树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因的表达及与细胞凋亡的关系

背景目前对肝细胞癌( HCC)的研究大多数只局限于对人的肝癌及癌旁组织进行研究,这种研究方法的最大缺陷是不能动态观察肝癌形成过程中的不同时期的各种变化. 目的利用实验诱发树鼠句肝癌的动物模型,动态研究在树鼠句肝癌形成过程中凋亡抑制基因( survivin)的表达及其抑制凋亡的机制. 设计完全随机对照实验. 干预实验组给予 AFB1(黄曲霉毒素 B1) 105周,然后继续喂正常饲料至 150周.对照组动物不喂 AFB1,仅按正常饲养方法同样喂至 150周.实验期间每隔 15周对实验组和对照组动物打开腹腔进行肝组织活检.活检组织用 40 g/L中性甲醛固定,石蜡包埋.然后将对照组 30, 60, 90周和实验组 30, 60周及 HCC组织的切片,采用免疫组织化学 S P法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记( TUNEL)技术,进行 survivin基因蛋白和凋亡细胞的检测. 主要观察指标树鼠句肝细胞癌形成过程中每一阶段的 survivin基因蛋白的表达情况和细胞凋亡的情况. 结果 survivin基因与 HCC的发生有关,在树鼠句 HCC形成过程中,其表达呈递增趋势. survivin在对照组 30, 60, 90周,实验组 30, 60周平均得分分别为 0.62, 0.77, 0.92, 1.02, 1.6,在树鼠句 HCC组织切片中平均得分为 5.34,与各组肝组织中的表达差异有显著性意义 (t=3.058 0,3.256 4,3.031 6,4.771 5,3.803 6,P< 0.01). 结论 survivin表达与凋亡指数呈负相关, survivin表达抑制细胞凋亡.     

原发性肝癌中Bax及c-myc蛋白表达与凋亡指数的关系

目的　检测Bcl- 2、Bax及c -myc在肝细胞癌中的表达 ,探讨肝细胞癌中二者表达与凋亡指数的关系。方法　对 2 2例人肝细胞癌及癌旁组织分别进行Bax及c -myc的免疫组织化学研究和TUNEL技术标记 ,计数阳性细胞数。结果　在肝细胞癌中Bax蛋白呈低表达 ,表达率为 45 45 % ,与癌旁组织相比有显著差异 (P <0 0 1) ;c -myc在肝细胞癌及癌旁组织中均呈高表达 ,表达率分别为 81 82 %和 72 73% ,但二者无差异 (P >0 0 5 ) ;肝癌组织中凋亡指数为 9 5 5 % ,低于癌旁组织15 6 8% ,二者有显著差异 (P <0 0 1)。结论　肝细胞癌的发生与细胞凋亡受到抑制有关 ,Bax起到更关键的作用 ;Bcl- 2 /Bax异二聚体能更准确地反映凋亡发生的程度 ;凋亡指数有可能成为判定细胞癌变的指标。     

肝癌细胞凋亡基因调控的研究进展

肝癌细胞凋亡调控的基因分为两大类，一类是抑制肝癌细胞凋亡的基因。主要有Bcl-2和生存素（Survivin）；另一类是促进肝癌细胞凋亡的诱导基因，有p53、Fas／FasL、TRAIL等。通过这些基因的表达和相互作用，对肝癌细胞凋亡的调控起着重要的作用。     

受控凋亡素基因逆转录病毒载体诱导人肝癌细胞凋亡

目的:构建受控重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察受四环素调控的凋亡素基因的表达对人肝癌细胞的影响。方法:构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE—VP3。调节载体pRevTet-Off和表达载体pRevTRE—VP3分别转染PT67包装细胞后,取其病毒上清液依次感染人肝癌细胞系HepG2,以四环素调控凋亡素基因在HepG2/Off-VP3细胞中的表达,以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:重组逆转录病毒载体pRevTRE—VP3构建成功;经PCR和RT—PCR证实凋亡素基因在HepG2细胞中得到了表达;HepG2/Off-VP3—8细胞在无四环素培养环境中凋亡率明显高于在1μg/ml四环素环境中的细胞凋亡率(P＜0．05)。结论:凋亡素基因经RevTet系统导入人肝癌细胞HepG2后,可在四环素调控下表达凋亡素并诱导HepG2细胞凋亡。     

肝癌细胞凋亡的研究

细胞凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)的概念首先由英国病理学家Ｋｅｒｒ等于1972年提出,用来描述一种在形态学上有别于细胞坏死的细胞死亡过程。细胞凋亡是机体为了维护自身稳定,在基因调控下细胞发生主动消亡的过程。细胞凋亡对肿瘤的发生、发展和治疗具有重要的影响,本文就细胞凋亡与肝癌的相互关系做一综述,以期对肝癌发生发展和治疗研究的进一步深入有所帮助。1　细胞凋亡的认识细胞的死亡方式有两种:一种是坏死(ｎｅｃｒｏｓｉｓ),另一种就是细胞凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)。细胞凋亡是指细胞在一定生理或病理条件下,遵循一定的程序,最终通过…     

肝癌细胞凋亡基因调控的研究进展

肝癌细胞凋亡调控的基因分为两大类,一类是抑制肝癌细胞凋亡的基因,主要有Bcl-2和生存素(Survivin);另一类是促进肝癌细胞凋亡的诱导基因,有p53、Fas/FasL、TRAIL等。通过这些基因的表达和相互作用,对肝癌细胞凋亡的调控起着重要的作用。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c-myc蛋白表达与细胞凋亡的关系

利用原位脱氧核糖核酸末端转移酶标记技术和ＳＰ免疫组化方法检测了肝细胞癌和癌旁肝组织中细胞凋亡和Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果显示，癌组织中凋亡细胞密度明显低于癌旁组织（Ｐ＜０．０１）；ｃ－ｍｙｃ蛋白在癌组织和癌旁肝组织中的阳性率分别为４０％（１２／３０）和８６．７％（２６／３０），差异有显著性，其表达强度亦以癌旁肝组织为强（Ｐ＜０．０ｌ）。结果提示，ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达既可诱导细胞凋亡又可促进细胞增殖；进一步支持癌旁肝细胞可能系具有肿瘤性增殖潜能的癌前细胞群的观点。     

凋亡抑制基因Survivin在宫颈癌中的表达及其生物学特性

方法：研究于2001—03／2003—07在哈尔滨医科大学分校附属医院妇产科和第三附属医院妇科完成。应用RT—PCR的方法检测51例宫颈癌组织及10例正常宫颈组织Survivin的表达。结果：Survivin蛋白表达阳性率随宫颈癌的病理分级及临床分期的增高而表达增强淋巴结转移组阳性率为86．2％，高于无淋巴结转移组的阳性率(45．4％)，二者差异有显著性意义(P&;lt;0.05)。结论：Survivin基因在官颈癌中高表达，与癌组织分化程度、临床分期、淋巴结转移呈正相关，与病理类型无关可作为判断宫颈癌发生、发展、转移等生物学行为的一个指标。     

树鼩血清与多种二抗的交叉反应:可在树鼩疾病动物模型中广泛应用

背景:由于树鼩是介于食虫目和灵长目之间的代表,进化程度高,较价廉的灵长类动物,医学生物学的用途很高,已受到广大学者的重视。目的:检测通常用的二抗能否与树鼩的血清发生免疫反应。方法:用Western和ELISA的方法检测树鼩的血清是否与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠、抗猴的二抗发生交叉反应。结果与结论:Western结果表明树鼩的血清与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠的二抗均不发生反应,与抗猴的二抗有交叉反应。ELISA的结果也表明树鼩的血清与抗猴的二抗有交叉反应,而与其他二抗没有交叉反应。结果说明通常卖的二抗不能用于树鼩IgG的免疫检测,只有抗猴的二抗与树鼩的血清发生交叉反应,必需制备抗树鼩IgG的单克隆和多克隆抗体,在没有现成抗体可用时,可采用抗猴的二抗替代检测,能在树鼩疾病动物模型的研究中得到广泛应用。     

siRNA抑制人肝癌细胞MDM2表达及细胞增殖的研究

目的探讨siRNA对人肝癌HepG2细胞MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响。方法体外合成针对MDM2基因的siRNA质粒,转染HepG2细胞株;应用RT-PCR和western blot方法检测siRNA对MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用MTT法检测siRNA对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期。结果和空白组比转染siMDM2-1,2的HepG2细胞的MDM2基因和蛋白表达减低,而P53基因和蛋白表达增加。阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变。转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,转染siMDM2-1,2和阴性对照质粒后的抑制率分别是46.3%、56.1%和3%。和对照组比较,转染siMDM2-1,2的hepG2细胞的细胞周期发生明显改变,而转染对照质粒的hepG细胞周期未发生明显变化。结论 siRNA MDM2可以有效抑制HepG2细胞株中MDM2的表达,促进P53的表达,同时可以使细胞周期发生变化,这可能是其抑制肿瘤细胞增殖的主要机制之一。     

凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究凋亡抑制蛋白Livin两种异构体Livinα、Livinβ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC生物学特点的相关性。方法:采用逆转录聚合酶链反应法检测48例NSCLC组织、29例癌旁组织和13例良性病变肺组织中LivinmRNA,并用组织芯片免疫组织化学SP法检测Livin蛋白的表达水平,结合临床病理资料进行分析。结果:Livinα和Livinβ在NSCLC组织中多同时表达,LivinmRNA和Livin蛋白的表达水平基本一致。Livin在NSCLC组织、癌旁组织和良性病变肺组织中的表达阳性率分别为66.7%、6.9%和0(P<0.05)。在淋巴结转移组,其表达阳性率为76.5%,高于无转移组的42.9%(P<0.05),而与NSCLC的病理类型、分化水平和临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:Livin在NSCLC组织中特异性地高表达,可能成为NSCLC诊断上新的标记物和治疗上新的靶点。     

5/6肾切除大鼠残肾细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的：观察5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas和Fas-L的表达变化及其意义。方法：SD大鼠行5／6肾切除,术后6周、12周采集标本,除常规光镜、电镜观察外,利用TUNEL及流式细胞术,观察肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化,并结合肾功能变化分析肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达与肾小球、肾小管及间质病变的关系。结果：5／6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡增加,凋亡相关基因表达增强,这些变化与肾脏形态和功能变化相平行。结论：肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的变化可能参与肾小球硬化、肾小管萎缩及间质纤维化的病理过程。     

超声评价三氧化二砷量与肝癌细胞凋亡关系的实验性研究

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)体外诱导肝癌细胞凋亡作用,利用超声观察AszO_3对小鼠肝癌的抑瘤效果,探讨其应用价值。方法 (1)以肝癌细胞株HepG2为研究对象,在体外用浓度分别为0、1、2、4、5、6、7 μmol/L的As_2P_3。作用48 h,显微镜观察细胞形态学变化,用MTT法和流式细胞术检测As_2O_3对HepG2的抑制作用;(2)裸鼠30只,随机分成2组。皮下注射HepG2细胞悬液,制作肿瘤模型,用0.1ml的PBS和不同浓度的As_2O_3进行多点注射。观察肿瘤的超声影像改变,病理检查肿瘤坏死情况。结果 (1)As_2O_3能抑制肝癌细胞生长,呈现剂量依赖性。(2)As_2O_3根据干预浓度不同,抑瘤效果不一致,超声观察其肿瘤大小及体积之间差异有统计学意义(P0.01)。结论 As_2O_3能抑制HepG2生长,促进其凋亡,超声作为一种检查手段,可观察肿瘤生长的情况,为抑瘤效果的评价提供有价值的信息。     

甲胎蛋白在肝癌细胞中表达调控的研究进展

甲胎蛋白现已广泛应用于原发性肝细胞癌的普查、诊断、判断疗效和预测复发。然而,甲胎蛋白基因在肝癌细胞中表达的调控是一个极其复杂的过程。现就甲胎蛋白基因的结构特点及其在肝癌细胞中表达调控机制的研究进展作一综述。     

热诱导颊癌细胞凋亡过程中Bax基因表达及mRNA的动态变化

目的：探讨热诱导颊癌细胞凋亡过程中Bax基因蛋白及mRNA表达的动态变化，及其在细胞凋亡过程中的作用。方法：43℃水浴40min加热BcaCD685细胞，0，3，6，12，24，48h后收获细胞，采用流式细胞仪DNA蛋白质分析技术、RT-PCR技术检测诱导颊癌细胞凋亡过程中的凋亡率、Bax蛋白及mRNA表达水平。结果：43℃水浴40min后，凋亡率、Bax蛋白及mRNA表达明显升高，与对照组相比，有显著的差异性(P&;lt;0．05)。结论：高温作为一种外来刺激信号通过上调bax基因的表达，诱导BcaCD885细胞凋亡的发生。     

凋亡抑制基因Survivin在宫颈癌中的表达及其生物学特性

目的:研究表明抗凋亡基因Survivin在恶性肿瘤中表达增高,故探讨Survivin基因在宫颈癌中的表达与生物学特性的关系,为预测宫颈癌的预后提供实验依据。方法:研究于2001-03/2003-07在哈尔滨医科大学分校附属医院妇产科和第三附属医院妇科完成。应用RT-PCR的方法检测51例宫颈癌组织及10例正常宫颈组织Survivin的表达。结果:Survivin蛋白表达阳性率随宫颈癌的病理分级及临床分期的增高而表达增强。淋巴结转移组阳性率为86.2%,高于无淋巴结转移组的阳性率(45.4%),二者差异有显著性意义(P<005)。结论:Survivin基因在宫颈癌中高表达,与癌组织分化程度、临床分期、淋巴结转移呈正相关,与病理类型无关。可作为判断宫颈癌发生、发展、转移等生物学行为的一个指标。     

应激性胃黏膜损伤细胞凋亡基因及凋亡抑制基因

急性胃黏膜损伤 (acutegastricmucosallesion ,AGML)是躯体或心理在遭受严重打击 (创伤、烧伤、休克、感染、内脏损伤、极度紧张、恐惧 )情况下发生的以胃黏膜的糜烂、溃疡、出血为主要特征的急性应激性病变 ,是临床上常见的并发症之一。多年来 ,国内外学者对其进行了大量的基础和临床研究 ,认为细胞通过不同的机制发生凋亡在急性胃黏膜损伤中发挥着重要的作用。细胞凋亡 (apoptosis)又称程序性细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD) ,是细胞在一定条件下通过启动内部机制 ,经过一连串的细胞变性 ,最终发生死亡的过程。胃黏膜完整性的维持…     

肝细胞癌中Livin mRNA与SMAC蛋白的表达

目的通过检测凋亡抑制因子（Livin mRNA）和凋亡促进因子（SMAC蛋白）在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移、复发的关系。方法通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测50例肝细胞癌和癌旁组织中Livin mRNA的表达;用免疫组化方法检测50例肝细胞癌和癌旁组织中SMAC蛋白表达水平。结果50例肝细胞癌组织中SMAC阳性率明显低于癌旁组织（P〈0．05）。Livin mRNA和SMAC的表达与门脉癌栓、术后复发、肝外转移及肿瘤细胞分化密切相关（P〈0．05）;SMAC的表达还与临床分期密切相关（P〈0．05）。Livin mRNA表达与SMAC蛋白表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论Livin mRNA的高表达及SMAC的失活可能在肝细胞癌的发生及进展中起着重要作用。