N-甲基-D-天门冬氨酸和非N-甲基-D-天门冬氨酸类受体在新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电中的作用

目的 探讨Ｎ－基－Ｄ－天门冬氨酸（Ｎ-methyl-Ｄ-aspartate,ＮＭＤＡ）和非ＮＭＤＡ类受体在基本呼吸节律发生和调 节中的作用。方法 在新生ＳＤ大鼠离休延髓脑片上记录舌下神经的呼吸节律性放电活动,在改良的Krebs液中加入兴 奋性氨基酸类递质及相应的拮抗剂,观察其ＲＲＤＡ的影响。结果 使用非ＮＭＤＡ受体激动剂海人酸（Kainic acid.ＫＡ） 后,可见呼吸周期及呼气时间有所延长, ＮＭＤＡ受体激动剂对呼吸活动则没有明显影响（Ｐ＞０．１）;相应的拮抗剂６－氰基 －７－硝基喹恶啉土卫四（６,７-dinitroquinoxaline-2,3-dione,ＤＮＱＸ）和２－氨基磷酸戊酸（D-２-amino-5-phosphonopentanoic, ＡＰ5）均可使放电频率和积分幅值明显降低吸气时间显著缩短（Ｐ＜０.０１）,ＤＮＱＸ同时可致呼吸周期和呼气时间明显缩短 （Ｐ＜０．０５）。结论 在哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中,ＮＭＤＡ类受体主要对呼吸活动的强度产生调节作用;而非 ＮＭＤＡ类受体不仅可以影响呼吸的强度,同时对呼吸的频率也发挥调节作用。     

N—甲基—D—天门冬氨酸拮抗酒精致鼠小脑颗粒细胞毒性作用的研究

目的 探讨N－甲基－D－天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)对鼠小脑颗粒细胞（CGC）存活的影响。方法 通过光学显微镜观察NMDA，一氧化氮酶抑制剂N^G－硝基－L－精氨酸（N^G-nitro-L-arginine methyl ester,NAME)以及可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6－Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione(LY83583)对鼠小脑颗粒细胞存活的影响。结果 NMDA能在无酒精的环境下促进细胞的生存，并能对CGC产生保护作用，减少酒精对细胞的杀死，但NAME及LY83583去能抑制NMDA的作用。结论 NMDA通过一氧化氮－环鸟苷酸通路（NO－cGMPpathway)促进鼠小脑颗粒细胞的存活并抵抗酒精的中枢神经毒性作用。     

甘氨酸对新生大鼠离体延髓脑片吸气神经元放电活动的影响

目的探讨甘氨酸(Gly)对延髓脑片面神经后核内侧区(mNRF)吸气神经元放电活动的影响。方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,主要包含mNRF,并完整保留舌下神经根,以改良Kreb,s液灌流脑片,同步记录舌下神经根呼吸节律性放电活动(RRDA)和吸气神经元的放电活动。在灌流液中分别单独给予Gly受体的特异性激动剂Gly和特异性拮抗剂士的宁(STR),并分别观察其对神经元放电活动的影响。结果给予Gly受体激动剂Gly后,吸气神经元的吸气时程(TI)缩短,放电的积分幅度(IA)减小,单位放电频率(PFn)变慢。给予其拮抗剂STR后,吸气神经元的呼气时程(TE)和呼吸周期(RC)缩短,PFn无明显改变。结论Gly及其受体参与了呼吸节律的调节,其调节作用可能是通过影响吸气神经元的放电活动参与了呼吸时相的转换。     

甘氨酸对新生大鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电活动的调制

目的 探讨甘氨酸(Gly)在延髓基本节律性呼吸放电发生和调节中的作用.方法 以改良Kreb's液恒温灌流新生Sprague-Dawley大鼠离体延髓脑片标本,稳定记录与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动(RRDA)后,第1、2组在灌流液中分别单独给予Gly受体的特异性激动剂Gly和特异性拮抗剂士的宁(STR);第3组分别先后给予Gly和Gly+STR,观察舌下神经根RRDA的变化,探讨Gly对其调节作用.结果 给予Gly后,吸气时程和放电的积分幅度显著缩短,呼气时程和呼吸周期无明屁变化;给予STR后,呼气时程和呼吸周期缩短,吸气时程和放电的积分幅度无明显变化,且Gly的作用可部分被STR逆转.结论 Gly参与了哺乳动物基本呼吸节律的调节.     

腺苷A1受体对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的 探讨腺苷A₁ 受体在基本呼吸节律产生和调节中的可能作用。方法 制作新生大鼠离体延髓脑片标本,主要包含面神经后核内侧区(the medialregion of the nucleus retrofacialis,mNRF),并保留舌下神经根的完整,以改良Kreb’s液灌流脑片,稳定记录舌下神经根呼吸节律性放电(respiratory rhythmical discharge activity, RRDA)。在灌流液中先分别单独给予腺苷A₁ 受体的特异性拮抗剂8-环戊-1,3-二丙基黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxa nthine, DPCPX)和特异性激动剂R-苯异丙基-腺苷(R-phenylisoprpyl-adeno sine,R-PIA);再分别先后给予R-PIA和R-PIA+ DPCPX,观察RRDA的变化,进一步探讨腺苷A1受体对其的调节作用。结果 给予腺苷A₁ 受体拮抗剂DPCPX后,呼气时程和呼吸周期明显缩短,吸气时程和积分幅度未出现显著性变化;给予腺苷A₁ 受体激动剂R-PIA后,吸气时程,积分幅度显著性降低,呼吸周期和呼气时程明显延长,且R-PIA的呼吸抑制作用可部分被DPCPX逆转。结论 腺苷A₁ 受体参于了哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中起着重要的作用。     

大鼠海马N-甲基-D天门冬氨酸受体的放射配基结合测定法

利用非标记N－甲基－D天门冬氨酸受体（NMDA）特异性阻断L－犤G－３H犦－谷氨酸与NMDA受体的结合，选择合适的放射配基结合反应时间、温度、放射性配基的浓度，笔者建立了大鼠海马NMDA受体分析方法，现报告如下。１材料和方法１．１动物与试剂SD大鼠，体重２００～３００g，由江苏省实验动物中心提供。０．３２mol／L蔗糖缓冲溶液，５０mmol／LTris－acetate缓冲液（TAB，pH７．４），L－犤G－３H犦－谷氨酸（Amersham公司）比活度１．２２１GBq／mmol，用前TAB稀释，NMDA（Sigma公司），GF／B玻璃纤维滤膜（Whatman公司…     

腺苷A1受体对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的探讨腺苷A1受体在基本呼吸节律产生和调节中的可能作用.方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,主要包含面神经后核内侧区(the medialregion of the nucleus retrofacialis，mNRF),并保留舌下神经根的完整,以改良Kreb's液灌流脑片,稳定记录舌下神经根呼吸节律性放电(respiratory rhythmical discharge activity,RRDA).在灌流液中先分别单独给予腺苷A1受体的特异性拮抗剂8-环戊-1,3-二丙基黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxa nthine,DPCPX)和特异性激动剂R-苯异丙基-腺苷(R-phenylisoprpyl-adeno sine,R-PIA);再分别先后给予R-PIA和R-PIA DPCPX,观察RRDA的变化,进一步探讨腺苷A1受体对其的调节作用.结果给予腺苷A1受体拮抗剂DPCPX后,呼气时程和呼吸期明显缩短,吸气时程和积分幅度未出现显性变化;给予腺苷A1受体激动剂R-PIA后,吸气时程,积分幅度显,性降低,呼吸周期和呼气时程明显延长,且R-PIA的呼吸抑制作用可部分被DPCPX逆转.结论腺苷A1受体参于了哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中起着重要的作用.     

脊髓NK1受体与非NMDA受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作用

目的观察脊髓水平神经激肽-1（NK1）受体和非N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体对大鼠心脏-躯体运动反射的调节作
用。方法鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP及拮抗剂CP-96345与非NMDA受体激动剂NMDA及拮抗剂6,7-二硝基喹喔啉-2,
3-二酮（DNQX）,观察心包内注射缓激肽（BK）诱发大鼠心脏-躯体运动反射的变化,该反射以背斜方肌肌电（EMG）为观测指
标。结果鞘内注射NK1受体激动剂Sar-SP后,对心包内BK诱发的背斜方肌EMG有明显的易化作用（P<0.05）,这种易化作用
被鞘内预先注射NK1 拮抗剂CP-96345 完全阻断;鞘内注射非NMDA受体激动剂NMDA后,对心包内BK诱发的背斜方肌
EMG有显著的易化作用（P<0.05）,这种易化作用被鞘内预先注射非NMDA受体拮抗剂DNQX部分阻断;鞘内联合注射Sar-SP
与NMDA,对EMG的易化作用较单一注射Sar-SP或NMDA显著增强（P<0.05）。结论脊髓水平的NK1受体与非NMDA受体
参与了大鼠心脏-躯体运动反射的调节。
     

Ⅱ组代谢性谷氨酸受体参与新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的调节

目的 探讨Ⅱ组代谢性谷氨酸受体在延髓离体脑片基本节律性呼吸放电调节中的作用.方法 以改良Kreb'S液恒温灌流新生Sprague-Dawley大鼠(0～3d)离体延髓脑片标本,稳定记录与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动(RRDA)后,第一组分别给予不同浓度Ⅱ组代谢性谷氨酸受体的特异性激动剂2R,4R-4-aminopyrrolidine-2,4-dicarboxylate(APDC)(10、20、50 μmol/L),观察各浓度舌下神经根RRDA的变化;第二组给予特异性拮抗剂(2S)-α-ethyiglutamic acid(EGLU)(300μmol/L),观察舌下神经根RRDA的变化;第三组先给予50μmol/L APDC持续灌流10 min后再给予50μmol/L APDC+300 μmol/L EGLU灌流10 mm,观察各时间点舌下神经根RRDA的变化.结果 单独给予APDC后,呼吸周期和呼气时程延长、吸气时程缩短、吸气放电积分幅度降低,且有浓度依赖性;单独给予EGLU后,呼吸周期及呼气时程缩短,对吸气时程和放电积分幅度没有影响,且APDC的作用可以被EGLU部分逆转.结论 Ⅱ组代谢性谷氨酸受体参与了哺乳动物基本呼吸节律的调节.     

NMDA受体与缺血性脑损伤

N一甲基一D一天门各氨酸（N-Me山yi-D-Ape，NMDA）受体是兴奋性氨基酸（ExCitompAlllllloACids，EAAs）的一种特异性受体。目前认为，NMDA受体介导的EAAs激发钙离子细胞内流在缺血、缺氧、持续癫病、脑外伤等所致的神经元损伤中起着关键作用［‘-6］。本文就近年来NMDA受体与缺血性脑损伤方面的研究进展作一综述。INMDA受体的分子生物学特性l·INMDA受体的分子结构EAAS主要通过受体活化方式而发挥兴奋性神经递质的作用L‘」。根据EAAs受体的药理和电生理特性，中枢神经系统EAAS受体可分为两类：离子通道型受体和亲代谢…     

5-羟色氨_(2A)受体对新生大鼠延髓脑片节律性呼吸放电的调制作用

目的探讨5-羟色氨2A(5-HT2A)受体对新生大鼠延髓脑片节律性呼吸放电的调制作用。方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,给予灌流恒温改良Kreb′s液,记录舌下神经根呼吸相关节律性放电活动(RRDA)。标本分2组:第1组使用含5-HT2A受体特异激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯基丙烷(DO I)的Kreb′s液灌流脑片,观察其对RRDA的影响;第2组使用含5-HT2A受体特异拮抗剂酮舍林的Kreb′s液灌流脑片,观察其对RRDA的影响。结果DO I延长RRDA吸气放电时程(TI)、缩短呼气时程(TE)、缩短呼吸周期(RC)、增强RRDA放电积分幅度(IA),对RRDA有兴奋作用(P<0.01)。酮舍林缩短RRDA的TI,延长TE和RC、减弱IA,对RRDA有抑制作用(P<0.01)。结论5-HT2A受体参与了新生大鼠基本呼吸节律的产生和调节。     

新生大鼠反复惊厥对NMDA受体表达的长期影响

目的：研究反复惊厥对大鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体表达，以及成年期认知功能和惊厥阈的长期影响。方法：生后6d(用P6表示，下同)的Wistar大鼠随机分成两组，每组6只，惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次，每次持续30min，连续6d；对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。两组大鼠于P60-P65行Morris水迷宫实验，检测大鼠的学习记忆功能。于P75时给予大鼠腹腔注射戊四唑(PTZ)测定大鼠的惊厥阈。随即断头处死大鼠，分离大脑皮质和海马，匀浆提取细胞膜蛋白，应用免疫印记法测定NMDA受体亚基l(NRl)和NR2A-2D表达的变化。结果：从P6l至P65，两组大鼠寻找平台时间均逐渐缩短，惊厥组大鼠在P65的平均寻找平台时间较对照组显著延长。惊厥组大鼠注射PTZ后发生惊厥的潜伏期与对照组比较差异无显著性。在大脑皮层，惊厥组大鼠较对照组NRl和NR2B表达水平明显下调，在海马这两种亚基表达水平无明显改变，在大脑皮层和海马区，惊厥组较对照组NR2A表达水平明显下调，NR2C表达水平明显上调。两组在皮层和海马均无NR2D表达。结论；新生大鼠反复惊厥可导致远期认知障碍，同时伴有NMDA受体的数量和结构上的长期改变，NMDA受体表达的这种改变可能在发育期惊厥导致的脑长期认知功能损害中起重要作用。     

A68930对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的 探讨激活多巴胺D1受体对延髓脑片基本节律性呼吸放电的影响.方法 用SPF级新生SD大鼠(0～3 d)制备离体延髓脑片标本,随机分成Ⅰ～Ⅳ组(每组n=5),以改良的Kreb's液恒温灌流,稳定记录到与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动(RRDA).Ⅰ组为对照组,只用Kreb's液灌注;Ⅱ～Ⅳ为实验组,分别给予1、2、5 μmol/L的多巴胺D1受体特异性激动剂cis-(±)-1-(aminomethyl)-3,4-dmydro-3-phenyl-1H-2-benzopyran-5,6一diolhydrochlo-ride(A68930)持续灌流10min:观察各组改灌前以及改灌后1、3、5min时舌下神经的呼吸节律性放电活动的变化.结果 (1)给药后RRDA的呼吸周期(RC)和呼气时间(TE)随时间延长逐渐缩短,放电积分幅度(LA)逐渐增大,5 min时RC、TE和IA的变化最明显:在2、5μmol/L组与用药前比较三项指标有统计学差异(2μmol/L组1 min时的IA与用药前相比较没有统计学差异);(2)随用药浓度增大RC、TE逐渐减小,而IA逐渐增大,5 μmol/L时RC、TE、IA变化最明显;用2、5μmol/L的A68930灌流后,三项指标与对照组比较有统计学差异.结论 多巴胺D1受体参与节律性呼吸的调节;多巴胺D1受体可能主要是通过缩短呼气时程增加呼吸的频率,通过增强吸气放电幅度来参与呼吸运动强度的调节.     

原代培养神经细胞膜经N—甲基—D—D天冬氨酸和MK—801作用后原子力微镜观察

目的：对比观察正常培养皮层神经元在N－甲基－D－天冬氨酸（NMDA）及其受体拮抗剂－MK－801作用下膜表面三维构像形态的改变。方法：利用分辨率为0．1－0．01nm的原子力显微镜（AFM）对原代培养大鼠皮层神经细胞膜表面进行纳米尺度的扫描观测。结果：正常神经元膜表面光滑，起伏均匀，隆起的颗粒状蛋白密集，间隔规律。NMDA损伤后神经元破碎，崩解，膜失去连续性，NMDA＋MK－801作用下神经元膜皱折增加，边缘粗糙，起伏程度介于前两者之间，结论：（1）AFM具有分辨率高，制样简单特点，（2）AFM能细微地分辨损伤保护作用后引起的细胞膜表面三维形态改变。（3）NMDA作用后膜结构开始解体，膜蛋白颗粒聚集增大，脂质凹陷加深，间距增宽，表面粗糙度增加。     

N—甲基—D—门冬氨酸2B受体mRNA在纹状体边缘区的表达

目的 通过研究N－甲基－D－门冬氨酸（N-methyl-D-asparate,NMDA)2B受体是否在纹状体边缘区表达,从而在基因分子方面确定边缘区在学习记忆过程中的作用。方法 用地高辛标记多相探针方法,原位检测大鼠纹状体边缘区内NMDA2B受体表达。结果 原位杂交结果发现NMDA2B 受体mRNA阳性信号在纹状体内分布不均匀,主要见于尾壳核,在尾壳核和苍白球间的边缘区部位可见中等大小梭形神经元,呈密集的带状分布,而苍白球只有少量的阳性胞体。结论 大鼠纹状体边缘区可以合成NMDA2B受体,推测边缘区的学习记忆功能与NMDA受体有关。     

8-OH-DPAT对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的 探讨激活5-HT1A受体对延髓基本节律性呼吸放电的影响.方法 制备20只新生SD大鼠(0～3 d)离体延髓脑片标本,以改良的Kreb's液恒温灌流,稳定记录到与之相连的舌下神经的呼吸节律性放电活动(RRDA)后,随机分成Ⅰ～Ⅳ组(每组n=5).Ⅰ～Ⅳ组给予5-HT1A受体的特异性激动剂( /-)-8-hydroxy-2-(di-N-propylamino)tetralin hydrobromide(8-OH-DPAT),浓度分别为1、5、10、20 μmol/L持续灌流10 min,观察给药后1、3、5 min时舌下神经的呼吸节律性放电活动的变化.结果 给药前后不同时间点之间呼吸周期(RC)有显著性差异(F=181.219,P＜0.001),各浓度在给药前RC最小,给药后逐渐延长,5 min时达到最大.各浓度之间有显著性差异(P＜0.001),给药后各时间点1 μmol/L的RC最小,给药浓度增大,RC延长,20 μmol/L时RC最大.给药前后和不同浓度之间存在交互效应(P＜0.001).给药前后不同时间点之间积分幅度(IA)有显著性差异(P＜0.001),在10 μmol/L和20μmol/L浓度组中给药前后不同时间点之间有显著性差异(P=0.017和0.001).各浓度之间有显著性差异(P＜0.001),给药后各时间点1μmol/L的IA最大,给药浓度增大IA减小,20μmol/L的IA最小.给药前后和不同浓度之间存在交互效应(P=0.002).结论 (1)8-OH-DPAT长效抑制吸气活动,对新生大鼠离体延髓脑片标本呼吸周期具有剂量依赖性延长作用,对频率和积分幅度具有剂量依赖性抑制作用.(2)5-HT1A受体参与了哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节.     

遗传性癫Jian易感大鼠惊厥后脑内N—甲基—D—天冬氨酸受体亚基NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达

目的：探讨惊厥后大脑皮质N－甲基－D－天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚基蛋白表达与癫Jian发病机制的关系。方法：利用免疫组化技术,观察听源性癫Jian易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间大脑皮质、海马等脑区NMDA受体亚基NR1、NR2A,NR2B蛋白表达状况。结果：惊厥后大脑皮质,海马齿状回,CA1、CA3等脑区NR1蛋白表达呈时间依赖性增高。大脑皮质在惊厥后4hNR1蛋白表了开始增加,24－48h达高峰,海马齿状回、CA1和CA3等脑区4h达高峰,8h开始下降,24h恢复正常。惊厥后4－8h,在海马CA1区NR2A亚基蛋白表达短暂性降低。而在大脑皮质、海马齿状回和CA3等脑区,惊厥后时间点NR2A,NR2B蛋白表达均无明显改变。结论：听源性惊厥后NMDA受体亚基蛋白表达的变化提示NMDA受体亚基组成的改变,这种改变可能与神经网络兴奋性增高及癫Jian感性的保持有关。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经元N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对损伤脊髓保护作用的分子机制。方法 :采用Allen′s法以 10g× 2 .5cm力致伤大鼠T8脊髓 ,插蛛网膜下隙导管于术后即刻、2h、4h、8h、12h、2 4h ,各注入NGF溶液 ,并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用原位杂交法检测N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1(NMDAR1)mRNA在脊髓中的表达。结果 :应用原位杂交法检测 ,正常组大鼠脊髓中几乎无NMDAR1mRNA表达 ,生理盐水组NMDR1mRNA表达明显增多 ,NGF组与生理盐水组相比较 ,NMDAR1mRNA表达明显减少 (P <0 .0 1)。结论 :NGF能通过抑制脊髓中N 甲基 D 天门冬氨酸受体 (NMDAR)的生成 ,抑制钙内流 ,抑制NO的生成 ,从而保护损伤的神经组织。     

强啡肽致脊髓损伤中非阿片样受体机制的研究

目的：探讨强啡肽（dynorphin,Dyn）致脊髓损伤的作用中是否有兴奋性氨基酸的N－甲基－D－门冬氨酸（NMDA）受体通过非阿片途径进行介导,为临床治疗脊髓继发性损伤提供新的思路。方法：通过大鼠蛛网膜下腔置管注药模型,观察不同剂量的非竞争性NMDA受体拮抗剂MK－801对DynA(1-13）致脊髓损伤作用中神经功能和组织病理改变的影响。结果：预先鞘内注射MK－801能明显缓解DynA(1-13)对神经功能和组织病理的损害作用,且呈一定的量效关系。结论：强啡肽致脊髓损伤的非阿片途径中至少有一定部分是通过NMDA受体介导的。     

胶质细胞代谢对新生大鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的探讨胶质细胞代谢在延髓基本节律性呼吸放电的作用。方法制备12只新生SD大鼠（0～3d）离体延髓脑片标本,以改良的Kreb＇s液（MKS）恒温灌流,稳定记录到与之相连的舌下神经的呼吸节律性放电活动（RRDA）后,第一组在灌流液中分别单独给予胶质细胞代谢激动剂L-谷氨酰胺（L-GLN）和拮抗剂L-硫酸蛋氨酸（L-MSO）,第二组先后给予L-MSO和L-MSO＋L-GLN,观察舌下神经根RRDA变化。结果给予L-MSO后,呼吸周期（RC）和呼气时程（TE）显著延长,吸气时程（TI）和放电积分幅度（IA）降低;给予L-GLN后RC、TE明显缩短,TI、IA无明显变化,且L-MSO的呼吸抑制作用可被L-GLN逆转。结论胶质细胞代谢在哺乳动物基本节律性呼吸的调节中起着重要的作用。