抗心肌肌凝蛋白重链的单链抗体VH和VL基因的合成

目的为研制心肌显像剂-抗人心肌肌凝蛋白重链（HCMHC）的单链抗体,合成抗HCMHC单链抗体的VH和VL基因。方法用TRIZOL试剂从抗HCMHCMcAb杂交瘤细胞提取总RNA,合成第一链cDNA,以这第一链cDNA为模板,用合成的特异引物、DNA聚合酶和四种单核苷酸,对重链可变区（VH）基因和轻链可变区（VL）基因进行PCR扩增。对各步骤的产物进行鉴定,并做了对RNA的稳定性与贮存温度的关系,MgCl2浓度和循环温度的最优化的选择。结果合成的第一链cDNA纯度达95％;扩增产物的琼脂糖凝胶电泳带呈单一明亮泳带,VH和VL基因分子量分别为340bp和320bp,与文献相一致。结论成功合成了VH和VL基因,为心肌显像及其显像剂抗HCMHC单链可变区抗体的研究打下了基础。     

抗汉滩病毒McAb可变区基因克隆及序列分析

目的克隆和分析抗汉滩病毒单克隆抗体(McAb)H7可变区基因.方法根据鼠源抗体可变区(V)氨基酸序列,设计合成一组抗体重、轻链可变区(VH/VK)简并引物.采用一步法提取McAb H7细胞总RNA,通过RT-PCR扩增V基因,并进行核苷酸序列测定和分析.结果通过RT-PCR成功克隆了H7可变区重轻链基因,序列分析表明均为开放阅读框,符合小鼠抗体框架结构,含有明确的4个骨架区和3个抗原决定簇互补区,与抗体二硫键形成有关的两个特征性半胱氨酸亦高度保守.同源对比表明,H7-VK长357 bp,编码119个氨基酸,属JK4重排;H7-VH长360 bp,编码120个氨基酸,属JH4重排.经GenBank查询证实为新基因,登记号为AY245601和AY245602.结论 McAb H7可变区基因的获得,为有目的地开展HFRSV基因工程抗体的遗传改造及体外亲和力成熟等研究奠定了基础.     

一株抗腮腺炎病毒Fab抗体克隆的筛选

[目的]获得抗腮腺炎病毒Fab段基因工程抗体。[方法]将腮腺炎病毒抗原（MUV-Ag）包被在固相ELISA板中,采用＂吸附-洗脱-扩增＂的方法,对已构建的抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库进行富集。从富集后的抗体库中筛选抗腮腺炎病毒阳性克隆,并交叉筛选鉴定其特异性。[结果]在对176个克隆筛选后,再用麻疹病毒抗原（MEV-Ag）、混合副流感病毒抗原（mPIV-Ag）和呼吸道合胞病毒抗原（RSV-Ag）进行交叉筛选,最终获得特异性抗MUV-Ag阳性克隆2个（B206和D210）。对其中1株B206序列分析表明它的κ轻链V基因属于VκⅠ（O12）亚群,J基因属于Jκ1;γ链V基因属于VH1-69亚群,D基因来自D3-10,J基因则来自JH6。[结论]用腮腺炎病毒抗原成功地从抗体库中筛选到特异性阳性克隆,构建的噬菌体抗体库是有效的。     

小鼠抵抗素基因及其反义核酸真核表达体系的构建与鉴定

目的构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础。方法用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中,通过RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA克隆于pGEM-T载体,经双酶切及测序鉴定克隆成功后再亚克隆于pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)真核表达载体,并测序鉴定。结果PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363bp相符;重组pGEM-T被EcoRⅠ和XbaⅠ内切酶切为约3000bp和355bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resistin基因mRNA编码区序列完全一致。重组pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷酸序列一致。结论成功克隆载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒。     

小鼠抵抗素基因及其反义核酸真核表达体系的构建与鉴定

目的构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础。方法用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中．通过RT—PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA克隆于pGEM-T载体,经双酶切及测序鉴定克隆成功后再亚克隆于pcDNA3．1^（＋）或pcDNA3．1^（-）真核表达载体,并测序鉴定。结果PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363 bp相符;重组pGEM—T被EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ内切酶切为约3000bp和355bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resistin基因mRNA编码区序列完全一致。重组pcDNA3．1^（＋）和pcDNA3．1^（-）测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷酸序列一致。结论成功克隆载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒。     

肠道病毒71型福建分离株(FJ08089)全基因组序列分析

[目的]分析2008年福建省手足口病患儿标本肠道病毒71型(EV71)分离株FJ08089全基因组序列特征。[方法]应用RD细胞,从患者疱疹液标本分离EV71,用RT-PCR方法扩增分离株病毒的全基因组,分析其基因组特征。[结果]FJ08089株的基因组长度为7 404 bp,其中包括5′端非编码区(5′UTR)长743 bp,病毒基因组编码区(ORF)全长6 576个核苷酸及3′端非编码区(3′UTR)长81 bp。ORF编码含2 192个氨基酸残基的多聚蛋白。[结论]FJ08089株基因组的结构与安徽地方株ANHUI703814十分相近,整个基因组的核苷酸同源性为93.8%,氨基酸同源性为92.6%,均属于C4亚型,而与Cox.A16国际标准株G10(U05876)差别较大,两者核苷酸同源性仅为77.9%,氨基酸同源性为84.0%。     

小鼠ScFv基因片段的构建

目的 利用分子重组技术构建小鼠单链抗体片段(ScFv)。方法 采用PCR反应从小鼠脾细胞扩增鼠免疫球蛋白的重链和轻链可变区，利用连结引物将重链和轻链DNA组装成单链抗体(ScFv)片段。结果 克隆出VH，VL基因，用Linker将VH，VL连接起来后的ScFv构建成功，其分子量为750bp。结论 ScFv分子小，异源性低，可以结合与噬菌体载体中形成融合蛋白表达．该技术是抗体制备的一种简便、可靠的方法。     

埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道3''端cDNA的克隆及序列分析

目的 扩增埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3'末端,并对其核苷酸序列进行分析.方法 提取埃及伊蚊雌蚊总RNA,以Trsa为反转录引物反转录成单链cDNA,继而设计阳性与阴性对照,采用巢式聚合酶链反应(PCR)和快速扩增cDNA 3'末端(3'RACE)技术,对埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3'末端进行PCR扩增、克隆与测序.结果 获得钠离子通道基因的3'端核苷酸序列共809 bp,包括编码区和非编码区poly(A)尾,编码区共编码208个氨基酸.相似性分析结果 显示编码区氨基酸序列与家蝇钠离子通道基因3'端氨基酸序列相似性为65%左右.结论 成功获得埃及伊蚊钠离子通道基因3'端,为进一步研究该基因的分子生物学特性奠定了基础.     

一步法RT-PCR检测SARS冠状病毒技术研究

[目的]建立一步法RT—PCR方法，对非典型肺炎疑似病例进行SARS相关冠状病毒检测。[方法]参照WHO公布的PCR检测SARS相关冠状病毒的引物序列，我们合成了4对引物，利用RT—PCR技术建立一步法检测SARS相关冠状病毒的方法。[结果]利用该方法对武汉市非典型肺炎疑似病例进行SARS相关冠状病毒检测，其中样品W20用4对引物检测均在相应的位置出现了DNA条带，样品W1只有BNIin—s/as引物出现预期产物。同时我们将W20的BNIin—s/as引物扩增的109bp产物进行了序列测定，结果显示该片段序列与其他地区和国家的SARS冠状病毒的同源性极高，均在99．5％以上。[结论]一步法RT—PCR扩增产物是SARS冠状病毒基因片段，我们建立的一步法RT—PCR是一种可靠的检测方法。     

埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道3′端cDNA的克隆及序列分析

目的扩增埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端，并对其核苷酸序列进行分析。方法提取埃及伊蚊雌蚊总RNA，以Trsa为反转录引物反转录成单链cDNA，继而设计阳性与阴性对照，采用巢式聚合酶链反应（PCR）和快速扩增cDNA3′末端（3′RAcE）技术，对埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端进行PCR扩增、克隆与测序。结果获得钠离子通道基因的3′端核苷酸序列共809bp，包括编码区和非编码区poly（A）尾，编码区共编码208个氨基酸。相似性分析结果显示编码区氨基酸序列与家蝇钠离子通道基因3′端氨基酸序列相似性为65％左右。结论成功获得埃及伊蚊钠离子通道基因3′端，为进一步研究该基因的分子生物学特性奠定了基础。     

北京石景山区疾病死因监测

通过对石景山区１９８４～１９９３年死亡资料分析，提示１０年中全区总死亡率为４０１．３５／１０万。心脑血管病和恶性肿瘤是主要死因，位居前三位。占总死因的５９．０６％     

六种鳞翅目昆虫的食用营养成分分析

目的：分析６种鳞翅目昆虫的蛋白质含量和蛋白氨基酸的组成。结果：６种昆虫均含有较丰富的蛋白质，除亚洲玉米螟、棉红铃虫和米蛾的幼虫以外，其余的蛋白质含量均在４１％以上，最高的达７５．２％。脂肪的含量变化较大，菜粉蝶、桑蚕的含量在８．５２％～１５．６７％之间，其余的在１９．３５％～４９．４８％之间。氨基酸含量为２５％～７１％；必需氨基酸占总氨基酸含量的３２．５０％～４９．７６％，除５龄桑蚕外，其余的种类均在４０％以上。６种昆虫的第一限制性氨基酸为含硫氨基酸，即蛋氨酸和胱氨酸，其氨基酸分（ＡＡＳ）在３１～６６之间。桑蚕、菜粉蝶、亚洲玉米螟、米蛾等幼虫的第二限制性氨基酸为亮氨酸。棉红铃虫则无第二限制性氨基酸。６种昆虫均含有一定的微量元素和矿物质，其中桑蚕含有较高的钙     

麻疹发病年龄与免疫接种探讨

[目的]针对2008年初常州市麻疹流行情况及发病年龄进行分析,根据发病年龄变化的原因,对初免月龄及再免问题进行探讨. [方法]选择2008年1月1日～5月31日所有在感染科住院的麻疹患者,按年龄进行分组,对不同年龄发病情况和免疫接种状况进行分析. [结果]麻疹发病年龄呈现两极分化,小婴儿和成人发病率明显上升.[结论]提前初免,坚持原有再免,加强二次强化免疫及婚前再免,以降低麻疹发病率.     

子宫腺肌症228例的临床分析

目的探讨子宫腺肌症的发病因素与诊治方法。方法对228例子宫腺肌症临床资料进行回顾性分析。结果人流史占57%,妊娠3次以上占67.5%。 B超诊断率42.5%。对于简单的子宫腺肌症,腹腔镜手术的术中出血量和术后住院天数小于开腹手术,两者有显著性差异。结论发病与多次妊娠,宫腔操作及雌激素有关。目前仍需通过病史,临床症状体征结合辅助检查如B超或阴道B超进行诊断。对于简单的子宫腺肌症,腹腔镜手术疗效好。     

唐山市社区老年人生命质量研究

[目的]利用SF-36量表分析唐山市社区老年人生命质量状况,探讨影响生命质量的因素,为今后制定和改善老年人的健康保健措施提供科学依据。[方法]采用整群随机抽样的方法,在唐山市区随机抽取4个街道办事处,每个街道办事处随机抽取3个居委会,对居住满30年的60岁及以上老年人登记造册,每个居委会随机抽取20～40名老年人,共抽取370人进行面对面访谈,调查生命质量及影响因素,利用t检验、方差分析和多元线性回归方法进行统计分析。[结果]在影响生命质量的诸多因素中,年龄、文化程度、个人收入、生活来源、生活事件、心理及健康状况等对生命质量的影响有统计学意义。[结论]一些人口社会学特征影响老年人的生命质量,因此,家庭和社会应该更多地关注老年人的生活环境、医疗条件及心理卫生,提高老年人的健康水平,并且从影响生命质量的因素出发制订老年卫生保健政策,有针对性、有重点地开展社区卫生保健项目,以促进老年人生命质量的提高。     

某市性病流行特征及数学模型在发病趋势中的应用

目的：探讨广州市近5年性病疫情流行特征，为政府部门制订预防控制措施提供科学依据。方法：对近5年性病疫情报告资料进行流行病学分析，并对近5年性病报告发病率进行曲线拟合，运用线性模型预测未来3年广州市性病发病率。结果：广州市近五年性病报告发病率逐年下降，但AIDS／HIV、胎传梅毒及三期梅毒发病数及发病率呈上升趋势；性病人群中老年患者人数增加。拟合的4种数学模型均有统计学意义，其中以直线模型为佳。经预测，未来3年性病发病率仍保持下降势态。结论：根据近几年性病流行特征及未来几年发病趋势，该市应及时调整性病工作防治策略及控制工作重点。     

重庆市消除碘缺乏病阶段目标评估

目的：评估考核各级政府和相关部门是否建立了可持续消除碘缺乏病的工作机制,掌握防治工作进程,为制定防治策略提供科学依据。方法：采用抽样问卷调查,以区县为单位自评,在自评基础上市级抽查。采取核实资料的方法对组织领导、碘盐管理、健康教育三项指标进行综合评分。结果：自评三项综合指标评分40个区县均在85分以上;2个碘盐生产厂合格率均达90％以上;全市36个批发企业合格率＞90％者39个区县,占97．5％;居民户合格率＞90％者35个区县,占87．5％;尿碘中位数均＞100μg/L;儿童甲状腺肿大率＜10％者11个区县,占27．5％,10％－19．9％者27个,占67．5％,＞20％者2个,占5％。市级抽查20个区县,综合评分在85分以上者19个;碘盐生产厂合格率均在90％以上,20个区县有19个批发企业,合格率＞90％者18个占94．74％,零售单位经均＞90％,居民户合格率＞90％者18个,占90％,尿碘中位数均＞100μg/L;儿童甲肿率无＜10％的区县,10％－19．9％者19个,＞20个者1个。结论：对照消除磺缺乏病阶段目标标准判断,无实现消除碘缺乏病阶段目标的区县,实现基本消除目标的有17个区县,未实现阶段目标者23个区县。     

抗生素应用对葡萄球菌耐药性的影响

目的了解儿科抗生素的应用对葡萄球菌耐药性的影响。方法对呼吸系统感染患儿葡萄球菌的检出率及耐药性进行调查研究,分析未应用抗生素及应用抗生素两组葡萄球菌的检出率及耐药性是否存在差异。结果两组菌株葡萄球菌、MRSA与MRCNS的分离率无显著性差异(p>0.05)。两组菌株青霉素的耐药率为93.10%和92.50%,对耐青霉素酶的苯唑西林的耐药率分别为100%和92.50%,而对AMP/SBT的耐药率为6.90%和25.00%,敏感率为72.41%和50.00%。结论两组葡萄球菌对青霉素和苯唑西林表现高度耐药,而对AMP/SBT敏感性较高,因此青霉素和苯唑西林单独应用对葡萄球菌引起的感染失去治疗意义,必要时可根据联合药敏试验结果与其他抗生素联用,AMP/SBT抗葡萄球菌作用肯定,可广泛用于儿科葡萄球菌感染性疾病。     

宜宾市职业人群OGTT结果分析

[目的]了解某市体检人群的血糖代谢状况,探讨糖代谢异常和耱尿病的发生率.[方法]体检人群中符合条件的参加口服葡萄糖耐量试验(OGTT),在测OGTT(0 min)的同时作TG,CHO,HDL-C测量,了解该人群的糖代谢情况以及糖尿病和糖调节受损(IGR)的血脂代谢情况.[结果]在参加OGTT试验的1 033例人群中,符合单纯空腹高血糖型糖尿病(IFH)和单纯餐后高血糖型糖尿病(IPH)诊断的共84例,占8.13%,糖调节受损(IGR)184例,占全部人群的比例为17.81%;HDL-C在统计的各组中其结果与糖耐量正常(NGT)组之间的差异有统计学意义(P＜0.001),而TG除IPH组外、CHO除IFH/IPH外其结果与NGT组之间的差异有统计学意义(P＜0.001).[结论]该市成人DM人群中,IFH人群比IPH人群的比例高,且发病年龄更早;TG,CHO,HDL-C在DM组和IGR组均较NGT组有显著性差异,提示DM和IGR者多合并血脂紊乱,具有高度发生心血管疾病的危险性.     

甘肃省居民主要死因潜在减寿年数和减寿率的分析

本文运用ＰＹＬＬ指标，对蒜处１９８６￣１９８８年居民死因回顾调查资料进行分析，前５位死因依次为意外死亡、恶性肿瘤、传染病、呼吸系疾病、循环系疾病、寿命损失男性高于女性，以婴幼儿及中青年为甚。胃癌的减寿年数，减寿率明显高于肝癌、肺癌等，是造成居民“早死”的主要癌症。为减少人口寿命损失，应加强安全教育，建立健康的人生观，减少意外事故的发生，开展恶性肿瘤等慢性病的知识普及和防治工作，搞好传染病的监测、控