kg-1.d-1）和脂多糖（5 mg?kg-1,2次/w）腹腔注射,建立酒精性肝炎小鼠模型,同时给予相应的药物灌胃,连续10 w。在末次给药后,解剖动物,取血清和肝组织,进行相应的检查。结果 在实验10 w末,模型组肝组织肝细胞水肿,胞浆疏松,其肝质量指数、血清ALT和AST水平分别为 （5.77±0.67） %、（82.22±6.20） U/L和 （93.43±17.30） U/L,均显著高于正常组[分别为（4.44±0.42） %、（35.83±3.84） U/L和 （66.43±5.14） U/L,P<0.05];大剂量化滞柔肝组肝质量指数为（5.24±0.36）%,显著低于模型组 [（5.77±0.67） %,P<0.05],小、中、大剂量化滞柔肝颗粒组和护肝片组ALT和AST水平均显著低于模型组（P<0.001）;小、中、大剂量化滞柔肝颗粒组和护肝片组的CK分别为（118.93±10.15） U/L、（102.33±8.07） U/L、（119.45±19.26） U/L和（104.00±8.15） U/L,均显著低于模型组[（227.50±50.10） U/L,P<0.001];小、中、大剂量化滞柔肝组和护肝片组血清TBIL水平均显著低于模型组（P<0.01）;各试验组之间血脂水平均无明显变化。结论 化滞柔肝颗粒对酒精联合脂多糖诱导的酒精性肝炎小鼠有保护作用,为化滞柔肝颗粒将来用于临床治疗酒精性脂肪肝提供了试验支持。     

小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用*

目的 探讨小檗碱（BBR）对脂多糖（LPS）刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法 体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组：①对照组（培养基）;②LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml）;③BBR组（培养基+BBR 10 μM）;④BBR/LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml+BBR 10μM）。在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western-blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达。结果 在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为（683.3±98.9）μg/ml和（849.0±89.7）μg/ml)以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义（P>0.05）;与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度（1886±176.0 μg/ml）显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度（1071.0±65.9 μg/ml）显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱。结论 BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性。     

小檗碱在溃疡性结肠炎中作用及机制的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性非特异性肠道炎性疾病,其发病机制可能与遗传、环境、免疫及微生物有关。小檗碱是黄连的主要成分,临床上主要用于抗炎。近年来研究发现小檗碱对UC有良好的疗效,但治疗机制尚不完全清楚,可能通过调整肠道菌群结构、保护肠道屏障功能、调节免疫应答反应、影响氧化应激等来发挥治疗作用,该文就此作一综述,为小檗碱应用于UC治疗提供理论依据。     

酒精性肝炎小鼠肝肠组织变化与内毒素血症的关系探讨

目的酒精性肝病常伴发肠源性内毒素血症,但两者孰因孰果尚不明确。本研究的目的是探讨肠源性内毒素血症与酒精性肝病的关系。方法 20只C57BL/6小鼠被随机分为对照组和模型组,采用饲喂Lieber-Decarli无酒精和含酒精液体法制备酒精性肝炎模型。6周后取小鼠肝脏和结肠组织进行病理学观察;采用酶联免疫吸附法检测血清内毒素、二胺氧化酶和D乳酸含量;采用高效液相色谱法分析尿中乳果糖和甘露醇含量比值,以动态观察小鼠肠道通透性的变化。结果模型组动物肝细胞明显脂肪变,说明模型制备成功;模型组动物结肠粘膜变薄,萎缩,肠上皮细胞脱落,病理学评分(3.41±0.59)与对照组(2.36±0.43)比,差异有统计学意义(P=0.04);模型组和对照组动物血清内毒素水平分别为0.40±0.07Eu/L和0.14±0.03Eu/L(P=0.02),二胺氧化酶分别为4.17±0.88 U/mL和2.09±0.39U/mL(P=0.03),D乳酸分别为8.53±1.10mg/L和6.58±1.00mg/L(P=0.04),差异均有统计学意义;模型组小鼠1~6周末尿乳果糖/甘露醇(L/M值)排泄率分别是2.28±0.33(P>0.05)、2.55±0.40、2.49±0.18、2.51±0.55、2.46±0.59和2.59±0.44,对照组则分别是2.16±0.30、2.34±0.33、2.27±0.24、2.01±0.27、2.24±0.26和2.17±0.31,后5周两组比,均有显著性差异(P<0.05)。结论肠道通透性的增加早于肝脏损伤,肠道通透性增加引起的内毒素血症是酒精性肝炎的关键诱发因素。     

小檗碱的抗动脉粥样硬化作用及其机制

小檗碱是治疗胃肠道疾病的一种传统中药.随着研究的不断深入,新近研究结果显示小檗碱具有防治冠心病的作用.故小檗碱抗动脉粥样硬化的作用成为心血管病研究领域所注视的问题之一.本文从调脂,抗内皮损伤,抗炎症反应以及抗血栓等角度对小檗碱抗动脉粥样硬化的作用及机制加以综述.     

小檗碱对兔缺血再灌注心肌损伤的保护作用

目的探讨小檗碱对家兔心肌缺血再灌注细胞的保护作用及其作用机制。方法取35只新西兰大白兔随机分为假手术组、模型组及小檗碱小、中、大剂量组,后四组在体制作心肌缺血再灌注损伤模型;小檗碱小、中、大剂量组分别予小檗碱3、6、12 mg/kg干预7 d。检测各组血清天冬氨酸氨基转换酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流氏细胞仪检测心肌细胞凋亡率和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与模型组比较,小檗碱小、中、大剂量组血清LDH、CK-MB、AST水平及心肌组织MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显升高,心肌细胞凋亡率及Bax指数明显降低,Bcl-2指数明显升高(P均<0.05),且呈剂量依赖性。结论小檗碱对家兔心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

盐酸小檗碱对糖尿病大鼠胸主动脉内皮损伤的保护作用

目的 探讨盐酸小檗碱对2型糖尿病血管内皮功能损伤的保护作用.方法 采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养的方法建立2 型糖尿病大鼠模型.将模型动物随机分为模型组、盐酸小檗碱组,另设正常对照组以及正常盐酸小檗碱组.用药组灌胃给药8 w后,做葡萄糖耐量实验;检测各组动物血清中空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹血清胰岛素(FINS)的水平;检测血清中一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;免疫组织化学方法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 与模型组比较,盐酸小檗碱治疗组FPG、TC、TG水平明显下降(P<0.05),血清胰岛素水平有所升高,但无显著性差异(P＞0.05);盐酸小檗碱能明显提高糖尿病大鼠胰岛素敏感指数,同时提高大鼠对腹腔注射葡萄糖的耐受力,改善胰岛素抵抗(均P<0.01);盐酸小檗碱可显著降低糖尿病组大鼠血清中NO含量,提高SOD水平(P<0.05,P<0.01);显著降低胸主动脉组织eNOS蛋白表达(P<0.05);而正常大鼠给予盐酸小檗碱治疗,上述指标未出现明显改变.结论 盐酸小檗碱对2型糖尿病大鼠血管内皮损伤具有明显的保护作用.     

益生菌对肠黏膜屏障紧密连接蛋白保护作用的研究进展

正常肠道除具有消化吸收食物及蠕动功能外,还有激素分泌、免疫调节和黏膜屏障功能。肠上皮细胞间紧密连接在调节肠黏膜屏障通透性和维持肠上皮细胞紧密性中发挥重要的作用。紧密连接是包含众多蛋白的复合体,可调节细胞旁的通透性,其中跨膜蛋白claudin-1最具代表性。研究报道,在炎症性肠病、肠道感染时,由于紧密连接崩解导致肠黏膜屏障断裂破坏,引起肠上皮细胞旁通透性增加。有研究发现肠道菌群失调与肠黏膜屏障功能失调有关。益生菌对因紧密连接蛋白崩解导致的肠黏膜屏障破坏具有保护作用,此文就相关研究进展作一综述。     

小檗碱对非甾体消炎药相关性肠损伤的保护作用及其机制研究

背景：近年非甾体消炎药（NSAIDs）相关性肠损伤的发生率明显升高,但目前尚缺乏有效防治NSAIDs相关性肠损伤的药物。目的：研究中药小檗碱对NSAIDs相关性肠损伤的治疗作用及其机制。方法：将40只大鼠随机分为对照组、模型组以及低、中、高剂量小檗碱干预组（分别为25、50、75mg·kg-1·d-1）。采用7.5mg·kg-1·d-1双氯芬酸制备NSAIDs相关性肠损伤模型。造模第5d处死所有大鼠,行小肠黏膜大体、组织学评分。以ELISA法检测小肠黏膜前列腺素（PG）E2含量,硝酸还原酶法检测小肠黏膜和血清NO含量,免疫组化法检测小肠黏膜环氧合酶（COX）-1、COX-2表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠小肠大体评分和组织学评分明显升高（P〈0．05）,小肠黏膜PGE,含量明显降低（P〈0．05）,小肠黏膜和血清NO含量明显升高（P〈0．05）,小肠黏膜COX-1表达明显降低（P〈0．05）,COX-2表达明显升高（P〈0．05）。给予低、中、高剂量小檗碱干预后,上述指标明显改善（P〈0．05）。结论：小檗碱对NSAIDs相关性肠损伤具有保护作用,其机制可能与小檗碱致小肠黏膜PGE：、COX-1表达升高以及组织和血清NO含量、COX-2表达降低有关。     

小檗碱对大鼠冷缺血再灌注损伤肝脏的保护作用

目的：观察小檗碱对大鼠冷缺血再灌注损伤肝脏的保护作用。方法18只健康雄性SD大鼠,随机分为3组各6只。 A组仅进行开关腹操作,B组于术前14 d给予等量生理盐水灌胃,C组于术前14 d给予小檗碱100 mg/（ kg＆#183; d）灌胃。 B、C组建立原位肝脏冷缺血再灌注损伤模型。于再灌注后6 h观察各组肝脏功能,炎症反应和组织病理的情况。结果与A组相比,B、C组大鼠肝功能ALT、AST及炎症因子IL-1β、IL-6的表达均高（ P均＜0．01）;且C组上述各指标表达水平较B组低（P均＜0．05）。肝脏组织病理显示B组肝组织损伤明显,C组肝组织损伤较B组轻。结论小檗碱可以明显降低大鼠冷缺血再灌注损伤肝脏的炎症反应,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤,起到对肝脏的保护作用。     

暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降

目的:研究暴发性肝衰竭小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化.方法:BALB/c小鼠150只随机分为生理盐水对照组(n=30)、内毒素(LPS)对照组(n=30)、D-氨基半乳糖(D-GalN)对照组(n=30)和暴发性肝衰竭(LPS GalN)组(n=60).采用D-GalN和LPS联合ip制备暴发性肝衰竭小鼠动物模型.应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中,小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位、表达及mRNA的变化.结果:occludin蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在暴发性肝衰竭组小鼠,6h时occludin的阳性染色开始减少,9h时更为明显.Westernblot结果与免疫组织化学结果相一致,6h时开始下降(0.48±0.07),9h达到最低值(0.36±0.05),与生理盐水对照组(0.71±0.09)相比差异显著(P<0.05).实时定量PCR结果显示,暴发性肝衰竭小鼠2h时occludinmRNA即开始下降(0.85±0.12),6h时达到最低值(0.72±0.04),与生理盐水对照组(1.00±0.05)相比有明显差异(P<0.05),9h时有所恢复(0.93±0.10).结论:在暴发性肝衰竭过程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降,其mRNA也呈下调趋势.     

益生元对急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

目的 研究肠道补充益生元对急性胰腺炎肠上皮细胞紧密连接和屏障功能的影响.方法 Wistar大鼠腹腔注射左精氨酸建立AP模型,按随机数字法分组法分成对照组、AP组、益生元组.益生元组于造模前7 d开始给予益生元4 g·kg-1·d-1.建模后12 h处死大鼠,心脏取血检测血浆二胺氧化酶(DAO)活性,观察空肠病理变化、采用免疫组化方法检测紧密结合蛋白Occludin的含量.结果 AP组的血浆DAO活性为(7.29±0.68)U/L,显著高于对照组的(2.01±0.34)U/L(P＜0.01)和益生元组的(3.44±0.59)U/L(P＜0.05).AP组肠上皮occludin蛋白表达的灰度值为95.1±9.2,明显高于对照组的44.7±8.2和益生元组的59.7±7.8(P＜0.01).益生元组occludin表达也显著高于对照组(P＜0.05).结论 AP大鼠补充益生菌可增加肠上皮occludin蛋白表达,维持肠上皮紧密连接,维持正常的肠道通透性,从而达到保护肠黏膜屏障的效果.     

肿瘤坏死因子受体l在暴发性肝衰竭肠黏膜屏障功能损害中的作用

肠黏膜屏障对于抵抗肠道病原微生物的侵入具有重要作用。暴发性肝衰竭（FHF）时肠黏膜屏障的通透性增加^[1-4]，细菌及其毒性产物穿透肠壁进人体内，引起自发性腹膜炎甚至败血症。FHF时肠黏膜屏障通透性的增加与肠上皮细胞紧密连接的破坏有关。我们的前期研究发现，在FHF时，肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降，     

Sieving characteristics of cytokine-and peroxide-induced epithelial barrier leak:Inhibition by berberine

AIM:To study whether the inflammatory bowel disease(IBD)colon which exhibits varying severity and cytokine levels across its mucosa create varying types of transepithelial leak.METHODS:We examined the effects of tumor necrosis factor-α(TNF-α),interferon-γ(IFN-γ),interleukin-1-β(IL1β)and hydrogen peroxide(H_2O_2)-singly and in combinations-on barrier function of CACO-2 cell layers.Our focus was on the type(not simply the magnitude)of transepithelial leak generated by these agents as measured by transepithelial electrical resistance(TER)and transepithelial flux of ~(14)C-D-mannitol,3H-Lactulose and ~(14)C-Polyethylene glycol as radiolabeled probe molecules.The isoquinoline alkaloid,berberine,was then examined for its ability to reduce specific types of transepithelial leak.RESULTS:Exposure to TNF-α alone(200 ng/mL;48 h)induced a 50% decrease in TER,i.e.,increased leak of Na~+ and Cl--with only a marginal but statistically significant increase in transepithelial leak of ~(14)C-mannitol(Jm).Exposure to TNF-α + IFN-γ(200 ng/mL;48 h)+ IL1β(50 ng/mL;48 h)did not increase the TER change(from TNF-α alone),but there was now a 100% increase in J_m.There however was no increase in transepithelial leak of two larger probe molecules,~3H-lactulose and ~(14)C-polyethylene glycol(PEG).However,exposure to TNF-α + IFN-γ + IL1β followed by a 5 h exposure to2 mmol/L H_2O_2 resulted in a 500% increase in ~(14)C-PEG leak as well as leak to the luminal mitogen,epidermal growth factor.CONCLUSION:This model of graded transepithelial leak is useful in evaluating therapeutic agents reducing IBD morbidity by reducing barrier leak to various luminal substances.     

肠黏膜细胞的紧密连接与肠壁通透性的研究进展

肠黏膜细胞的紧密连接是构成肠黏膜屏障的重要结构基础,在调节肠黏膜通透性中发挥着重要的作用.其结构的破坏,可导致肠壁通透性增高,引起细菌移位、全身炎症反应及多器官功能受损.本文就肠黏膜紧密连接的结构和功能、与通透性的影响因素及改善措施进行了综述.     

乌司他丁对乙醇诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对乙醇诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用。方法培养Caco-2细胞至形成肠上皮细胞屏障模型,分为空白对照组、乙醇组(终体积浓度10%)和不同浓度乌司他丁治疗组(750 U/mL、1 500 U/mL、3 000 U/mL)。测定单层上皮的跨上皮细胞电阻(TEER)及荧光素钠透过率,免疫荧光法及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1在细胞单层的定位及表达量,透射电镜观察细胞紧密连接的超微结构。结果与对照组对比,乙醇组单层细胞的TEER降低(P0.001);荧光素钠透过率升高(P0.001);免疫荧光检测显示ZO-1蛋白表达断续不完整,荧光强度弱;Western blot检测显示ZO-1蛋白表达水平降低(P0.001);透射电镜结果示细胞刷状缘受损,排列紊乱,细胞间连接模糊。乌司他丁治疗组的上述指标均改善(P均0.05),其中3 000 U/mL乌司他丁组的改善最明显(P均0.05)。结论乌司他丁对乙醇诱导的肠单层上皮细胞屏障损伤具有保护作用。     

酒精性肝炎的治疗进展

酒精性肝炎往往导致肝硬化及肝癌,其重症患者短期死亡率相当高.迄今为止,尚无任何药物可以根治这一顽疾,现有临床治疗仅停留于对病情的缓解和营养补充层次.肝脏移植是酒精性肝炎重症患者最佳的、也是最无奈的选择,但他仍然面临移植手术时机和患者适应症的选择问题.近年随着酒精性肝炎发病机制的逐渐阐明,揭示了肝细胞凋亡以及各种细胞因子在其病程发展中所扮演的重要角色,由此引发了新一轮寻找酒精性肝炎特效疗法的热潮.