HLA-B27基因在强直性脊椎炎中的临床应用

目的：为评价ＨＬＡ－Ｂ２７基因在强直性脊椎炎的临床诊断价值。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＰ地１４１例风湿性病人ＨＬＡ－Ｂ２７工与血沉、影像学Ｘ光片报告开面指标进行比较。结果：强直性脊椎炎病人组ＨＬＡ－Ｂ２７是性率６８．８％与风湿必 人组ＨＬＡ－Ｂ２７基因阳性率１１．４％,比较,Ｐ〈０．００５,有非常显著性划;强直性脊椎炎病人Ｂ２７基因阳性率６８．８％,与血沉结果升高率８７．５％比较,Ｐ〉０．０５,无显著     

用PCR-SSP分析HLA-B位点血清学分型困难标本

对血清学ＨＬＡ－Ｂ位点分型困难标本用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法分析,并寻找血清分型效果不佳原因。方法：用本室建立的ＰＣＲ－ＳＳＰ方法对１００株标准细胞及９１份血清学分型困难标本分别作ＨＬＡ－Ｂ位点分析,前者为作ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的参考对照品。结果：１０００株标准细胞分析结果与已知结果一致;９１例疑问标本均顺利地区ＰＣＲ－ＳＳＰ分型,结果共有７０种等位基因格局,其中３６种与血学 同,占５２％,ＰＣＲ－ＳＳＰ     

HLA-B27抗血清筛选

<正>HLA-B27是人类白细胞B位点上的一个抗原,它与强直性脊柱炎（anky losing spondy litis,AS）的发病密切相关。国内外许多研究表明AS患者中95％以上为HLA-B27阳性,而正常人群中仅4％～6％左右为阳性。HLA-B27抗原检测现已作为临床诊断强直性脊柱炎的重要标志之一。目前国内大多数实验室仍采用血清学方法来检测B27抗原,因而制备一套特异性好,效价高的HLA-B27抗血清是至关重要的。我们在三年时间内收集了 3 000份产后血,进行筛选。     

HLA-A位点PCR-SSP基因分型和血清学分型的比较

目的：建立优化ＨＬＡ－Ａ位点ＰＣＲ－ＳＰ分型方法。方法：采用普通扩增仪和Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管对细胞系ＤＮＡ和３７个健康正常人进行基因分型,血清学检测采用标准淋巴细胞毒试验方法。结果：发现引物浓度和浓度比、ＤＮＡ的纯度及酶的选用,是影响ＨＬＡ－Ａ位点ＰＣＲ－ＳＳＰ分型准确性的重要因素。该方法对３７个标本的基因分型结果与血清学结果相符合。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ方法具有简便准确的优点,可以作为ＨＬＡ－Ａ位     

HLA-B27基因检定技术

用聚合酶链反应和血清学方法检测ＨＬＡ－Ｂ２７，并进行比较。方法：采用ＰＣＲ技术７８例可疑为强直性脊椎炎患者样本的ＨＬＡ－Ｂ２７基因，并与血清学比较。结果：３６例具有Ｂ２７基因者中２４例同时作血清学试验，５例血清学难以判定结果，并与ＰＣＲ结果不一致。     

抗原处理相关转运体等位基因与HLA-B27检测呈阳性的强直性脊柱炎的相关研究

目的探讨汉族人群抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing, TAP)等位基因与HLA-B27及强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)的相关性。方法用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交技术,对48例AS患者(B27+)及123名正常对照人群(B27+27名、B27-96名)进行TAP1、TAP2等位基因分型及变异位点氨基酸表型频率分析。结果汉族人群TAP1表现型主要为Ile/Ile和Asp/Asp,而TAP2则以Val/Val、Ala/Thr和Stop/Stop占优势。TAP1和TAP2至少各有4种等位基因型,分别为TAP1*0101、TAP1*0201、TAP1*0301、TAP1*0401和TAP2*0101、TAP2*0102、TAP2*0201、TAP2*0202。研究对象中有9.9%(17/171)TAP1探针无法定型,15.8%(27/171)TAP2无法定型,呈杂交空白。病例组与对照组间TAP等位基因型分布无差异(P＞0.05)。AS(B27     

关于不同HLA-B27基因亚型强直性脊柱炎患者合并心血管疾病风险的探讨

目的 比较不同HLA-B27基因亚型强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者合并心血管疾病风险,进而为临床的个体化精准预防和治疗提供依据。方法 选取204例HLA-B27基因阳性AS患者(其中HLA-B2704型99例,HLA-B2705型90例,HLA-B2702型4例,杂合子型11例),以及97例健康体检者,利用Kruskal-Wallis H差异性分析不同基因亚型和健康组间超敏C反应蛋白(hs-CRP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、脂蛋白a(Lp(a))、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)差异有无统计学意义。同时将所有HLA-B27基因阳性患者作为总体阳性组与健康对照组进行统计学分析,比较以上血清学指标差异有无统计学意义。结果 与健康对照组相比,总体阳性组hs-CRP、Hcy、ApoB水平明显较高,ApoA1h和HDL-C水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.05);与健康对照组相比,HLA-B2704阳性组hs-CRP、ApoB、Hcy...     

强直性脊柱炎患者HLA-B27和免疫指标检测的临床意义

目的:探讨HLA-B27和免疫指标在强直性脊柱炎(AS)患者的临床意义.方法:采用流式细胞术检测147例AS患者、95例正常对照者的HLA-B27、CD3 T、CD4 T、CD8 T、CD19 B,用免疫比浊法检测IgA、IgG和IgM.结果:AS患者HLA-B27、CD3 T、CD4 T淋巴细胞的百分率及CD4 /CD8 的比值、血清IgA、IgG均明显高于正常对照组(P＜0.01);CD8 T淋巴细胞的百分率低于正常对照组(P＜0.05);CD19 B淋巴细胞的百分率高于正常对照组(P＜0.05);IgM与正常对照组相比无显著性差异.结论:HLA-B27、CD3 T、CD4 T与AS密切相关,提示,HLA-B27与CD3 T、CD4 T、CD4 /CD8 的比值可作为AS辅助诊断指标.     

疑似强直性脊柱炎患者HLA-B27与B13抗原关联的分析

ＨＬＡ Ｂ2 7与强直性脊柱炎 (ＡＳ)发病相关已得到公认。美国、加拿大、挪威和荷兰白种人的ＨＬＡ Ｂ6 0抗原可增加ＨＬＡ Ｂ2 7阳性个体的ＡＳ易感性〔1〕。我们在对疑似ＡＳ患者检测ＨＬＡ Ｂ2 7抗原中 ,发现相当多的患者存在ＨＬＡ Ｂ2 7/Ｂ13抗原关联现象 ,结果如下。材料与方法检测对象 :1999年 1月～ 2 0 0 1年 5月期间 ,由我室进行ＨＬＡ Ｂ2 7检测的来自江苏、安徽两省的 75 0名临床怀疑为ＡＳ的患者 ,男性 5 37人 ,女性 2 13人。检测方法 :采用微量淋巴细胞毒法 (ＮＩＨ标准 )。试剂由ＯｎｅＬａｍｂｄａ公司 (美国 )提供 ,每次实…     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术对HLA-B基因分型

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群ＨＬＡ－Ｂ基因分型方法。方法肾移植供受者临床样本ＤＮＡ３１９份，Ｂ基因标准系列ＤＮＡ６２份。设计合成Ｂ座位５２个特异性引物和１对阳性对照引物，组成４１个ＰＣＲ反应，建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法。一步法完成对Ｂ座位的基因分型。结果经双盲验证，并与血清学方法比较。结果所有临床样本和标准ＤＮＡ，ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功。可准确分辨ＨＬＡ－Ｂ座位等位基因４１个，实际检出汉族人群Ｂ抗原特异性３２个。无假阳性和假阴性，４０份样本的重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。与血清学分型结果比较显示：７８份血清学空白中１７例存在第二个基因，２６份血清学分型结果错误。总误差率１３．５％。结论用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术行ＨＬＡ－Ｂ基因分型，分辨率高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用。     

Detection of specimen contamination in routine histopathology by HLA class II typing using the polymerase chain reaction and sequence specific oligonucleotide probing

This study evaluates the use of human leukocyte antigen (HLA) class II PCR-SSO typing for the investigation of suspected specimen contamination in four routine surgical histopathology cases. Two cases were of patients undergoing transurethral resection of the prostate gland. The third case was a patient undergoing excision of a subcutaneous small cell carcinoma. The fourth case was a patient undergoing reversal of a Hartman's procedure for adenocarcinoma of the colon. Tissue was extracted from routinely processed formalin-fixed, paraffin-embedded material and HLA class II typed, using a non-radioactive polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probe technique (PCR-SSO), using probes specific for the DRB, DQA, and DQB loci. The accuracy of PCR-SSO typing of DNA extracted from paraffin biopsy material was confirmed by concordant results for DRB, DQA, and DQB typing in five separate control individuals from whom frozen and paraffin lymph node biopsies were available. PCR-SSO typing was also successful in the four study cases and revealed that contamination had occurred in two cases, eliminating this possibility in the remaining cases. This study demonstrates that DNA can be reliably amplified and accurately typed from routinely processed material, and reveals a useful new application for PCR-SSO tissue typing.     

HLA-B新等位基因B*9534的测序分析及其单链扩增技术的建立

目的 分析HLA-B新等位基因HLA-B*9534的核苷酸序列,并建立HLA-B * 9534单链扩增技术.方法 采用商品化快速抽提试剂盒抽提标本基因组DNA,采用PCR技术扩增先证者HLA-B基因的第1～8外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析第2、3、4外显子.应用序列特异性引物PCR建立HLA-B*9534单链扩增技术,获得HLA-B*9534等位基因的单链产物,并对单链产物进行第2、3、4外显子测序分析.结果 先证者标本存在2个HLA-B等位基因,直接测序结果经软件分析显示与最接近的HLA-B*1518和B*4601组合存在1个碱基不匹配,即第593位A/G杂合.单链扩增技术将先证者等位基因分离后,测序得到两个等位基因为HLA-B*4601和HLA-B*9534.与最接近的HLA-B*1518的第2～4外显子序列相比,HLA-B*9534仅在第3外显子存在一个碱基的不同,即第593位A→G的改变,导致第174位氨基酸天冬酰胺改变为丝氨酸,该等位基因序列已递交GenBank(EU046491),并经世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA-B*9534.结论 发现一个新的HLA-B*9534等位基因,建立的HLA-B*9534单链扩增技术是可行的.     

血清学指定HLA-B座位纯合型误差分析及HLA-B座位表达变异检测的意义

目的 :用DNA分型法对HLA B座位抗原纯合型进行分型 ,探明是否存在HLA B基因发生变异引起结果差异。方法 :经血清学鉴定HLA B座位纯合型样本 75例 ,用PCR SSP法进行DNA分型和表达变异筛查。结果 :75例血清学鉴定为纯合型后经DNA分型证实有 12例存在第二基因 ,经PCR SSP法进行变异筛查发现有 1例存在第四外显子额外胞嘧啶插入 ,经DNA分型发现的第二基因实为沉默基因。结论 :用PCR SSP法进行HLA B基因分型可弥补血清学方法的不足 ,同时筛查表达变异使分型结果更加准确 ,能有效地指导临床应用。     

检测HBV基因组nt585位突变的特异性聚合酶链反应

目的　为调查乙型肝炎病毒(HBV)nt585位A→C变异株在国内的流行情况提供方法学。方法　根据已知的HBV基因组序列并结合国内主要流行adr和adw亚型的特点,合成在nt585位分别为A和C的2套4对引物,建立了突变特异性聚合酶链反应(msPCR)方法。结果　利用msPCR对由25份乙型肝炎免疫失败儿童患者血清和32份成人乙型肝炎患者血清扩增的HBVS基因片段进行了初步检测。结果表明该法可特异性扩增nt585为A和C的HBVDNA。结论　该法是鉴定HBV基因组nt585位A→C变异株的特异而敏感的方法。     

HLA-B40交叉反应组高分辨度DNA分型

目的　采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲＳＳＰ） ， 建立汉族人群ＨＬＡＢ４０ 交叉反应组高分辨度ＤＮＡ 分型方法。方法　Ｂ４０ 组标准ＤＮＡ１０ 份，血清学Ｂ４０ 阳性临床样本１６４ 份，快速盐析法提取模板ＤＮＡ。设计合成１３ 个特异引物和１ 对阳性对照引物，组成８ 个ＰＣＲ 反应，建立一步法ＰＣＲＳＳＰ 快速ＨＬＡＢ４０ 组高分辨度ＤＮＡ 分型方法。结果　所有样本和标准ＤＮＡ 采用ＰＣＲＳＳＰ 分型均获得成功，可准确分辨出Ｂ４０ 组所有等位基因。无假阳性和假阴性出现，重复率１００ ％ ，总耗时４ ～５ 小时。分型结果经双盲验证符合。临床应用结果显示： 三分之一的汉族人群存在Ｂ４０组抗原，Ｂ６０ 占绝大多数（６７ ．３ ％ ） ，血清学对Ｂ４０ 组的误差率达１０ ％ 。本方法比血清学更加准确， 对血清学分型存在困难、亚型分辨不清的纯合子或杂合子均能作出准确的分型。结论　本研究建立的ＨＬＡＢ４０ 组ＰＣＲＳＳＰ 高分辨度ＤＮＡ 分型方法， 分辨度高、特异性强、结果精确可靠、明显优于血清学方法，适合于临床应用。     

应用顺序特异性引物聚合酶链反应检测华南人群HLA-B座位第4外显子变异

目的：为探明中国华南人群中因HLA-B座位发生基因突变而引起表达变异存在的可能性。方法：用顺序特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）对75例经血清血分型为纯合型样本再次分型，对有差异的结果使用PCR-SSP方法检测第四外显子突变情况。结果：75例血清学指定为纯合型标本经DNA分型证实有12例为杂合型。12例结果有差异的样本经PCR-SSP法表达变异的筛查发现有1例存在第四外显子额外胞嘧啶插入，经DNA分型发现的第二基因为沉默基因。结论：应用PCR-SSP方法可检测HLA-B等位基因突变，该突变导致HLA-B基因表达无效，进行HLA基因表达变异的检测可提高HLA分型的准确性，更加有效的指导临床进行器官和骨髓的选配。     

等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型

目的了解人群CYP2C19基因型的分布,评价等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型。方法等位基因特异荧光PCR法和金标准Sanger DNA直接测序法检测356名供者外周血CYP2C19基因型,实验采用同步盲法。结果 CYP2C19*1/*1型、CYP2C19*1/*2型、CYP2C19*2/*3型、CYP2C19*3/*3型、CYP2C19*2/*2型及CYP2C19*1/*3型的频率分布:使用PCR荧光法检测时分别为46.6%(166/356)、33.2%(118/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、10.7%(38/356)及6.7%(24/356);采用DNA测序法时分别为46.3%(165/356)、33.4%(119/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、11.0%(39/356)及6.5%(23/356)。两种方法检测CYP2C19基因型具有一致性(P=0.392),且一致性较好(Kappa=0.987);两种方法基因型检测结果一致率为99.2%。结论为保障医疗安全,临床需开展CYP2C19基因型检测;等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型简便可靠。     

用聚合酶链反应检测食管癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对汕头市区６８例食管癌的石蜡包埋标本进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ序列检测，结果显示，ＨＰＶＤＮＡ总阳性率为６６．１８％（４５／６８），检出型别主要为ＨＰＶ６、１１、１６，检出率分别为２７．９４％、３６．７６％和２７．９４％，经统计学处理三型间无显著性差异；ＨＰＶ－１８及未定型别各占８．８２％。值得注意的是ＨＰＶ感染中多重感染占阳性病例的５３．３３％（２４／４５）。初步结果表明，汕头市食管癌高发区有较高的ＨＰＶ感染率，此与食管癌的发生，可能有密切关系。     

Sybr green 1实时定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的探索

目的寻找一种能广泛用于临床快速、简便、灵敏度和特异性较好、价格低廉的乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量诊断方法.方法以Sybr green 1作为荧光指示剂,做样品血清DNA的实时定量聚合酶链反应(PCR),并结合溶解曲线结果,与Taqman荧光定量方法结果进行了对比.结果 Taq man法较好地检出体内HBV DNA载量.Sybr法测得样品的病毒拷贝数5.3×104 copies/ml与Taqman法所得数值9.6×104 copieslml相近,但检出率偏低.结论 Sybr green 1荧光实时定量方法简便、便宜,但检出率偏低.