黄芪甲苷通过mTORC1通路调控IgA肾病大鼠脾淋巴细胞分化

目的:探讨黄芪甲苷(AS)通过mTORC1信号通路调控IgA肾病(IgAN)大鼠脾淋巴细胞分化的影响及机制.方法:28只SD大鼠随机分为对照组、IgAN组、雷帕霉素(RAPA)组和AS组.观测大鼠肾IgA沉积情况、脾脏病理变化及脾CD4+T细胞数密度、CD8+T细胞数密度和IL-10、p-mTOR和p-p70S6k表达...     

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

 目的:观察黄芪甲苷 (AS-IV)对糖尿病肾病(DN)肾脏的保护作用及其机制。方法:38只清洁级雄性SD 大鼠分成正常组（10只）、模型组（14只）和AS-IV 干预组（14只）,用链脲佐菌素造模,成功后1 周开始治疗,期间每 4周动态观测血糖及尿微量白蛋白,治疗12周后处死大鼠取材及采血,取肾皮质行 HE 和Masson染色观察,并检测β 1整合素、整合素连接激酶(ILK)和α-actinin-4的蛋白表达水平。结果:干预8周末AS-IV 组血糖水平较模型组明显降低（P<0.01）。干预12周末AS-IV 组与模型组相比,尿微量白蛋白明显下降（P<001）,并使因造模引起的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平的变化产生逆变（P<0.05）。与正常组比较,模型组的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平均有明显差异（P<0.05）。结论:AS-IV 对DN 肾脏有明显保护作用,能降低血糖和尿白蛋白排泄量,改善足细胞黏附功能,从而延缓DN 的进展。     

黄芪甲苷对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对糖尿病大鼠视网膜氧化应激的影响及其对Müller细胞的保护作用。方法利用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组及AS治疗组,3个月后试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,免疫组化及Western blot检测视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)变化,Western blot检测Müller细胞功能性蛋白酶——谷氨酰胺合成酶(GS)表达变化。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜MDA含量增加,GSH含量减少,GFAP表达增加,GS表达减少(均0.01),AS治疗组视网膜MDA及GSH含量、GFAP及GS表达较糖尿病组均无明显变化(均0.05)。结论 AS抑制糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应,恢复视网膜Müller细胞功能性蛋白酶GS的表达。     

黄芪甲苷对成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞存活的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AST)在成年大鼠视神经切断后对视网膜节细胞(RGCs)存活的影响。方法:动物分为正常组、单纯切断视神经组、AST处理组和生理盐水对照组。用荧光金(FG)逆行示踪标记法及定量解剖学技术观察正常和经AST处理的SD大鼠于视神经切断后5、7、14 d的RGCs的密度。结果:正常组RGCs平均密度为(2 230±156)/mm~2。单纯视神经切断组RGCs平均密度与生理盐水对照组相比较,无显著性差异;AST处理组与单纯切断视神经组和生理盐水对照组相比较,在各个时间点上均存在显著性差异。结论:黄芪甲苷可提高成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞短期存活。     

黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化及能量代谢的影响

目的:研究黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化的影响,初步探讨其具体机制。方法:采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立大鼠慢性心衰模型,建模成功后随机分为模型组、缬沙坦组及黄芪甲苷组,另建立假手术组。缬沙坦组和黄芪甲苷组分别给予2 mg·kg~(-1)·d~(-1)的缬沙坦及30 mg·kg~(-1)·d~(-1)的黄芪甲苷灌胃,假手术组及模型组给予生理盐水灌胃。8周后收集心脏结构及血流动力学参数,留取心肌染色后观察心肌细胞形态学变化Western blot和RT-qPCR检测长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的蛋白及mRNA表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的左室质量指数(LVMI)、胶原容积分数(CVF)、左室后壁厚度(LVPWD)、PFK1蛋白及mRNA表达均升高(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达均下降(P0.05)。与模型组相比,缬沙坦组及黄芪甲苷组LVMI、CVF、LVPWD、PFK1蛋白及mRNA表达均下降(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:黄芪甲苷可以抑制慢性心衰大鼠心肌纤维化,其机制可能是通过上调LCAD、下调PFK1、纠正能量代谢异常实现的。     

黄芪甲苷对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及氧化应激损伤的影响

目的:探讨黄芪甲苷对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及氧化应激损伤的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对照达英-35(0.3392 mg/kg)组、黄芪甲苷低剂量(12.5 mg/kg)组和黄芪甲苷高剂量(50 mg/kg)组,每组12只。采用来曲唑(1 mg/kg)灌胃诱导PCOS模型,造模成功后灌胃给药,每天1次,连续3周。给药结束后,通过阴道涂片观察各组大鼠动情周期,计算卵巢指数,HE染色观察卵巢组织病理学变化,ELISA法检测血清性激素睾酮(T)、雌二醇(E₂)、促黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平,比色法检测血清及卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Western blot检测卵巢组织中甾类激素合成急性调节蛋白(St AR)及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢指数增加,卵巢呈多囊样改变,血清中T、LH和MDA含量显著增加(P<0.05),E_2...     

大鼠IgA肾病模型肾脏变化分析

目的探讨IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠肾小体、肾小囊、肾小球和近端肾小管病理变化。方法将20只SD雌性大鼠随机分成2组,即对照组和IgAN组(n=10)。用免疫荧光、HE染色和体视学方法,测出2组动物肾小体、肾小囊和肾小球体密度、球囊体积比、肾小体数密度、肾小体和肾小球长径、近端肾小管管腔和管壁面积及其比值,比较其差异。结果IgA免疫荧光染色,IgAN组皮质部见较强绿色荧光。与对照组比,IgAN组肾小体体密度增大,肾小囊体密度增大,肾小球体密度减小,球囊比减小,肾小体数密度变化差异无显著性,肾小体长径增大,肾小球长径减小,近端肾小管管腔面积减小,管壁面积增大,腔壁比减小。结论 IgAN大鼠肾小体和肾小囊增大,肾小球减小,近曲小管细胞体积增大,管腔变小。     

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P 0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P 0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P 0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P 0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。     

急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43表达的影响及黄芪甲苷的拮抗作用

目的:观察急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨黄芪甲苷的保护机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、镉处理组、镉加黄芪甲苷处理组,取心室肌组织,分别作光镜、透射电镜观察和免疫组织化学检测.结果:与正常组相比,镉组心肌细胞连接蛋白43的表达量明显降低,心肌纤维和闰盘超微结构破坏严重;而镉加黄芪甲苷组心肌细胞连接蛋白43的表达量较镉组显著增加,心肌纤维和闰盘超微结构的损伤也明显减轻.结论:镉能破坏心肌细胞闰盘超微结构,影响连接蛋白43的表达及分布,黄芪甲苷能在一定程度上拮抗镉对心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43的毒性损伤.     

黄芪甲苷对乙型病毒性肝炎大鼠模型免疫炎症反应的影响及机制

目的 探讨黄芪甲苷对乙型病毒性肝炎大鼠免疫炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法 将SPF级SD大鼠30只随机分为空白对照组、模型组、黄芪甲苷（40 mg/kg）组,每组10只。采用尾静脉注射乙型肝炎病毒的方法制备乙型病毒性肝炎大鼠模型。ELISA试剂盒检测大鼠血清中HBsAg、HBeAg水平;全自动生化分析仪测定血清中丙氨酸转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）水平;流式细胞仪检测外周血液中Th17、Treg细胞比例;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平;HE染色观察肝组织病理形态。Western blot检测AMPK、NF-κB及IκB蛋白表达。结果 黄芪甲苷能够显著降低大鼠血清HBsAg、HBeAg、ALT及AST水平;明显降低Th17比例,明显升高Treg比例及Treg/Th17;明显降低IL-1β、IL-6及TNF-α水平;明显减轻肝组织损伤;明显增加AMPK与IκB蛋白表达,并明显降低NF-κB蛋白表达。结论 黄芪甲苷可改善乙型病毒性肝炎大鼠免疫...     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

冬凌草甲素介导Notch信号通路对IgA肾病大鼠肾组织损伤及炎症因子、氧化应激的影响

目的观察冬凌草甲素对IgA肾病(IgAN)大鼠肾组织损伤及炎症因子、氧化应激的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组(IgAN)、低、中、高剂量冬凌草甲素组(5、10、20 mg/kg)及阳性对照组(10 mg/kg贝那普利),采用BCA法检测24 h尿蛋白含量,肌酐酶法检测血清肌酐(Scr)含量,脲酶连续监测法检测尿素氮(BUN)含量,HE染色观察肾组织病理损伤,生化试剂盒检测肾组织炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α及氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)],蛋白印迹检测Notch1信号通路蛋白表达。另取40只大鼠随机分为假手术组、IgAN组、Notch1激活剂Jagged1组及Jagged1+冬凌草甲素组(20 mg/kg),观察各组大鼠上述指标的变化。结果与IgAN组比较,中、高剂量冬凌草甲素组和贝那普利组24 h尿蛋白、血清Scr、BUN、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、Notch1及Hes1表达降低,SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05),且高剂量冬凌草甲素组与贝那普利组上述指标比较,...     

黄芪甲苷对变应性鼻炎小鼠线粒体动态平衡及NK 细胞分化影响的研究

目的：探讨黄芪甲苷对变应性鼻炎（AR）小鼠NK细胞分化的影响及机制。方法：C57/BL6小鼠随机分为空白组、AR模型组、黄芪甲苷组。观察各组小鼠行为学表现、鼻黏膜炎症反应;ELISA法测定血清IL-4、IL-5、IFN-γ水平;免疫荧光法检测各组NK细胞IL-4、IFN-γ表达;透射电镜等技术观察小鼠线粒体形态。结果：与AR模型组比较,黄芪甲苷组小鼠鼻过敏症状、鼻黏膜炎症明显改善,血清IL-4、IL-5水平降低。黄芪甲苷干预后,OVA致敏小鼠NKp46细胞IL-4、p-Drp1(Ser616)阳性比率降低。同时,黄芪甲苷组小鼠鼻黏膜NK细胞线粒体管状形态较AR模型组有所恢复,线粒体长度明显增加。结论：黄芪甲苷可能通过调节Drp1活性,恢复线粒体动态平衡,抑制NK细胞的NK2分化偏移,发挥改善AR的效应。     

探讨黄芪甲苷对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺细胞凋亡及RhoA/ROCK2通路的影响

目的：探讨黄芪甲苷对桥本甲状腺炎（HT）大鼠甲状腺细胞凋亡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2)通路的影响。方法：以皮下注射甲状腺球蛋白联合高碘饮水的方法诱导HT大鼠模型,随机分为模型组、黄芪甲苷（80 mg/kg）组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、黄芪甲苷（80 mg/kg）+Rhosin(40 mg/kg)组（每组12只）,另选出12只SD大鼠,正常饮水并皮下注射等剂量生理盐水作为对照组,经药物分组处理后,ELISA试剂盒测量血清抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）水平及炎症因子IL-6、IL-17、IL-1β含量;通过苏木精-伊红（HE）染色检测各组大鼠甲状腺组织病理形态变化;通过原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠甲状腺细胞凋亡率;通过Western blot实验检测各组大鼠甲状腺组织RhoA/ROCK2通路蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠甲状腺滤泡结构异常,部分萎缩或消失,排列紊乱,周围存在炎症细胞浸润,甲状腺组织有明显病理损伤,血清TGAb、TPOAb、IL...     

黄芪甲苷降低结肠巨噬细胞比例减缓溃疡性结肠炎发生发展

目的：观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）中的保护作用并初步探究其保护机制。方法：将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组和AS-Ⅳ组,AS-Ⅳ组连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。证实AS-Ⅳ对小鼠体质量和结肠长度均无影响后,将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组、DSS组、DSS+AS-Ⅳ组,DSS组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液7 d,DSS+AS-Ⅳ组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液的同时连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;qRT-PCR检测小鼠结肠组织细胞因子mRNA表达;流式细胞术检测小鼠外周血和结肠固有层单核/巨噬细胞比例。结果：与Control组相比,AS-Ⅳ组小鼠体质量和结肠无明显变化,DSS组小鼠体质量明显减轻、结肠长度缩短,肠黏膜组织结构破坏,炎症细胞浸润增多,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CCL2、CCR2 mRNA表达显著升高;与DSS组相比,DSS+AS-Ⅳ组小鼠结肠缩短程度和结肠组织炎症细胞浸润水平降低,Ly6C+MHCⅡ...     

IgA肾病免疫病理机制的研究进展

IgA肾病是全球范围内最常见的原发性肾小球肾炎 ,以肾小球系膜区IgA沉积为特征。其发病机制至今依然不清。许多研究表明与粘膜及骨髓的免疫失常 ,T细胞免疫调节功能紊乱有关。本文就当前对IgAN的免疫学发病机制的研究进展作一综述     

镉对大鼠血睾屏障的损伤及黄芪甲苷的保护作用

目的观察黄芪甲苷和SB203580对镉致大鼠血睾屏障破坏及相关蛋白表达改变的保护效应,探讨黄芪甲苷的保护机制。方法 21只成年雄性SD大鼠随机分为7组:单纯镉组[0.1%氯化镉腹腔内注射,1mg/(kg·d)],镉+黄芪甲苷组[镉剂量同上,同时注射黄芪甲苷,10mg/(kg·d)],镉+SB203580组[镉剂量同上,同时注射SB203580,100μg/(kg·d)],以上各组又分为连续处理5d和10d两个时间组,对照组腹腔内注射等量生理盐水。各实验和对照组动物均为3只。取睾丸做光学显微镜、电子显微镜观察以及免疫组织化学染色和Western blotting检测。结果 HE染色观察对照组支持细胞核染色较浅且不规则,镉组支持细胞内有空泡形成,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组未见明显形态异常。免疫组织化学染色观察对照组闭锁小带-1蛋白(ZO-1)、紧密连接蛋白-11(claudin-11)阳性产物在生精上皮靠近基底部表达。镉组ZO-1、claudin-11阳性产物表达均显著降低(P0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组阳性产物表达低于对照组但明显高于镉组(P0.05)。超微结构观察对照组血睾屏障紧密连接形态完整,呈连续的电子密度较深致密线,镉组血睾屏障紧密连接及支持细胞均见不同程度破坏,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组破坏程度较相应处理时间镉组为轻。Western blotting结果显示,镉组磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)水平明显增强(P0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组pp38MAPK水平虽高于对照组,但较镉组明显减弱(P0.05)。结论镉致大鼠血睾屏障ZO-1、claudin-11表达降低,紧密连接超微结构损伤,黄芪甲苷具有保护作用,其保护机制与抑制p38MAPK磷酸化有关。     

黄芪甲苷通过诱导自噬减轻慢性间歇性低氧大鼠心脏损伤

目的 探讨黄芪甲苷（ASⅣ）对慢性间歇性缺氧（CIH）大鼠的心肌保护作用和机制。 方法 SD雄性大鼠24只,随机分为对照组、CIH组、CIH+ASⅣ组和ASⅣ组,每组6只。CIH大鼠循环给予氮气和氧气,使氧气含量在9%～21%间循环,每个循环3 min,每天上舱8 h,共35 d。CIH+ASⅣ组和ASⅣ组每天给予黄芪甲苷干预,对照组和CIH组采用等量生理盐水灌胃。超声心动图检测大鼠心脏左心室功能;HE染色和麦胚芽凝集素染色检测左心室心肌结构;TUNEL检测心肌细胞凋亡;比色法检测心肌组织匀浆的超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达水平。 结果 与对照组相比,CIH模型组大鼠左室射血分数（LVEF）及左心室收缩末期内径（LVIDs）降低,心肌纤维排列紊乱,心肌细胞增大,心肌细胞凋亡率增加,Bcl-2/Bax比率下降,SOD活性降低,MDA含量增加,Beclin1表达下降而P62表达上升,p-mTOR/mTOR比率升高。与CIH组相比,ASⅣ干预使LVEF和LVIDs上升,心肌纤维排列较整齐,心肌细胞无异常增大,心肌细胞凋亡率下降,Bcl-2/Bax比率增高,SOD活性增加,MDA水平下降,LC3 Ⅱ/Ⅰ比率增高,Beclin1表达增高而P62表达下降,p-mTOR/mTOR比率下降。 结论 ASⅣ可能通过抑制mTOR诱导自噬,从而减轻CIH间歇性低氧对大鼠心脏的损伤。