p21蛋白与K-ras蛋白在先天性胆管扩张症中的表达及其意义

目的研究p21蛋白和K-ras蛋白在先天性胆管扩张症(CBD)中的表达及其相互关系,并探讨其在CBD癌变发生发展过程中的临床意义。方法收集本科2000年1月-2007年9月确诊为CBD的36例患儿行胆总管囊肿切除术的组织标本,9例正常对照组胆管组织来自本院病理学系流产胎儿及死于非胆管系统疾病儿童尸检标本。标本组织经40g·L-1甲醛固定,石蜡包埋,切片固定处理,应用免疫组织化学技术对标本中p21蛋白和K-ras蛋白表达进行检测。应用SPSS13.0软件进行统计学处理。结果36例CBD标本中,5例K-ras蛋白表达阳性,阳性率为13.8%,正常对照组胆管未检出阳性;CBD中p21蛋白的阳性率为55.6%,显著低于正常对照组(100%)(P<0.05)。结论p21蛋白和K-ras蛋白表达异常可能是CBD癌变发生过程中的一个早期信号。K-ras蛋白在正常胆管组织中不表达,而在CBD中高表达,表明CBD癌变的发生在蛋白表达水平上已具有恶性增殖信号。故早期手术切除囊肿组织是防止CBD发生癌变的主要手段,术后根据p21蛋白和K-ras蛋白的表达情况早期干预可能有助于阻止或减少癌变。     

波形蛋白在先天性马蹄内翻足内侧软组织中的表达

目的探讨先天性马蹄内翻足（Congenital clubfoot，CCF）软组织挛缩的机制。方法收集本院20例（2006年8月～2007年8月）手术治疗的先天性马蹄内翻足患儿的内侧三角韧带组织和5例尸体正常三角韧带组织进行对照研究。所取标本进行常规HE组织学染色观察以及波形蛋白（Vimentin，Vim）的免疫组织化学染色。染色结果应用图像分析软件和SPSS软件分析。结果免疫组织化学统计学结果显示：马蹄内翻足标本中波形蛋白（Vim）均呈现阳性反应，表达光度值为（0．51±0．07）；而对照组5例中仅有少数波形蛋白（Vim）反应阳性，表达光度值为（0．234±0．06），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论波形蛋白的高表达可能促进先天性马蹄内翻足的内侧软组织孪缩。     

基质胶原酶、明胶酶在先天性胆总管囊肿壁的表达及意义

目的观察先天性胆总管囊肿壁基质胶原酶（MMP-1）、明胶酶（MMP-2）蛋白的表达，探讨其与先天性胆总管囊肿发病的关系。方法收集53例先天性胆总管囊肿患儿临床资料以及囊肿壁和胆囊组织标本，其中男21例，女32例，年龄4个月～17岁，平均年龄6．5岁，另取正常胆囊组织28例作为对照组。免疫组化方法检测MMP-1、MMP-2蛋白表达，图像分析技术进行定量分析。结果MMP-1、MMP-2蛋白表达于胆总管囊肿壁黏膜上皮细胞、基质细胞及炎性细胞胞浆、胞膜；胆总管囊肿胆囊黏膜上皮细胞内也见不同程度表达。正常对照组胆囊表达阴性或弱阳性。定量分析显示胆总管囊肿壁MMp-1、MMP-2蛋白表达强度明显高于胆总管囊肿胆囊及对照组胆囊（P〈0．01）；胆总管囊肿胆囊与对照组胆囊组织间差异无显著性意义（P〉0．05）。结论胆总管囊肿MMP-1、MMP-2的表达高于其胆囊组织和对照组胆囊；MMP-1及MMP-2的高表达可能参与了先天性胆总管囊肿的形成过程。     

PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的表达及意义

目的研究促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁及胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达规律,探讨促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁发病机制中的作用。方法分别取18例胆道闭锁（Biliary Atresia,BA）和11例胆总管囊肿（Choledochal cyst,CC）患儿的胆管组织,应用蛋白质印迹（westong blot）与荧光实时定量（quantitative real—time PCR,qRT-PCR）的方法分别检测PDCD5在胆道闭锁与胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达,并进行定位和定量分析与比较。结果PDCD5在CC组胆管组织中的CT值为（6．7292±1．169）,高于BA组的相应CT值（4．0125±1．0735）,P〈0．05。应用2-△△CT计算出CC与BA中PDCD5基因表达量的比值为1：6．57。PDCD5在BA组胆管组织中mRNA转录水平明显高于对照组;Western blot结果显示,PDCD5在BA组胆管组织中蛋白表达量明显高于CC组。结论PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的蛋白和基因表达水平均增强。PDCD5可能参与胆道闭锁胆管上皮细胞凋亡,从而参与胆道闭锁的炎性反应,在胆道闭锁的发病机制中发挥重要作用。     

先天性胆管扩张症胆囊粘膜增殖性变化

目的 观察先天性胆管扩张症胆囊粘膜的增殖性变化。方法 先天性胆管扩张症患者４２例，其中儿童３５例，成人７例；慢性胆囊炎胆石症成人２０例，对照组５例。取石蜡切片行ＨＥ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）染色，观测，增生形态指标（即胆囊粘膜皱襞高度、皱襞密度、皱襞细胞密度）以及ＰＣＮＡ阳性率。结果 胆管扩张症、慢性胆囊炎胆石症患者的增生形态指标及ＰＣＮＡ阳性率均高于对照组（Ｐ〈０．０５）。成人胆管扩张症ＰＣＮ     

先天性胆总管囊肿上皮细胞增殖与囊肿形成的关系研究

目的 探讨先天性胆总管囊肿的发生及恶变机制。方法将Ⅰ型胆总管囊肿分为囊型高淀粉酶组、囊型低淀粉酶组和梭型组，采用免疫组化技术分别检测iNOS、P53、PCNA、TUNEL在胆总管囊肿上皮细胞中的表达情况。结果iNOS、PCNA、TUNEL在囊型高淀粉酶组和梭型组中均存在高表达，而在囊型低淀粉酶组中呈低表达；三组中未检测到P53表达。结论 胰液逆流人胆道系统可以造成胆道上皮细胞的增生及凋亡增加，促进囊肿的形成；上皮细胞的过度增生且高表达NO有可能是胆总管囊肿发生恶变的基础。     

NSE和S-100在先天性胆管扩张症发病机制中的协同作用

目的 探讨神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)和S-100蛋白在先天性胆管扩张症(CBD)发病中的作用及临床意义。方法 2007～2009年连续CBD患儿36例,均行囊肿和胆囊切除、肝门空肠吻合术,切取囊肿远、近端囊壁和胆囊壁为实验组。选取非正常怀孕或因其母亲特殊原因需终止妊娠胎儿15例的肝外胆管和胆囊为对照组。每组标本分别固定、包埋,免疫组织化学染色检测对比其NSE和S-100表达,比较其染色结果和分布特点,并对囊肿直径和胆道不同部位NSE和S-100的表达进行相关分析。结果 NSE和S-100在囊肿远端表达(1.86±1.29,1.81±1.04)均弱于囊肿近端表达(3.61±1.92,3.58±1.95)(P＜0.05);囊肿远端与胆囊(3.42±1.99,3.72±2.08)间差异有统计学意义(P＜0.05),囊肿近端与胆囊间差异无统计学意义(P＞0.05)。胎儿胆管(4.86±2.97,5.14±2.73)和胎儿胆囊(3.71±2.14,4.00±1.63)间NSE和S-100差异无统计学意义(P＞0.05)。组间比较,囊肿远端与胎儿胆管、胆囊间NSE和S-100差异均有统计学意义(P＜0.05);囊肿近端与胎儿胆管、胆囊间差异无统计学意义(P＜0.05);两组胆囊间差异无统计学意义(P＞0.05)。囊肿直径和胆道不同部位NSE和S-100的表达均呈负相关(P＜0.05)。结论 胆道远端神经节细胞和神经纤维的发育和分布受限与CBD发病关系密切,与其囊肿大小呈负相关;NSE与S-100表达在CBD发病中协同互补,可为CBD术中囊肿切除范围的正确判断提供理论依据。     

不同年龄先天性胆管扩张症的临床观察

目的：探讨不同年龄先天性胆管扩张症的特征，病因及防治措施。方法：对1988年1月－1998年12月收治的213例先天性胆管扩张症按年龄分3组，将分型，临床表现，治疗及预后等相关因素综合分析。结果：（1）新生儿、婴儿17例，囊肿型16例（94．12％），临床以黄疸（11例）、的（6例）为主要症状，15例手术治疗，13例（86．67％）治愈，2例（13．33％）死亡。（2）幼儿，儿童组163例，均以间歇性腹痛就诊，囊肿型74例（45．40％），梭型89型（54．60％），76例行影像学检查，62例（81．58％）伴胰胆管合流异常。161例手术治疗，治愈160例（99．38％），死亡1例（0．62％）。（3）成人组33例，囊肿型及混合型占多数，因反复感染并发症日益增多，33例中24例（72．73％）合并胆管结石等并发症，癌变2例，手术治疗33例，治愈30例（90．91％），死亡3例（9．09％）。结论：本病应根据不同年龄，临床表现，采用现代的影像技术检查，做到早期诊断、早期行根治术。     

胰胆合流共同管开口异位与先天性胆总管囊肿形态关系的探讨

目的：探讨先天性胆总管囊肿胰胆合流共同管开口位置与共同管长度，胆总管扩张程度的关系。方法：对38例先天性胆总管囊肿的患儿行术中胆道造影或ERCP检查，了解胰胆合流共同管开口于十二指肠的位置与共同管长度关系，以12例非胆总管囊肿患儿为对照组，结果：对照组中，十二指肠乳头均开口于十一指肠降段的中部，而38例先天性胆总管囊肿患儿中11例（28．9％）开口于十二指肠降段，共同管平均长度为（1．28＋0．46）cm,27例（71．1％）开口于降段以远，共同管平均长度为（2．64＋0．78）cm，后者较前明显延长（P＝0．038），表明共同管开口远，共同管的长度增加，另外共同管开口于十二指肠降段内的患儿中，36．4％（4／11）胆总管为囊状扩张，而开口于十二指肠降段较远患儿中，囊肿型占55．6％（15／27），两者差异有显著性意义（P＜0．01），表明共同管开口远，胆总管扩张明显，结论：胰胆合流共同管向十二指肠远端开口异位是先天性胆总管囊肿的病理改变之一，提示此病变可能是胰胆合流共同管延长的病因。     

先天性胆总管囊肿的病因、病理及诊断研究现状

１　病因　　先天性胆总管囊肿的发病原因，尚存诸多争议，近１０余年来随着对本病形态学、胆汁酶学及动物实验等研究的进展，对其病因有了更为深入的了解。多数学者认为本病与胆管发育不良、胆总管远端梗阻神经分布异常和先天性胰胆管合流异常有关，分述如下。１１　胆管发育不良　胎儿原始胆管上皮细胞增生转变为“实心期”时，不均衡的上皮增殖，使下部增生过度，则在空泡化再贯通时远端出现狭窄，近端发生扩张而形成本病。１２　胆总管远端狭窄阻塞　可因先天性或后天继发性局部病变引起。先天因素造成胆总管壁薄弱、其远端狭窄梗阻…     

先天性胆管扩张症合并肝内胆管扩张及复杂胆道畸形的诊断与治疗对策

目的研究先天性胆管扩张症合并肝内胆管扩张及复杂胆道畸形的特殊检查方法及其临床意义，探讨在标准术式即囊肿切除胆道重建的基础上对肝内胆管扩张及可能存在的复杂胆道畸形处理的方法。方法对于合并肝内胆管扩张患儿，以术中胆管造影、胆道镜观察等仔细进行术中检查，了解肝总管、胆囊管、左右肝管、肝内胆管扩张及狭窄情况，以及胰胆管共同通道的病理变化，同时仔细检查有无复杂胆道畸形的存在并予以手术处理。结果全组57例，33．3％合并肝内胆管扩张，其中10例为肝内胆管囊样扩张，其汇入肝总管的开口呈瓣膜状、隔膜状或细短管状狭窄。9例为自肝门向肝内胆管起始端逐渐变细的锥形扩张，无明显狭窄。2例合并迷走胆管，3例为左右肝管分别汇入扩张的胆总管囊肿。结论对合并肝内胆管扩张者进行相应的特殊检查具有重要的临床意义，可以指导在标准根治术，即囊肿切除胆道重建的基础上对近端肝内胆管狭窄矫治、可能存在的迷走胆管、复杂胆道畸形及远端胰胆管共同通道病变的处理。     

腹腔镜行巨大先天性胆总管囊肿切除术的探讨

目的 对腹腔镜下行巨大先大性胆总管囊肿切除肝管空肠Roux—Y吻合术进行探讨。方法对7例巨大胆总管囊肿(直径11～21cm)行囊肿切除 肝管空肠Roux—Y吻合术。术中行囊肿穿刺减压，切除胆囊，然后从扩张囊肿的中部横断囊肿前壁吸出胆汁，将囊肿壁全层分7～8块逐渐彻底切除。结果7例患儿均顺利完成巨大胆总管囊肿切除 肝管空肠Roux—Y吻合术，无中转开腹手术者。手术时间5．5h～7．6h，平均6．3h；出血最5ml～15ml；6例患儿切除远端囊肿时未找到与胰管相通的管道，仅l例见到明确的远端狭窄的肝管予以结扎。术后无切口感染、胆漏、胰漏和肠梗阻发生，均3d拔除腹腔引流管。术后住院时间4d～6d。随访3个月～19个月，无胆管炎和结石发生，肝功能检查指标均在正常范围内。结论腹腔镜下巨大先天性胆总管囊肿切除、肝管空肠Roux—Y吻合术是一种安全可靠的手术方法。     

Foregut atresias and bile duct anomalies: rare,infrequent or common?!

The association of foregut atresias and bile duct anomalies is reportedly rare. We encountered five referrals within 2 years where the secondary diagnosis was missed at operation. Four patients initially presented on antenatal scans as a foregut atresia whereas the fifth presented at nine years with abdominal pain due to a choledochal cyst. The biliary anomalies (cholecysto-hepatic duct, liver cyst and choledochal cysts) in the first four presented as postoperative jaundice during infancy whereas the fifth patient developed subacute intestinal obstruction due to congenital duodenal stenosis at fifteen years. In the patients with duodenal atresia neither did the preoperative X ray reveal any distal bowel gas nor did the subsequent intraoperative cholangiograms reveal bifid common bile duct or pancreato-biliary malunion. Atresias were corrected by primary repair (duodenoduodenostomy for congenital duodenal obstruction in four patients and disconnection/ligation of tracheo-oesophageal fistula with oesophageal anastomosis in one patient). The biliary anomalies were corrected by excision of the abnormal bile ducts (choledochal cyst/liver cyst/cholecystectomy) with Roux en Y hepaticojejunostomy. All patients are asymptomatic and liver function and biliary dilatation has normalised. The association of foregut atresias and bile duct anomalies is not as rare as previously reported. Antenatal ultrasound suggesting either a foregut or a biliary anomaly should alert one to the association. Full radiological and/or imaging investigation may be indicated prior to corrective surgery of the primary anomaly.     

Notch配体、受体在小儿胆道畸形肝组织中的表达及意义

目的 探讨Notch信号通路在小儿胆道畸形发病机制中的作用.方法 收集23例胆道畸形患儿临床资料(胆道闭锁12例,胆总管扩张11例),术中取肝脏组织样本;9例正常肝脏组织样本作为正常对照.免疫组化方法和实时荧光定量PCR方法检测肝脏组织中的Notch配体、受体的表达分布和相对表达量.结果 Jag1在胆道闭锁增生胆管表达明显增强,Jag2在各组门管区表达为阴性;荧光定量PCR显示:胆道闭锁组及胆总管扩张组Jag1 mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.01);Jag2 mRNA的表达在三组问差异无统计学意义(P＞0.05).Notch1、Notch 2在对照组及胆总管扩张组主要表达于肝细胞和成熟胆管细胞,胆道闭锁组胆管细胞无阳性表达.Notch 3在胆道闭锁汇管区新生血管、基质中有较为明显的表达.荧光定量PCR显示:Notch1、Notch 2mRNA的表达在三组间差异无统计学意义(P＞0.05),胆道闭锁组Notch 3 mRNA的表达高于对照组(0.013±0.003比0.009±0.003,P＜0.01).Notch 4表达为阴性.结论 胆道闭锁肝脏组织Notch配体、受体表达异常,增生胆管细胞Jag1的过表达及Notch受体表达缺陷可能参与了胆道闭锁的病理过程.     

先天性胆总管囊肿患儿胆汁成分分析及致石性研究

目的：探讨先天性胆总管囊肿患儿胆汁成分变化与结石形成关系。方法：对10例胆总管囊肿及9例非肝胆疾病手术患儿胆汁成分进行定量分析,包括总胆汁酸、4种初级胆汁酸、磷脂、胆汁蛋白、胆固醇及总脂含量等,并进行胆汁细菌培养。结果：①囊肿患儿胆汁中胆汁酸、磷酸、胆固醇、总蛋白及总脂浓度明显异常,以胆汁酸减少为显著。其肝胆汁、胆囊胆汁、囊肿胆汁中总胆汁酸浓度均明显降低,总脂浓度下降。易发生胆结石的主要原因之一;②囊肿患儿三种胆汁中四种初级结合型胆汁酸的含量及G／T,CA／CDCA均降低,胆汁酸组分比的变化,也是易产生结石的原因。囊肿中初级结合型胆汁酸的浓度相对降低,次级胆汁酸相对增加,可能对囊肿恶变发生的影响;③囊肿患儿肝细胞功能受损是导致CCC患儿胆汁成分发生改变的主要原因。结论：CCC患儿胆汁中主要固体成分存在明显异常,以胆汁酸减少及胆汁酸的组分比改变为著,是CCC患儿易发生结石的主要原因之一,导致CCC患儿胆汁成分改变的核心问题是肝功能受损所致。     

影像学检查在先天性胆总管囊肿切除术中的指导意义

目的通过对术前超声、核磁共振水成像（MRCP）和术中胆道造影（IOC）的影像学分析,评估影像学检查在胆总管囊肿及合并畸形中的诊断价值。方法2010年1月至2012年lO月我们共收治23例胆总管囊肿患儿,对影像学资料及术中所见进行分析。结果23例胆总管囊肿患儿中,Ia型12例;lc型3例;Ⅳa型8例。MRCP及IOC对胆总管囊肿形态显示清晰,MRCP对近端胆管扩张及狭窄显示清楚,而IOC可因图像的重叠造成病变遗漏。MRCP显示胰胆管合流异常10例（43．5％）,IOC显示胰胆管合流异常19例（82．6％）。IOC对胰胆合流的显影率高,明显优于MRCP。胆管狭窄在术中得到证实,对狭窄胆管均行胆管成形,远端胆管在靠近汇合处离断,术中无胰管损伤。结论MRCP和IOC选择性联合应用,对手术有重要的指导作用。     

Piezoelectric extracorporeal shockwave lithotripsy for bile duct stone formation after choledochal cyst excision

We report a case of bile duct stones in which piezoelectric extracorporeal shockwave lithotripsy (ESWL) was highly effective for the clearance of stones. A 16-year-old girl, who had undergone excision of a choledochal cyst when she was 3 years old, presented a spiking fever and colic abdominal pain. Radiological investigations showed two large stones incarcerating to the proximal end of hepatico-jejunostomy anastomosis. Massive debris was also present in intrahepatic bile duct proximal to the anastomosis. She underwent piezoelectric ESWL with an EDAP LT02 lithotripter. An average of 40 min ESWL session was repeated at intervals of 2 or 3 days. Neither anesthetic nor sedative treatment was required. By the end of the sixth session, the stones incarcerated were fragmented and the debris in the intrahepatic bile duct was completely eliminated. We conclude that piezoelectric ESWL is a less invasive, effective and repeatable method, therefore, it could be a treatment of choice for bile duct stone formation after choledochal cyst excision.     

胆道闭锁肝内iNOS及其调控因子异常表达与进行性肝损伤的相关性

目的 研究胆道闭锁(BA)患儿肝内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其上下游调控因子表达情况,并探讨其与BA进行性肝损伤发生的关系.方法 应用免疫组织化学染色法对2002年10月至2007年3月在本院行Kasai手术的38例BA患儿与16例对照儿童肝组织iNOS表达情况进行研究;应用ELASA法对BA患儿和对照组外周血总一氧化氮(NO)代谢产物浓度进行测定;应用TUNEL法对BA患儿和对照组肝内胆管上皮凋亡指数进行测定;应用免疫印记法对BA患儿和对照组肝组织NF-κB表达进行半定量分析.结果 iNOS在BA患儿肝组织异常高表达,强度为0.30±0.08,而在对照组肝组织不表达.BA患儿外周血总NO代谢产物浓度为(90.40±12.46)mol/L,明显高于对照组的(63.67±5.78)μmol/L,且BA组总NO代谢产物浓度与血清ALT水平[(152.76±29.59)U/L]呈强正相关(r=0.97).BA组肝内胆管上皮凋亡指数(54.00±11.67)%远高于正常对照组(20.72±5.63)%,且与肝组织iNOS表达强度呈强正相关(r=0.99).NF-κB出在BA患儿肝组织中的表达(0.74±0.06)明显高于正常对照组(0.22±0.03),且与iNOS表达强度呈强正相关(r=0.97).结论 iNOS异常高表达在BA患儿进行性肝损伤中发挥重要作用,该作用是由iNOS及其上下游调控因子NF-κB、NO共同作用所实现.     

Expression of osteopontin correlates with portal biliary proliferation and fibrosis in biliary atresia

The acquired or perinatal form of biliary atresia is a Th1 fibro-inflammatory disease affecting both the extrahepatic and intrahepatic bile ducts. Osteopontin (OPN) is a Th1 cytokine implicated in several fibro-inflammatory and autoimmune diseases. We examined the expression of OPN in acquired biliary atresia in comparison to normal liver and several pediatric cholestatic liver diseases. We also assessed OPN expression by cultured human bile duct epithelial cells. We found that liver OPN mRNA and protein expression were significantly increased in biliary atresia versus normal and other cholestatic diseases. OPN expression in biliary atresia was localized to epithelium of proliferating biliary structures (ductules and/or ducts) and bile plugs contained therein. No portal biliary OPN expression could be demonstrated in normal liver, syndromic biliary atresia, biliary obstruction not due to biliary atresia, and idiopathic neonatal hepatitis. OPN expression by human bile duct epithelial cells in culture was responsive to IL-2 and TNF-alpha. Our results demonstrate an up-regulation of OPN expression by interlobular biliary epithelium in biliary atresia, which correlates with biliary proliferation and portal fibrosis. These findings suggest a role for OPN in the pathogenesis of biliary atresia.