慢性丙型肝炎患者外周血滤泡辅助性T淋巴细胞表面PD-1受体表达及意义研究*

目的 探讨不同血清病毒载量的慢性丙型肝炎（CHC）患者外周血滤泡辅助性T淋巴细胞（Tfh）表面程序性死亡受体-1（PD-1）表达情况。方法 根据血清HCV RNA水平不同,将180例CHC患者分为低病毒载量组76例,3 lg copies/ml≤血清HCV RNA<6 lg copies/ml和高病毒载量组104例,血清HCV RNA≥6 lg copies/ml。比较两组外周血Tfh细胞百分比、Tfh细胞表面PD-1阳性率、外周血T、B淋巴细胞亚群、外周血CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞表面PD-1表达和血清白细胞介素21（IL-21）水平的差异。结果 低病毒载量组和高病毒载量组血清HCV RNA水平分别为（4.5±1.2）lg copies/ml和（6.4±0.7）lg copies/ml,Tfh细胞表面PD-1阳性百分比分别为（26.2±2.2）%和（37.2±1.1）%,Tfh细胞百分比分别为（7.9±0.7）%和（5.1±0.4）%,血清IL-21水平分别为（46.8±1.3） ng/L和（21.7±1.1） ng/L,差异均有统计学意义（P<0.01）;低病毒载量组和高病毒载量组外周血CD4⁺T细胞百分比分别为（51.1±4.6）%和（37.6±4.4）%,CD8⁺T细胞百分比分别为（24.0±3.1）%和（31.7±3.9）%, CD4⁺T/CD8⁺T细胞比值分别为（3.3±0.2）和（2.3±0.1）,CD19⁺B细胞百分比分别为（16.7±3.9）%和（11.8±3.2）%,差异具有统计学意义（P<0.01）;低病毒载量组和高病毒载量组外周血CD4⁺T细胞表面PD-1阳性率分别为（10.1±2.3）%和（2.4±0.6）%],CD8⁺T细胞表面PD-1阳性率分别为（6.3±2.2）%和（1.0±0.3）%,差异也具有统计学意义（P<0.01）。结论 不同血清病毒载量的CHC患者外周血Tfh和T淋巴细胞亚群以及血清白细胞介素21水平存在显著差异,进一步探讨它们对病情、抗病毒治疗应答和预后的关系,将具有十分重要的临床意义。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8+CD28+T淋巴细胞百分比的变化及其临床意义探讨

目的 探讨不同病程阶段的慢性乙型肝炎患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比的变化,以及CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比变化与血清HBsAg水平的关系。方法 2018年4月~2018年8月我院诊治的慢性乙型肝炎患者88例,其中免疫耐受期20例,免疫清除期28例,非活动期20例,再活动期20例,另选择健康人20例。使用流式细胞术检测外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比。结果 健康人与免疫耐受期患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（26.1±3.5）%和（26.3±3.4）%,差异无统计学意义（P>0.05）;免疫清除期患者CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比为（40.1±4.7）%,显著高于健康人（P<0.05）;非活动期和再活动期患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（20.3±2.2）%和（26.1±2.2）%,显著低于健康人（P<0.05）;外周血HBsAg低、中、高三组人群外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比分别为（24.0±7.5）%、（28.4±8.9）%和（33.2±8.5）%,各组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 不同病程阶段的慢性乙型肝炎患者外周血CD8⁺CD28⁺T淋巴细胞百分比存在明显差异,可能与病毒长期刺激机体免疫系统,导致免疫系统功能失调有关,而这种失调可能参与了慢性乙型肝炎的发病过程。     

自身免疫性肝炎患者肝组织程序性死亡受体1表达及其临床意义探讨*

目的 观察自身免疫性肝炎（AIH）患者肝组织程序性死亡受体1（PD-1）表达情况及其临床意义。方法 2015年5月~2017年4月我院收治的AIH患者68例（活动期48例,缓解期20例）,在超声引导下使用BARD一次性全自动活检枪行肝穿刺活检术取得肝组织。另选择同期肝血管瘤患者13例,经手术取得肝组织。采用ABC法检测肝组织PD-1表达。比较肝组织PD-1表达情况并采用Pearson相关分析其与血生化学和血清学指标的相关性。结果 48例活动期AIH患者血清TBIL、AST、ALT、ALP和GGT水平分别为（72.1±48.9） μmol/L、（243.1±170.4） U/L、（345.3±217.7） U/L、（154.3±94.6） U/L和（86.5±43.5） U/L,显著高于20例缓解期患者【分别为（14.8±4.2） μmol/L、（28.3±8.7） U/L、（27.6±8.8） U/L、（73.3±51.3） U/L和（71.3±27.3） U/L,P<0.05】;活动期患者血清GLO和IgG水平分别为（34.3±11.3） g/L和（23.2±7.5） g/L,显著高于缓解期【分别为（30.7±10.2） g/L和（11.7±4.6） g/L,P<0.05】; 68例AIH患者肝组织PD-1表达阳性率为（13.61±6.87）%,显著高于对照组的（2.25±0.68）%（P<0.05）,而48例活动期患者肝组织PD-1表达阳性率为（16.56±7.81）%,显著高于缓解期组的（6.56±3.21）%（P<0.05）;48例活动期患者肝组织界面性肝炎为93.75%,淋巴细胞浸润为89.58%,单管破坏性炎症为6.25%,而20例缓解期患者无界面性肝炎、淋巴细胞浸润或单管破坏性炎症表现;活动期AIH患者肝组织PD-1表达阳性率与血清TBIL （r=0.996,P<0.001）、AST（r=0.989,P<0.001）、ALT（r=0.995,P<0.001）、ALP（r=0.998,P<0.001）、GGT（r=0.995,P<0.001）、GLO（r=0.996,P<0.001）和IgG（r=0.997,P<0.001）均呈正相关,在缓解期AIH患者,肝组织PD-1表达阳性率与血清TBIL （r=0.999,P<0.001）、AST（r=0.999,P<0.001）、ALT（r=0.999,P<0.001）、ALP（r=0.999,P<0.001）、GGT（r=0.999,P<0.001）和IgG（r=0.999,P<0.001）呈正相关（P<0.001）。结论 AIH患者肝组织PD-1表达增强,与肝组织炎症活动度密切相关,其参与肝损伤的作用机制还需要进一步探讨。     

自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的分布特点。方法 2011年8月至2013年8月我院收治的50例自身免疫性肝炎患者,常规检测外周血淋巴细胞亚群。结果 自身免疫性肝炎患者CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T、CD3⁺CD4⁺ T/CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B、CD5⁺CD19⁺B、CD5⁺CD19⁺B/CD19⁺B细胞比率分别为（46.952±21.107）%、（33.288±11.308）%、（1.592±0.356）%、（13.510±5.536）%、（8.448±6.089）%、（0.776±0.652）%,均显著高于正常人[（64.739±7.615）%、（25.245±3.076）%、（1.421±0.178）%、（9.940±1.207）%、（2.840±0.915）%、（0.294±0.100）%,P<0.05];AIH患者肝功能指标异常、免疫球蛋白升高,肝组织炎症活动指数升高;AIH患者外周血CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T比率与肝功能指标ALT、AST或HAI评分呈显著的正相关（P<0.05）,但与ALP、γ-GT、TBIL、DBIL无相关性（P>0.05）;B淋巴细胞亚群CD5⁺CD19⁺B细胞比率与肝功能指标中ALT、AST或HAI评分、血清lgG呈显著的正相关（P<0.05）,但与ALP、γ-GT、TBIL、DBIL、lgM、lgA无相关性（P>0.05）。结论 自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞亚群发生了明显的异常。     

腹腔镜下肝部分切除术治疗原发性肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平的变化*

目的 探讨腹腔镜肝部分切除术治疗原发性肝癌（PLC）患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平的变化。方法 2014年2月~2015年2月于我院治疗的PLC患者68例,采用随机数字表法分为腔镜组34例和开腹组34例,分别在不同方式下行肝肿瘤切除术。采用免疫浊度法检测血清IgG、IgA、IgM含量,采用酶联免疫吸附法检测血清血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（aFGF）和bFGF水平,使用流式细胞仪检测外周血CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺T细胞百分比。结果 术前,两组外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞百分比无显著性差异（P>0.05）,术后7 d,腔镜组CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞百分比分别为（57.2±5.6） %、（46.9±7.2）%和（28.4±5.3） %,与开腹组比,存在显著性差异【分别为（51.9±3.2） %、（41.2±6.4） %和（33.6±2.3） %,P<0.05】;血清VEGF、aFGF和bFGF水平分别为（18.4±5.1） ng/ml、（5.3±4.2） pg/ml和（6.5±4.3） pg/ml,显著低于开腹组【分别为（31.9±5.7）ng/ml、（8.7±5.2） pg/ml和 （8.4±6.9） pg/ml,P<0.05】;两组肝功能指标和血清免疫球蛋白水平变化无显著性差异（P>0.05）。结论 腹腔镜下肝切除术与开腹肝切除术治疗PLC患者比,可能因为创伤小而对机体的免疫功能影响较小。     

HIV/AIDS患者外周血程序性死亡受体-1的表达及临床意义

目的 探讨HIV感染及抗病毒治疗对程序性死亡受体-1(programmed death-1, PD-1)表达的影响。方法 根据是否接受抗病毒治疗将61例HIV/AIDS患者分为治疗组及未治疗组,并以35例健康者作为对照。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术探究基因PD-1 mRNA在人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达;通过双夹心抗体ELISA法测定血清中可溶性PD-1(sPD-1)表达水平。并比较不同CD4⁺ T淋巴细胞数的HIV/AIDS患者血清sPD-1的差异。结果 未治疗组、治疗组、健康组研究对象PBMC中PD-1 mRNA的相对表达量均数分别为0.337 8±0.064、0.578 2±0.073和0.771 5±0.124,健康组与未治疗组差异极显著,健康组与治疗组、治疗组与未治疗组之间差异显著(P=0.031、P=0.043);未治疗组、治疗组、健康组血清sPD-1浓度分别为42.22±2.21 ng/mL、38.24±2.79 ng/mL和29.88±1.41 ng/mL。健康组与未治疗组、治疗组,治疗组与未治疗组分别具有显著性差异(P=0.008、P=0.040和P=0.020)。差异性分析结果表明,未治疗组、治疗组CD4⁺T淋巴细胞数<350 个/mm³患者血清sPD-1水平均显著高于CD4⁺T淋巴细胞数>350 个/mm³患者。结论 抗病毒治疗在一定程度上使高水平sPD-1表达下调以促使PD-1/PD-L1通路的恢复,从而促进机体免疫重建。监测PD-1 mRNA及sPD-1的表达在HIV的辅助诊断和推断病情发展上具有一定的价值。     

射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者疗效及对外周血T细胞亚群的影响

目的 探讨射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者的疗效及其对外周血T细胞亚群的影响。方法 2014年1月~2016年2月间于我院接受TACE治疗的原发性肝癌患者97例,按照TACE术后是否接受射频消融治疗,将患者分为联合组52例和TACE组45例。采用ELISA法检测血清细胞因子。对两组患者的治疗效果、治疗前后T细胞亚群变化情况以及治疗后生存质量进行比较。结果 联合组总有效率为67.31%,显著高于TACE组的40.00% （P<0.05）;联合组疾病控制率为90.38%,显著高于TACE组的73.33%（P<0.05）;联合组治疗后3个月外周血CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺比值分别为（68.40±10.20）%、（45.76±6.83）%和（1.96±0.31）,均明显高于TACE组【（56.14±6.75）%、（33.27±5.16）%和（1.21±0.22）,P<0.05】,联合组CD8⁺T细胞百分比为（22.08±2.55）%,显著低于TACE组【（28.42±3.97）%,P<0.05】;联合组患者治疗后3个月外周血IL-6、IL-8和TNF-α水平分别为（129.45±67.14） pg/mL、（0.49±0.13） ng/mL和（134.78±88.20） pg/mL,均明显低于TACE组【（165.30±65.91）pg/mL、（0.72±0.20） ng/mL和（200.43±84.02）pg/mL,P<0.05】;联合组患者生活质量改善率为55.77%,显著高于TACE组的40.00%（P<0.05）,联合组患者并发症发生率为73.08%,与TACE组的71.11%相比无统计学差异（P>0.05）。结论 射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者近期疗效较好,可改善患者免疫功能,提高生存质量。     

雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗自身免疫性肝炎患者外周血淋巴细胞PD-1和PD-L1变化

目的 探讨应用雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗的自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血淋巴细胞程序性死亡因子-1(PD-1)和PD-1配体(PD-L1)表达的变化。方法 将76例AIH患者随机分为对照组38例和观察组38例,分别给予异甘草酸镁口服治疗或异甘草酸镁联合雷公藤多甙口服治疗,两组均治疗24周。使用CyFlow Counter流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞PD-1/PD-L1表达,包括PD-L1⁺/CD4⁺、PD-L1⁺/CD8⁺、PD-1⁺/CD4⁺和PD-1⁺/CD8⁺表达百分比,采用ELISA法检测血清γ-干扰素(IFN-γ)。结果 在治疗结束时,观察组血清谷丙转氨酶(ALT)水平为(48.9±9.7)U/L,显著低于对照组【(77.5±11.2)U/L,P<0.05】,血清谷草转氨酶(AST)水平为(45.5±7.3)U/L,显著低于对照组【(81.3±9.5)U/L,P<0.05】,血清碱性磷酸酶(ALP)水平为(65.5±2.3)U/L,显著低于对照组【(91.3±5.8)U/L,P<0.05】;外周血淋巴细胞PD-L1⁺/CD4⁺百分比为(15.4±4.5)%,显著低于对照组【(19.3±5.8)%,P<0.05】,外周血PD-L1⁺/CD8⁺为(6.5±2.7)%,显著低于对照组【(9.2±3.0)%,P<0.05】,外周血PD-1⁺/CD4⁺为(7.4±2.6)%,显著低于对照组【(12.5±3.1)%,P<0.05】,外周血PD-1⁺/CD8⁺为(7.5±1.7)%,显著低于对照组【(10.1±1.2)%,P<0.05】;血清GLO水平为(13.4±1.5)g/L,显著低于对照组【(18.3±1.8)g/L,P<0.05】,血清IgG水平为(10.9±2.4)mg/mL,显著低于对照组【(13.6±2.9)mg/mL,P<0.05】,血清IFN-γ水平为(13.0±2.4)ng/mL,显著低于对照组【(18.1±2.8)ng/mL,P<0.05】。结论 应用雷公藤多甙联合异甘草酸镁治疗AIH患者近期疗效较好,可能与改善了外周血T细胞PD-1和PD-L1表达有关,值得进一步研究。     

丙泊酚对肝部分切除术治疗的原发性肝癌患者外周血淋巴细胞亚群和血清肿瘤相关标志物水平的影响

目的 探讨丙泊酚对肝部分切除术治疗的原发性肝癌（PLC）患者外周血T淋巴细胞亚群和血清肿瘤相关标志物水平的影响。方法 2010年2月~2014年4月我院收治的PLC患者92例,采用随机数字表法将患者分为丙泊酚组和异氟醚组,每组46例。在行肝叶切除术时,分别采用相应的麻醉方法。使用流式细胞仪检测外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺细胞比值,采用酶联免疫吸附法检测血清E-钙蛋白（EC）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶（MMP）水平,并观察两组不良反应和生存情况。结果 在麻醉前,两组外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺细胞百分比和CD4⁺/CD8⁺细胞比值无显著性差异（P>0.05）,在术后1d,丙泊酚麻醉组血CD3⁺和CD4⁺细胞分别为（56.3±4.8） %和（36.8±5.7） %,显著高于异氟醚组的（52.5±4.5）%和（34.2±4.2）%（P<0.05）;在麻醉前,两组血清EC、VEGF和MMP水平无显著性差异（P>0.05）,在术后14d,丙泊酚麻醉组血清EC、VEGF和MMP水平分别为（1763.3±112.7） ng/ml、（201.9±36.9） pg/ml和（32.4±4.2）ng/L,显著低于异氟醚组的（2318.4±153.9） ng/ml、（369.9±56.8） pg/ml和（72.5±7.2） ng/L（P<0.05）;术后丙泊酚组白细胞下降发生率为47.8%,显著低于异氟醚组的69.6%（P<0.05）;随访3年,两组患者生存率无显著性差异（P>0.05）。结论 丙泊酚可有效减轻PLC患者术后免疫抑制状态,减少并发症的发生,可能有助于患者术后的康复。     

柴胡解毒汤联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群和细胞因子的变化

目的 分析柴胡解毒汤联合阿德福韦酯片治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者体内病毒水平与外周血淋巴细胞亚群和细胞因子的变化的关系,为临床治疗CHB患者提供新的思路。方法 2013年12月至2015年3月间我院收治的CHB患者60例,被分为A组、B组和C组。给予A组服用柴胡解毒汤治疗,给予B组服用阿德福韦酯片,C组在B组基础上,服用柴胡解毒汤治疗。3组均观察12 m。采用ELISA法检测血清HBV标记物和血清IL-2水平,采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA水平,使用贝克曼库尔特流式细胞仪检测T细胞亚群和自然杀伤细胞百分比。结果 在治疗12 m末,C组患者HBV DNA阴转率、ALT复常率和HBeAg阴转率分别为85.00%、80.00%和80.00%,均显著高于A组（分别为50.00%、65.00%和45.00%）或B组（分别为65.00%、55.00%和50.00%,P<0.05）;C组患者外周血CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞和CD4⁺/CD8⁺细胞比值分别为（65.2±9.6）%、（28.4±7.2）%和（1.1±0.3）,与A组【分别为（57.5±8.7）%、（45.7±5.4）%和（1.8±0.6）】或B组【（55.7±6.3）%、（23.2±9.5）%和（0.9±0.1）】比,差异显著（P<0.05）;C组患者外周血CD8⁺T细胞为（25.3±4.1）%,显著低于B组[（28.7±4.3)%, P<0.05];C组患者外周血NK细胞与A组或B组比,无显著性差异（P>0.05）,但血清IL-2水平【（3.6±0.8） ng/mL】显著高于B组【（2.8±0.5） ng/mL,P<0.05】;A组CD4⁺T细胞增加与HBV DNA载量减少呈显著正相关（P<0.05）;C组CD3⁺T细胞增加、CD8⁺T细胞减少、NK细胞增加与HBV DNA载量减少呈正相关（P<0.05）。结论 柴胡解毒汤联合阿德福韦酯片治疗慢性乙型肝炎患者可调节外周血淋巴细胞比例失调,打破免疫耐受,恢复肝功能,提高抗病毒效果。     

Hepatoma cells up-regulate expression of programmed cell death-1 on T cells

AIM： To investigate the effect of hepatoma cells on up-regulation of programmed cell death-1 （PD-1）, and the function of PD-1 on T cells. METHODS： HepG2 or HepG2.2.1.5 cells were cocultured with a lymphoma cell line-Jurkat cells. PD-1 expression was detected by flow cytometry. IL：2, INF-γ and IL-10 in culture supernatant were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Cytotoxic action of T cells was determined by MIF reduction assay-direct mononuclear cell cytotoxicity assay. RESULTS： The PD-1 expression on Jurkat cells increased by 16.17% ± 2.5% and 17.43% ± 2.2% after HepG2 or HepG2.2.1.5 cells were co-cultured for 48 h. The levels of IL-2, INF-γ and IL-10 in the culture supernatant were 202.9 ＋ 53.0 pg/mL, 88.6 ± 4.6 pg/mL and 63.7± 13.4 pg/mL respectively, which were significantly higher than those （102.9 ± 53 pg/mL, 39.3 ± 4.2 pg/mL, and 34.6 =E13.7 pg/mL） in the control group （P 〈 0.05）. The OD value for MTT assay in the blocking group （0.29 ± 0.06） was significantly higher than that （0.19 ± 0.09） in the control group （P 〈 0.05）. CONCLUSION： PD-1 expression on Jurkat cells is upregulated by hepatoma cells, cytokines and cytotoxic action are elevated after PD-1/PD-L1 is blocked.     

PD-1抑制剂pembrolizumab停药后出现的免疫相关肺炎一例并文献复习

目的探讨程序性死亡蛋白1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂所致免疫相关肺炎的临床特征、诊断、治疗和预后。方法回顾性分析上海长征医院收治的1例晚期食管癌患者使用PD-1抑制剂pembrolizumab并在停药后出现免疫相关肺炎的临床资料,并对相关文献进行复习。结果患者男,64岁,食管癌术后出现腹腔淋巴结转移,二线给予Keytruda(200mg,静脉注射,每3周1次)治疗8个周期,腹腔转移性淋巴结缩小,用药期间未见明显不良反应。停用Keytruda4周后,出现胸闷、气急,胸部CT显示双肺弥漫磨玻璃影、网格状影。抗细菌治疗无效,使用足量激素2周仍未见明显改善,激素减量并加用吡非尼酮2个月后双肺间质性改变明显改善,但转移性腹腔淋巴结再次增大。文献复习PD-1抑制剂所致免疫相关肺炎,发病的中位时间为用药后28个月,最常见的临床表现为气短、呼吸困难,发热相对少见;最常见的影像表现为双肺多发磨玻璃影、网格状影、实变影;病理类型以机化性肺炎为主;轻症患者足量激素治疗后缓慢规律减量预后较好,重症患者可联合免疫抑制剂治疗,3级以上病例病死率高。结论需要提高对PD-1/PD-L1抑制剂所致免疫相关肺炎的认识,停药后仍需定期随访,监测各系统免疫相关不良反应。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平及意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞程序性死亡分子-1(PD-1)及其主要配体PD-L1的表达情况。方法在50例乙型肝炎肝硬化患者和25例健康体检者,使用流式细胞仪检测外周血T细胞PD-1和PD-L1表达;采用荧光定量核酸扩增及测序法检测血清HBV DNA载量。结果对照组和肝硬化组外周血T细胞PD-1阳性表达率分别为11.93±1.23%和33.13±3.38%(P<0.05),PD-L1阳性表达率分别为10.59±1.88%和32.47±2.18%(P<0.05);Child-Pugh A级(30.58±2.99%和32.19±1.44%)、B级(34.61±1.43%和33.46±2.58%)和C级(34.2±2.31%和31.76±2.33%)患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达率无显著性相差(P>0.05);在肝硬化患者,T细胞表面PD-l和PD-Ll表达水平与血清HBV DNA载量呈明显正相关(r2=0.8326和:r2=0.643,P<0.05)。结论肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平明显上调,且与血清HBV DNA载量呈明显正相关,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒感染持续。     

Programmed cell death-1 inhibitor-related sclerosing cholangitis:A systematic review

BACKGROUND Programmed cell death-1(PD-1)inhibitor has been indicated for many types of malignancies.However,these inhibitors also cause immune-related adverse events.Hepatobiliary disorder is a phenotype of immune-related adverse event affecting 0%–4.5%of patients treated with PD-1 inhibitors.Recent studies have reported PD-1 inhibitor-related sclerosing cholangitis(SC);however,the associated clinical and pathological features are unclear.AIM To evaluate the clinical and pathological features of PD-1 inhibitor-related SC through a systematic review of the literature.METHODS The review,conducted using electronic databases in PubMed,was restricted to the period from January 2014 to September 2019 and focused on case reports/series on PD-1 inhibitor-related SC published in English.We scanned the references of the selected literature to identify any further relevant studies.Six cases previously studied by us,including three that have not yet been published,were included in this review.RESULTS Thirty-one PD-1 inhibitor-related SC cases were evaluated.Median age of patients was 67 years(range,43–89),with a male to female ratio of 21:10.The main disease requiring PD-1 inhibitor treatment was non-small cell lung cancer.Agents that caused PD-1 inhibitor-related SC were nivolumab(19 cases),pembrolizumab(10 cases),avelumab(1 case),and durvalumab(1 case).The median number of cycles until PD-1 inhibitor-related SC onset was 5.5(range,1–27).Abdominal pain or discomfort(35.5%,11/31)was the most frequent symptom.Blood serum tests identified liver dysfunction with a notable increase in biliary tract enzymes relative to hepatic enzymes,and a normal level of serum immunoglobulin G4.Biliary dilation without obstruction(76.9%,20/26),diffuse hypertrophy of the extrahepatic biliary tract(90.5%,19/21),and multiple strictures of the intrahepatic biliary tract(30.4%,7/23)were noted.In 11/23(47.8%)cases,pathological examination indicated that CD8+T cells were the dominant inflammatory cells in the bile duct or peribiliary tract.Although corticosteroids were mainly used for PD inhibitor-related SC treatment,the response rate was 11.5%(3/26).CONCLUSION Some clinical and pathological features of PD-1 inhibitor-related SC were revealed.To establish diagnostic criteria for PD-1 inhibitor-related SC,more cases need to be evaluated.     

Costimulatory molecule programmed death-1 in the cytotoxic response during chronic hepatitis C

Hepatitis C virus (HCV)-specific CD8~+ T cells play an important role in the resolution of HCV infection. Nevertheless, during chronic hepatitis C these cells lack their effector functions and fail to control the virus.HCV has developed several mechanisms to escape immune control. One of these strategies is the upregulation of negative co-stimulatory molecules such us programmed death-1 (PD-1). This molecule is upregulated on intrahepatic and peripheral HCV-specific cytotoxic T cells during acute and chronic phases of the disease, whereas PD-1 expression is low in resolved infection. PD-1 expressing HCV-specific CD8~+ T cells are exhausted with impairment of several effector mechanisms, such as: type-1 cytokine production, expansion ability after antigen encounter and cytotoxic ability. However, PD-1 associated exhaustion can be restored by blocking the interaction between PD-1 and its ligand (PD-L1). After this blockade, HCV-specific CD8~+ T cells reacquire their functionality. Nevertheless,functional restoration depends on PD-1 expression level.High PD-1-expressing intrahepatic HCV-specific CD8~+ T cells do not restore their effector abilities after PD-1/ PD-L1 blockade. The mechanisms by which HCV is able to induce PD-1 up-regulation to escape immune control are unknown. Persistent TCR stimulation by a high level of HCV antigens could favour early PD-1 induction, but the interaction between HCV core protein and gC1q receptor could also participate in this process. The PD-1/PD-L1 pathway modulation could be a therapeutic strategy, in conjunction with the regulation of others co-stimulatory pathways, in order to restore immune response against HCV to succeed in clearing the infection.     

PD-1/PD-L 1抗体在非小细胞肺癌治疗中的研究现状

程序性死亡因子1(programmed death-1,PD-1)存在于活化的T细胞和 B细胞表面,是一种重要的免疫共抑制分子。当 PD-1与程序性死亡配体1/2(programmed death-ligand 1/2, PD-L1/2)结合后,可以引起一系列的免疫抑制作用,并使肿瘤逃避免疫破坏。阻断 PD-1/PD-L1通路,则可能减弱其对免疫活性细胞的抑制作用,从而达到增强细胞免疫、杀灭肿瘤细胞的目的。目前大量研究证明PD-1/PD-L1抗体在非小细胞肺癌治疗中有显著的抗肿瘤活性。本文将对其研究现状加以综述。     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1及其配体表达的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎患者在抗病毒治疗过程中程序性死亡分子1(PD-1)及其主要配体PD-L1表达的变化情况及其与HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系.方法 对10例人类白细胞抗原(HLA)-A2阳性的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以替比夫定抗病毒治疗24 周,分别于治疗的0、12周和24周随访,检测HBV DNA水平、外周血单个核细胞(PBMC)表面PD-1和PD-L1表达水平、HBV特异性T淋巴细胞数量与其表达PD 1水平,及PBMC体外培养上清液中干扰素(IFN)γ水平.其中HBV DNA定量采用荧光定量PCR法检测;PBMC自新鲜血分离,部分PBMC加入重组HBcAg体外培养7d,加入HBV抗原表位肽五聚体复合体;PD-1和PD-L1阳性细胞、CD8'T淋巴细胞以及CD8和PD-1双阳性细胞用流式细胞仪检测;IFN γ水平用酶联免疫吸附试验检测.比较不同时间点PBMC表面PD-1和PD L1表达水平、HBV特异性CD8'T淋巴细胞数量及其PD-1表达水平、PBMC培养上清液中IFN γ水平.对抗病毒治疗前后对应指标数值的变化采用配对t检验分析.结果 治疗前HBV DNA水平为5.16～8.77 log10拷贝/ml,治疗24周时,7例HBV DNA水平低于检测下限,3例仍可检测到,但明显低于基线水平.2例HBeAg/抗-Hbe血清学转换,2例HBeAg阴转,6例仍维持HBeAg阳性.0、12周和24周PBMC表面PD 1表达水平分别为52.1%±17.0%、39.1%±18.2%和23.4%±16.3%(24周和0周比较,P＜0.01);PD-L1分别为45.6%±15.4%、34.6%±16.2%和20.9%±9.5%(24周和0周,P＜0.01;24周和12周比较P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞上PD-1表达水平分别为76.2%±10.4%、66.5%±15.4%和49.5%±25.3%(24周和0周比较,P＜0.01;12周和0周比较,P＜0.05;24周和12周比较,P＜0.05);HBV特异性T淋巴细胞分别为1.3%±0.5%、1.5%±1.0%和2.2%±1.5%; IFN γ水平(pg/ml)分别为91.7±82.1、99.4+93.5和109.0+86.6.24周HBeAg/抗-Hbe血清学转换者上述指标变化明显大于无HBeAg/抗-Hbe血清学转换者.结论 直接抑制HBV复制能降低PD-1、PD-L1表达水平,并增加HBV特异性CD8'T淋巴细胞的数量和功能.早期PD-1快速下降和HBV特异性T淋巴细胞数量及功能的恢复与早期HBeAg/抗-Hbe血清学转换的关系有待于进一步研究.     

PD-1/PD-L1信号通路在乙型病毒性肝炎免疫调节作用的研究进展

程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)是由pdcdl基因编码的一个抑制性共刺激分子,在维持外周耐受中起着关键性的作用,并在慢性病毒感染、肿瘤免疫及自身免疫性疫病的发生过程中发挥重要的生物学作用,受到广泛的关注.本文主要综述PD-1/PD-L1信号通路在乙型病毒性肝炎免疫调节作用的研究进展.     

Contributions of PD-1/PD-L1 pathway to interactions of myeloid DCs with T cells in atherosclerosis

Although inflammatory cells contribute to immunopathogenesis of atherosclerosis, underlying molecular mechanisms remain largely undefined. Recently, it has been demonstrated in mouse model that Programmed death-1 (PD-1)/PD-1 ligand (PD-L) pathway plays a critical role in proatherogenic immune responses. Here we examined the expression of PD-1 and PD-L1 on peripheral blood mononuclear cells by flow cytometry in 76 patients with coronary artery disease (CAD), and 25 healthy volunteers. The expression of PD-1 and PD-L1 is significantly down-regulated on T cells and myeloid dendritic cells (mDCs) in CAD patients than in healthy individuals, respectively. More importantly, we found that decreased PD-L1 expression on mDCs is related with the increased T cell immune responses in CAD patients. In addition, stimulation of PD-L1 expression in vitro could attenuate the stimulatory ability on allogeneic T cell proliferation and its cytokine production, including IFN-γ and IL-2, and also influence the production of IL-10 and IL-12 by mDCs. Taken together, we can draw a conclusion that PD-1/PD-L1 pathway plays a key role in the regulation of proatherogenic T cell immunity by intervening antigen presenting cell (APC)-dependent T cell activation, which associates with pro-inflammatory or anti-inflammatory cytokine production, and further studies need gain insight into that this pathway represents a strategy of immunotherapy for atherosclerosis.     

大动脉炎患者外周血单个核细胞中Toll样受体和程序性死亡受体1的表达

目的探究大动脉炎的发病机制及活动性是否与Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)及免疫检查点程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)有关,以及二者之间是否存在调控关系。方法纳入大动脉炎患者20例,以10名健康成人作为对照组,采集外周血,分离单个核细胞并提取总RNA,用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中TLRs、PD-1等共20个目的基因的相对含量。结果与健康对照组相比,大动脉炎患者PBMCs中TLR2(P=0.0146)、TLR4(P=0.0439)、IκBα(P=0.0016)、PD-1(P=0.0386)上调,CD40(P<0.0001)、TCR(P=0.0054)下调;活动性大动脉患者PBMCs中p50(P=0.0048)、p65(P=0.0127)、IκBα(P=0.0015)、PD-1(P=0.0251)上调,CD40(P=0.0008)下调;非活动性大动脉患者PBMCs中TLR2(P=0.0133)、IκBα(P=0.0350)上调,CD40(P=0.0010)、CD28(P=0.0023)、TCR(P=0.0015)下调。活动性大动脉炎者PBMCs中的p50(P=0.0381)、CD28(P=0.0023)、TCR(P=0.0074)较非活动组上调。结论TLR2、TLR4活化可能与大动脉炎的发病机制有关,对TLRs和PD-1的调控可能会影响大动脉炎活动性。