X射线对血管平滑肌细胞作用机制的实验研究

目的：研究X射线外照射对体外原代培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）生长、增殖的影响及作用机制。方法：体外培养VSMC,给予单次8MVX射线照射,源皮距为100cm,剂量率400cGy/min。按照射剂量分为2、5、10、20Gy组,以0Gy为对照组,分别采用细胞计数法,克隆形成实验、四唑盐（MIT）比色实验、伊红排斥实验,流式细胞术及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术,动态观察对VSMC生长、增殖、死亡率、凋亡的影响。结果：①照射后24hVSM数降低,72h后明显恢复（P＜0．05）。②照射后48h内VSMC吸光度（A570）值降低,72h2、5Gy组A570值升高,而10、15、20Gy组各高不明显（P＜0．05）。③72h内10、15、20Gy组VSMC死亡率较高,6d后,各剂量组死亡率下降至较低水平（P＜0．05）。④克隆形成实验提示X坶照射可直接导致NA链断裂,引起细胞死亡。⑤碘化丙啶（PI）染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰,TUNEL法阳性细胞核呈棕黄色,荧光镜下可见凋亡小体。结论：X射线外照射可抑制VSMC的生长和增殖,可能通过两种不同的机制即致死性和（或）亚致死性损伤及诱导凋亡导致SMC死亡。为应用放射治疗防治血管成形术后再狭窄提供了理论依据。     

粘着斑激酶在膀胱移行细胞癌中表达的意义

目的：探讨粘着斑激酶（FAK）在膀胱移行细胞癌（TCC）中的表达与肿瘤分化、浸润的关系,以及与p53、bcl-2、ki-67表达的关系。方法：采用免疫组织化学方法,测定FAK在81例膀胱TCC中的表达情况。结果：FAK在膀胱癌组织中的表面明显高于癌旁黏膜,浸润性膀胱癌明显高于非浸润性,p53或ki-67阳性膀胱癌明显高于阴性组。结论：FAK可能是一种肿瘤转化相关酶,又是一种肿瘤演变相关酶;它的表达量可作为膀胱癌发生发展过程中有价值的指标。     

粘着斑激酶在膀胱移行细胞癌中表达的意义

目的 :探讨粘着斑激酶 (FAK)在膀胱移行细胞癌 (TCC)中的表达与肿瘤分化、浸润的关系 ,以及与p53、bcl 2、ki 67表达的关系。方法 :采用免疫组织化学方法 ,测定FAK在 81例膀胱TCC中的表达情况。结果 :FAK在膀胱癌组织中的表达明显高于癌旁黏膜 ,浸润性膀胱癌明显高于非浸润性 ,p53或ki 67阳性膀胱癌明显高于阴性组。结论 :FAK可能是一种肿瘤转化相关酶 ,又是一种肿瘤演变相关酶 ;它的表达量可作为膀胱癌发生发展过程中有价值的指标。     

胃泌素对胃癌细胞粘着斑激酶酪氨酸磷酸化的影响

背景与目的:胃泌素能够刺激胃癌细胞的生长和增殖,这一作用同酪氨酸激酶有关。本研究旨在阐明胃泌素对人胃癌细胞内粘着斑激酶(focaladhesion kinase,FAK)酪氨酸磷酸化的影响。方法:用人胃泌素受体(gastrinreceptor,GR)的真核表达载体pCR3.1/GR,转染人胃癌细胞株SGC7901,增强胃泌素受体表达;用胃泌素受体拮抗剂L-365260,抑制胃泌素和其受体结合;以不同浓度和作用时间的胃泌素刺激胃癌细胞,利用免疫沉淀和蛋白质印迹法检测上述情况下,FAK酪氨酸磷酸化的变化。结果:分别用0.1nmol/L、1nmol/L和10nmol/L的胃泌素作用后,转染pCR3.1/GR的SGC7901细胞内FAK酪氨酸磷酸化表达量分别为0.64±0.06、0.91±0.10和1.00±0.10,高于SGC7901细胞的0.40±0.05、0.52±0.07和0.62±0.06(P<0.01);转染pCR3.1/GR的SGC7901细胞内FAK酪氨酸磷酸化表达量分别为0.72±0.08、0.83±0.05、0.88±0.06和1.00±0.08,高于SGC7901细胞的0.59±0.05、0.65±0.07、0.58±0.03和0.47±0.10(P<0.01或P<0.05)。胃泌素受体拮抗剂L-365260使转染pCR3.1/GR的SGC7901细胞内FAK酪氨酸磷酸化表达量从1.00±0.07降至0.72±0.07(P<0.01),使SGC7901细胞内表达量由0.62±0.06降至0.45±0.05(P<0.01)。在此过程中,FAK蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FAK是胃泌素和其受体结合后发挥效应的关键下游信号分子,酪氨酸磷酸化是其活性形式。     

TNF—α对人肝癌细胞E—钙粘蛋白、α5β1整合蛋白及粘着斑激酶蛋白表达的影响

目的：研究应用肿瘤坏死因子（TNF-α）单独处理SMMC－7721肝癌细胞不能引起肝癌细胞凋亡的原因。方法：采用免疫组化ABC法，结合图像分析仪及流式细胞术和Western印迹方法测定SMMC－7721细胞表面E－钙粘蛋白（E－cadherin)、α5β1整合蛋白（α5β1intergrin)、粘着斑激酶（FAK）表达及粘着斑激酶磷酸化的程度。结果：在肿瘤坏死因子的作用下，E－钙粘蛋白的表达略有下降，但无明显差异。整合蛋白α5亚基的表达明显下降，而整合蛋白β1亚基表达基本无变化。粘着斑激酶的蛋白表达随着肿瘤坏死因子浓度的增加略有下降，但变化不明显，粘着斑激酶的磷酸化程度无明显的变化。结论：单独用肿瘤坏死因子处理SMMC－7721肝癌细胞后，并没有阻断由整合蛋白，α5β1亚基及E－钙粘蛋白介导的2条信号通路，且由胱冬肽酶（caspases)介导的凋亡也没有被完全启动，不足以引起细胞的凋亡。     

粘着斑激酶在食管癌中表达的临床意义

目的探讨粘着斑激酶蛋白(focal adhesion k inase,FAK)的表达与食管癌发生、浸润转移及预后的关系。方法应用免疫组织化学En V ision法原位观察正常食管粘膜、单纯增生粘膜上皮、各级不典型增生上皮及癌组织中FAK蛋白的表达。结果正常食管粘膜未见FAK蛋白的表达。单纯增生粘膜上皮、不典型增生上皮及癌组织中FAK的阳性表达率分别为为10.0%、31.25%及62.5%,其中原位癌的阳性表达率为41.7%,浸润癌的阳性表达率为65.2%。无淋巴结转移者的阳性表达率为22.9%,有淋巴结转移者的阳性表达率为82.6%(P=0.0002)。FAK蛋白阳性表达率随肿瘤分化程度降低及浸润深度加深而增加(P<0.05,P<0.01)。FAK阳性表达者术后的3年和5年生存率分别为41.54%和38.38%,FAK阴性表达者的3年和5年生存率分别为89.66%和72.41%,两组3年及5年生存率的差别有显著性差异(P=0.0011和P=0.026)。结论FAK蛋白的表达与食管癌的发生,细胞分化,浸润,淋巴结转移及预后有关,FAK蛋白表达阳性的患者比表达阴性的患者预后差。     

γ射线对大鼠血管平滑肌细胞增殖和周期影响

目的：探讨γ射线对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）抑制作用机理。方法：对大鼠VSMCs进行原代培养，经^3H-TdR掺入法观察γ射线对VSMCs增殖情况影响，应用流式细胞仪检测γ射线对VSMCs细胞周期的影响。采用Western Blot技术检测γ射线对VSMCs p53、细胞周期素D（cyclin D)和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。结果：γ射线对寻殖的抑制作用呈剂量依赖性。γ射线照射可诱导VSMCs出现G1期阻滞，在照射后一定时间内会导致p53表达增强，cyclinD和PCNA表达减弱，结论：γ射线可抑制VSMCs增殖，其机制可能主要是γ射线诱导VSMCs出现G1期阻滞，抑制VSMCs进行有丝分裂，在这个过程中p53,cyclinD和PCNA等分子起到一定作用。     

膀胱癌中mdm2、p53蛋白和粘着斑激酶表达的病理意义

目的探讨mdm2、p53蛋白和粘着斑激酶(FAK)在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达与肿瘤生物行为的关系.方法采用免疫组织化学方法,测定mdm2、p53蛋白和FAK在81例TCC中的表达情况.结果mdm2、p53蛋白和FAK在TCC组织中的表达明显高于癌旁粘膜,mdm2在p53阳性TCC组中的表达明显高于阴性组.结论mdm2和p53在TCC发展过程中可能具有协同作用,联合检测mdm2、p53蛋白和FAK可作为TCC有价值的诊断指标.     

黏着斑激酶对肝癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨降低黏着斑激酶（FAK）的表达对FAK高表达的人肝癌细胞株SMMC－7721恶性生物学行为影响。方法用Western杂交法比较不同肝癌细胞株FAK含量的差别,构建FAK反义质粒,转染至FAK高表达的细胞株,研究其多种细胞生物学行为的变化。结果SMMC－7721FAK含量比正常人肝细胞L02明显增高,转染FAK反义质粒后、SMMC－7721细胞生长受到抑制,软琼脂培养克隆形成率下降;细胞周期分析,S期细胞下降15％;黏附能力下降;细胞表面整连蛋白含量不变。结论在SMMC－7721中存在FAK过表达,降低FAK表达能部分逆转该肝癌细胞株的恶性表型。     

粘着斑激酶--肿瘤治疗的新靶点

粘着斑激酶FAK(focal adhesion kinase)是一种非受体酪氨酸激酶，通过多种信号通路在细胞周期调控、细胞骨架组装、粘附、迁徙、运动能力、生长调节、生存、血管生成等多方面发挥了重要作用。研究发现FAK在多种上皮及血液肿瘤中高表达或过度激活，参与了肿瘤的发生、发展、侵袭转移、化疗耐药及放疗耐受。FAK已经成为新的肿瘤治疗靶点。本文将综述FAK在这方面的进展。     

FAK 在恶性肿瘤中的研究进展

黏着斑激酶（ Focal adhesion kinase,FAK）是细胞内重要的骨架蛋白,属于一种非受体型酪氨酸蛋白激酶,也是多种信号通路的关键性分子。在肿瘤发生、发展、迁移以及侵袭的各个阶段FAK都具有重要作用。近年来,人们对FAK的研究越来越多,综合国内外研究资料表明,FAK在许多肿瘤组织中表达增高,提示FAK可能与肿瘤的发生发展密切相关,可能是肿瘤治疗的潜在靶点。该综述将对FAK分子结构及功能特点,与肿瘤的关系进行系统阐述。     

Inhibiting focal adhesion kinase: A potential target for enhancing therapeutic efficacy in colorectal cancer therapy

Focal adhesion kinase (FAK) is a major integrin-dependent tyrosine phosphorylated protein, recently, FAK association with colorectal cancer (CRC) has gained attention. The various cancer-promoting mechanisms that associated with FAK can be implicated in the progression of CRC. The interactions between structural features of FAK and various kinases could be closely related to growth, survival, and metastasis in CRC cells. These interactions include human epithelial growth factor receptor, c-Met, platelet-derived growth factor receptor, vascular endothelial growth factor receptor, and Src. Such interactions can trigger the survival signaling of CRC cells and are also involved signaling downstream of phosphatidylinositol 3-kinase, AKT, and the extracellular regulated kinase. Based on this scientific background, many pharmaceutical companies are taking efforts to develop FAK inhibitors to treat solid cancer including CRC. Although the anti-cancer efficacies have been noted in many studies, the commercial drugs have not been developed yet. Therefore, the FAK research on CRC is expected to gain momentum and be highly appreciated as a potential field for developing the new drugs. Therefore, the studies on FAK that effect on the progression of human CRC s would be possible to suggest various approaches to CRC treatment, and FAK could be a potential target as an anticancer candidate for CRC therapies.     

Dual targeting of EGFR and focal adhesion kinase in 3D grown HNSCC cell cultures

Purpose

Epidermal growth factor receptor (EGFR) and focal adhesion kinase (FAK) show frequent overexpression and hyperactivity in various human malignancies including head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). To examine effects of dual EGFR/FAK inhibition on cellular radiosensitivity of HNSCC cells in a more physiological environment, we employed a previously established laminin-rich extracellular matrix (lrECM) based three-dimensional (3D) cell culture model.

Materials and methods

UTSCC15 and SAS HNSCC cell lines stably transfected with EGFR-CFP or CFP were used. Single or combined EGFR (Cetuximab, siRNA) and FAK (TAE226, siRNA) inhibition were accomplished prior to measuring clonogenic survival and protein expression and phosphorylation. Immunofluorescence enabled visualization of EGFR-CFP and FAK.

Results

Cetuximab resulted in higher radiosensitization in EGFR-CFP overexpressing cell lines than CFP controls. Single EGFR or FAK inhibition mediated radiosensitization, while dual EGFR/FAK targeting further augmented this effect. Despite signaling alterations upon Cetuximab and siRNA knockdown, analysis of protein expression and phosphorylation indicates EGFR and FAK signaling coexistence without obvious overlap.

Conclusions

Combined EGFR/FAK targeting yielded stronger radiosensitization than either approach alone, which might be based on non-overlapping downstream signaling. Whether dual targeting of EGFR and FAK can reasonably be combined with radiotherapy and chemotherapy needs clarification.     

食管癌血管内皮生长因子mRNA表达的检测及意义初探

目的　探讨食管癌血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA表达及其临床意义。方法　通过食管镜活检 2 5例食管癌新鲜组织 ,运用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学技术 ,检测VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达 ,分析其与食管癌侵袭和淋巴结转移的相关关系。结果　食管癌VEGFmRNA和蛋白的表达与性别、年龄、病灶部位、T分期、N分期、静脉侵犯、神经侵犯和组织学分级无显著相关性。淋巴结阳性患者 ,VEGFmRNA和蛋白表达较高 ,提示VEGF可能与肿瘤淋巴道转移相关 ,但相关性未达到显著水平。VEGFmRNA阳性表达率为 4 4 % ,异构体形式为VEGF12 1和VEGF16 5。结论　运用RT PCR技术能检测少量食管癌活检组织的VEGFmRNA ;初步研究未发现食管癌VEGFmRNA和蛋白表达与食管癌进展存在明显相关 ,但有必要扩大样本量进一步研究 ;食管癌VEGFmRNA的异构体形式及其生物学行为值得深入研究。     

人肿瘤细胞中Th2类细胞因子的强势表达

目的观察人肿瘤细胞中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞因子的漂移。方法以ＩＬ－２、ＩＦＮγ代表Ｔｈ１类细胞因子,ＩＬ－４、ＩＬ－１０和ＩＬ－１３代表Ｔｈ２类细胞因子,用逆转录聚合酶链反应和ＲＮＡ斑点杂交检测人肿瘤细胞中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞因子的基因表达。结果肿瘤发生时,机体的细胞因子网络发生了相应变化,在检测的２０种人肿瘤细胞株中,１１株实体瘤和９株血液系统肿瘤均呈现明显的Ｔｈ２类细胞因子偏移趋势。结论人肿瘤细胞中Ｔｈ２类细胞因子的强势表达可能与肿瘤的免疫逃逸有关     

乳腺癌VEGF的表达与肿瘤生物学特性的关系

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌组织中的表达及其与临床生物学特性的关系。方法：应用免疫组化S-P法和RT-PCR法检测VEGF、在42例乳腺癌和相应正常乳腺组织中的表达。结果：免疫组化和RT-PCR检测结果显示，42例乳腺癌组织中VEGF的阳性表达率分别为59，5％（25／42）和73．8％（31／42），明显高于正常乳腺组织VEGF的阳性率16．7％（7／42）和23，8％（10／42），VEGF的高表达与乳腺癌患者淋巴结转移密切相关。结论：乳腺癌组织中存在VEGF的过量表达，并且与癌组织淋巴结转移有关：检测VEGF有可能作为预测乳腺癌转移潜能和预后的重要指标。     

非小细胞肺癌组织中FAK和pY397FAK的表达

目的:探讨粘着斑激酶(focaladh sionkinase,FAK)和磷酸化FAK(phosph FAK,pY397FAK)在非小细胞肺癌(no smallcelllungcancer,NSCLC)和正常支气管 黏膜上皮中的表达,及FAK在NSCLC发生 浸润和转移中的作用。方法:应用免疫组织 化学方法检测FAK和pY397FAK在60例 NSCLC和19例正常支气管黏膜上皮中的表 达,并与临床病理指标和Ki 67表达进行联 合分析。结果:FAK和pY397FAK在NSCL 中表达为83.3%(50/60)和55.0%(33 60),高于正常支气管黏膜上皮[57.9%(11 19)和21.1%(4/19)],差异有统计学意义 P=0.030、P=0.010。FAK和pY397FAK表 达升高与TNM分期及淋巴结转移有关,在 Ⅲ期和淋巴结转移组的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ 期和无淋巴结转移组,差异有统计学意义, 均<0.05。FAK的强阳性表达率在低分化 组中(73.1%,19/26)显著高于高 中分化组 (47.1%,16/34),P=0.043。结论:FAK和 pY397FAK过表达在NSCLC发生和进展中发 挥重要作用。FAK和pY397FAK可能作为判 断NSCLC生物学行为的指标和治疗的新靶 点。