抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

骨髓瘤蛋白(IgDλ)独特型单克隆抗体的制备

本文用从1例骨髓瘤患者(IgDλ)尿中提取的λ链作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过两次融合,分别经3～4次克隆后获得86株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,经鉴定其中15株为抗独特型McAb。其中12株仅与同源性λ链和IgD反应,不与正常人λ链,k链,IgG、IgA、IgM、IgD、IgE及白蛋白(HSA)和一系列副球蛋白反应.间接免疫荧光法证明,抗独特型McAb与骨髓瘤患者外周血淋巴细胞和骨髓细胞阳性率高达23%,不与正常人群外周血淋巴细胞和骨髓细胞反应,其中部分McAb与实验室培养的浆细胞瘤株呈现阳性反应.     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中应用的研究

应用B-淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空肠弯曲菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4株的McAb针对CA中的耐热抗原成分,1株的McAb针对CA中的不耐热抗原成分。应用32种其它细菌对这些McAb的特异性检查表明,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,与其它细菌均为阴性反应。应用不同地区、不同来源的516株空弯菌对这些Mc-Ab与空弯菌的反应性进行了检查,结果均为阳性反应。应用BA-ELISA对人(140)、     

人体实质性肿瘤的单克隆抗体及其临床应用(文献综述)

<正> 自杂交瘤技术问世以来,现已迅速运用单克隆抗体(McAb)试图解决肿瘤抗原及肿瘤的诊断、治疗等一系列问题。本文主要介绍人体实质性肿瘤McAb的研制近况及探讨用于临床诊断和治疗的可能性。 一、人体实质性肿瘤McAb的研制: (一)已建立的杂交瘤及其McAb的特性:目前制得肿瘤McAb大部分是小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾脏细胞融合的杂交     

抗鼠上皮细胞单克隆抗体的制备及其导致肾损伤的作用

为了探讨膜性肾病的发病机理,作者试图用杂交瘤技术获得针对肾小球上皮细胞的McAb。以大鼠肾小球为抗原,加完全福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠。采用对数生长的P3u1与免疫后的脾细胞融合及进行克隆筛选,获得3株针对肾小球上皮细胞的杂交瘤。利用抗原交叉试验(ELISA方法)、McAb亚类鉴定、放射免疫沉淀McAb纯度鉴定、McAb效价测定等方法对杂交瘤细胞进行了鉴定,同时使用免疫电镜的方法,并制备了McAB介导的肾炎模型。结果为:(1)以     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

用菌体抗原筛选霍乱弧菌单克隆抗体的ELISA

<正> 众所周知,ELISA常用作筛选和鉴定可溶性抗原单克隆抗体(McAb)的常规方法。但对颗粒性抗原的淋巴细胞杂交瘤产生的McAb,则缺少准确、敏感、微量、快速的筛选和鉴定的检测系统。Stocken(1979)Nachamkin(1981)曾将细菌等细胞性抗原贴附于微孔塑料板上进行固相免疫测定。我们在     

抗人前B淋巴细胞鼠-鼠杂交瘤的建立

用急淋患者的白血病细胞为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了一株抗人前B淋巴细胞杂交瘤All_(26)。该杂交瘤分泌的单克隆抗体活性高,特异性地针对前B淋巴细胞,     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

脂蛋白(α)单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

应田淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清脂蛋白(α)(LP(a))杂交瘤细胞株(BH6、BH7、BH11和BH21),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:BH6为IgG1,BH7、BH11和BH21均为IgG2a,腹水效价为1×10~(-7)。特异性测定:LP(α)McAb与载脂蛋白(apo)AⅠ、AⅡ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E,人血清白蛋白,纤维蛋白溶酶原(pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实,BH6和BH21为识别LP(α)上同一抗原决定簇的McAb;BH7和BH11则为针对LP(α)上另一抗原决定簇的McAb。分别利用单株和混合株McAb标记酶建立了可应用于人血清LP(α)含量测定的ELISA双抗体夹心法。     

单克隆抗体

(1)高度特异性追踪单克隆抗体(McAb)已在医学中取得成效,本文介绍了这种免疫防御武器的应用可能性和限度。Kohler应用细胞杂交瘤技术,将致敏的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,可按照人们的意愿生产大量纯的McAb。Kohler和Milstein由于发展了生产McAb的技术于1984年获诺贝尔医学奖金。目前McAb已广泛应用于医学领域。     

抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究

用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。     

抗可溶性抗原鼠单克隆抗体的特性分析和鉴定

<正> 随着小鼠B淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体(McAb)技术的发展,预计今后80％左右的常规动物多克隆抗体(PcAb)将被McAb取代。McAb在分子结构、亲和力、稳定性、效价和抗原位点(或称决定簇)特异性方面都与PcAb不同,因而在实际工作中必须对获得的McAb进行更多的鉴定,以使成为更加稳定、标准和特异的制剂。近几年来,我们研究室     

抗同系小鼠白血病细胞单克隆抗体的研究

用可移植性小鼠淋巴细胞性白血病腹水瘤细胞克隆株(LAC-1)细胞免疫同系小鼠,常规方法融合、筛选获得四株分泌特异抗体杂交瘤株。所得McAb能特异地与LAC—1细胞结合,但不能与正常或经ConA转化的小鼠胸腺细胞以及其它多种小鼠瘤细胞起结合反应。ELISA检测显示,McAb与LAC—1细胞培养上清液中提取的病毒作用时未发现阳性反应。细胞介导的细胞毒实验表明,将McAb预先与LAC—1细胞孵育后能显著抑制T杀伤细胞对靶细胞的特异性杀伤作用,免疫印迹试验分析发现McAb识别的LAC—1细胞靶抗原分子量为41KD。     

乙型肝炎单克隆抗体的应用及研究中的问题

乙型肝炎病毒(HBV)不能在非灵长类动物体内增殖,组织培养分离亦未成功,加之该病毒复杂的抗原结构,常掺杂宿主抗原成分;有时又和Delta因子并存,因之在研究上需要高度特异性的抗体,自从淋巴细胞杂交瘤技术问世以来,能分泌大量高特异性的均一的单克隆抗体(McAb),无论在基础医学还是在实际应用中都具有明显的优越性。目前国内外已制成针对HBV三种抗原—表面抗原(HBsAg)、c抗原(HBeAg)和核心S抗原(HBcAg)的     

抗绿脓杆菌单克隆抗体的研究(1983-1986研究综述)

绿脓杆菌(简称PA)常在人体免疫力降低时引起继发感染,采用免疫制剂可取得一定疗效。我们用淋巴细胞杂交瘤技术制备了抗PA单克隆抗体(简称McAb),并对其保护作用和机制作了初步研究。用PAI群10115株,Ⅱ群10117株,Ⅳ群10119株全菌体抗原免疫的BALB/C小鼠脾细     

发酵乳杆菌干预对牛乳β-乳球蛋白过敏小鼠模型的免疫调节作用

目的观察活的/热致死发酵乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白(BLG)致敏小鼠Th1/Th2细胞平衡、血清抗体水平及T淋巴细胞亚群数量的影响,探讨其缓解过敏反应的作用。方法用牛乳BLG和弗氏佐剂的混合液腹腔注射诱发Balb/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验动物随机分为空白组、致敏组、活的与热致死发酵乳杆菌组。采用ELISA法测定各组小鼠血清总IgE和BLG特异性IgE含量。体外分离培养各组小鼠脾淋巴细胞,采用ELISA法检测细胞上清液中Thl型细胞因子(IL-12、IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的水平,采用流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+的百分含量。结果与致敏组相比,活的/热致死发酵乳杆菌组小鼠的IFN-γ/IL-4比值(代表Thl/Th2细胞平衡)显著增高(P<0.05);血清总IgE和BLG特异性IgE水平显著降低(P<0.05);脾淋巴细胞中的CD4+细胞比例升高,CD4+/CD8+比值得到优化。特别是热致死的发酵乳杆菌组抑制IL-4分泌的效果显著优于活菌组(P>0.05),且该组的抗体水平和CD4+/CD8+比值与空白组相比无差异(P>0.05)。结论发酵乳杆菌干预可改善小鼠的BLG过敏症状,其作用可能与促进Thl占优势的Thl/Th2细胞平衡,阻断IgE分泌及平衡T淋巴细胞亚群数量相关。     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb