gyrA和parC介导的淋病奈瑟菌对环丙沙星耐药机制研究

目的探讨淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药机制。方法采用K-B纸片法检测27株淋病奈瑟菌的耐药率,PCR扩增gyrA和parC基因,测序分析DNA序列。结果27株淋病奈瑟菌对青霉素、四环素以及环丙沙星的耐药率均为100%,而大观霉素和头孢曲松100%敏感;DNA序列分析表明:环丙沙星耐药株均存在gyrA和parC基因的突变,其中gyrA基因的突变位点发生在第91位、95位氨基酸,parC基因的突变发生在第86位、87位、88位和91位氨基酸。结论淋病奈瑟菌的耐药与gyrA和parC基因突变有关。     

淋病奈瑟菌gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区突变与环丙沙星耐药相关性研究

目的分析宁波地区淋病奈瑟菌临床菌株gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变类型及与喹诺酮类药物耐药的相关性。方法采用琼脂稀释法检测137株淋病奈瑟菌临床菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),PCR法扩增50株环丙沙星耐药的淋病奈瑟菌临床菌株gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区,并进行测序分析。结果 137株淋病奈瑟菌临床菌株对大观霉素、头孢曲松、四环素、青霉素、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为0、0、75.2%、76.6%、97.1%和100%。50株临床菌株测序发现,gyrA基因存在3种核苷酸序列发生错义突变,其中S91F突变发生在所有检测菌株,49株D95位发生突变;parC基因突变位点较多且相对比较分散,其中28株parC基因85、86、87、88和91位发生单位点突变,9株parC基因发生双重突变。结论青霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星已不能作为治疗淋病的常规用药,大观霉素和头孢曲松仍可推荐用药。gyrA和parC基因突变在淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物耐药中起重要作用。     

淋球菌对氟喹诺酮类药物敏感性及其耐药机制的研究

目的 了解长沙地区淋球菌流行株对氟喹诺酮类药物的耐药现状,探讨淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药的分子机制.方法 纸片扩散法检测126株淋球菌对4种氟喹诺酮类药物的敏感性.E-test法定量检测其中63株淋球菌环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC).对淋球菌喹诺酮类药物作用靶位编码基因gyrA和parC的喹诺酮耐药决定区(QRDR)进行PCR扩增和直接测序分析.结果 淋球菌对氧氟沙星、氟罗沙星、洛美沙星、依诺沙星耐药率分别为70.6%、81.7%、72.2%和82.5%.环丙沙星MIC为0.004～12.0μg/mL,耐药率65.1%.对环丙沙星敏感的菌株gyrA和parC基因均未发生突变,而中介或耐药菌株均出现gyrA突变或同时伴有parC 突变,且所有parC突变均发生在gyrA突变基础上.突变位点包括gyrA上Set91→Tyr,Set91→Phe,Asp95→Gly,Asp95→Ala,Asp95→Ash以及parC上Gly85→Cys、Asp86→Asn、Set87→,Arg、Ser87→Ile、Ser87→Asn、Ser88→Pro、Glu91→Lvs、Glu91→Gly.其中以gyrA Ser91→Phe频率最高.结论 长沙地区淋球菌流行株对氟喹诺酮类药物耐药已十分严重.淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药与gyrA和parC基因突变密切相关;GyrA Ser91→Phe是形成该耐药性的关键突变.多位点突变具有协同作用,可使耐药性进一步增强.     

耐药鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因研究

目的 了解耐药不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因的存在状况.方法 GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应（PCR）检测靶位DNA回旋酶编码基因（gyrA）与拓扑异构酶Ⅳ编码基因（parC）之氟喹诺酮耐药决定区突变分析,以及可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因[qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰb-cr].结果 20株不动杆菌对12种常用抗菌药物严重耐药,对左氧氟沙星耐药率85％,亚胺培南90％,美洛培南耐药率达到95％.19株耐药鲍曼不动杆菌均检出gyrA基因氟喹诺酮耐药决定区（QRDR）第83位密码子TCA→TTA有义突变（氨基酸序列Ser→ Leu）;20株不动杆菌中,parC基因均检出存在QRDR区第80位密码子TCG→TTG有义突变（氨基酸序列Ser→Leu）;没有检出耐药鲍曼不动杆菌可移动遗传元件可介导的氟喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰ b-or.结论 鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类药物的耐药机制主要与gyrA和parC基因QRDR区突变相关.     

淋病奈瑟菌对环丙沙星耐药性的基因研究

目的 探讨临汾地区淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药性及其与gyrA基因喹诺酮类耐药决定区(QRDR)之间的关系.方法 采集33例淋球菌感染标本,通过药敏试验筛选出对环丙沙星耐药菌株,设计对应于淋球菌gyrA上QRDR区基因片段的引物,经过聚合酶链式反应(PCR)扩增其目的 基因片段,并对扩增产物进行DNA序列测定.结果 33株淋病奈瑟菌临床分离株对环丙沙星全部耐药;所有耐药菌株均经PCR扩增出大小为225 bp(对应于QRDR)的基因片段;测序结果显示耐药菌株都发生了91位点突变(Ser-91→Phe),其中单独91位点突变的有3株,发生91和95双位点突变的有30株,95位点突变类型有三种:Asp-95→Gly, Asp-95→Asn, Asp-95→Ala,以Asp-95→Gly最为常见,有19株,占gyrA 95位点突变株的63.3%.结论 临汾地区淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药情况很严重;gyrA基因突变在淋病奈瑟菌对环丙沙星耐药中起着重要作用. Abstract： Objective To investigate the occurrence of ciprofloxacin(cip)-resistance among Neisseria gonorrhoeae strains in Linfen region in 2006 and determine the frequency and patterns of mutations in gyrA gene in the ciprofloxacin resistance isolates. Methods A total of 33 gonococcal isolates were collected in Linfen region for Neisseria gonorrhoeae. In vitro, susceptibility tests of ciprofloxacin were performed in 33 isolates, gyrA gene were amplified by polymerase chain reaction(PCR)assay and the PCR products were directly sequenced in order to see if there were mutations in gyrA gene. Results The 33 clinical isolates demonstrated 100% resistance to ciprofloxacin. The gyrA gene containing quinolone resistance-determining region (QRDR)were amplified by PCR in all clinical isolates. The mutations had amino acid substitutions of Ser to Phe at codon 91(33 strains),and Asp to Gly,Asn,Ala at codon 95 of gyrA respectively. The most common gyrA alteration at codon 95, Asp-95 to Gly was found in 19 strains (63.3 %). Conclusions The resistant strains of Neisseria gonorrhoeae to ciprofloxacin in Linfen region are serious. The results from this study suggested that mutations in gyrA gene play an important role in the development of fluoroquinolone resistance of Neisseria gonorrhoeae.     

淋球菌43株对环丙沙星的耐药性及gyrA和parC基因突变的检测

目的:确定延安地区2002年分离的淋球菌对环丙沙星的耐药率和耐药菌株gyrA及parC基因突变情况.方法:从临床分离43株淋球菌,进行药敏试验.PCR扩增gyrA和parC基因,产物直接测序.结果: 43株淋球菌菌株中,耐药株为37株,耐药率为86%.耐药菌株gyrA基因的突变形式是Ser-91→Phe和 Asp-95→Gly.parC基因最多见的突变是Asp-86→Asn和Ser-87→Arg,另外还检测到了Glu-91→Gly 和Arg-116→Leu.gyrA 突变见于所有的敏感性下降株和耐药株,parC突变见于耐药株,但有一株MIC为0.5 μg/mL的菌株也存在parC突变.结论:延安地区淋球菌gyrA和parC基因突变是形成淋球菌耐环丙沙星的主要原因.     

570株铜绿假单胞菌对11种抗菌药物的敏感性及其耐氟喹诺酮机制

目的　了解铜绿假单胞菌的耐药性及其耐氟喹诺酮的机制。方法　Kirby Bauer琼脂扩散法测定 5 70株铜绿假单胞菌对 11种抗菌药物的敏感性 ,琼脂稀释法测定其中 111株对两种氟喹诺酮的最低抑菌浓度 (MIC)。直接序列分析和聚合酶链反应 限制性长度多态性 (PCR RFLP)分析环丙沙星耐药菌株gyrA和parC基因突变。结果　 5 70株铜绿假单胞菌对头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星和头孢他啶的敏感性较高 ,其耐药率分别为 10 9%、11 1%、11 8%、12 5 %。环丙沙星、头孢哌酮 /舒巴坦和哌拉西林的耐药率分别为 2 9 2 %、2 3 5 %和 33 7%。耐环丙沙星和ICU临床分离的菌株对所测试的抗菌药物的耐药率均较高 ,6 0 %以上为多重耐药 (MDR)菌株。 80株耐环丙沙星菌株中 6 6株( 75 % )出现gyrA基因Thr83(ACC)→Ile(ATC)突变 ,5 2株 ( 6 5 % )发生parC基因Ser87(TCG)→Leu(TTG)突变 ,同时存在上述两种突变的有 5 2株 ( 6 5 % ) ,而 31株环丙沙星敏感菌中未发现上述突变。gyrA和parC双基因突变对环丙沙星的MIC显著高于单独gyrA基因突变株和不存在上述突变的菌株 ,P <0 0 5。结论　铜绿假单胞菌的耐药性日趋严重 ,特别是耐环丙沙星和ICU分离株对多种抗菌药物耐药 ;氟喹诺酮类药物作用靶位gyrA和parC的基因突变是临床分离铜绿假单     

餐饮从业人员耐喹诺酮类药物大肠埃希菌基因突变研究

目的调查和分析餐饮从业人员体检人群分离的大肠埃希菌gyrA、gyrB、parC、parE基因的突变特征。方法用加入4μg/mL环丙沙星营养琼脂平板筛选耐环丙沙星大肠埃希菌耐药菌株,PCR方法扩增其gyrA、gyrB、parC、parE基因,琼脂稀释法测定环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC)值。结果共分离到112株环丙沙星耐药大肠埃希菌,所有菌株的MIC值都介于16～512μg/mL之间。gyrA检测到3种突变类型:112株都出现Ser83→Leu替代,103株发生Asp87→Asn替代,7株菌出现Asp87→Tyr替代。gyrB检测到2种突变类型:6株菌出现Ser343→Phe替代,9株菌出现Ser492→Asn替代。parC共检测到7种突变类型:112株菌都发生Ser80→Ile代替,12株大肠埃希菌发生Glu84→Val代替,5株菌发生了Ala56→Thr替代,各有1株菌发生Glu84→Gly和Glu84→Lys代替,另外各有1株发生Ala108→Thr和Val144→Gly替代。parE基因共检测到2种突变类型:有2株菌发生了Leu445→His代替,49株菌发生Ser458→Ala代替。其中gyrA Ser83→Leu、Asp87→Asn、Asp87→Tyr替代和parC Ser80→Ile、Glu84→Val、Glu84→Gly、Glu84→Lys代替,为gyrA和parC喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变引起的氨基酸替代类型。所有菌株都有2个及以上氨基酸位点的突变,都是高耐药菌株。环丙沙星的MIC值32μg/mL以上的耐药菌株都发生了3个以上位点的突变。Spearman相关系数显示,gyrB492、parE458的突变与环丙沙星的MIC值成正相关,差异有统计学意义(r=0.226 9,P=0.016 1;r=0.273 7,P=0.003 5)。结论餐饮从业人员耐喹诺酮药物的大肠杆菌gyrA、gyrB、parC、parE基因具有多种氨基酸替代类型,gyrB492、parE458的突变与环丙沙星的MIC值呈正相关。     

多重耐药淋病奈瑟菌耐药基因研究

目的:探讨淋病奈瑟菌多重耐药表型与耐药基因型之间的关系。方法:应用K-B法检测临床分离到的40株淋病奈瑟菌对8种常用抗生素的敏感性。用煮沸法提取细菌的DNA,用PCR法检测随机抽取其中20株分离株的TEM、tetM、ermF和mefA基因。结果:淋病奈瑟菌的多重耐药现象明显,对氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均高达92.5%;TEM、tetM基因的检出率均为75.0%,ermF和mefA基因未检出;本组菌株对青霉素的耐药表型与TEM基因密切相关(Kappa=0.733,P<0.01)。结论:淋病奈瑟菌的多重耐药表型与耐药基因之间密切相关。     

Study of isolation of fluoroquinolone-resistant Ureaplasma urealyticum and identification of mutant sites

目的：研究Uu临床株对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法：从184个临床Uu株中筛选出13株对6种氟喹诺酮类药物呈不同程度耐药的菌株,PCR扩增其gyrA,gyrB,parC和parE基因的QRDR区。产物测序后和标准敏感株进行序列比较。结果：序列比较结果表明gyrA QRDR第87位核苷酸C到A的突变导致GyrA第95位天冬氨酸被谷氨酸替代,parC QRDR的第50位核苷酸C到T的突变导致ParC第80位丝氨酸被亮氨酸所替代。结论：这些结果表明gyrA QRDR第87位核苷酸C到A的突变与parC QRDR的第50位核苷酸C到T的突变和Uu对氟喹诺酮类药物的耐药相关。     

gyrA和 parC基因突变与解脲支原体喹诺酮类药物耐药相关性研究

目的探讨解脲支原体gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变与喹诺酮类药物耐药的相关性。方法用支原体培养、鉴定和药敏一体化试剂盒分离获得42株解脲支原体并检测对3种喹诺酮类药物的耐药性,同时PCR法扩增临床分离株的gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区并进行测序分析。结果对3种喹诺酮均敏感1株,41株至少对1种药物呈现不同程度耐药。gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区测序发现上述敏感株和1株耐药株不发生突变,其余40株耐药株gyrA和parC基因发生D112E和(或)S83L突变。结论 3种喹诺酮类药物耐药均较严重,已不适合作为临床推荐用药,解脲支原体gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区突变与耐药密切相关。     

淋病奈瑟菌耐药性与耐药基因的研究进展

随着抗生素的广泛使用,淋病奈瑟菌对常用的抗生素产生了不同程度的耐药。现综述近年淋病奈瑟菌的耐药性及耐药基因的研究进展,包括:改变PBPs的胞内作用靶位,导致对青霉素类抗生素的耐药,gyrA基因、parC基因和norm基因的突变,导致对氟喹诺酮类抗生素的耐药,药物外排机制引起多重抗生素的通透性降低,teM-1基因和tetM基因编码的胞质蛋白抑制了四环素类药物对细菌的毒性作用,阿奇霉素和大观霉素耐药与作用靶位的改变等。     

解脲脲原体喹诺酮类药物耐药机制的研究

目的研究解脲脲原体喹诺酮类药物耐药机制。方法用支原体培养、鉴定和药敏试剂盒分离获得77株解脲脲原体并检测对3种喹诺酮类药物的耐药性,同时PCR法扩增临床分离株的gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区并进行测序分析。结果对3种喹诺酮均敏感3株,74株至少对1种药物呈现不同程度耐药。gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区测序发现上述敏感株和2株耐药株不发生突变,其余72株耐药株gyrA和parC发生D112E和／或$83L突变。结论解脲脲原体gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区突变与耐药密切相关。     

临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌gyrA基因突变的研究

目的：检测临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌DNA促旋酶gyrA基因突变情况。方法：收集临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌30株及敏感株10株，测定其对萘啶酸、环丙沙星、氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)；用聚合酶链反应(PCR)扩增gyrA基因部分片断，对PCR产物进行限制性片断长度多态性(PCR—RFLP)及单链构象多态性(PCR—SSCP)分析，检测gyrA突变情况。结果：30株耐喹诺酮菌株都检测到gyrA基因突变，PCR—RFLP均显示两条不同于敏感株的电泳带，其PCR—SSCP则检测到4种不同于敏感菌的迁徙率条带；而10株敏感菌均未检测到gyrA基因突变。结论：阴沟肠杆菌对喹诺酮类药物耐药性与gyrA基因突变有关，gyrA基因第83位氨基酸密码子突变可能为其耐药的主要原因。     

对喹诺酮类药物耐药的志贺菌gyrA基因突变的研究

目的研究福氏志贺菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法对38株耐药的福氏志贺菌gyrA基因的N末端编码区进行PCR扩增后,用SSCP方法检测突变,然后测序。结果福氏志贺菌gyrA基因PCR-SSCP显示有8株突变,测序结果揭示存在2个导致氨基酸改变的基因点突变:83位TCG(Ser)→TTG(Leu)突变和87位GAC(Asp)→GGC(Gly)突变。结论gyrA基因点突变与福氏志贺菌对喹诺酮类药物的高水平耐药有密切关系。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药性探讨

目的探讨铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药性情况。方法采集2014年1月~2015年2月于德清县第三人民医院住院的3000例患者痰液、脓汁标本,按常规方法分离铜绿假单胞菌,从中选择30株铜绿假单胞菌喹诺酮耐药菌株进行试验。选择铜绿假单胞菌野生型标准株作为对照。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)进行gyrA、gyrB、parC和parE基因QRDR氨基酸变化结果分析。结果 30株铜绿假单胞菌喹诺酮耐药菌株中有3株没有发生Ⅱ类拓朴异构酶基因突变,其余均发生基因突变,突变率达到90%。基因突变主要集中在gyrA编码的83位密码子、parC的80位密码子。结论探讨铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变特点,对突变株进行药物敏感试验,可以为临床合理用药提供可靠的理论依据。     

对喹诺酮类药物耐药的志贺菌gyrA基因突变的研究

目的 研究福氏志贺菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法 对38株耐药的福氏志贺菌gyrA基因的N末端编码区进行PCR扩增后,用SSCP方法检测突变,然后测序。结果 福氏志贺菌gyrA基因PCR－SSCP显示有8株突变,测序结果揭示存在2个导致氨基酸改变的基因点突变：83位TCG（Ser)→TTG（Leu)突变和87位GAC（Asp)→GGC（Gly)突变。结论 gyrA基因点突变与福氏志贺菌对喹诺酮类药物的高水平耐药有密切关系。     

小肠结肠炎耶尔森菌O:3血清型喹诺酮耐药的分子机制研究

目的 研究中国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌菌株的耐药特征,为小肠结肠炎耶尔森菌感染的预防控制工作提供依据.方法 自2002年至2007年,选择几个省市在不同季节对腹泻人群进行了该病原菌的分离,并对分离到的菌株进行血清学分型、生物学分型、药敏试验以及gyrA和parC基因突变检测.结果 通过对该菌喹诺酮耐药决定区gyrA和parC基因的变异情况检测发现,在22株萘啶酸耐药的菌株中,有20株gyrA基因检出氨基酸变异,其中83位点共检出Ser(AGC)→Arg(AGA或AGG)突变12株,Ⅱe(ATC)突变3株,Cys(TGC)1株,87位点检出Gly(GGC)突变2株,Tyr(TAC)和Asn(AAC)突变各1株;3株萘啶酸敏感O:3血清型小肠结肠炎耳耶尔森菌未检出上述氨基酸位点突变,而parC基因无论耐药株或敏感株均未检出突变.结论 我国小肠结肠炎耶尔森菌对萘啶酸的耐药比较严重,这可能是因为氟喹讲酮类抗生素是临床最常用药物之一,而高水平用药,用药时间过长,以及动物饲料中抗生素的使用可能是小肠结肠炎耶尔森菌对喹诺酮类抗生素耐药的根本原因.氟喹诺酮的过度应用使萘啶酸耐药株选择性形成.     

深圳市急性感染性腹泻病人来源沙门菌监测情况

目的了解深圳地区沙门菌的感染率、血清学分布和耐药性特征,为制定防控措施提供依据。方法选择3家哨点医院(北京大学深圳医院、深圳市儿童医院、中山大学附属第八医院),对2016-2018年肠道门诊急性腹泻患者粪便标本分离的沙门菌进行血清分型、抗生素敏感性试验和耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE的检测。结果从2 842例腹泻患者的粪便标本中分离出187株(6.6%)沙门菌,共鉴定出25种血清型,其中鼠伤寒沙门菌的分离率最高(3.5%),其次为肠炎沙门菌(1.3%)、4,5,12:i:-(0.3%)。沙门菌对氨苄西林、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、萘啶酸的耐药率较高,分别为81.0%、36.0%、31.0%。肠炎沙门菌和4,5,12:i:-分别对萘啶酸和氨苄西林全部耐药;鼠伤寒沙门菌和4,5,12:i:-对头孢菌素类、环丙沙星、左氧氟沙星和磺胺甲恶唑/甲氧苄啶耐药率较高。所有环丙沙星/左氧氟沙星耐药菌株的gyrA基因均发现突变,而gyrB、parC、parE基因均未发生突变。结论鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是深圳地区流行的最常见血清型,鼠伤寒沙门菌对抗生素的耐药率较高。氟喹诺酮耐药可能与gyrA基因突变有关,建议临床合理使用抗生素,并对本地区沙门菌的流行状况进行持续监测。     

耐喹诺酮类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的 探讨广州地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制.方法 对喹诺酮耐药株的gyrA和parC基因进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),并对其中的高水平耐药株gyrB和parE基因进行测序;用琼脂稀释法测定加入碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)前后环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC);同时用SDS-PAGE对高水平耐药株的外膜蛋白进行电泳分析.结果 有 72.7%(72/99)的菌株发生gyrA突变,主要为,Thr-83-Ile;25.3%(25/99)的菌株发生parC突变,主要为Ser-87-Leu,且均是gyrA和parC双基因突变;gyrB和parE突变较少见.53.3%(53/99)的菌株的MIC可被CCCP逆转,其MIC能明显降低;7%(7/10)的高水平耐药株的外膜蛋白在43～67kDa间条带增多,其蛋白含量有差异.结论 抗菌药物作用靶位的改变和外排泵机制是本地区铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药的重要机制.