在流动血液中蜂胶黄酮对血小板活性的抑制作用

目录：观察蜂胶黄酮对流动状态下血小板活性的影响。方法：实验于2005-12／2006—09在泰山医学院生命科学研究所完成。采用体外灌注法复制血管内膜创伤模型，正常血液流经受损膜表面后，在切应力为1000s^-1时，测量血小板黏附率。以0．1g/L的黄酮磷酸盐溶液作实验组，加入25mmol／L的磷酸盐溶液作阴性对照组，同浓度的阿魏酸磷酸盐溶液作阳性对照组。结果：①血小板在基质膜表面的黏附面积百分比：实验组血小板黏附率低于阴性对照组[（10．498&;#177;2．548）％，（18．792&;#177;4．169）％，F=34．72，P〈0．01]；而实验组与阳性对照组[（9．933&;#177;2．647）％]比较，差异不明显（P〉0．053。②血小板在基质膜表面的黏附状况：当血液流经盖玻片后，可观察到血小板黏附于受损膜表面。阴性对照组血小板分布密度较大，有聚集倾向。实验组血小板分布稀疏，密度较均匀。结论：蜂胶黄酮能抑制血小板的活化，降低其在受损膜表面的黏附活性。     

蜂胶黄酮对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9的影响

背景:研究表明,基质金属蛋白酶9与动脉粥样硬化斑块的稳定性有关,蜂胶黄酮具有抗动脉粥样硬化的作用.目的:拟证实蜂胶黄酮对人脐静脉内皮细胞摹质金属蛋白酶9表达的影响.设计、时间及地点:对比观察.实验于2008-01/08在山东泰山医学院生命科学研究所完成.材料:蜂胶黄酮由泰山医学院生命科学研究所实验室提取;出生1 h内新生儿脐带由山东泰安市中心医院提供,产妇知情同意.方法:进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定.按四甲基偶氮唑盐实验筛选的浓度,分别加入25,50,100,200 mg/L不同剂量的蜂胶黄酮处理细胞24 h,以空白组做对照.主要观察指标:免疫细胞化学染色和ELISA法测定蜂胶黄酮对基质金属蛋白酶9表达的影响.结果:不同剂量的蜂胶黄酮作用人脐静脉内皮细胞24 h后均能明显抑制细胞基质金属蛋白酶9的表达,并且随着浓度的升高抑制作用明显增强.结论:蜂胶黄酮能明显降低人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9的表达.     

体外循环手术中血小板单采对血液的保护作用

目的　探讨在体外循环心脏手术中血小板单采对血液的保护作用 ;方法　选择 2 0例行心脏瓣膜手术患者 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组采用血小板单采技术 +常规体外循环 ,对照组只采用常规体外循环 ,其他血液保护措施两组相同 ;结果　①实验组血小板采集量均在患者血小板总数的 2 0 %以上 ;②实验组术中血液制品 (全血和血浆 )用量较对照组明显减少 ,差异有显著性 ;③两组间Hb及Hct各时点变化趋势一致 ;④围手术期患者血小板计数的动态变化两组差异不大 ,而实验组恢复较快 ;⑤实验组术后血小板聚集功能明显优于对照组 ,差异有显著性 ;⑥实验组术后凝血酶原恢复时间明显较对照组快 ,差异有显著性 ;⑦实验组术后各分时段引流量较对照组明显减少 ,差异有显著性。结论　体外循环术中血小板单采能够保护血小板免遭体外循环的破坏 ,明显减少术后出血 ,起到良好的血液保护作用。     

抗血小板药物研究进展

<正>冠心病已成为危害人类健康的首要疾病,冠心病的发病机制比较复杂,研究表明,其发生发展与血小板过度活化关系密切。在正常的血液循环中,血小板为静息状态,而当血管内皮损伤或是动脉粥样硬化斑块破裂,内皮下的基质暴露,出现活化因子时,血小板将由静息状态转为功能状态,即血小板的激活;然后血小板粘附介导的血管性血友病因子(vWF)与血小板膜糖蛋白(GP)IB结合,形成vWF GP IB,在损伤处形成一层血小板膜,二级介质如二磷酸腺苷(ADP)与血小板膜上ADP受体相结合,从     

血小板对树突状细胞和肿瘤细胞抗原呈递活性的抑制作用

本研究探讨完整的血小板对骨髓来源的树突状细胞（BMDC）和肿瘤细胞的抗原呈递功能的影响。抗原呈递检测体系采用BMDC诱导的混合淋巴细胞反应或肿瘤细胞系EG7（表达卵白蛋白OVA）诱导的OVA特异性T细胞的活化,共培养体系中加入从小鼠外周血分离的血小板至不同浓度,培养一定时间后采用同位素掺入法检测淋巴细胞增殖,采用ELISA检测各种细胞因子的水平,采用流式细胞术检测细胞表面分子情况。结果发现,在反应体系中加入血小板时,淋巴细胞增殖和IFN,,／产生均明显受抑制。血小板还可以阻断细菌脂多糖或含CpG基序的寡核苷酸引起的BMDC表面B7之上调、细胞因子分泌及对同种异基因淋巴细胞的刺激反应。血小板也可抑制BMDC特异性T细胞呈递可溶性或细胞性抗原的能力,表现为淋巴细胞的增殖和细胞因子分泌受到抑制。血小板的这些抑制作用均依赖于加至培养体系中血小扳的浓度。流式细胞术分析表明,血小板结合于BMDC仅轻微增加后者的死亡比例。结论：在某些条件下,血小板可以通过抑制抗原呈递功能而对免疫反应起到负向调控作用,血小板对免疫系统的调节可能比原来预期的更加复杂。     

腺苷对血小板体外激活的抑制作用

本研究的目的主要是研究腺苷对血小板的体外激活抑制作用,为血小板冻干前处理过程筛选血小板功能保护剂提供依据.采用流式细胞术（FCM）测定血小板膜表面CD62P和PAC-1的表达,应用APACT-2聚集仪测定瑞斯托菌素（restocetin）、凝血酶（thrombin）、二磷酸腺苷（ADP）和没食子酸（propyl gallate）诱导的血小板聚集率.研究结果表明,冻干预处理后血小板膜表面CD62P表达显著增加,腺苷浓度为0.75 mmoL/L时可抑制CD62P表达,且呈剂量效应;腺苷可抑制没食子酸诱导的血小板聚集反应,但对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集无抑制作用,腺苷浓度≥1.0 mmol/L对凝血酶诱导的聚集有显著抑制作用.因此,腺苷可抑制体外处理导致的血小板激活,对瑞斯托霉素和凝血酶诱导血小板聚集反应无明显抑制.结论：腺苷可作为血小板体外激活抑制剂及冻干前处理的功能保护剂.     

反复输血者血小板抗体对血小板输注效果的影响

目的　探讨血小板相关抗体与血小板输注效果的关系。方法　采用简易致敏红细胞血小板血清学技术(SEPSA) ,对 87名长期反复输血而又需输注血小板的患者 ,检测血小板相关抗体 ,在血小板输注前后计数血小板 ,并计算 1h和 2 4h血小板增值 (CCI)。采用微量淋巴细胞毒试验 (LCT)和SEPSA法对部分血小板抗体阳性且血小板输注无效的患者进行了血小板配合性输注。结果　反复输血的患者 ,血小板抗体阳性比率 6 0 .9% (5 3/ 87) ;5 3名血小板抗体阳性者中 ,再次输注血小板时 4 6名输注无效 ;血小板抗体阳性组与阴性组比较CCI差异有显著性 (P<0 .0 0 1) ,血小板输注无效率差异也有显著性 (P〈0 .0 0 1)。结论　长期反复输血患者 ,易发生同种免疫反应 ,产生血小板相关抗体 ,导致血小板输注无效 ;血小板配合性输注能较好的解决因血小板抗体阳性引起的输注无效问题 ,可获得满意效果     

炒紫苏子醇提物对血小板聚集活性的影响

目的:探讨炒紫苏子醇提取物对腺苷二磷酸(ADP)、花生四烯酸(AA)和血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集功能的影响。方法:用诱导剂ADP(终浓度3μmol/L)、PAF(终浓度7.2 nmol/L)、AA(终浓度0.35 mmol/L)分别激发血小板聚集,观察炒紫苏子醇提取物对血小板聚集的抑制作用。结果:炒紫苏子醇提取物体外能抑制由ADP、PAF和AA激发的兔血小板聚集,并表现明显的剂量依赖关系。其中,对PAF诱发的血小板聚集作用有更强的抑制作用,80mg/L就表现出明显的抑制作用(P<0.05);而对于ADP和AA激发的兔血小板聚集,640 mg/L炒紫苏子醇提取物表现出明显的抑制作用。结论:炒紫苏子醇提取物具有明显的抗血小板聚集作用。     

PGE1对血小板的体外激活抑制作用

目的 研究前列腺素E1（PGE1）在血小板冻于前预处理过程中对血小板激活和功能的影响,为血小板冻干前处理过程筛选血小板激活损伤保护剂。方法 测定血小板平均体积（MPV）,采用流式细胞术（FCMs）分析血小板CD62p、PAC-1的表达。以反映血小板状态。测定血小板对凝血酶（thrombin）、二磷酸腺苷（ADP）和瑞斯托菌素（Restocetin）的最大聚集率,以反映血小板功能,研究血小板预处理前后的变化以及前列腺素的保护作用。结果预处理后,血小板平均体积（MPV）未发生明显改变,但血小板CD62p表达率显著增加,达20％。PGE1抑制血小板CD62p表达,这种抑制作用随PGE1浓度增加而递增。预处理过程对Restocetin和ADP诱导的血小板聚集有一定影响,聚集抑制率为10％和23％,对凝血酶诱导的聚集抑制不显著。PGE1不影响血小板对Restocetin的聚集反应,但PGE1≥1μmol／L可抑制血小板对ADP的聚集反应,PGE1≥5μmol／L时,显著抑制凝血酶诱导的血小板聚集。结论 前列腺索E1浓度为1μmol／L,可抑制血小板在预处理过程中的激活损伤,且保留血小板的聚集功能。     

Sulfatides inhibit platelet adhesion to von Willebrand factor in flowing blood

Summary.  Sulfatides are sulfated glycosphingolipids present on cell surfaces that bind to adhesive proteins such as von Willebrand factor (VWF), P-selectin, laminin and thrombospondin. Previous studies have localized the sulfatide-binding site of VWF to amino acid residues Gln626–Val646 in the A1 domain. The A1 domain also contains the binding site for platelet glycoprotein Ib (GP Ib), a site that has been reported to be distinct from the sulfatide-binding site. In this study, we analyzed the interaction of sulfatides with VWF and its effect on GP Ib-mediated platelet adhesion under flow conditions. Recombinant VWF A1 domain (rVWF-A1) bound specifically and saturably to sulfatides (half-maximal concentration of ∼12.5 µg mL⁻¹), binding that was blocked by dextran sulfate (IC₅₀≈100 µg mL⁻¹) but not by heparin at concentrations up to 100 U mL⁻¹. Furthermore, sulfatides (125 µg mL⁻¹) prevented the adhesion of platelets or glycocalicin-coupled polystyrene beads to a rVWF-A1-coated surface under high shear stress. In addition, plasma VWF prebound to a sulfatide-coated surface failed to support subsequent platelet adhesion. These results provide firm evidence that sulfatides bind the VWF A1 domain at a site overlapping the GP Ib-binding site.     

Alcohol and polyphenolic grape extract inhibit platelet adhesion in flowing blood

BACKGROUND: Moderate and prolonged alcohol consumption has been associated with decreased cardiovascular morbidity and mortality. Inhibition of platelet function in suspension attributes to these effects. Whether alcohol, red wine, or polyphenolic grape extracts (PGE) inhibit platelet adhesion is not known. We investigated platelet adhesion to fibrinogen and collagen in whole blood under standardised flow. MATERIALS AND METHODS: Before perfusion was started, citrated whole blood from 95 volunteers was preincubated for five min with different alcohol concentrations, unfractioned red wine and PGE. Then, blood was perfused in a single-passage flow chamber over coverslips coated with human fibrinogen or collagen type III at shear rates of 300 s(-1) and 1600 s(-1). RESULTS: Alcohol inhibited platelet adhesion to human fibrinogen at high shear rate (concentrations > or = 0.15 per thousand) and low shear rate (only at a concentration of 4.8 per thousand), whereas red wine (concentrations > or = 0.15 per thousand) inhibited platelet adhesion to human fibrinogen at both shear rates. In contrast, PGE (concentrations > or = 0.0225 g L(-1)) inhibited platelet adhesion to human fibrinogen only at low shear rate. None of these incubations affected adhesion to collagen. CONCLUSIONS: Alcohol, red wine and PGE inhibit adhesion to fibrinogen but not to collagen. This inhibition might contribute to the cardioprotective effects of moderate alcohol consumption.     

Variable effect of P2Y12 inhibition on platelet thrombus volume in flowing blood

Summary. Background and objectives: Patients treated with percutaneous coronary intervention receive aspirin and P2Y12 ADP receptor inhibitors to reduce thrombotic complications. The choice of methodology for monitoring the effects of treatment and assessing its efficacy is still a topic of debate. We evaluated how decreased P2Y12 function influences platelet aggregate (thrombus) size measured ex vivo. Methods and results: We used confocal videomicroscopy to measure in real time the volume of platelet thrombi forming upon blood perfusion over fibrillar collagen type I at a wall shear rate of 1500 s^?1. The average volume was significantly smaller in 31 patients receiving aspirin and clopidogrel (19) or ticlopidine (12) than in 21 controls, but individual values were above the lower limit of the normal distribution, albeit mostly within the lower quartile, in 61.3% of cases. Disaggregation of platelet thrombi at later perfusion times occurred frequently in the patients. Vasodilator‐stimulated phosphoprotein phosphorylation, reflecting P2Y12 inhibition, was also decreased in the patient group, and only 22.6% of individual values were above the lower normal limit. We found no correlation between volume of thrombus formed on collagen fibrils and level of P2Y12 inhibition, suggesting that additional and individually variable factors can influence the inhibitory effect of treatment on platelet function. Conclusions: Measurements of platelet thrombus formation in flowing blood reflects the consequences of antiplatelet therapy in a manner that is not proportional to P2Y12 inhibition. Combining the results of the two assays may improve the assessment of thrombotic risk.     

甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠醛糖还原酶活性的抑制

目的:观察氨基胍甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。方法:实验于2005-06/2005-09在暨南大学药学院药理教研室实验室完成。选用6周龄清洁级SD大鼠60只,雌雄各半,取15只为正常对照组,腹腔注射生理盐水,1次/d,持续8周;其余大鼠均采用腹腔注射D-半乳糖150mg/kg,1次/d×8周致病。D-半乳糖处理大鼠2周后,将大鼠按体质量均衡数字表法随机分成模型对照组、氨基胍组和甘草酸组3组,然后继续腹腔注射D-半乳糖处理同时灌胃给予蒸馏水、氨基胍和甘草酸穴浓度均为30g/L雪300mg/kg灌胃,1次/d×6周;实验结束时,观察氨基胍和甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。结果:实验动物60只全部进入结果分析,没有有脱失。①与正常对照组比较,D-半乳糖处理大鼠出现糖耐量减退、糖基化产物(包括糖化血红蛋白、果糖胺和晚期糖基化终产物)增高以及红细胞内醛糖还原酶活性增强(P<0.01)。②氨基胍组与模型组比较,2h血糖显著降低,可拮抗D-半乳糖诱导的糖耐量减退(P<0.01);甘草酸对糖耐量减退也有一定的改善作用,但差异未见显著性意义(P>0.05)。③氨基胍和甘草酸,均可抑制D-半乳糖诱导的醛糖还原酶活性增高(P<0.01,0.05);氨基胍能明显降低果糖胺,糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量,差异均有非常显著性意义(P<0.01);甘草酸则对果糖胺,糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量的影响不大,差异均未见显著性意义(P>0.05)。结论:氨基胍和甘草酸均能抑制D-半乳糖诱导大鼠体内增高的醛糖还原酶活性,氨基胍对D-半乳糖诱致的大鼠糖基化反应具有明显的抑制作用,而甘草酸对大鼠糖基化反应未见抑制作用。     

甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠醛糖还原酶活性的抑制

目的：观察氨基胍甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。 方法：实验于2005-06／2005-09在暨南大学药学院药理教研室实验室完成。选用6周龄清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，取15只为正常对照组，腹腔注射生理盐水，1次／d，持续8周；其余大鼠均采用腹腔注射D-半乳糖150mg／kg，1次／d&;#215;8周致病。D-半乳糖处理大鼠2周后，将大鼠按体质量均衡数字表法随机分成模型对照组、氨基胍组和甘草酸组3组，然后继续腹腔注射D-半乳糖处理同时灌胃给予蒸馏水、氨基胍和甘草酸（浓度均为30g／L）300mg／kg灌胃，1次／d&;#215;6周；实验结束时，观察氨基胍和甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。 结果：实验动物60只全部进入结果分析，没有有脱失。①与正常对照组比较，D-半乳糖处理大鼠出现糖耐量减退、糖基化产物（包括糖化血红蛋白、果糖胺和晚期糖基化终产物）增高以及红细胞内醛糖还原酶活性增强（P〈0．01）。②氨基胍组与模型组比较，2h血糖显著降低，可拮抗D-半乳糖诱导的糖耐量减退（P〈0．01）；甘草酸对糖耐量减退也有一定的改善作用，但差异未见显著性意义（P〉0．05）。③氨基胍和甘草酸，均可抑制D-半乳糖诱导的醛糖还原酶活性增高（P〈0．01，0．05）；氨基胍能明显降低果糖胺，糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；甘草酸则对果糖胺，糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量的影响不大，差异均未见显著性意义（P〉0．05）。 结论：氨基胍和甘草酸均能抑制D-半乳糖诱导大鼠体内增高的醛糖还原酶活性，氨基胍对D-半乳糖诱致的大鼠糖基化反应具有明显的抑制作用，祈甘草酸对大鼠糖基化反应末见抑制作用.     

同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的抑制作用

目的:探讨同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的影响及其发生的可能原因。方法:实验于2004-08/2005-02在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室进行。选用健康家兔20只,取抗凝血,离心收集红细胞,制备含有γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶体系的红细胞裂解液,设置对照组,高、低剂量同型半胱氨酸处理组,每组均设8个平行管。各组均加入100mmol/L的Tris-Hcl缓冲液(pH8.0)60μL,1mol/LMgCl28μL,10mmol/LATP40μL,50mmol/L谷氨酸(调pH为中性)40μL,红细胞裂解液40μL。低、高浓度同型半胱氨酸处理组再分别加入100mmol/L同型半胱氨酸20μL和60μL,其余实验条件相同。以反应中生成无机磷的mmol数表示γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性大小。分别用紫外分光光度法和荧光法检测各组无机磷和谷胱甘肽含量。结果:①无机磷的生成量:低浓度同型半胱氨酸组和高浓度同型半胱氨酸组明显低于对照组犤(1.476±0.240),(0.751±0.085),(3.279±0.470)mmol/L,P<0.01犦,高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组(P<0.05)。②还原型谷胱甘肽含量:低同型半胱氨酸组和高同型半胱氨酸组明显低于对照组犤(3.058±0.264),(1.908±0.301),(4.476±0.462)μmol/L,P<0.01犦,高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组(P<0.01)。结论:同型半胱氨酸有可能通过竞争性抑制γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的活性,减少细胞内还原型谷胱甘肽的生成。     

同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的抑制作用

目的：探讨同型半胱氨酸对谷胱甘肽合成的影响及其发生的可能原因.方法：实验于2004-08/2005-02在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室进行.选用健康家兔20只,取抗凝血,离心收集红细胞,制备含有γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶体系的红细胞裂解液,设置对照组,高、低剂量同型半胱氨酸处理组,每组均设8个平行管.各组均加入100mmol/L的Tris-Hcl缓冲液（pH 8.0）60 μL,1 mol/L MgCl2 8 μL,10 mmol/L ATP 40μL,50 mmol/L谷氨酸（调pH为中性）40 μL,红细胞裂解液40μL.低、高浓度同型半胱氨酸处理组再分别加入100 mmol/L同型半胱氨酸20μL和60μL,其余实验条件相同.以反应中生成无机磷的mmol数表示γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性大小.分别用紫外分光光度法和荧光法检测各组无机磷和谷胱甘肽含量.结果：[1]无机磷的生成量：低浓度同型半胱氨酸组和高浓度同型半胱氨酸组明显低于对照组[（1.476&;#177;0.240）,（0.751&;#177;0.085）,（3.279&;#177;0.470）mmol/L,P＜0.01],高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组（P＜0.05）.[2]还原型谷胱甘肽含量：低同型半胱氨酸组和高同型半胱氨酸组明显低于对照组[（3.058&;#177;0.264）,（1.908&;#177;0.301）,（4.476&;#177;0.462）μmol/L,＜0.01],高浓度同型半胱氨酸组明显低于低浓度同型半胱氨酸组（P＜0.01）.结论：同型半胱氨酸有可能通过竞争性抑制γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的活性,减少细胞内还原型谷胱甘肽的生成.     

The effects of platelet inhibitors on blood use in cardiac surgery

Platelet inhibition via glycoprotein (GP) IIb/IIIa receptor antagonists has greatly reduced the need for emergent cardiac surgery. However, this change has come at a cost to both the patient and the cardiac surgical team in terms of increased bleeding risk. Current guidelines for patients requiring coronary artery bypass surgery include: 1) cessation of GP IIb/IIIa inhibitor; 2) delay of surgery for up to 12 h if abciximab, tirofiban, or eptafibitide is used; 3) utilization of ultrafiltration via zero balance technique; 4) maintenance of standard heparin dosing despite elevated bleeding times; and 5) transfusion of platelets as needed, rather than prophylactically. These agents present cardiac surgery teams with increased risk during CABG, although overall risk may be diminished by the substantial benefits to patients with acute coronary syndromes and percutaneous interventions, i.e., reduced infarction rates and improved vessel patency. With judicious planning, urgent coronary artery bypass can be safely performed on patients who have been treated with GP IIb/IIIa receptor inhibitors.