复方积雪草合剂对IgA肾病大鼠肾组织炎症因子和ECM表达的影响

目的：探讨复方积雪草合剂对实验性IgA肾病（IgAN）模型大鼠肾脏组织细胞外基质（ECM）和炎症因子表达的干预作用。方法：采用改良口服牛血清白蛋白（BSA）和尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）的免疫复合法建立大鼠实验性IgAN模型,40只大鼠随机分为正常组、模型组及复方积雪草合剂治疗组（设高、中、低3个剂量）。药物干预12周,分别观察实验大鼠尿蛋白、肾功能、血尿及肾病理的变化,并用免疫组化及半定量法检测肾组织中FN、IL-6、TGF-β1的含量。结果：复方积雪草治疗组能显著减少实验大鼠尿红细胞和尿蛋白（P〈0.05）,同时对实验大鼠肾组织TGF-β1、FN的表达均有明显抑制作用（P〈0.05）,但对IL-6的表达未见显著作用,且无明显剂量依从性。结论：复方积雪草合剂对IgAN模型鼠具有显著的治疗作用,能有效减少蛋白尿和红细胞,减轻肾组织的免疫损伤。其作用机制可能与其抑制或降低炎症因子的分泌有关,并最终延缓IgA肾病的发展。     

复方积雪草对肾小球系膜细胞及细胞外基质的影响

目的 :探讨复方积雪草在体外及体内对大鼠肾小球系膜细胞及细胞外基质增生的影响。方法 :体外实验在培养的大鼠肾小球系膜细胞中进行 :应用氮蓝四唑盐 (MTT)比色法、流式细胞术对DNA倍体进行分析 ,分别检测复方积雪草对系膜细胞增殖的影响。体内实验在单侧肾切除术合并阿霉素静脉双次注射的大鼠肾小球硬化模型中进行 ,用定量病理分析观察复方积雪草对系膜细胞增殖及系膜基质增殖的影响。结果 :体外实验提示 ,复方积雪草明显抑制血清加血管紧张素Ⅱ刺激的系膜细胞增殖 (与对照组比较P <0 .0 1) ,G0 /G1期细胞比例增加 ,S G2 /M期细胞比例逐渐下降 ,且呈量效和时效依赖关系。体内实验中 ,造模大鼠经复方积雪草治疗后第 8周 ,系膜细胞增殖、细胞外基质沉积均明显减少 (与对照组比较P <0 .0 1)。结论 :复方积雪草可以抑制系膜细胞增生 ,阻止系膜细胞由G1期进入S期 ,减少细胞外基质沉积     

氧化低密度脂蛋白对大鼠肾脏系膜细胞增殖及LOX-1、TNF-α表达的影响

目的：应用MTT酶标分析法,检测在不同浓度、不同时长氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）干预下的大鼠肾小球系膜细胞（ RMC）的增殖情况以及不同浓度ox-LDL干预下LOX-1和TNF-α的表达,探讨其相互关系。方法：体外培养RMC,使用不同浓度ox-LDL在不同时间对RMC干预,经MTT法检测,并进行分组分析。用浓度为5μg/ml和50μg/ml的ox-LDL干预RMC 24 h,使用RT-PCR法和Western blot法检测LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达量,并进行分析比较。结果：Ox-LDL干预RMC 在时间点为24 h的结果显示,在1-30μg/ml范围内呈生长促进效应,浓度大于30μg/ml后呈生长抑制效应;干预48 h组对细胞效应趋势基本与作用24 h后一致,但生长抑制效应从30μg/ml开始;而72 h组,ox-LDL在各个浓度均显示出生长抑制效应。5μg/ml及50μg/ml浓度ox-LDL干预RMC后,均可使LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达升高,且50μg/ml较5μg/ml效果明显,结果差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Ox-LDL对RMC增殖影响具有浓度及时间依赖性。较低及较高浓度ox-LDL均能导致RMC中LOX-1和TNF-α的表达增高,且浓度较高时效果更明显。其机制可能为ox-LDL导致LOX-1表达增多,引起炎症因子的产生和趋化,发生细胞损伤,提示脂质代谢紊乱在肾脏疾病中的重要作用。     

益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的：观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法：以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果：与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调（P〈0.05或P〈0.01）;与脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡（P〈0.01）。结论：益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。     

低氧诱导的大鼠系膜细胞增殖及基质mRNA表达的研究

目的观察慢性低氧诱导的系膜细胞增殖，细胞外基质ｍＲＮＡ表达及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在低氧介导系膜细胞增殖中的作用。方法采用体外大鼠系膜细胞培养，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析及放射核素测定法。结果与正常氧（１８％Ｏ２）比较，低氧（３％Ｏ２）培养系膜细胞３Ｈ－胸腺嘧啶掺入率显著增高（３．３±０．３×１０３ｍｉｎ－１／瓶对１．７±０．２×１０３ｍｉｎ－１／瓶，Ｐ＜０．０１）。细胞计数在培养２８小时无显著差异，但培养７２小时，低氧比正常氧培养增加３３％（Ｐ＜０．０１）。低氧培养系膜细胞表达Ⅳ型前胶原（ＰＣｏｌⅣ）、纤维连接蛋白（Ｆｎ）、层粘连蛋白（Ｌａ）ｍＲＮＡ显著增高。测定低氧培养系膜细胞ＰＫＣ活力呈双峰型增高，加入ＰＫＣ抑制剂Ｈ７可抑制低氧诱导的系膜细胞增殖。结论慢性低氧可诱导系膜细胞增殖和细胞外基质产生增多，ＰＫＣ激活起着重要的介导作用     

补肾通络方对rIL-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β_1、CTGF的影响

目的：研究补肾通络方含药血浆对重组大鼠白细胞介素-1β（r IL-1β）干预的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖与TGF-β1和CTGF表达的影响,以探讨补肾通络方抗肾脏纤维化的分子作用机制。方法：体外培养GMCs,制备补肾通络方含药血浆,用白细胞介素对GMCs进行干预,MTT比色法检测GMCs增殖、ELISA检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR检测CTGF mRNA的表达。结果：与空白对照组比较,白细胞介素能诱导GMCs的增殖、促TGF-β1生成、上调CTGF表达;补肾通络方含药血浆能下调由白细胞介素介导的GMCs增殖、TGF-β1蛋白和CTGF mRNA的表达量,与白细胞介素组比差异有统计学意义（P〈0.01）,且呈时间依赖性。结论：补肾通络方抗肾脏纤维化作用与抑制TGF-β1和CTGF的表达,调节GMCs的功能密切相关。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

复方积雪草2号对IgA肾病大鼠肾组织电镜形态及Nephrin表达的影响

目的：观察复方积雪草2号对IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织病理电镜及Nephrin表达的影响。方法：复合免疫法制造IgAN大鼠模型,分设正常对照、模型、模型＋缬沙坦、模型＋复方积雪草2号高剂量、模型＋复方积雪草2号中剂量、模型＋复方积雪草2号低剂量6组。观察各组大鼠肾脏病理及肾组织Nephrin表达的变化。结果：（1）造模各组大鼠尿蛋白、镜下红细胞增多;免疫荧光镜下造模各组肾小球系膜区有不同程度IgA荧光,提示造模成功;（2）电镜下模型组系膜细胞增生,基质明显增多、有足突融合;而各治疗组足突融合情况均较模型组明显改善（P〈0.05）;（3）免疫组化法检测Nephrin显示模型组几乎没有阳性表达;RT-PCR显示模型组NephrinmRNA表达明显弱于正常组和其他各治疗组（P〈0.01）。结论：（1）Nephrin的下降可能是IgAN足细胞损伤、产生蛋白尿的病理机制之一;（2）Nephrin可能是复方积雪草2号、缬沙坦发挥肾小球足细胞保护作用的分子靶点之一。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1基因表达活性的调控研究

目的观察丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖及对人转化生长因子β1（TGF-β1）基因启动子活性的影响。方法对传代培养的肾小球系膜细胞分别加入3种浓度的丹参酮ⅡA（1×10-3／L、5×10-3g／L和10×10-3g／L）,采用MTT法观察肾小球系膜细胞增殖情况;将TGF-β1启动子重组质粒phTGF2.14、phTGF1．12转染至肾小球系膜细胞,分别加入上述3个浓度的丹参酮ⅡA,用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测报告基因氯霉素乙酰转移酶（CAT）的活性。比较各组系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性。结果不同浓度丹参酮ⅡA对。肾小球系膜细胞增殖具有明显抑制的作用,抑制率分别为8．20％、18．40％和23．06％,呈剂量依赖性（P〈0．01）;丹参酮ⅡA浓度为10×10-3g／L时,TGF-β1启动子活性明显降低（P〈0．01）。结论丹参酮ⅡA对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞具有抑制其增殖的作用,其作用机制可能与其抑制TGF-β1启动子的活性有关.     

灯盏花注射液对ET-1诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:探讨灯盏花注射液对内皮素1(ET-1)诱导的大鼠系膜细胞(MC)增殖的影响.方法:在大鼠系膜细胞原代培养成功的基础上,应用MTT法和流式细胞仪观察灯盏花注射液对ET-1诱导的MC增殖和细胞周期的影响.结果:(1)ET-1(10-10～10-6mol/L)能以一定的剂量方式刺激MC的增殖,以10-8mol/L时作用最强;而灯盏花注射液(45、90、180、360mg/L)能以一定的量效关系抑制ET-1诱导的MC增殖.(2)ET-1(10-9～10-7 mol/L),能增加S期细胞百分数,减少G0/G1期细胞百分数;而上述不同浓度的灯盏花注射液则能增加G0/G1期细胞百分数,减少S期细胞百分数,均呈一定的量效关系.结论:灯盏花注射液能抑制ET-1诱导的系膜细胞DNA合成,延迟细胞周期进程,抑制MC增殖,从而减轻或延缓肾小球硬化进程,可能是其防治肾脏疾病的机制之一.     

积雪草颗粒对单侧输尿管结扎大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的：研究积雪草颗粒（CTA）对单侧输尿管结扎（UUO）大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响,为临床上应用CTA延缓肾衰竭的进展提供理论依据。方法：采用UUO大鼠模型,60只雄性SD大鼠随机分为6组：假手术（SOR）组、模型（UUO）组、积雪草颗粒大剂量组（CTAh）、积雪草颗粒中剂量组（CTAm）、积雪草颗粒小剂量组（CTAl）、蒙诺组（Monopril）。术后SOR、UUO组管饲与药物组同等容积的生理盐水;CTAh、CTAm、CTAl组于术后即每日分别管饲积雪草颗粒11.2mg.100g-1.d-1、5.6mg.100g-1.d-1、2.8mg.100g-1.d-1;Monopril组每日管饲蒙诺20mg.100g-1.d-1,术后21d处死各组大鼠。免疫组化法检测各肾组织CTGF的表达,RT-PCR方法检测各组CTGF mRNA含量。结果：UUO组CTGF的表达明显高于SOR组（P〈0.01）,而CTAh组和Monopril组各项指标明显低于UUO组（P〈0.01）,CTAh组和Monopril组无统计学差异（P〉0.05）,CTA组间比较大剂量组抑制CTGF表达优于中、小剂量组（P〈0.01）。结论：CTA减轻RIF的程度可能与下调CTGF的表达有关,且随剂量增加其抑制CTGF表达的生物学效应亦增大,呈量效依赖关系,CTA大剂量组抑制CTGF的效应与蒙诺组相似。     

pRb的磷酸化状态在肾小球系膜细胞增生和凋亡中的作用

目的：探讨视网膜母细胞瘤敏感基因蛋白（Rb蛋白）的磷酸化状态对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生和凋亡的影响。方法：将大鼠GMCs分为脂多糖（LPS）组、对照组、维生素（VitE）组、激素组与激素＋VitE组共5组分瓶培养,后3组加LPS诱导。实验末,收集培养细胞,涂片,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原（PCNA）、去磷酸化Rb蛋白（Rb）、磷酸化Rb蛋白（pRb）阳性表达率,TUNEL法检测GMCs凋亡指数（AI）。结果：VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞PCNA阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞PCNA阳性率明显低于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞凋亡指数均高于LPS组,VitE＋激素组培养细胞凋亡指数明显高于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞Rb阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞Rb阳性率明显低于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞pRb阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞pRb阳性率均低于激素组。PCNA细胞阳性率与pRb阳性细胞率、Rb阳性细胞率均成正相关;AI与pRb阳性细胞率、Rb阳性细胞率均成负相关。结论：去磷酸化和磷酸化Rb蛋白表达水平增加均促进了肾脏系膜细胞的异常增生,抑制异常增生的系膜细胞凋亡,促进肾脏病的慢性进展。     

Laboratory Study Atrial Natriuretic Peptide Inhibits Mesangial Cell Proliferation Induced by Early Postnephrectomy Serum

Rat kidney mesangial or tubular cells were grown in tissue culture medium supplemented with sera of 20 sham-operated vs. 20 nephrectomized Charles River rats. Each cell sample was grown with or without addition of atrial natriuretic peptide (ANP) to the medium. ANP completely abolished the growth stimulatory effect of postnephrectomy serum [i.e., effect of renotropic factor(s) present in the serum] on mesangium cells. Tubular cell proliferation was unchanged. We propose that interaction between renotropin and atrial natriutetic peptide activity might be one of the possible mechanisms regulating compensatory renal growth following nephrectomy.     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

缬沙坦对Thy1肾炎大鼠肾小球系膜细胞CDK2表达的影响

目的：观察Thy1肾炎大鼠系膜细胞增生及CDK2表达，以及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对其干预作用。方法：设正常组、Tby1。肾炎组及Tby1肾炎＋缬沙坦治疗组。分别于各组疾病诱导后第1、3、5、7d取。肾脏行病理检查，免疫组化检测肾小球内PCNA、CDK2蛋白的表达，Western blot分析肾小球内CDK2的表达。结果：在正常大鼠系膜细胞CDK2存在低表达，而在肾炎大鼠随系膜细胞增生，其CDK2表达增加。缬沙坦治疗组第3～7d。肾小球系膜细胞增生、系膜区扩张程度以及肾小球内PCNA表达低于。肾炎组（P〈0．05），肾小球内CDK2表达也低于。肾炎组相应时间点（P〈0．05）。结论：。肾小球系膜细胞的增生与其CDK2的高表达相关，缬沙坦可抑制系膜细胞CDK2的高表达，抑制系膜细胞增殖及系膜扩张。提示缬沙坦对Thy1肾炎大鼠有一定治疗作用。     

游离脂肪酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨游离脂肪酸（FFAs）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和生长周期的影响。方法：用不同浓度的游离脂肪酸处理大鼠HBZY-1细胞株（即大鼠肾小球系膜细胞）24h～72h。采用噻唑蓝比色（MTT）法检测内皮细胞增殖情况,流式细胞术（FCM）分析法测定细胞周期变化。结果：游离脂肪酸可抑制HBZY-1细胞的生长增殖（与对照组比较,P〈0.01）,且这种抑制作用具有剂量和时间依赖性;游离脂肪酸作用于HBZY-1细胞24h、48h、72h,细胞周期发生明显改变,G1期细胞数增多,S期细胞数减少（与对照组比较,P〈0.01）。结论：游离脂肪酸可通过停滞细胞生长于G1期,抑制大鼠肾小球系膜细胞的生长增殖。     

复方积雪草有效组分对人肾小管上皮细胞补体C3表达的影响

目的：探讨复方积雪草有效组分——积雪草苷／大黄素干预肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的人肾近曲小管上皮细胞（HPTEC）补体C3 mRNA及蛋白的表达水平。方法：采用HPTEC，模型组TNF-α 10ng／ml诱导，治疗组在TNF-α诱导的同时，以不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素进行干预，于24h后分别提取细胞RNA及上清，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和酶链免疫方法（ELISA）分别检测HPTEC C3 mRNA和蛋白的表达。结果：正常HPTEC具有C3 mRNA和蛋白表达，经TNF-α诱导后G表达明显上调，用不同浓度的积雪草苷、大黄素以及积雪草苷合大黄素干预后，C3 mRNA及蛋白水平表达出现不同程度的下调，呈一定的剂量依赖关系和协同作用。结论：复方积雪草有效组分能够抑制炎性细胞因子TNF-α上调所致的肾局部G过度产生。