化疗药诱导颊癌细胞凋亡的原位组织学研究

目的 :探讨化疗药诱导颊癌细胞凋亡及其相关机制。方法 :选择临床行术前化疗患者的颊癌组织进行原位DNA末端标记 (TUNEL法 )显示凋亡细胞以及免疫组化SP法检测Fas蛋白的表达。结果 :凋亡细胞及凋亡小体散在分布于颊癌组织中 ,化疗后颊癌凋亡细胞发生率增加 ,凋亡指数 (AI)均值为 0 .91,明显高于化疗前AI( 0 .38) (P <0 .0 1) ;与化疗前相比 ,化疗后颊癌细胞Fas表达强度增加 (P <0 .0 1)。结论 :细胞凋亡途径可能是化疗药杀灭颊癌细胞的重要机制 ,Fas系统在化疗药诱导颊癌细胞凋亡发生中发挥关键性作用。由此 ,应用凋亡诱导分子FasL有可能成为一种新的抗癌方法。     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的：探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法：水浴加温诱导BcaCD88产生调亡。通过FCM－DNA、FCM－抗体检测技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl-2及bax基因蛋白表达的动态变.:地亡率与bcl-2蛋白表达水平存在负相关关系,与bax蛋白表达存在正相关关系。结论：高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl-2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生。     

阻断内源性bcl-2蛋白表达提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨与bcl—2翻译起始部位碱基互补的反义bcl—2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletide，ODN)对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：以脂质体Lepofectin加为载体，转染20μM反义bcl—2 ODN于BcaCD885细胞内，阻断内源性bcl—2蛋白表达，再以43℃40min加热后，以流式细胞术—抗体及DNA分析对bcl—2蛋白、bax蛋白和细胞凋亡进行检测。结果：反义bcl—2 ODN阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达后，bax／bcl—2升高，细胞凋亡率明显提高。结论：阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达能提高其热敏感性。     

二甲基苯并蒽诱导地鼠颊癌过程中Rb基因产物表达的研究

目的探讨实验性吕必生过程中Ｒｂ基因编码产物（ｐＲｂ）的表达变化。方法 用０．５％的二甲基苏醒 并蒽（ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｂｅｎｚａｎｔｈｒａｃｅｎｅ,ＤＭＢＡ）丙酮液涂技法 鼠石侧颊粘膜３次／周,对病变组织用ＬＳＡＢ法进行免疫组化染色（ｐＲｂ染色最强,３周（单纯增生）尖似正常;６、９周异常增生损害时染色减弱,与异常增生程度有关;１２周 形成时染色进一步减弱。ｐＲｂ染色降低与恶变进展有关。结论 ＤＭＢ     

中药单方和复方对人颊癌细胞株体外抑制作用研究

目的:体外实验观察绞股蓝、黄芩甙、丹参酚酸B、灯盏花乙素4种中草药对人颊癌细胞株(HIOEC-BaP,HB)的抑制作用,选取其中抑制效果最佳的两种中药观察其对HB的抑制作用.方法:采用四唑盐(PMS-MTT)比色法检测绞股蓝、黄芩甙、丹参酚酸B、灯盏花乙素4种中草药对HB的抑制作用,并与西药(顺铂)做对比,计算出各药梯度剂量的细胞存活百分率,绘制药效曲线图.采用中效原理计算出各药的ID50,选出其中抑制效果最佳的两种中药复方合用,观察其对HB的抑制作用,计算出梯度剂量的细胞存活百分率,绘制药效曲线图.采用中效原理计算出ID50,判断两种药物的相互作用关系.结果:绞股蓝、黄芩甙、丹参酚酸B、灯盏花乙素4种中草药对人颊癌细胞株(HB)有抑制作用,经方差分析,4种中药与顺铂对人颊癌细胞株(HB)的抑制作用有统计学差异(P＜0.01),而4种中药之间HB的抑制作用也有统计学差异(P＜0.01),其中黄芩甙、灯盏花乙素的抑制作用最佳.它们的ID50分别是黄芩甙:391.7832μM;灯盏花乙素:354.6062 μM.黄芩甙、灯盏花乙素对这种细胞株的抑制率的差异无统计学意义(P＞0.05).中药黄芩甙、灯盏花乙素合用对HB的ID50是208.222 μM,这两种中药的合用指数CI＜1,表明有协同作用.结论:绞股蓝、黄芩甙、丹参酚酸B、灯盏花乙素4种中草药对HB细胞株有一定的抑制作用,其中黄芩甙、灯盏花乙素对细胞株的抑制作用最佳.且两种中药复方时对人颊癌细胞株有协同抑制作用.     

增殖细胞核抗原和Ki67在口腔癌浸润前沿表达及意义

目的:探讨口腔黏膜癌浸润前沿分级、细胞增殖核抗原和Ki67抗原在浸润前沿中的表达及意义.方法:对30例原发口腔黏膜癌进行分级,采用免疫组化SP法分别检测浸润前沿和中心PCNA、Ki67的表达.结果:口腔黏膜癌浸润前沿(ITF)和非前沿WHO(1997)分级差异有显著性(P<0.05);浸润前沿PCNA(P<0.01)、Ki67(P<0.05)的表达均高于非前沿部分,差别有显著性;浸润前沿PCNA标记指数(LI)(P<0.05)与浸润前沿分级(IFG)总分呈正相关关系.结论:口腔黏膜癌浸润前沿肿瘤细胞分化较差,增殖活性明显高于非前沿部分.在浸润前沿中PCNA和Ki67的高表达可以反映肿瘤的高恶性度及高复发转移倾向.     

血管内皮生长因子C在颊癌中表达及其与淋巴结转移关系的研究

颊癌是较为常见的口腔恶性肿瘤 ,容易早期发生淋巴结转移 ,预后较差 ,但目前对癌细胞淋巴转移的原因不完全清楚 ,近期的研究表明血管内皮生长因子 Ｃ(ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ Ｃ ,ＶＥＧＦ Ｃ)可特异性促进淋巴管增生 ,我们对ＶＥＧＦ Ｃ在颊癌中的表达及其与淋巴结转移的联系进行了研究。1 材料和方法 :( 1)标本来源 :取 4 9例第四军医大学口腔颌面外科切除的颊癌标本 ,常规包埋切片 ,ＨＥ染色 ,光镜检查 ,并随访术后情况 ,分为转移组和无转移组。( 2 )免疫组化 :抗ＶＥＧＦ Ｃ及其受体Ｆｌｔ 4的…     

MTHFD2在口腔鳞状细胞癌中免疫浸润及表达的研究

目的:探讨亚甲基四氢叶酸脱氢酶2(methylenete trahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的生物学意义及其潜在治疗靶点。方法:通过生信分析和免疫组化共同分析MTHFD2的蛋白表达谱和预后价值。利用组织芯片进一步评估OSCC中MTHFD2的表达,并评估MTHFD2表达与总体生存期相关性,探讨MTHFD2在免疫浸润中的意义。结果:通过组织芯片验证MTHFD2在OSCC中表达显著升高(P<0.05),且与总体生存期存在相关性。生物信息分析MTHFD2在OSCC中与免疫细胞及免疫检查点具有相关性(P<0.05)。结论:MTHFD2的上调可能是OSCC潜在的致癌风险因子。MTHFD2可能促进OSCC肿瘤细胞免疫浸润。     

口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究

目的：对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）及癌相关成纤维细胞（CAFs）进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法：取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞（NFs）和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果：获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论：通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。     

P21和P185在颊粘膜上皮良性和恶性病变中的表达及意义

采用免疫组化ABC法检测P21和P185在正常颊粘膜上皮，慢性非特异性炎症病变、镤状细胞癌及其癌旁组织中的表达，并进行图像分析，结果显示，P21和P185在鳞癌和部分癌旁组织中的表达明显高于正常颊粘膜上皮和炎症病变，二者具有明显的相关性，提示P21和P18与颊粘膜上皮恶变有相关性。     

人骨髓间充质干细胞对舌鳞癌细胞系Cal-27侵袭作用的影响

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)对舌鳞癌细胞系Cal-27侵袭的影响及作用机制。方法 分别培养hBM-MSCs和Cal-27,倒置显微镜下观察细胞形态。hBM-MSCs和Cal-27共培养,获得共培养后的Cal-27细胞。划痕实验观察Cal-27的迁移面积;Transwell迁移及侵袭实验观察Cal-27的迁移及侵袭细胞数目,绘制条形图。使用荧光定量PCR技术,观察hBM-MSCs对Cal-27侵袭相关肿瘤标志物E-cadherin、twist、slug、snail、MMP-2、MMP-9基因表达的影响;使用Western 免疫印迹技术,观察hBM-MSCs对Cal-27侵袭相关肿瘤标志物MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 hBM-MSCs可促进Cal-27的侵袭,伴随E-cadherin下调,twist、slug、snail、MMP-2、MMP-9基因表达上调及MMP-2、MMP-9蛋白表达上调。结论 hBM-MSCs促进Cal-27细胞的侵袭作用,可能与其上调Cal-27细胞侵袭作用相关肿瘤标志物的表达有关。     

舌鳞状细胞癌侵袭和转移的研究进展

舌鳞状细胞癌是头颈鳞状细胞癌中最常见的恶性肿瘤,尽管医疗技术水平已经取得较大进步,但舌鳞状细胞癌患者的预后仍不理想,局部或区域性复发及颈部淋巴结转移仍为临床治疗的巨大挑战。文章介绍了与舌鳞状细胞癌侵袭和转移相关的一系列蛋白和基因、micro RNA、上皮间质转化和肿瘤干细胞行为的研究进展。随着对舌鳞状细胞癌侵袭和转移机制研究的不断深入,舌鳞状细胞癌侵袭和转移的生物学行为难题将有望被攻克。     

Establishment of a highly metastatic buccal squamous cell carcinoma cell line from a Sprague-Dawley Rat

ObjectivesThe incidence of buccal squamous cell carcinoma (buccal SCC) is considered to be the second highest out of all oral cancers, but the unsatisfactory in vivo tumorigenicity and metastatic potential of the widely used cell lines have greatly delayed studies on the mechanisms of tumor progression. This study aimed to establish a highly metastatic buccal SCC cell line, which may serve a useful tool in buccal SCC research.Materials and methodsBuccal SCC was induced by 4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO) in Sprague-Dawley rats. The cancer samples were collected, and the tumor cells were purified in vitro. A highly aggressive cell line termed “Rca-B” was established by an invasion assay. Its proliferative ability, cell cycle distribution, baseline level of apoptosis, carcinogenicity and metastatic behavior in nude mice were investigated.ResultsTo date, Rca-B cells have been stably cultured in vitro for more than 180 passages. These cells were polygonal or spindle-shaped, grew adhesively, and exhibited a stable epithelial phenotype as characterized by positive expression of cytokeratin. The population doubling time was 25.09 h. Cells in S-phase of the cell cycle accounted for 31.17% of the total number of cells, and the baseline level of apoptosis was 8.52%. The in vitro migration and invasion assays revealed highly aggressive features of Rca-B cells. In addition, the rate of xenograft formation was 100%, and the incidence of experimental lung metastasis was 81.8% in immunodeficient nude mice.ConclusionThe Rca-B cell line was established as a highly metastatic rat buccal SCC cell line, and its in-depth characterization, which includes malignant behaviors, allows for a wealth of functional studies on the molecular mechanisms of buccal SCC progression and targeted therapy.     

颊粘膜鳞癌微血管密度与增殖细胞比率的定量研究

用ＡＢＣ酶标法定量分析了颊癌内微血管密度和增殖细胞比率，其与正常组织的差别及参考价值。颊癌内这二个指标均明显高于正常颊部组织，分别为后者的２０８％（Ｐ＜０．０５）和３３５％（Ｐ＜０．０５）。研究结果表明，微血管密度改变和增殖细胞比例变化均反映了肿瘤组织的恶性特征。增殖细胞分布区域与颊癌内微血管密集增生区域相一致，主要分布在肿瘤周边部和癌巢的基底部；二者间存在密切的依存关系，呈直线正相关。经统计学处理，其直线回归方程为Ｙ＝２０．０８０１＋１．３０４４Ｘ（ｒ＝０．９６８０，Ｐ＜０．０１）。本研究证明颊癌内血管生成与癌细胞增殖相互促进，是颊癌生物学行为表达的二个重要指标，对判断颊癌的发展和疗效评价有重要意义。     

口腔鳞癌IV型胶原和层粘连蛋白的表达与颈淋巴结转移的关系

目的 探讨口腔鳞癌ＩＶ型胶原（ｃｏｌ ＩＶ）和层粘连蛋白（ＬＮ）的表达及其与临床病理参数的关系。方法 应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了３０例口腔鳞癌组织和５例人正常口腔膜组ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达,并用病理图像分析软件定量分析了两者的表达程度;对ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达与临床病理参数的关系进行了统计学分析。结果 ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达部位相同,主要分布于口腔粘膜和鳞癌组织基底膜;正常粘膜ＣｏｌⅣ和ＬＮ表达完整连     

口腔粘膜鳞状细胞癌基底膜蛋白的免疫组化研究 ——Ⅳ型胶原和LN的表达异常

目的：了解层粘连蛋白（ＬＮ）和Ⅳ型胶原在口腔粘膜鳞状细胞癌中的表达情况。方法：采用免疫组化之ＳＰＴＭ法对３０例口腔鳞状细胞癌,１０例正常口腔粘膜染色。结果：正常口腔粘膜基底膜ＬＮ和Ⅳ型胶原染色密度高,呈连续线状。鳞状细胞癌ＬＮ和Ⅳ胶原的染色密度。基底膜的连续性与肿瘤的分化程度呈负相关。结论：ＬＮ和Ⅳ型胶原的表达异常与肿瘤分化、浸润和转移有密切关系,可作为判断肿瘤预后的一项指标     

丙泊酚对人咽鳞癌FADu细胞系增殖、迁移、侵袭和凋亡的调节作用

目的:探讨丙泊酚对人咽鳞癌FADu细胞系增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的潜在机制.方法:将不同浓度(0、5、10、20 μg/mL)丙泊酚处理的人咽鳞癌FADu细胞系分别进行CCK-8毒性测试,平板克隆实验测试增殖能力,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞纵向迁移能力和侵袭能力,通过Western免...     

沙利霉素对舌鳞癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沙利霉素对口腔舌鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并初步分析其影响机制。方法:CCK8法检测沙利霉素和顺铂分别作用于CAL-27细胞和EA.hy926细胞后,对细胞增殖的影响;Transwell小室法检测沙利霉素对CAL-27细胞侵袭和迁移能力的作用;Western 免疫印迹检测沙利霉素对CAL-27细胞中E钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）和β连环蛋白（β-catenin）表达的影响。采用SPSS20.0 软件包对数据进行统计学分析。结果:沙利霉素抑制CAL-27细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性,且其增殖抑制作用强于顺铂（P<0.05）;经过沙利霉素(4 μmol/L）处理过的CAL-27细胞,其侵袭和迁移能力均显著低于空白对照组(P<0.05);沙利霉素上调CAL-27细胞中E-cadherin蛋白的表达水平,并且下调vimentin和β-catenin蛋白的表达水平。结论:沙利霉素能够明显抑制CAL-27细胞的增殖能力,显著减弱CAL-27细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与抑制癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)有关。     

颊粘膜鳞癌细胞凋亡与临床病理特征及预后的关系

目的:研究颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生情况,并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法:采用末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,计算凋亡指数。结果:本组34例颊癌标本均有凋亡细胞发生,凋亡指数范围为0.12～0.92,均值0.38,凋亡指数与病理学分级之间有关(P<0.01),而与临床分期及颈淋巴结转移无统计学意义(P>0.05);生存率单因素分析未能揭示凋亡指数高低影响颊癌预后(P>0.05)。结论:颊癌细胞凋亡的发生与分化恶性程度有关,但凋亡指数不能作为颊癌的预后指标