青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度和作用不同时间的青蒿素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用。方法取对数生长期的细胞接种于96孔板,给予不同浓度的青蒿素0．10．20．40．60．81．01．2 mmol／L）处理,给药24 h后在倒置显微镜下观察细胞形态的改变,并用MTT法检测药物的细胞毒作用。结果倒置显微镜下,细胞随药物浓度和作用时间的增加对细胞的毒性作用增强,细胞数目均有所减少,多数细胞体积固缩变小,失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形。 MTT结果显示,不同浓度青蒿素对肿瘤细胞的抑制效果呈现出浓度和时间的依赖性。1．2 mmol／L的青蒿素,作用细胞24 h后的抑制率达到了81．33％。结论青蒿素在体外对肝HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈现一定的时间和剂量依赖性。     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

儿茶素抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡作用研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞Cyclin D1,Bcl-2表达的影响,探讨EGCG抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法观察EGCG对肝癌细胞HepG2增殖的影响,免疫细胞化学法、Western blot法分别检测EGCG作用后Cyclin D1,Bcl-2的表达。结果 EGCG呈浓度依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖(P<0.05),免疫细胞化学和Western blot的结果均显示EGCG作用后Cyclin D1和Bcl-2的表达下调。结论 EGCG可能通过下调Cyclin D1,Bcl-2的表达,抑制HepG2细胞增殖的同时诱导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

甘草黄酮诱导肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞凋亡及其对相关蛋白ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.     

半枝莲抑制人肝癌QGY-7701细胞增殖研究

目的 探讨半枝莲抑制人肝癌QGY-7701细胞的初步机制。方法 MTT法检测半枝莲作用后QGY-7701细胞增殖的改变,光、电镜观察其形态变化,流式细胞仪检测其凋亡细胞比例、细胞周期的变化及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas表达。结果 半枝莲能抑制QGY-7701细胞的增殖,作用72h后,细胞呈现凋亡早期形态;凋亡细胞增多：G0／G1期细胞减少,G2／M期细胞增多;Bax表达增强,Bcl-2表达减少,Fas表达变化不明显。结论 半枝莲可抑制QGY-7701细胞增殖,可能与通过激活Bcl-2基因家族抑癌基因、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期有关。     

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的 以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制.方法 在3个时间点(24、48、72 h)采用 MTT 比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50).根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6 mol/L 3个浓度进行下述实验.通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片, Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况.结果 ① MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;② 流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;③ 经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;④ Western blot 结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调.结论 橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用.其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡.HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物.     

补骨脂酚通过线粒体自噬抑制人肝癌Hep3B细胞生长的机制研究

[目的] 探讨中药补骨脂活性成分补骨脂酚（BAK）诱导人肝癌Hep3B细胞生长抑制的机制。[方法] 采用噻唑蓝法（MTT法）检测BAK对人肝癌Hep3B细胞生长抑制作用;相差显微镜观察BAK处理后Hep3B细胞形态变化;Hoechst/Mitotracker/Rhodamine荧光探针染色结合高内涵细胞成像系统分析BAK对线粒体功能的影响;免疫印迹法（Western blot法）考察BAK处理后自噬标志性蛋白溶酶体相关蛋白1（LAMP1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、SQSTM1蛋白（p62）以及线粒体自噬标志性蛋白PTEN诱导假定激酶1（PINK1）、帕金蛋白（Parkin）、线粒体融合蛋白2（MFN2）、线粒体膜蛋白（Tom20）的表达情况;MTT法考察线粒体自噬抑制剂氯喹（CQ）、巴弗洛霉素A1（Baf-A1）对BAK诱导的肝癌细胞生长抑制的影响。[结果] BAK时间剂量依赖性抑制Hep3B细胞生长;高内涵实验结果表明BAK能够升高线粒体质量,降低线粒体膜电位;BAK可以上调LAMP1、LC3、PINK1、Parkin表达量,下调p62、 MFN2及Tom20蛋白表达;加入线粒体自噬抑制剂可显著逆转BAK诱导的Hep3B细胞生长抑制。[结论] 补骨脂酚通过线粒体自噬抑制人肝癌Hep3B细胞生长。     

奥曲肽联合特异性COX-2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398和生长抑素类似物奥曲肽联合使用对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖、凋亡的影响。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。结果:(1)MTT法显示NS-398和奥曲肽均在一定范围内呈浓度和时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞的增殖;联合用药组抑制率显著高于单用NS-398或奥曲肽组(P<0.01),金正均方法显示q>1.15,提示两药联合应用有协同抑制肝癌细胞增殖效应,并随着作用时间延长而增强。(2)流式细胞仪测定显示,NS-398、奥曲肽和两药联合作用于SMMC-7721细胞24 h后,联合用药组细胞凋亡率显著高于单一用药组(P<0.01)。结论:NS-398和奥曲肽呈剂量、时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞凋亡,两者联合应用具有协同作用。     

上调XB130表达对人肝癌HepG2细胞凋亡和增殖的影响

目的观察XB130 表达上调后人肝癌细胞HepG2 增殖和凋亡的变化,并探讨其作用机制。方法Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝癌细胞株中XB130表达;构建过表达质粒pCMVEGFP-XB130 转染HepG2 细胞,实验分为pCMV-EGFP-XB130 组（pCMV-EGFP-XB130 转染）,空白对照组（EGFP 转染）。以免疫荧光、Western blot法及qRT-PCR 法检测上调效率。Western blot 法检测PI3K/Akt通路相关基因表达;采用MTT法检测转染后细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果XB130 蛋白及其mRNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、HepG2 和MHCC97H 中均有表达,在HepG2 细胞株中表达量最低（ F=6.342 和5.424,均P=0.001）。与EGFP 组比较,pCMV-EGFP-XB130 组中p-p21、p-p27、p-FOXO3a 及Pro Capase-9蛋白表达上调（t =4.652,3.558,6.743 和3.021,均P<0.05）;XB130 表达上调后在72 及96 h HepG2 细胞增殖能力增强（ t=4.752 和8.542,均P=0.001）;XB130 表达上调后HepG2 细胞凋亡率降低（t =7.467,P =0.001）。结论XB130 表达上调通过PI3K/Akt信号通路促进肝细胞癌细胞增殖,抑制凋亡。     

选择性ＣＯＸ-２抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对肝细胞癌细胞周期的影响

目的:探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib对培养的人肝细胞癌细胞的细胞周期的阻滞作用.方法:采用3种常规培养的人肝细胞癌细胞株HUH-7、Hep3B和HepG2,分别给予不同浓度的celecoxib(0、10、25、50 μmol/L),作用不同的时间(0、12、24、48 h),用WST-8法检测细胞的活性,用流式细胞仪检测肝癌细胞的细胞周期变化.结果:WST-8检测发现,随着celecoxib的作用浓度的增加和作用时间的延长,3种肝癌细胞的细胞活性明显下降.流式细胞仪检测发现,3种肝癌细胞在celecoxib 25μmol/L作用24 h后出现Go/G1期阻滞,HUH-7细胞也出现较弱G2/M期阻滞的现象,48 h时更为明显.结论:选择性COX-2抑制剂celecoxib可以通过明显的细胞周期阻滞作用降低肝细胞癌细胞活性,阻滞的时期主要位于Go/G1期和G2/M期.     

美洛昔康联合奥曲肽增强对肝癌生长的抑制作用

目的美洛昔康和奥曲肽以各自不同的作用机制均能抑制肝癌生长,两者联用其抗肿瘤作用将如何,并不清楚.从不增加不良反应但又能最大限度增加抗肿瘤作用的角度考虑,我们将探讨美洛昔康联合奥曲肽能否协同抑制肝癌细胞生长.方法采用 3H-TdR掺入法探讨美洛昔康和奥曲肽单独或联合应用对人肝癌细胞株HepG2生长的影响,根据中效原理判断两者相互作用的关系;并观察它们对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响.结果美洛昔康联合奥曲肽在体外能显著抑制HepG2肝癌细胞的生长,其浓度与 3H-TdR掺入值呈负相关(r=-0.980, P<0.01).美洛昔康联合奥曲肽能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤生长,抑瘤率为75.4%,较单药美洛昔康抑瘤率55.1%明显增高(P<0.05 ).各组裸鼠的体内实验中未见明显不良反应.结论体外细胞培养及裸鼠原位移植瘤实验均表明:美洛昔康联合奥曲肽能显著增强抑制肝癌生长的作用,美洛昔康和奥曲肽呈协同作用.     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L（GH0组）、5μg/L（GH5组）、25μg/L（GH25组）、50μg/L（GH50组）、100μg/L（GH100组）和500μg/L（GH500组）的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加（P〈0.05）;GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）,Bax mRNA和蛋白表达显著降低（P〈0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.05）。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。     

甘草酸苷对肝癌细胞SMCC-7721凋亡的诱导作用

目的 探讨甘草酸苷对肝癌细胞SMCC-7721凋亡诱导作用及相关机制.方法 以甘草酸苷(0、10、30、100μg/mL)处理肝癌细胞SMCC-7721 48 h后,咪唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位;紫外分光光度法检测细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性的影响;Western blot分析线粒体途径中相关蛋白p53、细胞色素C(CytC)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达.结果 与阴性对照比较,10、30、100 μg/mL甘草酸苷可显著降低细胞的活力(P＜0.01),诱导细胞凋亡(P＜0.01),促进线粒体膜电位去极化(P＜0.01),抑制肝癌细胞SMCC-7721Caspase-3、Caspase-9活性(P＜0.01),并上调p53、CytC、Bax的表达(P＜0.01),下调Bcl-2的表达(P＜0.01),且作用呈现浓度依赖关系.结论 甘草酸苷可通过线粒体途径诱导肝癌细胞SMCC-7721凋亡.     

Antitumor Effects of Soluble TRAIL in Human Hepatocellular Carcinoma

TNF related apoptosis inducing ligand(TRAIL) is a promising cancer therapeutic agent,which appears to specifically kill transformed cells,and spare most normal cells[1, 2]. In the presentstudies, we investigated the expression of TRAILand TRAIL receptors in 60 HCC tissues, 20 nor mal liver samples and two HCC cell lines (HepG2and SMMC 7721). The effects of TRAIL on pro moting apoptosis in the HCC cell lines were ana lyzed after the cells exposed to the…     

ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的： 检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。 方法： 采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5 的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。 结果： PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P＜0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72　h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组［(8.770±0.656)%］和阴性对照组［(8.763±1.201)%］比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论：ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。     

Smac过表达增强氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

目的:研究Smac过表达联合氯化镉(CdCl2)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为以Smac为基础的肿瘤基因治疗以及镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据.方法:实验共设立5组,分别为对照组、pcDNA3.1+组、pcDNA3.1+-hSmac组、CdCl2组以及CdCl2联合Smac组.对照组细胞不进行细...     

肝细胞生长因子体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的 :观察肝细胞生长因子 (HGF)对体外培养的人肝细胞癌细胞的生长效应。方法 :将处于指数生长期的SMMC 772 1细胞经过 (HGF处理组 )或不经 (对照组 )HGF处理培养 1～ 4d ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞数 ,并进行细胞周期分析。结果 :HGF对SMMC 772 1细胞增殖具有剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内 ,使用最高浓度的HGF(rhHGF为 2 0 μg·L-1、cHGF为 10 0mg·L-1)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度 (5、10、2 0 μg·L-1)rhHGF处理 3d的培养细胞均有一半以上停留在G0 /G1期。结论 :HGF对SMMC 772 1人肝细胞癌细胞的体外生长有强烈的抑制作用 ,这与细胞生长阻滞在G0 /G1期有关。     

青蒿素联合厄洛替尼对肺癌细胞生物学行为的影响

[目的] 探讨青蒿素联合厄洛替尼对肺癌细胞的活性和凋亡的影响。[方法] 通过CCK-8实验检测青蒿素和/或厄洛替尼不同浓度处理下A549肺癌细胞的活性;流式细胞术检测青蒿素和厄洛替尼单独或联合作用下A549肺癌细胞凋亡行为变化;小鼠肿瘤内注射实验检测青蒿素和厄洛替尼单独或联合作用下对小鼠成瘤的影响。[结果] 青蒿素联合厄洛替尼作用A549肺癌细胞时细胞活性下降91%,最佳的用药浓度为10 μg/mL青蒿素和10 μg/mL厄洛替尼;青蒿素联合厄洛替尼诱导细胞凋亡,凋亡率高达90%,显著高于单独处理组;肿瘤内注射青蒿素和厄洛替尼,使小鼠体内肿瘤体积显著缩小。[结论] 青蒿素联合厄洛替尼能降低肺癌细胞活性,诱导其凋亡,也能有效地减少体内肿瘤体积。     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

毛萼乙素诱导肝细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的研究毛萼乙素抑制肝癌肿瘤细胞增殖的机制。方法利用MTr实验检测毛萼乙素对肝癌肿瘤细胞株增殖的影响,采用Hoechst染色法检测毛萼乙素是否能引起人肝癌细胞株HepG2的凋亡,采用Western—blotting检测凋亡相关蛋白Bax和PARP的表达水平,免疫荧光技术检测Bax的表达水平。结果毛萼乙素可以明显抑制肝癌细胞的生长,Hoechst染色实验发现毛萼乙素可以诱导肝癌细胞的凋亡,Western—blotting实验检测到实验组Bax高表达,凋亡蛋白PARP的剪切带与对照组相比也明显增强。免疫荧光实验也显示,实验组Bax高表达。结论毛萼乙素可通过升高促凋亡蛋白Bax的表达,促进肝癌细胞株HepG2的凋亡,从而抑制其增殖。