染料木黄酮对Panc 1细胞株基因表达的影响

目的 研究染料木黄酮对Panc 1细胞株基因表达的影响.方法 用染料木黄酮处理Panc 1细胞株0、1、3、6和12h.从各个样本中提取总RNA并制备成辅酶R标记的探针和人基因组U133A芯片杂交,提取和分析数据.对因染料木黄酮作用而表达水平大幅改变的基因,用实时PCR验证.结果 两次独立实验表明染料木黄酮显著改变了47个基因的表达水平:表达上调的有egr-1和IL-8;下调的有 EGF-R AKT2, CYP1B1, NELL2, SCD, DNA ligase Ⅲ, Rad,和18s及28s rRNA等.这些改变用实时PCR得到了验证,虽然变化的倍数在两种方法中不是完全一致.结论 染料木黄酮的抑癌机制包括了EGF-R信号通路,其中涉及的5个基因表达均下调(EGFR,egr-1,AKT2,CYP1B1和NELL2).染料木黄酮还可能通过抑制AKT2,CYP1B1和DNA连接酶Ⅲ来解除肿瘤细胞的自我保护而起作用.另外,染料木黄酮可能通过抑制SCD的表达来抑制癌肿形成.最后,染料木黄酮抑制rRNA形成从而调节肿瘤生长.     

Dose-dependent induction of apoptosis by R-apomorphine in CHO-K1 cell line in culture

A variety of mechanisms have been proposed as explanations for the distinctive neuropathology of Parkinson's disease, such as increased iron levels, increased oxidant stress or decreased antioxidant defences. The vulnerability of dopamine-containing neurons towards cell death has attracted much attention to the dopamine molecule itself as one of the probable neurotoxic factors leading to neurodegeneration. The similarity between apomorphine and dopamine with regards to their chemical, pharmacological and toxicological properties provided a basis for investigating the nature of the toxicity of the former agent. In this study the CHO-K1 cell line was exposed to different concentrations of apomorphine, and markers of cell death and apoptosis were studied. Apomorphine reduced cell proliferation in a dose-dependent fashion after 72 h incubation. Furthermore, apomorphine induced dose-dependent cell death at concentrations of 10-50 microM. The CHO-K1 line showed specific markers of apoptosis such as the typical DNA laddering phenomenon on agarose gel, morphological changes of apoptotic nuclei as described by in situ end labelling, and annexin binding.These data strongly suggest that apomorphine, like dopamine, elicits its cytotoxic effect with an apoptotic mechanism.     

氧化苦参碱与抗肿瘤药物联合作用对HNE-1、HNE-1(200)细胞增殖抑制的影响

目的了解天然有效成分氧化苦参碱联合常用抗肿瘤药物(长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂)对HNE-1、HNE-1 (200)细胞的增殖抑制作用。方法本研究以鼻咽癌HNE-1细胞株以及由放射线照射诱导的耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,采用氧化苦参碱与低毒剂量的常用抗肿瘤药物联合应用,用MTT法测定其对实验细胞的增殖抑制率。结果对试验细胞抑制率低于20%的低毒浓度的长春新碱、平阳霉素、5-Fu、顺铂加入低毒浓度(0.5mg/mL)的氧化苦参碱后,使4种药物对细胞的抑制率增加,浓度越低,增幅越大。结论低浓度的天然药物与抗肿瘤药物联合应用对肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用,并且时放射线照射诱导的耐药细胞株有一定的逆转作用。     

人鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2的光声光谱

目的:了解人鼻咽癌细胞的光谱吸收特性。方法:利用单光束光声光谱技术测量两株人鼻咽癌细胞(CNE-1、CNE-2)的归一化光声光谱。结果:在波长为380nm~700nm范围内,这两株人鼻咽癌细胞的光声光谱吸收特性存在着显著差异,它们的光谱吸收强度大小为:CNE-2>CNE-1。结论:利用光声光谱技术能够区分不同的人鼻咽癌细胞株的光谱差异性,从而表明该技术能为鼻咽癌的研究提供一种新方法。     

姜黄素的体外抗癌作用及其水溶液的稳定性

目的探讨姜黄素（curcumin，Cur）对人癌细胞株的体外作用特点及其水溶液的稳定性。方法以MTT法观察对人胃癌MGC803、人肝癌Be17402、人红白血病K562及其耐阿霉素株K562／ADM等的体外杀伤作用，并以体外活性变化为指标观察Cur水溶液的稳定性。结果Cur8.5～136.0μmol·L-1对上述细胞的IC50分别为13.0，15.9，11.7，62.6μmol·L-1;低于8.5μmol·L-1就能完全对抗41.5nmol·L-1表皮生长因子（EGF）的促增殖作用。Cur水溶液于4℃贮存3～7d体外抗癌活性明显下降。结论Cur对MGC803、Be17402、K562等有明显的杀伤作用，并能对抗EGF的促增殖作用，其水溶液稳定性较差。     

稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系的构建

摘要：目的 构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）。方法 采用pCDH-CMV-GFP LC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素（Puromycin）筛选 稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Western blot和流式细胞术检测THP-1细胞中GFP-LC3蛋白的表达,并利用 该稳定表达细胞系观察饥饿和雷帕霉素诱导时细胞发生的自噬变化。结果 筛选得到稳定表达GFP-LC3蛋白的 THP-1细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光。Western blot和流式细胞术检测证实了GFP-LC3融合蛋白 的表达。激光共聚焦法和Western blot均证实饥饿和雷帕霉素可以诱导自噬的发生,且GFP-LC3融合蛋白可以反映 内源LC3蛋白的变化,包括蛋白聚集和发生剪切修饰。结论 应用慢病毒质粒系统成功构建了高效稳定表达GFP LC3蛋白的THP-1细胞系,从而为后续利用GFP-LC3融合蛋白研究自噬变化提供了细胞模型。     

黄曲霉毒素B_1对肝癌细胞株SMMC-7721的作用研究

目的通过用黄曲霉毒素B1（AFB1）处理人肝癌细胞株SMMC-7721研究AFB1对SMMC-7721细胞生长的影响。方法①首先应用96孔板培养细胞,选择适宜的细胞接种密度进行实验。②应用不同浓度的黄曲霉毒素B120g/ml、10g/ml、5g/ml、2g/ml、1.0g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml处理人肝癌细胞株SMMC-7721,MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄曲霉毒素B1对肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响。结果不同浓度的AFB1对肝癌细胞株SMMC-7721的影响不同,AFB120.0g/ml、AFB110.0g/ml、AFB15.0g/ml表现为细胞毒性,呈浓度依赖性;AFB11.0g/ml、AFB10.1g/ml、AFB10.01g/ml对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性具有促进作用,以AFB11.0ug/ml浓度显著,AFB10.1 g/ml、AFB10.01g/ml作用渐减弱。结论黄曲霉毒素B11.0g/ml具有增强人肝癌细胞株SMMC-7721增殖活性的作用。     

小檗碱改善高糖高脂诱导的胰岛NIT-1细胞凋亡的分子机制

目的观察小檗碱对高脂高糖诱导后NIT-1胰岛β细胞凋亡的改善情况,探讨小檗碱抗凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在培养基中加入高糖高脂及小檗碱共同培养24h后,比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞活力的影响;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3mRNA表达水平;免疫荧光法检测caspase-3表达。结果与正常对照组相比,模型组NIT-1细胞凋亡率明显升高(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达明显增高(P<0.01),且胞质caspase-3表达增加;与模型组相比,小檗碱组NIT-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA表达增高(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达降低(P<0.01),小檗碱组胞质caspase-3表达亦降低。结论小檗碱抑制高糖高脂诱导NIT-1细胞的凋亡可能与其激活bcl-2和抑制bax和caspase-3的表达有关。     

血管紧张素Ⅱ受体抑制剂对人卵巢癌细胞抑制作用的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(氯沙坦)对人卵巢癌HO89101细胞的体外生长的影响。方法采用体外实验的方法将不同浓度的Losartan作用于HO8910细胞后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察氯沙坦对HO8910细胞增殖的抑制作用,并采用流式细胞仪分析氯沙坦对HO8910细胞增殖周期的影响。结果①不同浓度的氯沙坦对HO8910细胞有抑制其生长的作用(P<0.05),并呈现剂量依赖性关系;②细胞周期分析显示氯沙坦使HO8910 G0/G1期细胞明显增加,而S和G2/M期的细胞减少,说明细胞被阻滞在G0/G1期,细胞增殖被抑制。结论氯沙坦可以抑制HO8910细胞的体外增殖,细胞被阻滞在G0/G1期,诱导细胞进行程序性死亡。     

Decreased Cellular Toxicity of Neomycin in a Clonal Cell Line Isolated from LLC-PK1

We have previously shown in LLC-PK₁ cells, that apical membrane enzyme activity was inhibited by aminoglycoside antibiotics (Am. J. Physiol. 254, C251-C257, 1988). In the present study, the relationship between the lethal cytotoxic effect of aminoglycoside and its effect on apical membrane enzyme was examined by establishing aminoglycoside resistant cells. A clonal cell line, LLC-PK₁/NRa3, was isolated from parent LLC-PK₁ cells in the presence of neomycin. Neomycin inhibited colony formation and increased the number of floating dead cells in parent LLC-PK₁ cultures. In contrast, these cytotoxic effects of neomycin were negligible or less pronounced in NRa3 cells, indicating that NRa3 cells were more resistant to neomycin compared with the parent cells. The inhibitory effect of neomycin on apical enzyme activity was significantly weaker in NRa3 cells than in the parent cells. These results suggest that a common mechanism is involved in the aminoglycoside-induced reductions in the apical enzyme activity and in cell viability of LLC-PK₁ cells.     

汉黄芩素对MCF-7细胞胰岛素样生长因子-1的影响

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁妇女健康.胰岛素样生长因子(insulin like growth factors,IGFs)在乳腺癌的发生发展过程中起着重要的作用,它参与肿瘤细胞凋亡调控,是癌基因及抑癌基因发挥生物活性的关键环节[1].     

人单核细胞白血病细胞系SHI-1的多药耐药和耐药蛋白的表达

目的 探讨人单核细胞白血病细胞系SHI-1多药耐药谱及其机制.方法 噻唑蓝(MTT)检测SHI-1细胞对柔红霉素、鬼臼乙叉甙、高三尖杉酯碱、紫杉醇和长春新碱的敏感性;流式细胞术(FCM)检测SHI-1细胞中P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)等耐药蛋白的表达.结果 MTT药敏实验结果显示SHI-1细胞存在着多药耐药,尤其对VP-16最为明显.FCM检测显示SHI-1细胞中P-gp阳性比例10.78%,相对荧光强度(RFI)为1.02;GST-π阳性率93.52%,RFI 6.91;LRP阳性率92.86%,RFI 8.00;MRP阳性率4.54%,RFI 1.38;BCRP阳性率3.84%,RFI 1.06.结论 SHI-1细胞存在多药耐药,以对VP-16最为明显,其耐药机制可能与LRP和GST-π的高表达有关.     

病毒感染和饥饿对不同细胞GCM1和syncytin 1表达的影响

目的:研究病毒感染和饥饿外环境因子对不同细胞系syncytin 1和转录因子glial cell missing 1 (GCM1)表达的影响,进一步探讨GCM1在不同细胞系对syncytin 1转录的调控作用.方法:应用实时RT-PCR检测细胞GCM1和syncytin 1 mRNA水平, 并采用RNA干扰技术抑制GCM1的转录,进一步探讨GCM1是否直接调控syncytin 1在星形胶质细胞中的表达. 结果:病毒感染和饥饿处理使不同细胞的GCM1和syncytin 1转录水平不同程度增高.RNA干扰使绒癌细胞系JEG-3细胞的GCM1 mRNA水平比对照组明显降低(P ＜ 0.05),同时syncytin 1的mRNA水平也较对照组降低(P ＜ 0.01).然而,RNA干扰使受病毒感染或饥饿处理的人星形胶质细胞瘤细胞CCF-STTG1的GCM1 mRNA水平明显降低后,syncytin 1 mRNA水平与病毒感染或饥饿处理组比较差异无统计学意义.结论:病毒感染和饥饿外环境因子可上调细胞GCM1和sycnytin 1的转录,GCM1不直接调控syncytin 1在星形胶质细胞的表达.     

TRAP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过Oncomine数据库分析TRAP1在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达,Western blot检测TRAP1在结直肠癌组织及其配对癌旁黏膜组织、LOVO、HT29、HCT116、RKO、SW480、NCM460细胞中的表达及干扰TRAP1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT通路的影响,CCK-8检测TRAP1对结直肠癌细胞增殖的影响,平板克隆实验检测TRAP1对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测TRAP1对细胞周期及凋亡的影响。结果生物信息学分析显示TRAP1在结直肠癌中的表达高于正常肠黏膜组织,Western blot结果显示TRAP1在结直肠癌组织和细胞中蛋白表达水平均高于正常组织和细胞(P<0.05),干扰TRAP1的表达可以显著抑制SW480细胞的增殖及克隆形成能力(P<0.05),并且将细胞阻滞在G0/G1期,增加细胞凋亡(P<0.01),细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低,凋亡相关蛋白Cleaved-Casp...     

MLH1 R217C/BRAF V600E 突变型家族性甲状腺乳头状癌永生化细胞系的建立及鉴定

摘要： 目的 建立家族性甲状腺乳头状癌 （FPTC） 永生化细胞系, 为研究家族性非髓样甲状腺癌 （FNMTC） 提供新的途径。方法 选取 FPTC 患者的肿瘤标本, 采用消化法分离原代细胞。使用改良的 DMEM/F12 培养基, 添加促甲状腺激素 （TSH）、 三碘甲状腺原氨酸 （T3）、 表皮细胞生长因子 （EGF） 及氢化可的松等进行培养。在原代细胞早期分 2种方式导入外源基因 SV40T/TERT 用于诱导永生化。利用 RT-PCR 检测甲状腺过氧化物酶（TPO）、 甲状腺球蛋白（TG）、 促甲状腺激素受体 （TSHR）、 钠/碘共同转运体（NIS） 等基因的表达, 同时利用免疫荧光技术检测 TPO 及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）蛋白的表达。提取该患者外周血 DNA, 进行突变基因的检测。提取细胞基因组 PCR 扩增后测序, 进行突变基因的检测。结果 分离的 FPTC 原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长; 细胞生长 6 个月, 转染 SV40T 组（标记为 FPTC-S）传代至 p26, FPTC 细胞传代至 p23, 转染 SV40T+hTERT 组（标记为 FPTC-ST）传代至p19, 细胞增殖能力较好; FPTC-S 与 FPTC-ST 细胞均能够在基因水平稳定表达 TPO、 TG 与 TSHR; 患者外周血中存在 MLH1 R217C 胚系突变; 原代细胞存在 BRAF V600E 突变; 原代细胞及永生化的细胞系中均存在 MLH1 R217 基因突变。结论 本研究初步建立了 FPTC 永生化细胞系, 且该细胞系中存在 MLH1 R217C 及 BRAF V600E 突变, 该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型。     

Akt1和Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1侵袭和迁移的影响

目的:观察蛋白激酶B1(Akt1)和蛋白激酶B2(Akt2)基因转染人胃黏膜上皮细胞系GES-1后对其侵袭和迁移的影响。方法:采用脂质体法将分别含Akt1和Akt2基因全长cDNA序列的p-LXSN-Akt1(Akt1组)和p-LXSN-Akt2(Akt2组)质粒转染到GES-1细胞,以转染p-LXSN空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,并经抗生素G418筛选抗性克隆,蛋白印迹(Westernblot)鉴定各组细胞Akt1、Akt2及基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达水平;Transwell法分析转染后细胞的侵袭能力;用免疫荧光法观察转染后GES-1细胞丝状肌动蛋白(F-actin)的变化。结果:Akt1组和Akt2组均获得了稳定表达Akt1和Akt2基因的GES-1细胞模型;2组MMP-2蛋白表达均高于空载组和对照组(P<0.01)。Transwell法显示Akt1和Akt2组GES-1细胞侵袭能力均明显增加(P<0.01)。免疫荧光发现Akt1和Akt2组F-actin的聚集均增加。结论:Akt1、Akt2基因均可以通过增加细胞侵袭力和迁移力,导致GES-1细胞恶性转化。     

Evidences for salbutamol metabolism by respiratory and liver cell lines

This study aimed to investigate the enantiomeric biotransformation of salbutamol in the human respiratory and liver cells. The cells from the different cell growth cycles were treated with various concentrations of salbutamol sulfate. Salbutamol and its metabolites were analyzed using chiral liquid chromatography and mass spectrometry. There were no metabolites of salbutamol found in the extracellular medium, intracellular, and cell lysate of respiratory cell lines. The S/R ratios of salbutamol were found to be 0.99–1.10 in all cell lines, cell cycles, and salbutamol concentrations in this study. Salbutamol metabolites were found only in intracellular HepG2 cells. The S/R ratios of the salbutamol inside the liver cells were 10 times greater than the S/R ratios of the salbutamol in the liver extracellular medium (0.99–1.10). It is important to note that the S/R ratios of salbutamol in liver cell lysate enzyme were 0.99–1.10 whereas the S/R salbutamol metabolites inside the liver cell were around 1.91–2.14. Both salbutamol and sulfate conjugation metabolites were detected in MS chromatograms with an m/z of 239.2 and 317.6, respectively. Hence, the delivery of salbutamol directly to the respiratory system is a right target that can avoid first-pass metabolism.     

人肝癌细胞和肝细胞放射敏感性的体外研究

目的 观察人肝癌细胞株HepG2及人肝细胞株QSG-7701对高能X线照射的敏感性和时相差异.方法 用吸收剂量为5 Gy的6 MV X线单次照射体外培养的HepG2细胞及QSG-7701细胞,以MTT比色法测定细胞在受照后不同时间的存活率,分别采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜观测细胞凋亡率和形态变化.结果 高能X线照射后6h HepG2细胞凋亡率达到高峰(32%),存活率最低(62%),而QSG-7701细胞在照射后24h凋亡率和存活率才分别达高峰(17%)和低谷(82%).两株细胞单次照射后6h的凋亡率和存活率差异最大.结论 高能X线能够诱导人肝癌细胞株HepG2及人肝细胞株QSG-7701发生凋亡,两株细胞存在不同的敏感性和时相差异,HepG2细胞对射线敏感性比QSG-7701细胞高,HepG2细胞凋亡高峰明显早于QSG-7701细胞.     

人膀胱癌BLZ211细胞cDNA文库的构建分析

目的:构建人膀胱癌BLZ211细胞表达型cDNA文库,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。方法:提取BLZ211细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,削平cDNA末端,连接EcoRI适配子,磷酸化EcoRI适配子5′端,XhoI酶切,Sephacryl-S400柱除去小于400bpcDNA片段,与λZAP表达载体连接,包装蛋白包装后建成cDNA文库;取出1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1-Blue-MRF’,测定文库大小、重组率;随机挑取7个噬斑,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下,释放出PBK-CMV噬菌粒;感染大肠杆菌XLOLR,铺于卡那霉素抗性的LB平板;挑取克隆,37℃震摇过夜;抽提质粒,经EcoRI和XhoI酶切后,初步确定片段的大小及多样性。结果:构建成含1.39×106重组子的BLZ211细胞cDNA文库,重组子平均插入外源片段长约1.3kb。结论:所建文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。