砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子表达及生精细胞凋亡的影响

目的:探讨砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子(AIF)表达及生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠被随机分为对照组和染砷组。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR检测AIF表达水平;采用TUNEL法观察生精细胞凋亡的情况。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,染砷组大鼠睾丸内AIF蛋白及mRNA表达水平均显著增高。TUNEL法检测结果显示与对照组比较,染砷组生精上皮凋亡细胞平均灰度值显著增高。结论:砷染毒时AIF介导的非caspase依赖性凋亡途径可能参与了大鼠生精细胞凋亡。     

慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF的表达升高

目的　观察慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF蛋白表达情况,探讨慢性酒精中毒脑损伤可能的发病机制。方法　清洁级8周龄雄性SD大鼠45只,随机分为对照组和酒精组,采用逐步增加浓度自由饮方法建立慢性酒精中毒大鼠动物模型。应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,采用HE染色法观察海马神经元病理形态学改变,TUNEL法、免疫组化法检测凋亡神经元数量及caspase-8、AIF蛋白的表达。结果　酒精组可见海马神经元数目缺失及细胞变性和损伤,其凋亡神经元数和caspase-8、AIF蛋白表达阳性细胞数均高于对照组（p<0.01）。结论　慢性酒精中毒大鼠海马存在明显神经元凋亡,伴有caspase-8、AIF蛋白表达增加,通过胱冬酶(caspase)依赖性和非依赖性两种通路发生细胞凋亡可能是其病理基础之一。     

过氧化物酶6在慢性砷中毒大鼠附睾的表达及意义

目的:研究过氧化物酶6(Prdx6)在慢性砷中毒大鼠附睾中的表达及意义,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高(60 mg/L)、中(12 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR法检测Prdx6的表达变化及意义,透射电镜观察精子超微结构变化。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,各染毒组Prdx6的蛋白及mRNA表达水平均显著较低。透射电镜结果显示对照组精子结构正常,砷染毒各组精子尾部中段线粒体均出现了病理损害。结论:慢性砷中毒对大鼠附睾中Prdx6的表达有影响,引起精子超微结构改变,说明其与男性不育有一定的关系。     

FAS和FASL基因在大鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测FAS和FASL基因在Wistar大鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在大鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法采用原位标记(TUNEL)法检测DNA单链或双链的裂解;应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的大鼠胸腺细胞凋亡时FAS和FASL基因的表达。结果镜观察地塞米松组TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处。免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内FAS呈低表达,随着地塞米松剂量的增加FAS的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);正常对照组胸腺内FASL呈高表达,随着地塞米松剂量的增加FASL的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论促凋亡蛋白FAS和抗凋亡蛋白FASL在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。     

豚鼠脑缺血再灌注损伤后内耳凋亡诱导因子的表达及与细胞凋亡的关系

目的:探讨豚鼠脑缺血再灌注损伤后螺旋神经节细胞凋亡诱导因子(AIF)表达的改变、细胞凋亡的情况以及两者之间的关系。方法:健康豚鼠40只随机分成正常组、假手术组和模型组,模型组分为缺血再灌注6、24、48 h 3组。用H-E染色观察脑缺血再灌注不同时间段耳蜗各部位的形态学改变,用免疫组织化学和免疫印迹检测螺旋神经节细胞.AIF的表达部位和表达量,用原位末端凋亡检测法(TUNEL法)检测螺旋神经节细胞凋亡的情况。结果;正常组、假手术组螺旋神经节罕见凋亡细胞,AIF为阳性表达,表达部位在细胞质;模型组螺旋神经节在缺血再灌注每个时间段均有细胞凋亡,AIF为强阳性表达,表主达部位在细胞核和细胞质,与正常组比较差异有统计学意义。结论:AIF参与了豚鼠脑缺血再灌注损伤后螺旋神经节细胞凋亡的发生。     

砷对大鼠附睾中肝细胞生长因子及其受体c-met表达与透明质酸酶活性的影响

目的:研究砷对大鼠附睾中肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-met与透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法:SD大鼠随机分为4组,对照组饮用蒸馏水,低、中、高剂量组分别饮用含2.4、12.0、60.0mg/L亚砷酸钠的蒸馏水。采用免疫印迹法检测HGF、c-met蛋白在大鼠附睾中的表达,改良HYD一明胶底物膜法测精子顶体内HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度),扫描电镜观察大鼠精子超微结构的改变。结果:与对照组比较,砷中毒各组HGF、c-met蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义;砷染毒中、高剂量组的HYD活性与对照组比较均显著下降。扫描电镜结果显示,与对照组比较,砷染毒低、中、高剂量组大鼠精子顶体完整率均较低,而精子畸形率均较高,差异均有统计学意义。结论:慢性砷中毒能够影响HGF及其受体c-met的表达,使HYD活性减弱,精子顶体完整率下降,精子畸形率升高。     

App17肽防治去卵巢大鼠海马神经细胞的凋亡

目的:观察去卵巢大鼠几种神经元凋亡相关蛋白的表达,并用TUNEL试剂盒检测,研究缺乏雌激素是否引起神经元凋亡;评估App17肽是否能改善去卵巢大鼠的神经细胞凋亡,初步探讨App17肽的神经保护作用机制。方法:雌性Wistar大鼠随机分3组:假手术组(shamcontrol组),卵巢去势对照组(OVX组),App17肽实验组(17P+OVX组)。Sham组做假手术,OVX组和17P+OVX组做双侧卵巢切除术。17P+OVX组从卵巢去势第7周开始用App17肽治疗6周,用免疫组化和Westernblot方法观察AIF、Bax、Bcl-2的表达,用TUNEL法检测凋亡情况。结果:免疫组织化学和Westernblot结果表明App17肽实验组AIF、Bax表达明显少于去卵巢组;Bcl-2在App17肽实验组的表达明显高于去卵巢组。TUNEL结果表明App17肽实验组凋亡细胞明显少于去卵巢组。结论:雌激素缺乏引起去卵巢大鼠海马和皮层神经细胞凋亡相关蛋白改变和出现凋亡细胞,App17肽具有明显的防治作用。     

始动caspase凋亡相关蛋白在大鼠肾发育中的表达

目的:探讨始动caspase凋亡相关蛋白在大鼠肾发育中的表达。方法:采用免疫组织化学与免疫印迹法,对大鼠肾发育中始动caspase凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-9的表达进行定性和定量观察。结果:免疫组织化学结果显示caspase-8主要表达在大鼠发育肾的近端小管和远端小管,在胚期其在远端小管的表达弱于近端小管,但在生后肾发育期其在远端小管的表达强于近端小管。而caspase-9在整个肾发育期主要表达在近端小管,远端小管的表达十分微弱。免疫印迹结果显示caspase-8蛋白表达在胚期较高,从P1d开始逐渐升高,在P7d时达到顶点,随后则逐渐减弱;caspase-9蛋白表达从E18d开始逐渐升高,在P3d其表达达到顶点,随后则逐渐降低。结论:在大鼠肾发育中,近端小管的细胞凋亡与caspase-8和caspase-9的表达密切相关,而远端小管的细胞凋亡则在生后肾发育期与caspase-8的表达有关。     

凋亡诱导因子介导TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡

目的探讨TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡的分子机制。方法用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测食管鳞癌EC9706细胞中凋亡诱导因子（AIF）和p63的表达;将质粒pcDNA3．1-TAp63γ转入EC9706细胞,流式细胞仪检测凋亡率,并用激光共聚焦显微镜和亚细胞器分离技术观察分析AIF的转位;采用RNA干扰技术下调AIF的蛋白表达水平,caspase广谱抑制剂zVAD．fmk预处理细胞,再用流式细胞仪分析EC9706细胞表达TAp63γ后凋亡率的变化。结果EC9706细胞中AIF表达且定位在细胞质中,p63基因的表达亚型是ANp63,TAp63γ不表达;在pcDNA3．1-TAp63γ转染组和pcDNA3．1-p53转染组的细胞质及细胞核蛋白中分别检测到AIF,pcDNA3．1转染组的胞核蛋白无AIF信号;pcDNA3．1转染组、pcDNA3．1-TAp63γ转染组、AIF—siRNA干扰后再转染pcDNA3．1-TAp63γ组、zVAD．fmk处理后再转染pcDNA3．1-TAp63γ组和AIF-siRNA干扰联合zVAD．fmk处理后再转染pcDNA3．1-TAp631组的凋亡率分别为1．37％、13．64％、4．52％、4．03％和1．91％。结论TAp63γ在诱导EC9706细胞凋亡的过程中,AIF从线粒体释放入胞质并转位到细胞核内;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp631诱导的细胞凋亡;TAp631诱导的细胞凋亡依赖于AIF和caspase。     

线粒体凋亡路径参与创伤后应激障碍大鼠海马神经元凋亡的调控

目的观察Caspase-9、Caspase-3和细胞色素C(CytC)在创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元中的表达及相互关系,探讨PTSD大鼠海马神经元凋亡的信号转导机制。方法成年雄性Wistar大鼠60只,采用国际认定的无连续单一应激(SPS)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,取SPS刺激后1d、4d、7d、14d、28d组和正常对照组。应用免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹法检测Caspase-9、Caspase-3和CytC蛋白的表达。结果免疫组织化学和免疫荧光结果显示,CytC蛋白于SPS刺激后4d在海马神经元胞质内的表达达到高峰,并维持较高水平,SPS刺激后7d逐渐下降。SPS刺激后,Caspase-9和Caspase-3阳性表达增强,均于SPS刺激后7d达到高峰。免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,模型组海马胞质内CytC蛋白水平明显上调,于SPS刺激后4d达到较高水平。而SPS刺激后线粒体中CytC蛋白水平则显著下降。在正常对照组,无Caspase-9和Caspase-3活性片段;在模型组,出现Caspase-9和Caspase-3活性片段,两者均于SPS刺激后7d达到高峰,14d开始下调。结论神经元凋亡可能是导致PTSD大鼠海马萎缩的重要机制之一;线粒体通路的激活参与了PTSD大鼠海马神经元凋亡的调控。     

金属硫蛋白降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡

目的 研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在金属硫蛋白(MT)减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡中的作用.方法 建立MT治疗亚砷酸钠(NaAsO2)诱导的大鼠砷中毒肝损伤模型,用MT治疗2周,以TUNEL法检测肝细胞凋亡,免疫组化法、Western blot检测大鼠肝脏GRP78、CHOP蛋白表达.结果 砷中毒模型组大鼠肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.05),MT治疗组肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达明显回降(P＜0.05),但仍然高于对照组(P＜0.05).结论 MT可通过降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒所致的肝细胞凋亡.     

红景天苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的影响

目的:探讨红景天苷对中波紫外线(UVB)诱导HaCaT细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将HaCaT细胞分为正常对照组、红景天苷处理组、UVB组和UVB+红景天苷组,先用UVB照射细胞,再用红景天苷处理HaCaT细胞24h,Real-time PCR和免疫印迹分别检测caspase 3、caspase 12、前细胞凋亡因子(CHOP)的mRNA及蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:UVB处理组caspase 3、caspase 12、CHOP的mRNA和蛋白表达明显增加,红景天苷处理后明显降低。UVB+红景天苷组较UVB组细胞增殖显著增加,凋亡率减少23.22%。结论:红景天苷可通过抑制caspase 12、CHOP的表达,减少UVB引起的HaCaT细胞凋亡。     

慢性砷中毒对大鼠行为能力及中脑黑质多巴胺含量与结构的影响

目的:观察慢性砷中毒对大鼠行为能力及中脑黑质多巴胺含量与其形态结构的影响.方法:砷中毒组采用三氧化三砷灌胃,连续染毒3个月后观察大鼠行为能力;高效液相色谱测定中脑黑质多巴胺含量;酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学显色;免疫印迹法检测大鼠中脑黑质TH与iNOS蛋...     

脑缺血对大鼠大脑皮质中钙通道Cav1.3表达的影响

目的:探讨脑缺血后大鼠大脑皮质中钙通道Cav1.3表达变化及其在脑缺血损伤中的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血7 d组和缺血14 d组。采用免疫组织化学和免疫印迹分别检测各组大鼠大脑皮质中钙通道Cav1.3的表达,采用TUNEL法观察大鼠大脑皮质内细胞的凋亡。结果:与假手术组比较,缺血7 d和14 d组大鼠大脑皮质中钙通道Cav1.3免疫组织化学显色的平均光密度(OD)值和免疫印迹条带的IOD比值都明显降低,缺血14 d组较7 d组降低更明显,细胞凋亡检测显示大脑皮质中凋亡神经元数量随缺血时间延长而增加。结论:缺血导致神经元凋亡的机制可能通过影响钙通道Cav1.3的表达,从而影响皮质神经元的正常功能,导致神经元死亡。     

促红细胞生成素对视网膜色素变性的RCS大鼠的作用

为观察促红细胞生成素对视网膜色素变性的RCS大鼠的作用,探讨其对视网膜变性神经元保护的可能机制。我们把出生后雄性RCS大鼠48只,随机分为给药组和对照组。RCS大鼠给药组从生后5d开始腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO),每5d注射一次,剂量为4000IU/kg。RCS大鼠对照组注射生理盐水,剂量同上。HE染色和TUNEL检测观察rhEPO对视网膜色素变性神经元的保护作用。应用免疫组织化学方法检测caspase2蛋白的表达。结果显示:(1)RCS大鼠给药组20d,25d,感光细胞的数目与对照组大鼠相比明显增加(P<0.05);(2)RCS大鼠给药组25dTUNEL检测阳性细胞数目与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);(3)生后25d到40d,RCS大鼠给药组和对照组在节细胞层和内核层观察到caspase2阳性染色,RCS大鼠给药组在20d和25d内核层caspase2阳性细胞数目多于对照组(P<0.05)。结果提示:在RCS大鼠视网膜变性的早期,rhEPO对神经元起保护作用,可以使感光细胞得到更多存留;rhEPO对视网膜变性神经元的早期保护作用可能是通过抑制凋亡的方式进行的;caspase2蛋白在视网膜的一过性高表达提示其参与了视网膜感光细胞的凋亡过程,rhEPO可减少其早期的表达,对早期变性的神经元发挥保护作用。     

大鼠脑慢性缺血状态再灌注对海马区神经细胞凋亡及p21和p53蛋白表达的影响

目的通过建立大鼠慢性脑缺血再灌注模型,观察再灌注时大鼠海马区神经细胞凋亡及p53和p21蛋白的表达。方法70只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10),模型组(n=30),模型再灌注组(n=30),应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,用免疫印迹法检测大鼠海马p53和p21蛋白的表达。结果对照组未见凋亡细胞,模型组凋亡细胞数明显少于模型再灌注组(p<0.05);p53和p21蛋白在对照组无表达,模型组表达少于模型再灌注组(p<0.05),术后48h达高峰,72h后逐渐降低。结论慢性脑缺血再灌注后海马神经细胞凋亡,海马区p53和p21蛋白表达上调可能参与正常灌注压突破综合症发病机制。     

BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡时BAD和Bcl-X/L基因的表达。结果免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内BAD呈低表达,地塞米松组随剂量的增加BAD的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有有统计学意义(P<0.05);正常对照组胸腺内Bcl-X/L呈高表达,地塞米松组随剂量的增加Bcl-X/L的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡蛋白BAD和抗凋亡蛋白Bcl-X/L在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。     

PARP-1/AIF介导的细胞凋亡

PARP-1/AIF通路介导的非caspase依赖性细胞凋亡多见于缺血再灌注或某些药物引起的神经细胞死亡。PARP-1定位于细胞核,参与细胞内多种生理活动。广泛的DNA损伤引起PARP-1过度激活,进而使线粒体蛋白AIF转位至细胞核,作为DNA内切酶引发染色质凝集、DNA片段化和细胞死亡。最近,对该通路信号转导和调控机制的研究取得了快速的进展。     

rL-RVG体外抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡

目的将表达狂犬病毒糖蛋白的重组LaSota株新城疫病毒疫苗(rL-RVG)感染至A549肺腺癌细胞,观察其对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法采用直接感染的方法将rL-RVG感染至A549细胞,采用Western blot法检测rL-RVG中RVG和NDV蛋白在A549细胞内的表达;MTT法检测rL-RVG对细胞增殖的影响,TUNEL法检测rL-RVG对A549细胞凋亡的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞检测术检测A549细胞凋亡情况;Western blot法检测caspase-3的表达,并与对照组LaSota株进行比较,PBS组为空白对照组。结果 A549细胞感染rL-RVG后RVG蛋白和NDV蛋白都稳定表达,MTT法结果显示细胞增殖明显被抑制,rL-RVG组抑制率高于LaSota组。A549细胞凋亡增多,其中流式细胞检测术中显示rL-RVG组早期凋亡细胞较其他2组增多,差异有统计学意义(P0.05),TUNEL检测凋亡指数增加,rL-RVG组较其他2组增多,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot法显示促凋亡蛋白caspase-3表达增加,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 rL-RVG感染A549细胞后能在细胞内稳定表达,rL-RVG可抑制肺癌细胞生长、促进肺癌细胞凋亡,效果优于野生LaSota株。     

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的影响

目的 研究低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸生精细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响. 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg.d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg.d)+炔雌醇25μg/(kg.d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d)]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过原位缺口末端标记(TUNEL)染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化. 结果 TUNEL染色显示,在正常对照组,阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中.棉甾联合用药组和激素组,阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01).iNOS免疫组织化学显示,在正常对照组,在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性.在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在IX-XII期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达.在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05).iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至最低,3时间点表达量无统计学差别. 结论 iNOS蛋白在低剂量棉酚加甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;生精细胞凋亡数增加,可能与iNOS的表达增多有关.