抗斯氏肺吸虫单克隆抗体的制备和检定

作者用斯氏肺吸虫成虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞杂交,获得成功。融合率64％,抗体阳性率19％。经克隆化获得分泌抗免疫用抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。对其中2E_5诱生的腹水进行了检测,显示腹水中含高效价特异性单克隆抗体;PAGE揭示一明显特异区带;并经检定,属IgG_1亚类。     

抗羊垂体催乳素单克隆抗体性质研究

本文报道了应用淋巴细胞杂交瘤技术将羊垂体催乳素(oPRL)免疫过的BALB/c小鼠脾细胞与NS-O骨髓瘤细胞融合。制备了5株分泌抗oPRL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中1种单克隆抗体属IgG1,4种属IgG2a。ELISA检测小鼠腹水抗体稀释度均在5×10~4倍以上。用固相夹心免疫放射测定法测出5种单克隆抗体可识别oPRL分子上3个不同的抗原决定簇,本文还对5种单克隆抗体与和oPRL结构相似的生长激素进行交义反应以鉴别其特异性。     

抗小鼠endolgin单克隆抗体杂交瘤的建立和初步应用

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠endogun的单克隆抗体杂交瘤细胞系，为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法 利用小鼠endc，glin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠，通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠endoglin单克隆抗体的杂交瘤系。利用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型，免疫印迹方法明确筛选的单克隆抗体的特异性，免疫组化和免疫荧光初步判定获得的单克隆抗体是否可以应用于临床诊断。结果通过对90多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选，获得一株分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系，分泌的单克隆抗体亚型为IgG1，轻链亚型为kappa。免疫印迹显示该研究获得的单克隆抗体可以特异识别小鼠endoglin重组蛋白，该单克隆抗体可以结合实体肿瘤组织微血管上的特异抗原并将微血管有效染色。结论本研究所获得的抗小鼠endglin单克隆抗体将有助于深入研究endoglin的新功能，为肿瘤血管生成的诊断和治疗提供了物质保障。     

肺炎支原体种特异性单克隆抗体杂交瘤制备及鉴定

目的　制备抗肺炎支原体种特异性单克隆抗体。方法　以纯化的肺炎支原体膜蛋白抗原 (相对分子质量为43× 10 3)加福氏免疫佐剂免疫 8周龄雌性BALB c小鼠 ,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 0 Ag14融合 ,以酶标记免疫吸附测定法 (ELISA)筛选和鉴定所制备的单克隆抗体。结果　共筛出 3株分泌抗肺炎支原体种特异单克隆抗体杂交瘤 ,经免疫鉴定其分泌的免疫球蛋白类型为IgG1、IgG2a及IgM ,与肺炎支原体有很强的亲和力 ,与种属相近的其它 6株支原体没有交叉反应。结论　本次筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌高浓度的肺炎支原体单克隆抗体 ,并且有很强的种特异性。     

分泌抗精氨酸加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(简报)

本文利用杂交瘤技术获得1株分泌抗精氨酸加压素(AVP)单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为1A_1。由此细胞株产生的单克隆抗体将用于研究AVP在体内的作用及激素和递质间的调控作用,并为神经内分泌的研究提供了一种良好的工具药。 以AVP为抗原,用碳二亚胺偶联,合成AVP-牛甲状腺球蛋白。将此结合物与等量福氏完全佐剂制成乳状物免疫BaL b/c小鼠,一月后用同样剂量加强一次,于细胞融合前3～4 d作脾脏免疫。取血清抗AVP抗体阳性反应(酶联免疫吸附测定法,ELISA)的免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0(10:1)     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

抗轮状病毒主要内壳蛋白Vp6单克隆抗体的研制

本文采用猴轮状病毒SA11株免疫的Balb/c小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用ELISA双抗体夹心法筛选出4株能稳定分泌抗SAll抗体的杂交瘤细胞株.4株单克隆抗体均针对SAll内壳蛋白Vp 6,而其中一株具有对人和动物轮状病毒的广谱反应性.利用此株单克隆抗体对62例婴幼儿腹泻样本作ELISA检测,并与PAGE结果比较,二者符合率为90.3%;且与电泳长型及短型的轮状病毒起反应,证明此株单克隆抗体具有抗轮状病毒群抗原决定簇的特性.     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2（AnxA2）的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系。方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性。结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白。结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障。     

抗AIB1-C单克隆抗体的制备及初步应用

目的:建立分泌抗AIB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:以纯化GST-AIB1-C蛋白为免疫原,免疫BAL b/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA筛选。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗AIB1-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经Western-blot和免疫细胞化学法鉴定,这些McAb特异性高,亲和力强。结论:成功研制出抗AIB1-C单克隆抗体,为双抗体夹心法ELISA试剂盒的研制奠定基础。     

抗纤维蛋白—抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓？…

研究抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力。方法 通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，获得分泌双特异性单抗杂交－杂交瘤细胞。采用ＥＬＩＳＡ法检测该ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶的结合力。用＾１３１Ｉ血浆－血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力。     

抗新型锌指蛋白ZBTB45单克隆抗体的制备与应用

目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分泌ZBTB45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,从荷瘤小鼠的腹水中通过蛋白A柱纯化单克隆抗体,鉴定分析所制备抗体在免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学中的应用效果。结果成功制备了6株抗ZBTB45的特异性单克隆抗体,其中3E5、2G4、4D2和1D4可成功用于免疫印迹和免疫沉淀分析,3E5、6D8和8E3可用于免疫组织化学检测内源性ZBTB45,具有较好的敏感性、特异性。结论首次成功制备了抗ZBTB45单克隆抗体,可应用于体外和体内的免疫学检测,为深入研究ZBTB45的生物学功能提供了技术支持。     

抗食管癌单克隆抗体的免疫组织化学研究

以人食管癌109细胞株免疫BALB/c小鼠获得两株抗食管癌杂交瘤,分别分泌单克隆抗体(McAb)2GF_3和2GF_4。以上述两种McAb的一种或将该二者混合,用ABC染色法检测食管癌和正常组织的石蜡切片,发现该两种McAb对不同组织类型或分化程度不同的食管癌细胞有不同的反应性;而且,应用两种McAb混合液的,可增高在食管癌总体标本中的检测阳性率。     

抗HBV逆转录酶杂交瘤细胞系的建立及其单克隆抗体鉴定

目的 建立抗乙型肝炎病毒逆转录酶单克隆抗体杂交瘤并研究杂交瘤细胞及抗体特性。方法 用经原核表达的乙型肝炎病毒逆转录酶蛋白（HBV-RT）免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系,然后用ELISA法筛选出阳性克隆,最后用免疫组化ABC方法研究杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果 2株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其杂交瘤细胞经过100d连续培养,单克隆抗体分泌稳定,特异性强、腹水抗体效价免疫组化ABC法1：1000。免疫组化检测显示其相应抗原在肝炎及肝硬变组织中呈高表达（73%）,正常肝组织中未见阳性反应;其抗原主要分布于细胞质内。结论 此2株抗乙型肝炎病毒逆转录酶杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体具有特异亲合性,它们的成功制备为研究HBV感染的早期诊断及乙肝患的治疗奠定了基础。     

抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系的建立及其单克隆抗体鉴定

目的：制备分泌抗乙型肝炎病毒末端蛋白mAb杂交瘤并研究杂交瘤细胞及所产生抗体的特性．方法：用经原核表达的乙型肝炎病毒末端蛋白(HBV-TP)免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／O融合，经筛选和克隆化建立杂交瘤细胞系，然后用ELISA法筛选出阳性克隆，以免疫组化ABC方法研究杂交瘤细胞分泌的mAb特性．结果：共筛选出3株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系，其杂交瘤细胞经过100d连续培养，mAb分泌稳定，特异性强，腹水抗体效价免疫组化ABC法1：1000。免疫组化检测显示其相应抗原在肝炎及肝硬变组织中呈高表达(80％)，正常肝组织中未见阳性反应；其抗原主要分布于细胞质内．结论：此3株抗乙型肝炎病毒末端蛋白杂交瘤细胞分泌的mAb具有特异亲合性，其成功制备为研究HlBV感染的早期诊断及乙肝患的生物治疗奠定了基础。     

分泌抗体的杂交瘤细胞株的制备

目的应用杂交瘤技术制备出分泌抗肺癌抗体杂交瘤细胞株,为肺癌的早期诊断和免疫治疗提供可能靶点．方法用肺癌细胞株作免疫原免疫健康BALB／C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA和检测单抗体的特异性,双抗体夹心法测定免疫球蛋白同种型．结果通过细胞融合,筛选出2株持续分泌抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株C5、B8,其分泌的抗体为IgM亚类,κ亚型,并和肺癌细胞发生特异性反应．结论成功完成细胞融合,制备了分泌抗体的杂交瘤细胞株．     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

人垂体提取液免疫建立促甲状腺素单抗杂交瘤细胞株

获取分泌结合力和特异性均好的抗人促甲状腺素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法；用人重体提取液为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以聚乙二醇为融合剂，亚克隆三次。结果；获得２株分泌与ｈＴＳＨ特异性结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株，所分泌的免疫球蛋白为ＩｇＧ１，液相中与ｈＴＳＨ的最大备ｈＴＳＨ单克隆抗体；２．此２株单克隆抗体的获得为建立敏感的ｈＴＳＨ测定方法奠定了基础。     

PREPARATION OF ANTI-IDIOTYPIC ANTIBODIES SPECIFIC FOR ANTI- HEL AND ANALYSIS OF THEIR FUNCTIONAL MIMICRY

Objective. This study is to investigate the functional mimicry by using anfi-idiotypic antibodies of enzymes. Methods. Monoclonal anti-idiotypic antibodies against anfi-HEL(hen egg-white lysozyme, HEL) antibodies were obtained by fusion of Sp2/0 myeloma ceils with spleen ceils of syngeneic mice immunized with monoclonal anti-HEL antibodies against HEL‘s different antigenic epitopes. Then bacteriolysis of the anti-idiotypic antibodies were ohserved. Results. Eight hybridomas strains secreting anti-idiotypic antibodies were observed and characterized. It was shown that two of eight anti-idiotypic antibodies secreted by two hybridomas( 1A10C9 and 2AllC1B3) could mimic HEL catalytic activity to lyse Micrococcus lysodeikticus and that the catalytic effect of mixed anti-idiotypic antibodies of 1A10 G9 and 2A11C1B3 was stronger than that of one of them, but less than HEL. Conclusion. The results demonstrated that the anti-idiotypic antibodies that could mimic enzyme activity existed in the idiotype network during anti-enzymatic immune response.