十一酸睾酮对胃上皮细胞生长的实验研究

目的：观察十一酸睾酮对正常胃上皮细胞株HFI－145生物学行为的影响，评价此药的安全性。方法：用不同浓度的十一酸睾酮作用细胞，MTT方法研究细胞生长状况，FCM观察细胞周期分布，TUNEL法检测细胞凋亡。比较不同浓度作用组间差异以及与对照组的差异。结果：0．0004μmol/L－0．4μmol/L十一酸睾酮对HFI－145细胞作用不明显，4μmol/L逍度能抑制细胞生长，并且有时间依赖性，作用第3天抑制率为27％；4μmol/L用药组细胞的G0／G1期比较较对照组增多；FCM以及TUNEL未发现凋亡百分比的改变。结论：药理浓度范围内十一酸睾酮对正常胃粘膜上皮细胞无毒性作用，高浓度十一酸睾酮抑制胃上皮细胞生长。     

五味子乙素B对人胃癌细胞MGC－803增殖和迁移能力的影响

目的：观察五味子乙素B（ Schisandrin B , Sch B）对人胃癌细胞MGC－803增殖、迁移能力及基质金属蛋白酶－9（matrix metalloproteinase 9, MMP－9）mRNA表达的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：采用CCK－8法检测50、100、200、400和800μmol／L Sch B对胃癌细胞增殖的抑制作用;光镜观察细胞生长状态变化,并计数细胞分裂指数;细胞划痕实验检测200μmol／L Sch B对细胞迁移能力的影响;定量PCR检测细胞MMP－9 mRNA的表达。结果：CCK－8结果显示,Sch B对胃癌细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;胃癌细胞经不同浓度Sch B处理24、48、72 h,光镜下可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核质浓缩及凋亡小体形成,细胞分裂指数随Sch B剂量增加和作用时间延长而降低;200μmol／L Sch B作用24、48、72 h,细胞迁移率分别为（39．57±9．14）％,（56．57±10．04）％和（68．21±11．43）％,明显低于对照组（P＜0．05）;PCR结果显示,胃癌细胞中MMP－9 mRNA表达显著低于对照组。结论：Sch B对胃癌细胞的增殖抑制呈剂量和浓度依赖性,并降低胃癌细胞迁移能力,可能与下调MMP－9基因的表达有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度（0．5、1．0、5．0、10．0和50．0μmol／L）的MG132处理Raji细胞24h和48h,MTT法检测细胞增殖情况;5．0μmol／LMG132处理Raji细胞24h,流式细胞术进行细胞凋亡率及细胞周期分析。结果：浓度为1．0、5．0、10．O、50．0μmol／L的MG132作用于Raji细胞24h和48h后,细胞增殖OD（A490nm）值均显著低于对照组（P〈0．05）,增殖抑制率（20．60±10．28）％～（60．40±2．75）％,随MG132浓度的增加和作用时间的延长细胞增殖抑制率增高,抑制作用呈现剂量和时间依赖性;5．0μmoL／L的MG132作用Raji细胞24h后,实验组细胞凋亡率为25．86％,对照组为0．06％,实验组s期细胞比率（51．70％）较对照组（39．83％）上升,而G0／G1期细胞比率（33．54％）较对照组（46．04％）下降。结论：蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制Raji细胞的增殖并诱导其发生凋亡和G2／M期阻滞。     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用

目的：藤黄酸能抑制包括乳腺癌、肝癌、血液系肿瘤以及乳腺癌在内的多种肿瘤细胞的生长,但是目前对于藤黄酸在泌尿系肿瘤作用的报道尚少。文中旨在研究藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用可能的机制。方法实验分为4组,藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组及阴性对照组（加入等渗盐水）。体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87,将不同浓度藤黄酸加入处于对数生长期的人膀胱癌BIU-87细胞共培养,免疫组化法检测瘤组织Caspase-3蛋白的表达,使用流式细胞仪检测分析藤黄酸诱导人膀胱癌细胞的凋亡作用和细胞周期变化。结果藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组免疫组化评分分别为（4．28±1．86、5．03±0．78和6．47±1．31）,较对照组（2．13±1．27）明显升高,差异均有统计学意义（ P＜0．05）。流式细胞术结果显示：细胞周期 G0／G1期细胞逐渐减少,G2／M 期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显。结论藤黄酸可通过增加 Caspase-3蛋白的表达来促进膀胱癌细胞凋亡,可阻滞膀胱肿瘤细胞周期,抑制膀胱肿瘤细胞的增殖。     

多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制作用

目的研究多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的作用。方法将0．1μmol／L的多西紫杉醇分别作用于Tca8113细胞12、24、48h,分别用倒置显微镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞凋亡状况;将浓度为0．001、0．01、0．1、1、10μmol／L的多西紫杉醇分别作用于Tea8113细胞12、24、48h后,用MTT法检测细胞增殖状况。结果多西紫杉醇对Tea8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且浓度在0．001、0．01、0．1、1、10μmol／L时呈时间和浓度依赖性;镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞术检测：多西紫杉醇浓度为0．1μmol／L时,作用12、24、48h,凋亡率增加,细胞阻滞于G2／M期。结论多西紫杉醇对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与抗癌机制有关。     

LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用

目的探讨P13K／Akt信号转导通路特异性阻滞剂LY294002在体外对人乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7／ADR各自分为未加LY294002的对照组及加入不同浓度的LY294002组,MTF法观察各组药物的细胞毒作用。选用流式细胞术（FCM）检查细胞凋亡率、细胞分布周期的变化。结果①LY294002在浓度10umol／L以下时对两种细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对MCF-7和耐药细胞MCF-7／ADR的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．14±0．02）μmol／L和（15．74±0．08）μmol／L,耐药倍数为112倍。③LY294002能够增强阿霉素对MCF-7／ADM的细胞毒作用,LY294002浓度0．1、2．5、5．0、10μmol／L分别作用于MCF-7／ADM细胞48h后,耐药细胞株的IC50分别降至（13．53±0．10）μmol／L、（10．24±0．08）μmol／L、（5．53±0．16）μmol／L、（2．29±0．12）μmol／L,差异有统计学意义（P〈0．01）。④LY294002可显著增加MCF-7／ADR细胞凋亡率（P〈0．01）。细胞周期分布显示,加用LY294002对各个细胞周期影响不明显。结论LY294002能够增加MCF-7和MCF-7／ADR的化疗敏感性,部分逆转耐药细胞MCF-7／ADR的多药耐药性。     

罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞损伤的干预作用

目的观察PPAR-γ激动剂罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞（HPMC）增殖、损伤作用的影响。方法①细胞培养及分组：待生长状况良好的HPMC株60％-80％细胞贴壁后,无血清培养基同步24h,采用15μmol／L罗格列酮预处理细胞4h后,给予600μmol／L尿酸不同作用时间（24h、48h、72h）进行干预。②指标检测：采用细胞活性检测法检测HPMC增殖情况;采用乳酸脱氢酶测定试剂盒,检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果①600μmol／L尿酸作用HPMC24h、48h、72h后,抑制HPMC增殖;与对照组比较,抑制增殖作用明显（P〈0．05）,差异有统计学意义;罗格列酮干预后,各不同时间点,尿酸对HPMC抑制作用减弱。②600μmol／L尿酸作用HPMC24h、48h、72h后,HPMC培养液中LDH水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;罗格列酮干预后,各不同时间点,HPMC培养液中LDH水平降低（P〈0．05）。结论罗格列酮能够降低尿酸对HPMC增殖抑制、损伤作用。     

奥美拉唑诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

【目的】探讨质子泵抑制剂奥美拉唑体外对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。【方法】0、100、200、300μmol／L奥美拉唑分别作用于体外培养的HeLa细胞,荧光显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因caspase-3和bcl-2的mRNA表达。【结果】HeLa细胞经奥美拉唑作用24h后,均可见染色质凝集;MTT法检测示各组24h增殖抑制率为（2．19±0．24）％、（16．70±1．61）％、（27．50±1．37）％和（31．20±2．04）％,48h增殖抑制率为（2．38±0．76）％、（16．80±3．00）％、（40．50±2．64）％和（45．80±2．18）％。增殖抑制率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;各组流式细胞仪检测24h凋亡率为（3．99±0．75）％、（11．50±2．61）％、（25．70±3．1）％和（37．3±2．67）％;200μmol／L组48h凋亡率为（45±2．15）％,72h为（62．4±2．89）％。细胞凋亡率随奥美拉唑浓度和作用时间增加而增加（P〈0．05）;RT-PCR结果示casepase-3基因表达随奥美拉唑浓度增加而增加,bcl-2基因表达随奥美拉唑浓度增加而降低。【结论】奥美拉唑通过上调casepase-3和下调bcl-2基因的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。     

安罗替尼对宫颈癌细胞增殖和迁移与侵袭的影响及作用机制

目的 研究安罗替尼对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 取对数生长期宫颈癌SiHa细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验根据半数抑制浓度（IC50）确定安罗替尼实验浓度,将SiHa细胞分为对照组（0μmol/L）、低浓度组（5μmol/L）、中浓度组（10μmol/L）、高浓度组（20μmol/L）。以平板克隆实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测安罗替尼对SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。以Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、上皮钙黏附素（E-cadherin）、无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)和β-连环蛋白（β-catenin）的表达水平。结果 CCK-8实验显示安罗替尼能够剂量依赖性抑制SiHa细胞的增殖,作用24、48和72 h的IC50分别为（26.96±2.25）、（13.59±1.13）和（9.27±0.75）μmol/L。平板克隆实验显示,处理SiHa细胞48 h后,对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞克隆形成率分别为（62.05±7.88）%、（39.96±5.1...     

双氢青蒿素对人宫颈癌细胞Hela生物学特性的影响

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人宫颈癌细胞Hela细胞周期、增殖、凋亡和侵袭的影响及机制.方法 以Hela细胞为研究对象,根据DHA的不同浓度,分组:空白对照组(等体积生理盐水)、低浓度DHA组(50μmol/L)及高浓度DHA组(400μmol/L).RT-PCR、Wester...     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制.方法 用不同浓度槲皮素(空白对照、20、40、80 μmol/L),顺铂(空白对照、5、10、15、20 μg/mL)以及两者联合(槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL)分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92 ±3.953)%(20 μmol/L组)、(66.54 ±3.932)%(40 μmol/L组)和(52.21 ±2.970)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(98.35 ±1.230)%;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为(65.19 ±7.071)%(20 μmol/L组)、(47.04 ±8.881)%(40 μmol/L组)和(29.71 ±6.505)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(96.97 ±1.788)%.;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ± 3.182)%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ±3.182)%(P<0.05).细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G0/G1期数量,减少S期数量.Western blot 结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达.结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡.     

PI-103对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制研究

目的观察PI-103在体外对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法应用MTT法检测不同浓度PI-103对A375细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞迁移能力和侵袭能力的影响,Western Blot法测定细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达。结果 0.1、0.2μmol/L PI-103对A375细胞增殖的抑制作用不明显（P〉0.05）;在浓度高于0.4μmol/L时,PI-103能够明显抑制A375细胞的增殖（P〈0.05）。0.1μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为（91.73±13.80）、（63.67±8.54）,与对照组比较明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;0.2μmol/L PI-103作用后,迁移实验和运动实验穿膜细胞数分别为（64.07±9.22）、（34.80±7.89）,与对照组比较明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。0.1、0.2μmol/L PI-103作用后,A375细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 PI-103可通过下调MMP-2、MMP-9的表达抑制A375细胞迁移和侵袭,为其应用于抗恶性黑素瘤转移治疗提供了实验依据。     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的：研究穿心莲内酯（Andro）对肾细胞癌（RCC）786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法：取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（5、10、20、40和80 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（0.50、1.25和2.50 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（10、20和40 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,10、20、40和80 μmol·L^-1 Andro组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,0.50和1.25 μmol·L^-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,10、20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.01）,20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较,40 μmol·L^-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高（P<0.01）,Caspase-8表达水平明显降低（P<0.05）,Caspase-8剪切体表达水平明显升高（P<0.01）。结论：Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。     

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 用不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果 硝呋齐特0、1.25、2.5 μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均未受到明显抑制（ P>0.05）;硝呋齐特5、10、20 μmol/L处理BCPAP细胞,10、20 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均受到明显抑制（ P<0.05）,且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5 μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72 h和48 h起效（ P<0.05）。暴露于10 μmol/L硝呋齐特10 d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理48 h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48 h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加（ P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（ P<0.05）;促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达减少（ P<0.05）,MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2表达增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48 h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降（ P<0.05）。结论 硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。     

和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组,实验组分别加入20、40、60 μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测 不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响;划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力;Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率;Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK（0、20、40、60 μmol/L）处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱;且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高,凋亡率分别为（6.53±1.80）%、（15.24±2.06）%、（35.03±2.42）%、（48.13±4.61）%,细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加（P<0.01）。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移,同时还能诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。     

普伐他汀和CRP对ADP诱导的血小板凝血酶受体 PAR-1表达的调节

目的：探讨普伐他汀对二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板PAR‐1表达的影响及机制。方法体外分离富血小板血浆,分别给予C反应蛋白（CRP）、普伐他汀干预和ADP刺激进行体外研究。试验分组分别为：对照组,单纯ADP组,低浓度普代他汀＋ADP组,高浓度普伐他汀组＋ADP组,CRP组,普伐他汀＋CRP联合组。采用流式细技术检测PAR‐1和LOX‐1平均荧光强度（M FI）。采用酶联免疫试验检测TXB2和F1＋2水平。结果5μmol／L ADP刺激能促使血小板PAR‐1表达增加35％。50μg／mL CRP显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。1μmol／L、10μmol／L普伐他汀均显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。联合应用CRP和普伐他汀更能降低ADP诱导的血小板PAR‐1表达,较单独使用CRP或普伐他汀降低更显著（P＜0．05）。单纯ADP刺激后TXB2较基础时明显增高（P＜0．01）,50μg／mL CRP、10μmol／L普伐他汀干预后ADP刺激的TXB2分别下降为（112．68±24．48）pg／mL、（146．48±46．54）pg／mL ,与单纯ADP刺激比较,差异均有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP显著增加ADP诱导的F1＋2水平（P＜0．01）,10μmol／L普伐他汀对ADP诱导F1＋2的生成无明显影响。普伐他汀呈浓度依赖性的方式降低ADP诱导的血小板LOX‐1表达（1μmol／L和10μmol／L普伐他汀处理后M FI分别为：1．80±0．19和1．62±0．16）,与单纯ADP刺激后LOX‐1表达（MFI：3．16±0．23）比较,差异有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP对ADP刺激的血小板LOX‐1表达无明显影响。结论 PAR‐1在ADP诱导的血小板活化中起重要作用,普伐他汀和CRP通过不同机制明显降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达,提示在炎症状态下他汀仍能起着重要的抗血栓作用。     

甲基化调控microRNA表达影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究

目的 研究基因启动子区甲基化对胰腺癌相关microRNA（miR34a、miR34b、miR148a、miR203a）表达水平的调控,及其对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 通过5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)去甲基化处理胰腺癌细胞MIAPaca-2,使用甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)法检测60 μmol/L 5-Aza-CdR处理组及0 μmol/L对照组 MIAPaca-2细胞目标microRNA启动子甲基化水平的变化;用荧光实时定量PCR检测处理组及对照组目标microRNA表达水平的改变;CCK-8法、划痕实验以及Transwell法检测胰腺癌细胞去甲基化处理后处理组和对照组增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 MSP法结果显示处理组较未处理组目标microRNA甲基化M条带灰度值减弱,非甲基化U条带灰度值增强,处理组目标microRNA启动子甲基化程度较对照组减弱。荧光实时定量PCR结果显示处理组较未处理组目标microRNA相对表达量升高（ P<0.05）,处理组microRNA的表达水平随去甲基化处理而升高。CCK-8法显示随着药物处理浓度的增加,处理组细胞抑制率增高,去甲基化处理抑制了胰腺癌细胞的增殖能力。划痕实验结果显示处理组较未处理组细胞伤口愈合率降低（ P<0.01）,去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的迁移能力。Transwell法结果显示处理组较未处理组穿膜细胞数减少（ P<0.01）, 去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的侵袭能力。结论 肿瘤细胞去甲基化处理,导致4种目标microRNA高表达,抑制了胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

DADS上调miR-200b抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭

目的 探索miR-200b和二烯丙基二硫(DADS)相关的抑瘤机制,为揭示DADS抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的内在分子机制提供理论依据.方法 采用qRT-PCR分别检测不同浓度的DADS对Y79细胞miR-200b表达的影响,DADS分别设置六种浓度:0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L和400 μmol/L.MTT和Transwell侵袭实验分别检测DADS和miR-200b对Y79细胞生长及侵袭能力的影响,将实验设置成五个组,即miRNA阴性对照组(瞬时转染scramble 40μmol/L);miR-200b组(瞬时转染miR-200b-mimics 40μmol/L);DADS阴性对照组(DMSO 10μmol/L,即mock组);DADS组(DADS 200μmol/L)和DADS+miR-200b组(瞬时共转染miR-200b-mimics 40μmol/L)和DADS (200μmol/L).结果 DADS可上调Y79细胞中miR-200b的表达,且其呈剂量依赖性(P<0.05);在MTT实验中,miR-200b组的OD值(0.549±0.057)较miRNA阴性对照组(0.737±0.135)明显降低;DADS组的OD值(0.508±0.064)较DADS阴性对照组(0.722±0.145)明显降低;而DADS+miR-200b组的OD值(0.362±0.081)较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组降低最为显著(P<0.05),即DADS可以通过上调miR-200b抑制Y79细胞的增殖能力.在Transwell侵袭实验中,外源性的高表达miR-200b组(105±13)较miRNA阴性对照组(162±12)能够显著抑制Y79细胞的穿膜细胞数,DADS组(102±13)较DADS阴性对照组(154±8)能够显著降低Y79的穿膜细胞数,且DADS+miR-200b组(77±8),细胞穿膜细胞数较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组减少最显著(P<0.05),即DADS通过上调miR-200b抑制Y79细胞侵袭.结论 DADS通过上调miR-200b的表达抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长及侵袭.