RelA反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株COC1凋亡的影响

目的　探讨RelA反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株COC1凋亡的影响。方法　应用不同浓度的肿瘤坏死因子 (TNF)α或泰素结合RelA反义寡核苷酸 ,分别处理COC1细胞株 ;应用间接免疫荧光、Westernblot、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法 ,检测RelA活化及COC1细胞凋亡。结果　 5 0nmol/L的泰素单独及其与RelA反义寡核苷酸联合处理COC1细胞 12h后 ,COC1细胞的凋亡率分别为 (12 3± 0 6 ) %、(2 7 4± 0 5 ) % ,两者比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;2 4h后 ,COC1细胞凋亡率分别为 (13 0± 0 5 ) %、(31 7± 0 3) % ,两者比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。 5 0 μg/L的TNFα单独及其与RelA反义寡核苷酸联合处理COC1细胞 12h后 ,COC1细胞凋亡率分别为 (13 2± 0 4 3) %、(30 8± 0 3) % ,两者比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;同样 10 0 μg/L及 2 5 0 μg/LTNFα单独及其与RelA反义寡核苷酸联合处理COC1细胞的凋亡率相比 ,差异均有极显著性 (P <0 0 1)。结论　RelA反义寡核苷酸可增加TNFα或泰素诱导卵巢癌细胞凋亡的敏感性。     

脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及化疗药物敏感性的影响

目的探讨脂质体ＣｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（ＣｅｒｂＢ２ＳＯＤＮｓ）对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤生长及顺铂（ＤＤＰ）敏感性的影响。方法对２０只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型,分为对照组（腹腔注射无菌水）、观察组（腹腔注射脂质体ＣｅｒｂＢ２ＳＯＤＮｓ）、化疗组（腹腔注射无菌水及ＤＤＰ）、观察＋化疗组（腹腔注射脂质体ＣｅｒｂＢ２ＳＯＤＮｓ及ＤＤＰ）。治疗期间观测裸鼠体重变化,治疗结束后取瘤体称重进行电镜观察。结果观察组抑瘤率为３７％,电镜下可见细胞异染色质增多,线粒体退化。观察＋化疗组抑瘤率可达５０％。观察组裸鼠体重无明显改变。结论ＣｅｒｂＢ２反义基因治疗在卵巢癌基因治疗中有一定作用,与化疗联合应用可以取得更好的治疗效果。     

端粒酶催化亚基反义基因抑制卵巢癌裸鼠移植瘤生长作用的观察

端粒酶是一种具有逆转录作用的核酶 ,端粒酶催化亚基(ｈＴＥＲＴ)反义脱氧寡核苷酸能通过降低端粒酶活性、增强细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等途径 ,抑制卵巢癌细胞生长 ,与顺铂 (Ｃ ＤＤＰ ,简称ＤＤＰ)联合应用能增强对癌细胞的杀伤作用[1 5] 。本研究旨在观察端粒酶ｈＴＥＲＴ反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用 ,及其与ＤＤＰ联合应用的效果。一、材料与方法1 实验材料 :(1)实验动物 :纯合型雌性裸鼠 (ｎｕ/ｎｕ) ,鼠龄为 4周 ,体重为 (14 4± 2 1)ｇ ,购自北京肿瘤研究所动物中心。在无特定病原体环境下饲养。 (2 )卵巢癌细…     

Survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC_1/DDP凋亡的实验研究

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行细胞核DNA梯形电泳 ,检测caspase 3活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 :经survivin ASONs作用后COC1/DDP细胞中survivin等抗凋亡基因的表达下降 ,细胞核DNA电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ,caspase 3活性增加且呈时间依赖性 ,细胞凋亡率达33.18% ,细胞周期G2 /M及S期明显下降而多阻滞于G0 /G1期 ,与对照组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论 :survivin ASONs反义寡核苷酸能诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞凋亡 ,且效果显著     

整合素连接激酶反义寡核苷酸对卵巢上皮性癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨整合素连接激酶(ILK)反义寡核苷酸(ASODN)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长的抑制作用.方法 将ILK-ASODN转染入卵巢癌细胞株H08910细胞,阻断其表达ILK.实验分为6组,分别为空白对照组(A组)、脂质体对照组(B组)、ILK-正义寡核苷酸(SODN)100 nmol/L组(C组)和ILK-ASODN 60 nmol/L组(D组)、ILK-ASODN 80 nmol/L组(E组)、ILK-ASODN 100 nmol/L组(F组).采用RT-PCR技术和蛋白印迹法检测各组H08910细胞ILK mRNA和蛋白表达量的变化;水溶性四氮唑1(WST-1)法及流式细胞术评价H08910细胞转染ILK-ASODN后对该细胞体外增殖的抑制作用及对该细胞周期和凋亡的影响.结果 ILK-ASODN转染后H08910细胞ILK mRNA表达量明显下降,D、E、F 3个实验组分别为0.307±0.011、0.198±0.008、0,与A、B两对照组(分别为0.343±0.006、0.342±0.009)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).ILK-ASODN转染后H08910细胞ILK蛋白表达量也明显下降,D、E、F 3个实验组分别为26.3±0.8、20.6±0.4、0;细胞生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显增高,3个实验组分别为7.31%、8.84%、11.27%;G0/G1期细胞增多,3个实验组分别为49.25%、56.28%、67.61%.以上指标分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 ILK-ASODN转染卵巢癌H08910细胞后可以明显抑制其生长.     

端粒酶反义hTERT基因治疗对卵巢癌细胞生长抑制作用及其对顺铂疗效的影响

目的 :探讨端粒酶反义hTERT对卵巢癌细胞生长抑制作用及对顺铂疗效的影响。方法 :以TRAP PCR ELISA法检测卵巢癌SKOV3、ES 2细胞中端粒酶活性 ;以MTT法及流式细胞术测定反义hTERT对卵巢癌细胞生长的抑制作用、细胞周期阻滞及细胞凋亡的诱导作用及对CDDP疗效的影响。结果 :SKOV3及ES 2细胞中端粒酶活性分别为 2 .17U、2 .2 7U。反义hTERT能降低卵巢癌细胞端粒酶活性 ,以剂量依赖性方式抑制癌细胞生长 ;反义hTERT10 μmol L作用 2 4、72h后G1期细胞所占比例分别为 33 16%、5 3 4 7% ,细胞凋亡发生率分别为 11 66%、13 93% ;而联合应用顺铂时 ,G1期细胞比例分别为 4 2 17%、38 98% ,细胞凋亡发生率分别为 18 66%、2 7 61%。当反义hTERT取 10、2 0、4 0 μmol L时 ,卵巢癌SK OV3、ES 2细胞对顺铂的敏感性分别增加 10 4～ 2 5 5倍、11 7～ 2 0 2倍。结论 :端粒酶反义hTERT基因治疗能通过抑制端粒酶活性、增强细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等途径抑制卵巢癌细胞生长 ,与CDDP合用能增强对癌细胞的杀伤作用。     

核苷酸还原酶小亚基反义寡核苷酸对人绒毛膜癌细胞体外生长的影响

目的　探讨核苷酸还原酶小亚基 (RRM2 )反义寡核苷酸 (ASODN)对人绒毛膜癌细胞株JAR细胞体外生长的影响。方法　以脂质体为载体 ,将人工合成的分别位于RRM2mRNA核苷酸序列第 6 2 6～ 6 4 5 (编码区 )和第 15 72～ 15 91(3′端非编码区 )位点且全程硫代修饰的两条ASODN片断 (前者称ASODN1,后者称ASODN2 )导入JAR细胞中 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测细胞存活率 ,免疫印迹法和RT PCR技术检测ASODN对RRM2蛋白和mRNA表达的影响。结果　 (1)ASODN1对JAR细胞的抑制作用呈剂量和时间效应 :10 0nmol/LASODN1作用后JAR细胞的生长抑制率为 (8 10±1 18) % ;随着ASODN1浓度的增加细胞生长抑制作用增强 ,ASODN1浓度为 4 0 0nmol/L时其细胞生长抑制率为 (2 7 70± 3 6 8) % ,与ASODN1浓度为 0时 [(0 16± 0 12 ) % ]比较 ,差异有极显著性 (P =0 0 0 0 )。 2 0 0nmol/LASODN1作用 2 4h后 ,细胞生长抑制率为 (13 98± 1 4 5 ) % ;4 8h[为 (18 90±4 85 ) % ]达到高峰 ,72h抑制作用 [为 (19 5 3± 5 0 0 ) % ]不再明显增强 ,分别与作用时间为 0时 [(0 16± 0 31) % ]比较 ,差异均有极显著性 (P =0 0 0 0 )。 (2 )JAR细胞RRM2蛋白和mRNA的表达 :2 0 0nmol/LASODN1作用 12h ,RRM2蛋白和mRNA表达水平开始下降     

C-erbB2及C-myc基因反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌COC1细胞的作用

近年来 ,有关卵巢肿瘤的基因治疗研究方兴未艾 ,特别是反义基因治疗取得了一些明显的效果[1] 。但随着分子生物学和分子遗传学技术的深入发展 ,人们已逐渐认识到肿瘤的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程 ,单一癌基因的反义阻断不能完全抑制或逆转其恶性表型。本研究通过体外实验探讨联合反义基因治疗对ＣＯＣ1细胞Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ基因表达及细胞增殖的影响。一、材料与方法1 材料来源 :卵巢癌ＣＯＣ1细胞系由武汉大学中南医院肿瘤研究所提供。引物及Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ反义脱氧寡核苷酸(ＡＳ ＯＤＮｓ)的合成、修饰[2 …     

bcl-2反义寡核苷酸逆转人卵巢上皮性癌细胞耐药的体外研究

目的探讨体外bcl2反义寡核苷酸(AODN)对人卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂(DDP)耐药的逆转作用。方法以卵巢癌DDP耐药细胞株A2780/DDP为模型,实验组以脂质体为载体,分别将bcl2AODN、bcl2正义寡核苷酸(SODN)、bcl2随机寡核苷酸(RODN)分别转染到A2780/DDP细胞内;阴性对照组细胞以同体积的培养基转染;空白对照组细胞不转染。采用计数法检测细胞增殖变化;RTPCR技术检测bcl2mRNA表达水平;免疫荧光技术检测bcl2蛋白表达。将DDP作用于细胞,观察实验组、阴性对照组、空白对照组对DDP敏感性的差异。采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DDP对细胞的抑制率。结果实验组转染AODN的A2780/DDP细胞增殖被抑制,细胞倍增时间延迟了24h;A2780/DDP细胞的bcl2mRNA及蛋白的表达量下降,16μg/ml的AODN转染72h后,bcl2mRNA的表达量为0.76±0.01,bcl2蛋白表达量为171.30±3.09,分别与空白对照组bcl2mRNA(1.56±0.03)、bcl2蛋白(105.34±1.72)的表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与相同浓度SODN、RODN转染的A2780/DDP细胞以及阴性对照组A2780/DDP细胞分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组转染AODN的卵巢癌细胞对DDP的敏感性提高,细胞抑制率为(97.49±1.00)%,与阴性对照组的(3.33±0.17)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论AODN可通过下调bcl2mRNA及bcl2蛋白表达水平,抑制细胞的生长,增加细胞对DDP的敏感性,在一定程度上逆转了卵巢癌细胞的耐药性。     

金属硫蛋白反义寡核苷酸对子宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨金属硫蛋白-2A(MT-2A)反义寡核苷酸(ASODN)对子宫颈癌HeLa细胞体外生物学行为的影响。方法:设空白对照组、正义寡核苷酸(SODN)组及ASODN组,应用RT-PCR和Western Blot检测MT-2A mRNA和蛋白表达水平的改变;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HeLa细胞的增殖抑制率;流式细胞技术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期。结果:MT-2A ASODN对MT-2A mRNA表达抑制率为70%,并可显著抑制MT-2A蛋白的表达;ASODN组HeLa细胞增殖的抑制率为56.45%,凋亡指数(AI)为(16.76±2.08)%,S期细胞百分率为(11.93±2.08)%,与空白对照组、SODN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MT-2A ASODN可有效抑制子宫颈癌HeLa细胞中MT-2A mRNA和蛋白的表达,促进细胞凋亡并阻止细胞进入S期而抑制细胞增殖,MT-2A可能参与了子宫颈癌的发生发展。     

多药耐药基因反义寡脱氧核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3多药耐药性逆转的作用

目的 探讨多药耐药基因（ｍｄｒ１）反义寡脱氧苷酸（ＡＳＯＮ）对卵巢癌细胞多药耐药性的逆转作用。方法 以人ｍｄｒ１基因转导产生的耐药卵巢癌ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞为模型,采用２５０μｇ／ｍｌ ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ,作用于ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞,采用流式细胞术及罗丹明１２３排出试验,检测ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞ｍｄｒ１基因产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的阳性率及其功能。并进行ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞集落培养,观察耐药性。结果 ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ作用后,ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞的Ｐ－ｇｐ阳性率由３８．９％减少至２１．３％（Ｐ〈０．０１）,ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞内罗丹明的潴留率,由３２．１％增加至５０．７％（Ｐ〈０．０１）。ＳＫＯＶ３／ｍｄｒ１细胞加ｍｄｒ１－ＡＳＯＮ和空白对照细胞形成抗性细胞集落的相对百分数,在泰素浓度     

端粒酶RNA反义核酸联合其催化亚单位反义核酸对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用

目的　探讨端粒酶RNA反义核酸 (反义hTR)联合端粒酶RNA催化亚单位反义核酸(反义hTERT) ,对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及作用机理。方法　实验分为空白对照、脂质体对照、正义hTR、正义hTERT、反义hTR、反义hTERT及反义hTR +反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法、PCR 端粒重复序列扩增 (TRAP) 酶联免疫吸附实验 (ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测宫颈癌Hela细胞转染反义hTR和反义hTERT后细胞的增殖、端粒酶活性及细胞形态学、细胞凋亡和细胞周期阻滞的变化。结果　宫颈癌Hela细胞转染端粒酶反义核酸后 ,出现明显的细胞增殖抑制、端粒酶活性下降、细胞凋亡形态学改变、细胞凋亡率升高及细胞周期阻滞。反义hTR、反义hTERT组与空白对照、脂质体对照及正义hTR、正义hTERT组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。Hela细胞转染反义核酸 (0 2 μmol/L) 3d后 ,反义hTR +反义hTERT组 ,细胞增殖抑制率、相对端粒酶活性 (相对于空白对照组 )、细胞凋亡率分别为 6 9 3%、19 6 %、2 8 6 % ,与反义hTR组和反义hTERT组比较 ,差异均有统计学意义 (P <0 0 1) ,Q值分别为 0 86 7、0 919、1 0 75。反义hTR +反义hTERT组G0 /G1期细胞比例增加。结论　端粒酶反义核酸能通过特异性抑制端粒酶活性、诱导细     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)联合转染,对人卵巢癌细胞株SKOV3,在裸鼠皮下移植瘤形成过程中的抑制作用。方法 共分7组：Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组[c-erbB-2正义寡核苷酸(SODN)]、Ⅲ组(c-raf-1 SODN)、Ⅳ组(c-erbB-2 ASODN)、V组(c-raf-1 ASODN)、Ⅵ组(全剂量联合)、Ⅶ组(半剂量联合)。根据不同分组条件将相应寡核苷酸导入SKOV3细胞株内,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。结果 Ⅱ、Ⅲ组与对照组成瘤能力比较,差异无显著性,Ⅳ、V组的成瘤能力明显降低,Ⅵ组与Ⅶ组的成瘤能力最低,Ⅵ组与Ⅶ第1次出现肉眼可见肿瘤的时间分别为13．7d和15．2d,最大抑瘤率分别为61．1％和71．3％。结论 反义寡核苷酸联合转染,对卵巢癌细胞的成瘤能力和肿瘤生长抑制作用更明显。     

脂质体-C-erbB_2反义寡核苷酸对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的：探讨经脂质体—硫代磷酸化修饰的Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ）作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下的成瘤能力及形态学变化。方法：利用离体途径将Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ导入卵巢上皮癌细胞，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。用透射电镜观察肿瘤形态变化。结果：经脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低，最大抑瘤率可达４１．７％。超微结构显示实验组肿瘤细胞异染色质增多，分化增高。结论：Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌的成瘤能力，抑制肿瘤生长，在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用     

脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌细胞的作用

目的 探讨脂质体Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（脂质体－ＣｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ）对卵巢癌细胞系Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因表达及细胞增殖的影响。方法 应用流式细胞仪技术,＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷参入方法,观察脂质体－ＣｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３ Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因表达及细胞生长、细胞周期的作用。结果 脂质体Ｃ－ｅｒｂＢ２ Ｓ－ＯＤＮｓ能够降低Ｃ－ｅｒｂＢ２的表达,并抑制细胞生长;脂     

脱氧寡核苷酸对卵巢癌细胞核转录因子-κB活性和下游细胞分子表达的影响

目的 探讨核转录因子(NF)-κB诱捕物脱氧寡核苷酸(ODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞NF-κB活性和下游细胞分子如细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)表达的影响。方法 SKOV3细胞转染NF-κB诱捕物ODN后,用白细胞介素113(IL-1β)刺激6、12、24、48 h,采用凝胶电泳滞后实验测定NF-κB DNA结合活性,采用RT-PCR技术检测ICAM-1、VEGF、uPA mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测VEGF蛋白表达水平。结果 (1)SKOV3细胞表达NF—κB DNA结合活性,IL-1β刺激后其活性上升,在转染NF—κB诱捕物ODN后SKOV3细胞NF-κB DNA结合活性被显著抑制,刺激6、12、24、48 h的抑制率分别为99.6％、86.4％、80.1％、21.6％。各时间点间比较,差异均有显著性(P<0.05～0.01)。(2)SKOV3细胞表达ICAM-1、VEGF、uPA mRNA和VEGF蛋白,IL-1β刺激后其表达率上升,转染NF-κB诱捕物ODN后其表达率下降。结论NF—κB诱捕物ODN转染SKOV3细胞后可能通过抑制NF-κB活性,从而抑制ICAM-1、VEGF、uPA的表达。NF—κB诱捕物ODN有望应用于卵巢癌的基因治疗。