曲古抑菌素A对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制药曲古抑菌素A(TSA)对肾癌GRC-1细胞生长的影响及其作用机制. 方法使用TSA处理GRC-1细胞. 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western blot免疫印迹分析p53,p21和bcl-2表达. 结果 TSA能明显抑制GRC-1细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的GRC-1细胞早期凋亡率明显提高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低. TSA能够明显下调bcl-2的表达,上调p21的表达,而对p53的没有显著影响. 结论TSA可以通过诱导肾肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21的表达有关,TSA可能依赖非p53途径调控p21的表达.     

藤黄酸通过Wnt3α/β-catenin信号通路抑制肾癌细胞的研究

摘 要 目的：探讨藤黄酸抑制肾癌细胞RC 2增殖的作用机制。方法: 体外培养肾癌细胞RC 2细胞株,将梯度浓度藤黄酸处理处于对数生长期的RC 2细胞中共培养,采用CCK-8法检测藤黄酸对RC 2细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测分析藤黄酸诱导RC 2细胞的凋亡作用和细胞周期;Western Blot技术检测分析了细胞中凋亡抑制蛋白Survivin的表达量及Wnt3α/β-catenin信号通路中蛋白的表达水平。结果: CCK-8实验发现,梯度浓度藤黄酸处理RC-2细胞24 h或48 h后,藤黄酸对RC2细胞增殖抑制作用均明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞术结果显示,梯度浓度藤黄酸对RC 2细胞的凋亡率均显著高于对照组,呈时间剂量依赖性,RC 2细胞周期G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显;Western Blot检测发现藤黄酸处理的RC 2细胞中Survivin蛋白表达水平降低,并且Wnt3α、β catenin表达水平也降低。结论:藤黄酸可抑制RC 2细胞增殖,促进RC 2细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt3α/β-catenin信号通路进一步降低Survivin的表达有关。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

慢病毒载体介导的长链非编码 RNA Rpph1沉默对胆囊癌 GBC-SD细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Rpph1对胆囊癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响和潜在机制.方法 以人胆囊上皮细胞HGBEC为对照,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996和NOZ中ln?cRNA Rpph1的表达.将GBC-SD细胞分为对照组、si-con组、si-lnc Rpph1组.蛋白质印迹法检测周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、Ki-67、剪切型胱天蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、剪切型胱天蛋白酶9(Cleaved caspase-9)、β连环素(β-catenin)和c-Myc蛋白表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术分别检测细胞增殖、细胞周期和凋亡率.结果 与对照相比,胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996和NOZ组细胞中lncRNA Rpph1含量[(4.89±0.31)、(3.42±0.42)、(3.96±0.45)比(1.07±0.13)]显著升高(P<0.05);与si-con组比较,si-lnc Rpph1组GBC-SD细胞活力[(0.78±0.08)比(1.17±0.13)]降低,凋亡率[(12.89±1.96)％比(4.26±0.65)％]、G0～G1期细胞比例[(63.67±2.62)％比(52.57±1.32)％]升高,CDK2[(0.22±0.04)比(0.41±0.05)]、Ki-67[(0.31±0.04)比(0.62±0.04)]、β-catenin[(0.32±0.05)比(0.63±0.05)]和[c-Myc(0.21±0.04)比(0.41±0.06)]蛋白表达降低(P<0.05),Cleaved caspase-3[(0.44±0.05)比(0.14±0.04)]和Cleaved caspase-9[(0.54±0.05)比(0.17±0.03)]蛋白表达增加(P<0.05).结论 慢病毒载体沉默lncRNA Rpph1可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胆囊癌GBC-SD细胞增殖,诱导细胞周期停滞和促进细胞凋亡.lncRNA Rpph1是胆囊癌的潜在分子靶点.     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.     

褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡时Wnt/β-catenin通路的变化。方法褐藻糖胶不同浓度(25、50、100、200、400μg·mL-1)分别作用于PRMI8226细胞24、48、72 h,采用MTT法检测PRMI8226细胞增殖情况并求得半数抑制浓度(IC50);以1/2 IC50浓度的褐藻糖胶作用于PRMI8226细胞72 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为空白对照组、Wnt通路抑制剂(DKK-1)组(100 ng·mL-1)及褐藻糖胶(25μg·mL-1)组,采用Western blot检测β-catenin、c-myc、bax及caspase 3蛋白表达水平。结果褐藻糖胶对PRMI8226细胞增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性增强。PRMI8226细胞经褐藻糖胶25μg·mL-1处理72 h后,其凋亡率(12.22%)明显高于对照组(4.82%)(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,两组β-catenin和c-myc表达水平均有显著差异(P<0.05),褐藻糖胶组β-catenin和c-myc表达水平与DKK-1组比较无显著差异(P>0.05);褐藻糖胶组caspase3和bax蛋白表达水平较DKK-1组增加(P<0.05),两组与空白对照组比较表达亦增加,均有显著差异(P<0.05)。结论褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路的活化,能诱导多发性骨髓瘤PRMI8226细胞凋亡。     

丁酸钠和曲古抑菌素A促进K562细胞分化机制的研究及其对比

目的　探讨丁酸钠与曲古抑菌素A(TSA)促进K5 6 2细胞分化的机制 ,并对比二者的异同。方法　台盼蓝拒染实验观察药物对细胞生长曲线的影响 ;四氮唑盐还原试验和细胞表面分化抗原检测观察药物对细胞的分化作用 ;流式细胞仪分析细胞周期 ;RT PCR和WesternBlot分别检察细胞周期蛋白在mRNA和蛋白质水平的表达。结果　丁酸钠和TSA分别将细胞主要阻滞于G0 /G1期和G2 期 ;丁酸钠下调cyclinD1mRNA的水平基本上不影响其蛋白质的表达 ,上调cyclinD3蛋白质表达水平基本上不影响其mRNA的水平 ;TSA与丁酸钠的作用相同 ;二者均可以在mRNA和蛋白质水平刺激K5 6 2细胞 p2 1的表达。 结论　丁酸钠和TSA促进K5 6 2的分化是通过诱导 p2 1和cyclinD3蛋白质的表达而完成的 ,丁酸钠和TSA均有望成为治疗慢性髓系白血病的药物。     

异莲心碱对HepG2细胞周期和凋亡的影响

摘要：目的:研究异莲心碱对人肝癌Hep G2细胞周期与凋亡的影响。方法:采取流式细胞术检测不同浓度异莲心碱诱导Hep G2细胞24 h后对周期的影响; Hoechst33258染色观察异莲心碱诱导Hep G2细胞凋亡后细胞核形态的变化; JC-1染色检测细胞线粒体膜电位变化;蛋白免疫印记法(Western blot)检测Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果:流式结果显示,G0/G1期和G2/M期比例明显升高,而S期比例明显下降,并呈现剂量依赖性; Hoechst33258结果表明,药物诱导Hep G2细胞后,细胞数量减少,形态皱缩或改变,蓝色荧光加深; Western bolt检测可知,异莲心碱上调Bax蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达水平。结论:异莲心碱可使Hep G2细胞阻滞于G0/G1期、G2/M期,诱导Hep G2细胞发生早期凋亡,其作用可能与Bax、Bcl-2两种凋亡蛋白表达水平变化相关。     

曲古抑菌素A对结肠癌细胞细胞周期影响的机制研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对结肠癌细胞株SW480细胞周期、凋亡的影响,初步探讨TSA作用细胞周期的可能机制,为HDAC抑制剂用于结肠癌治疗提供理论依据.方法 培养人结肠癌细胞系SW480,采用HDAC抑制刺TSA干预细胞,运用流式细胞术检测细胞周期、凋亡以及细胞周期素的变化,最后采用Western blot对细胞周期相关的基因进行检测.结果 TSA处理细胞后,流式细胞计数分析显示,TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,并且影响细胞周期素cyelinE、cyclinA聚集,而对凋亡无明显的影响.Western blot显示,TSA能够上调p21wafl/Cipl、p27Kipl的表达,下调CDK2、cyclinE以及cyclinA的表达.结论 在结肠癌细胞中,TSA能够通过上调p21Wafl/Cip1、p27Kip1的表达以及下调CDK2、cyclinE、cyclinA的表达,从而阻滞细胞周期于G1期,最终影响肿瘤细胞的生长.     

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

沉默Sp5对mEPMCs中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响

目的 探讨沉默转录因子特异蛋白5(Sp5)对小鼠胚胎腭突间充质细胞（m EPMCs）中Wnt信号通路相关因子及增殖能力的影响。方法 体外分离并培养孕14.5 d C57BL/6J小鼠的mEPMCs，细胞免疫荧光染色鉴定细胞来源；利用慢病毒转染技术沉默mEPMCs中Sp5基因的表达，Western blot验证转染效率。后续实验设空白对照组、空载病毒组、沉默组（Sp5-shRNA组）。各组细胞转染72 h后，采用Western blot及RT-qPCR法分别检测β-连环蛋白（β-catenin）、丝氨酸/苏氨酸激酶（GSK-3β）、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、特异性周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白及m RNA的表达；CCK-8法检测细胞增殖能力；免疫荧光法检测5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）阳性细胞增殖率；流式细胞术检测细胞周期。结果 成功分离mEPMCs并沉默Sp5的表达。Western blot及RT-qPCR结果显示，Sp5-shRNA组β-catenin、GSK-3β、Wnt3a、CyclinD1蛋白及mRNA表达水平均高于空白对照组和空载病毒组（P<0....     

去甲斑蝥素作用早期对人肝癌细胞活性氧及NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的激活

目的探究去甲斑螯素(NCTD)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的早期事件,分析NCTD作用早期Hep G2细胞内活性氧自由基(ROS)的变化规律及NCTD对NF-E2相关因子/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路的影响。方法 NCTD30,60和120μmol·L~(-1)分别作用于体外培养的人肝癌Hep G2细胞3,6,12,24,48和72 h,MTT法检测NCTD对细胞存活的影响;流式细胞术检测NCTD60μmol·L~(-1)作用细胞12,24和48 h对细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针结合流式细胞术检测NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用于3,6和12 h对Hep G2细胞内ROS的影响;荧光素酶法测定NCTD同时转染ARE和荧光素酶报告基因的Hep G2C8细胞的荧光强度;实时荧光定量PCR检测对血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO1)m RNA表达的影响。结果 NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用3和6 h对Hep G2细胞存活无明显影响,而作用24,48和72 h对Hep G2细胞有明显生长抑制作用(P<0.01);NCTD 60μmol·L~(-1)作用12 h后可诱导Hep G2细胞发生凋亡及G2/M期阻滞,12,24和48 h凋亡细胞比例分别由12 h细胞对照组(4.00±1.98)%增加到(12.10±1.70)%,24 h对照组(4.05±0.21)%增加到(31.80±6.50)%,48 h对照组(3.90±0.85)%增加到(33.30±1.41)%;12,24和48 h G2/M期细胞比例分别由12 h对照组的(16.51±1.58)%增加到(40.89±0.18)%,24 h对照组的(16.99±1.32)%增加到(55.29±3.99)%,48 h对照组的(14.45±0.59)%增加到(50.66±5.88)%,相应各时相NCTD处理组G1期细胞比例明显下降(P<0.01);NCTD 30,60和120μmol·L~(-1)作用Hep G2细胞3,6和12 h,ROS无明显变化,作用Hep G2C8细胞6和12 h可明显激活Nrf2/ARE信号通路,下游基因HO-1和NQO1 m RNA表达显著上调(P<0.05)。结论NCTD作用Hep G2细胞早期可明显激活Nrf2/ARE信号通路;ROS激活可能不是NCTD诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的主要原因。     

微小染色体缺陷维持蛋白3对黑色素瘤细胞迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的探究微小染色体缺陷维持蛋白3(MCm3)通过Wnt/β-catenin信号通路对黑色素瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法将人恶性黑色素瘤细胞A375分为对照组(空白对照),si-NC组(转染si-NC组)、si-MCm3组(转染si-MCm3组)。以噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,以划痕实验和Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测Wnt3a蛋白(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果对照组、si-NC组和si-MCm3组72 h的细胞存活率分别为(249.31±18.66)%,(253.26±12.63)%,(168.71±16.01)%,侵袭细胞数分别为(375.55±11.83),(366.94±20.04),(148.53±11.75)个,划痕愈合率分别为(53.64±5.71)%,(51.37±4.33)%和(22.37±2.07)%,si-MCm3组与对照组和si-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组和si-NC相比,si-MCm3组细胞Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1均显著降低(均P<0.01)。结论敲低MCm3可抑制黑色素瘤细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.     

熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的作用及机制。方法用不同浓度的熊果酸处理对数生长期的U937细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53、Bcl-2、Bax表达,以及细胞浆凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素蛋白C(CytC)蛋白表达。结果熊果酸呈浓度依赖性诱导U937细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和细胞浆AIF、CytC表达,下调Wnt、β-catenin、p53及Bcl-2表达。结论熊果酸对U937白血病细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能为抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径促发白血病细胞死亡。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探究右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法 将Ishikawa、RL95-2细胞分为对照组,右美托咪定1、10、100 nmol/L组,右美托咪定（100 nmol/L）＋LiCl组。CCK-8法和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平。构建子宫内膜癌裸鼠模型,分为对照组、右美托咪定组、右美托咪定＋LiCl组,测量肿瘤质量与体积,苏木精–伊红（HE）染色观察移植瘤组织形态,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组相比,不同浓度右美托咪定处理后Ishikawa、RL95-2细胞吸光度（A）值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达上升（P＜0.05）;与右美托咪定100 nmol/L组相比,右美托咪定＋LiCl组A值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax表达下降（P＜0.05）。右美托咪定能抑制移植瘤质量和体积,促进肿瘤凋亡,降低β-catenin、Ki-67蛋白表达（P＜0.05）;LiCl能逆转右美托咪定对移植瘤的抑制作用（P＜0.05）。结论 右美托咪定能抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.     

6'-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制

目的探讨6'-羟基爵床素A(JR6)对人肝癌Hep G2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用MTT法观察不同浓度的JR6和5-氟尿嘧啶(5-FU)对Hep G2细胞存活的作用,荧光显微镜观察Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染后Hep G2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素c、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 JR6 6.1~196μmol·L-1和5-FU 3.4~192μmol·L-1分别作用Hep G2细胞48 h,对Hep G2细胞存活具有抑制作用,IC50分别为74.90和49.75μmol·L-1。JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的(6.9±2.0)%增加至(13.8±2.0)%,(18.6±4.3)%和(32.4±3.2)%(P<0.05,P<0.01)。Hoechst33258染色结果显示,JR6 49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR6 49和196μmol·L-1作用48 h能使Hep G2细胞线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,胞浆细胞色素c表达增加,促凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且Bax/Bcl-2比值增加(P<0.05,P<0.01)。JR6 49μmol·L-1和5-FU组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素c释放、打破Bcl-2/Bax平衡诱导Hep G2细胞凋亡。     

紫杉醇对肺癌细胞株A549 Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肺癌细胞株A549 Wnt/β-连环素（β-catenin）信号通路相关基因和蛋白表达的影响。方法：免疫组化法检测1nmol·L-1紫杉醇组和对照组A549细胞中β-catenin蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应检测0.1、1、10nmol·L-1紫杉醇组和对照组A549细胞中dkk-3（抑癌基因）、c-myc（原癌基因）mRNA表达,干预时间均为48h。结果：与对照组比较,1nmol·L-1紫杉醇组β-catenin蛋白表达明显降低,0.1、1、10nmol·L-1紫杉醇组c-mycmRNA表达明显降低,而dkk-3mRNA表达明显增加（P均〈0.05）,且基因表达呈浓度依赖性。结论：紫杉醇能通过下调A549细胞内β-catenin蛋白表达,诱导dkk-3mRNA表达,从而阻断Wnt信号转导通路,减少c-myc表达。