当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的:研究当归补血汤对高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及其乙酰肝素酶(HPA)表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义.方法:①利用透射电镜观察各组中GMC的增殖情况;②采用免疫组织化学方法检测各组肾小球中HPA的表达.结果:高糖能明显促进肾小球GMC增殖,也相应的增加系膜细胞中HPA表达(P＜0.05...     

当归补血汤含药血清对高糖条件下肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察当归补血汤含药血清对高糖条件下肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法动态观察各种处理因素的作用下GMC增殖情况。结果高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,而当归补血汤能明显抑制GMC增殖,并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖也相应增加或减少。结论高糖可促进GMC增殖,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,从而发挥预防和延缓DN发展的积极作用。     

当归补血汤对内皮细胞增殖和粘附分子表达的影响

目的　了解当归补血汤对内皮细胞增殖及分泌粘附分子 (ICAM- 1)的影响 ,探讨当归补血汤对造血调控的机理。方法　建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型 ,将 HU VEC与当归补血汤不同剂量 (0、4、40、40 0和40 0 0 μg/ m l)一起培养 ,以流式细胞分析术测定内皮细胞增殖周期 ,同时对粘附分子进行测定。结果　当归补血汤能够促进内皮细胞分泌粘附分子 ,对照组 CD5 4(ICAM- 1)仅有少量表达 ,而实验组 CD5 4(ICAM- 1)表达明显较对照组增多 (P<0 .0 5 )。细胞周期分析结果表明 ,实验组与对照组相比 ,有更多的细胞处于 S期 (P<0 .0 5 )。提示当归补血汤能够促进细胞由静止期进入增殖期。结论　当归补血汤能够促进内皮细胞的增殖以及细胞粘附分子的表达。     

风心病血清中细胞外基质变化及临床意义

目的：检测风心病患血清中LN，HA含量的变化及其心肌组织中FN，LN的表达量，探讨检测血清标志物对判断心肌间质病变程度的价值．方法：用放射免疫法检测患血清中LN，HA含量，用免疫组化法检测患心肌中LN，FN表达量，将结果进行对比分析．结果：风心病患血清中LN，HA含量较正常对照组明显升高，其含量与心肌中LN，FN表达量呈正相关(r分别为0．718，0．507，P＜0．001)．结论：检测风心病患血清中LN，HA含量的变化，可间接反应心肌间质病变程度．     

当归补血汤对大鼠糖尿病足iNOS mRNA表达的影响

目的:探讨当归补血汤对糖尿病大鼠足部病变的保护作用及其机制。方法:SD雄性大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)并结合室温控制以建立糖尿病足模型,给予当归补血汤或西洛他唑治疗。实验第3周末时,观察各组肢端坏疽并测定血糖情况。腹主动脉取血,测定血甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、C反应蛋白(CRP)、C肽(CP)、糖化血红蛋白(GHb)。应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR),观察各组大鼠小腿腓肠肌iNOSmRNA的表达情况。结果:STZ诱导的糖尿病大鼠存在明显的血糖、血脂及CRP、CP、GHb异常(P<0.01或<0.05),且出现不同程度的肢端坏疽。当归补血汤可以降低上述指标,减轻肢端坏疽(P<0.01或<0.05),而西洛他唑只改善了CRP和CP(P<0.01)。经给药处理3周后,当归补血汤组及西洛他唑组大鼠足部iNOSmRNA均有不同程度的下调(P<0.01)。结论:当归补血汤可改善血糖、血脂代谢紊乱,降低异常升高的GHb、CP、CRP水平,减轻肢端坏疽的症状,并能纠正升高的iNOSmRNA的表达,推测其能延缓高糖状态下的足部病变,对糖尿病足有一定的保护作用。     

细胞外基质纤维粘连蛋白、层粘连蛋白在不孕症子宫内膜的表达

目的：探讨女性不孕症在着床方面的缺陷,尤其是子宫内膜接受性的异常。方法：采用免疫组织化学方法对生育组41例,原因不明不孕组43例妇女细胞外基质FN、LN在分泌期子宫内膜中的表达进行检测。结果：FN、LN在生育组分泌中期呈强表达,早期次之,晚期较弱。不孕组分泌各期表达均高于生育组,并且FN、LN在分泌期子宫内膜上的表达在生育组与不孕组间不同,在同一组子宫内膜腺上皮细胞及基底膜,血管内皮细胞及基底膜和间质细胞上表达不同。结论：FN、LN在分泌期子宫内膜上呈周期特征性变化并参与子宫内膜的功能变化及胚泡的着床环节。其过高表达影响胚泡对母体子宫内膜的识别,定位和粘着过程,导致胚泡着床失败。     

当归补血汤对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响及作用机制

目的 研究当归补血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响及其作用机制.方法 以不同生药浓度的当归补血汤作用于小鼠BMSCs,MTr法检测其对BMSCs增殖的作用,流式细胞仪检测其对BMSCs细胞周期与细胞凋亡的影响;RT-PCR及ELISA方法探讨BMSCs的增殖机制.结果 当归补血汤质量浓度为0.5、1.0 mg/mL作用于BMSCs 24 h、48 h后,可明显促进BMSCs细胞增殖;作用48 h后可明显降低BMSCs细胞的G0/G1期,升高S期,抑制细胞凋亡;质量浓度为0.5、1.0 mg/mL的当归补血汤能促进EPO基因表达量升高;质量浓度为1.0 mg/mL时EPO含量相对空白对照组明显升高.结论 当归补血汤具有促进BMSCs增殖的作用,其增殖机制可能与影响细胞周期、抑制细胞凋亡、促进EPO基因的表达以及蛋白分泌有关.     

高糖下系膜细胞细胞外基质主要成分及MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TGF-β1的动态变化

目的：观察高糖下系膜细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2，MMP-9)，金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP—1)及转化生长因子β1(TGF-β1)，层粘连蛋白(LN)，胶原蛋白IV(colⅣ)的动态改变，探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法：采用Western印迹杂交、酶谱分析法及ABC-EHSA法检测。结果：随着高糖作用时间的延长，体外培养大鼠系膜细胞分泌TIMP-1，TGF-β1，LN、colⅣ逐渐增加，分泌MMP-2、MMP-9逐渐减少。结论：高糖引起系膜细胞套泄TGF-β1异常增加，同时有MMPs/TIMPs、细胞外基质合成降解的失衡，是DN的病理基础。     

当归补血汤对细胞免疫调节作用及超微结构的影响

本实验采用环磷酰胺(CY)制造免疫功能低下小鼠的动物模型，研究当归补血汤组成药物的不同比例配伍，对机体免疫功能调节作用的影响。实验过程中将当归、黄芪分别配制成1：1（A方)、1：5(B方)、5：1（C方)的不两比例中药方剂，对小鼠施以灌胃，并设对照组，以WBC总数、T淋巴细胞转化率及胸腺细胞超微结构变化作为检测指标。结果表明：三组不同比例配伍的方剂，对小鼠机体免疫功能均有调节作用。三组之间比较，提高WBC总数以A方效果最明显；三个方剂均有促进淋巴细胞转化的作用，但转化率三之间无明显差异；保护胸腺细胞作用以B方效果最好。应用：当归补血汤对机体免疫功能有明显调节作用，但不同比例配伍，对机体免疫功能调节作用各有所侧重。     

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;     

地骨皮活性成分对高糖致肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的?观察地骨皮中有效成分对高糖刺激的肾小球系膜细胞的增殖以及细胞外基质分泌的影响,研究其对糖尿病肾病的保护机制。方法?体外培养肾小球系膜细胞,分为高糖模型组（葡萄糖浓度为30?mmol/L）,空白对照组（葡萄糖浓度为5.5?mmol/L）,甜菜碱、山奈酚5个浓度剂量组（0.01、0.1、1、10、100?μmol/L）,用MTT法观察系膜细胞增殖情况,ELISA法观察细胞外基质分泌情况。结果?与高糖模型组比较,不同剂量甜菜碱组和山奈酚组,对高糖致肾小球系膜细胞增殖有不同程度的抑制。甜菜碱、山奈酚均能抑制细胞外基质的分泌,与高糖模型组比较有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论?地骨皮中有效成分甜菜碱和山奈酚均具有抑制高糖刺激下系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的作用,推测地骨皮中有效成分具有治疗糖尿病肾病的作用。      

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响

目的:探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导下原代肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制.方法:原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24 h、48 h收集细胞.用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;免疫细胞化学检测p53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达.结果:48 h内,高糖促进GMC增殖并上调p38MAPK蛋白的表达,抑制p53的表达,SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强.结论:SF可能是通过抑制p38MAPK通路,促进p53的合成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖.     

黄芪注射液对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影响

[目的]观察黄芪注射液对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na⁺-K⁺-ATP酶活性的影响。[方法]用含高糖或AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,四甲基氮唑盐(MTT)法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na⁺-K⁺-ATP酶测定。[结果]葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低,与正常培养液比较具有显著性差异。而加入黄芪注射液后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na⁺-K⁺-ATP酶活性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na⁺-K⁺-ATP酶活性降低,起到保护细胞的作用。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

生脉注射液对高糖和糖化终末产物诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察生脉注射液对高糖和糖化终末产物(AGEs)诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响.方法 用高糖和AGEs 作为刺激因子,诱导体外培养的牛肾小球系膜细胞增殖,并用MTT 比色法测定生脉注射液对系膜细胞增殖的影响.结果 生脉注射液能拮抗高糖和AGEs 诱导的肾小球系膜细胞的增殖(P<0.01).结论 生脉注射液治疗糖尿病肾病的主要靶细胞之一是肾小球系膜细胞,其对肾小球系膜细胞增殖的抑制可能是其治疗作用的重要机制.     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞[Ca2+]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系. 方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法,动态测定细胞[Ca2+]i,MTT法测定细胞增殖. 结果血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高,并促进细胞增殖.钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖.中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时,对细胞游离钙却无影响. 结论肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联,但[Ca2+]i的升高并非细胞增殖的唯一途径.     

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖（LPS）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组：对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR（RT-PCR）法检测ECM中层黏连蛋白（LN）β2 mRNA表达的变化。结果（1）LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义（P〈0.05）;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义（P〈0.01）;（3）正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义（P〈0.01）。结论从蛋白和mRNA两个水平同时观察到ECM成分（如FN、LN和ColⅣ）的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。