一种含有哇巴因IgG亲和层析柱的制备

内源性钠泵抑制因子与高血压发病的关系在近年来报道较多 ,已成为该领域国际研究的热点。有学者从人的血液及牛的下丘脑纯化出一种与哇巴因相似的明显抑制钠泵活性的类哇巴因物质 (ｏｕａｂａｉｎ ｌｉｋｅｃｏｍｐｏｕｎｄ ,ＯＬＣ) [1,2 ] 。作者的研究也证实了ＯＬＣ存在于人和其它哺乳动物体内[3 ,4] 。利用自制的抗哇巴因抗体制备亲和层析柱并用于高血压病人血液中类哇巴因活性物质的分离 ,报道如下。1　材料与方法1.1　仪器与试剂　高效液相色谱 (ＨＰＬＣ ,日本ＨＩＴＡＣＨ) ,酶标仪 (ＢＥＣＫＭＡＮ) ;ＣＮＢｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ…     

抗磷脂抗体对内皮细胞释放前列环素的影响

用狼疮凝集抑制物（ＬＣＩ）阳性的病人血清、亲和分离的ＩｇＧ和脂质体亲和纯化的抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）作用于人内皮细胞（ＥＣ），测定ＥＣ释放的前列环素（ＰＧＩ＿２）。结果表明，对照组ＰＧＩ＿２的平均释放量为１３０５±２４０ｐｇ／ｍｌ，实验组为１２４６±２８７ｐｇ／ｍｌ，差别为４．５％（Ｐ＞０．０５）。经人α－凝血酶（１Ｕ／ｍｌ）刺激后，对照组ＥＣ释放ＰＧＩ＿２的量平均增加２．１倍，实验组为１．３６倍，差别为３５．２％（Ｐ（０．０５）。上述三种成份均能明显抑制低浓度凝血酶（１Ｕ／ｍｌ）介导ＥＣ释放ＰＧＩ＿２，但并不抑制高浓度凝血酶（１０Ｕ／ｍｌ）和花生四烯酸（２０μｍｏｌ／ｍｌ）介导ＥＣ释放ＰＧＩ＿２（Ｐ＞０．０５）。因此，具有ＬＣＩ活性的ＡＣＡ对凝血酶介导的ＥＣ释放ＰＧＩ＿２的抑制是引发血栓形成的机制之一；也是现所知的直接沟通免疫和凝血两大系统的唯一抗体。     

抗钙调素抗体对抗体产生细胞分泌抗体功能的影响

以钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）和环抱素Ａ（ＣｓＡ）为对照，观察抗钙调素（抗ＣａＭ）抗体对绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫的小鼠脾细胞及分泌抗巨细胞病毒（抗ＣＭＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞抗体分泌功能的影响。发现ＴＦＰ（０．１～１００μｍｏ／Ｌ）、ｃｓＡ（０．１～１００μ／Ｌ）明显抑制小鼠脾细胞与杂交瘤细胞分泌鼠Ｉｇ的功能，且此抑制作用随ＴＦＰ、ＣｓＡ剂量的增大而增强；与此不同，人和兔抗ＣａＭ对上述细胞分泌Ｉｇ有明显促进作用。     

抗心磷脂抗体与神经精神性狼疮

用酶联免疫吸附试验检测神经精神性狼疮（ＮＰＬＥ）。非ＮＰＬＥ狼疮患者，ＳＬＥ脑血管疾病患者及正常对照者血清及脑脊液中抗心磷脂抗体（ＡＣＬ抗体）。结果提示ＮＰＬＥ组ＡＣＬ抗体阳性率在血清中为９０．０％，脑脊液为３３．０％，非ＮＰＬＥ狼疮组ＡＣＬ阳性率在血清中为４４．０％，脑脊液为８．３％，非ＳＬＥ脑血管疾病组ＡＣＬ阳性率在血清中为５０．０％，脑脊液为４０．０％，正常人组ＡＣＬ阳性率在血清及脑脊液中均     

原因不明习惯性流产患者抗子宫内膜抗体和肿瘤坏死因子α的测定

目的：探讨抗子宫内膜抗体（ＥｍＡｂ）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与原因不明习惯性流产（ＨＡ）的关系。方法：应用酶免和放免法对５９例原因不明ＨＡ（研究组）和２０名正常对照的血清ＥｍＡｂ和ＴＮＦα含量进行测定,其中研究组分为Ａ组（每次流产均小于１２ｗ,３１例）和Ｂ组（至少有一次流产大于１２ｗ,２８例）。结果：原因不明ＨＡ的ＥｍＡｂ阳性率为５０８５％,ＴＮＦα水平为０５８５±０３０９μｇ／Ｌ,而正常对照未见ＥｍＡｂ阳性（Ｐ＜０００５）,其ＴＮＦα为０３３４±０２６５μｇ／Ｌ（Ｐ＜０００５）;Ａ组ＥｍＡｂ阳性率及ＴＮＦα水平均明显高于Ｂ组（Ｐ＜０００５,Ｐ＜００２）。结论：ＥｍＡｂ和ＴＮＦα在ＨＡ发病中可能起着重要作用,尤其对早期流产患者。     

BXSB小鼠血清抗DNA抗体水平及其对淋巴细胞转化的影响

用酶联免疫吸附剂测定法（ＥＬＩＳＡ）和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入法，观察一种自发性系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）好发小鼠（ＢＸＳＢ小鼠）在不同月龄时，血中抗ＤＮＡ抗体水平的变化，并观察该血清对正常ＬＡＣＡ小鼠淋巴细胞转化的影响。结果显示，自３月龄起，ＢＸＳＢ雄性鼠血中的抗ＤＮＡ抗体水平开始升高，４月龄上升至高峰，５月龄仍保持较高水平，各月龄ＢＸＳＢ血清与对照血清相比，Ｐ＜０．０５（ＡＮＯＶＡ）。同时，该血清对正常ＬＡＣＡ小鼠淋巴细胞转化也有抑制作用，以４月龄血清的抑制作用最大。如果将同一只小鼠血清抗ＤＮＡ抗体水平的变化与该血清对淋巴细胞转化的影响做回归和相关分析，发现两者有明显的正相关关系（，０．２３２，＜一５３，尸＜Ｏ．０５）。提示雄性＊ｘ８Ｂ小鼠可能从３月龄开始表现ＳＬＥ。发病后，血清中产生某种能够抑制淋巴细胞转化的物质，它的产生与抗ＤＮＡ抗体有平行关系。     

影响抗A杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素

目的 研究影响抗Ａ杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素。方法 通过试管法和玻片法检测Ａ抗体的效价和亲和力。结果 ０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ丁酸钠和０．０１Ｕ／ｍＬ胰岛 能明显提高抗Ａ抗体的效价和亲和力,ＨＡ 筛上体积细胞迅速死亡,抗Ａ抗体的效价和新和力明显提高。结论 丁酸钠、胰岛素和ＨＡＴ重筛选可提高抗Ａ杂交瘤细胞抗体的分泌。     

化学发光免疫测定抗dsDNA抗体的实验条件分析和初步应用

采用正交设计确定了化学发光免疫测定抗ｄｓＤＮＡ抗体的最适实验条件，并与免疫荧光法（ｌＦ）、酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫测定法（Ｆａｒｒ）比较。结果表明，最适条件：ｄｓＤＮＡ包被浓度为１０μｇ／ｍｌ、ＡＢＥＩ－ＳａＨＩｇＧ结合物使用发光强度为１．０×１０￣４ｍｖ坎德拉，氯化高铁血红素（Ｈｅｍｉｎ）浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，Ｈ＿２Ｏ＿２浓度为０．３％，５６份ＳＬＥ患者血清中，化学发光免疫测定法（ＣＬＩＡ）检测抗ｄｓＤＮＡ抗体阳性率为８３．９％，高于ＩＦ和ＥＬＩＳＡ法，接近Ｆａｒｒ法水平。阻断试验证明，本方法检测抗ｄｓＤＮＡ抗体具较高特异性。     

抗心磷脂抗体检测及其影响因素的研究

目的：研究血清样品稀释度、温度、离子强度以及样品检测间隔时间对血清抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）检测结果的影响。方法：采用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测ＡＣＡ。结果：血清样品最佳稀释度为１：５０;３７℃时光吸收值比２２℃和２５℃的光吸收值显著下降;１５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ可明显抑制ＡＣＡ与抗原结合（Ｐ〈０．０１）,抑制率平均为４５．４％,包被１４ｄ以上的检测结果明显高于１ｄ和７ｄ的测定结果（Ｐ〈０．     

免疫印迹技术检测抗中性粒细胞胞浆抗体的应用研究

用免疫印迹技术（ＩＢＴ）检测了１０１例不同原因的血管炎、ＳＬＥ和类风湿性关节炎（ＲＡ）患者血清中的抗中性粒细胞胞浆抗体（ＡＮＣＡ），ＡＮＣＡ与凝胶电泳时２９ＫＤａ处的中性粒细胞胞浆抗原形成一条明显的沉淀带。韦格纳氏／多血管炎组患者的阳性率为５４．５％（６／１１例），显著高于其他血管炎、ＳＬＥ和ＲＡ患者的１４．２％（３／２１例），４．２％（２／４８例）和０％（０／２１例）。３５份正常人血清全呈阴性。用ＡＮＣＡ阳性血清作用于中性粒细胞，在间接免疫荧光检测时均呈胞浆型（Ｃ－ＡＮ－ＣＡ）。此法特异、简便、易于推广应用，有助于血管炎的诊断。     

抗IgE抗体的诱导及其对血清IgE水平的抑制

用ＩｇＥＦｃε片段和钥孔血蓝蛋白聚合物（ＫＬＨ－ＩｇＥ）免疫小鼠，产生了内源性抗ＩｇＥ抗体，同时伴有血清ＩｇＥ含量下降。这种状况在新生小鼠可保持１２周，而在同剂量ＫＬＨ－ＩｇＥ免疫的成年小鼠体内只能保持４周。以５倍剂量免疫成年小鼠，诱导出较高水平的抗ＩｇＥ抗体，ＩｇＥ水平也显著被抑制，并保持１２周，同时，ＩｇＥ分泌细胞数也显著减少。提示诱导产生的内源性抗ＩｇＥ抗体既可加速体内ＩｇＥ抗体的清除，也可抑制ＩｇＥ抗体的产生。     

乙型肝炎病毒单克隆表面抗体的抗独特型抗体的制备与免疫效果

用乙型肝炎病毒单克隆表面抗体免疫新西兰兔制备抗独特型抗体，经小鼠γ球蛋白－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ免疫亲和柱纯化后，用ＥＬＩＳＡ鉴定，结果表明特异性良好。以此抗独特型抗体免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，引起抗－ＨＢ＿ｓ应答，提示制备抗独特型疫苗的可能性。     

TMA与TGA检测对甲状腺疾病的临床诊断价值

根据174例疑诊患者的TMA、TGA，T3，T4放射免疫测定结果及其临床表现进行诊断，结果表明桥本氏甲状腺炎和甲亢所占的比例(分别为38．51％及31．61％）显著高于甲减和亚急性甲状腺炎(分别为6．32％和4．02％)，P＜0．05。甲减患者TGA TMA的阳性率（81．82％)显著高于甲亢(50．91％)，桥本氏甲状腺炎(50．75％)及亚急性甲状腺炎(57．14％)，P＜0．05。单项抗体阳性者以TMA较TGA为多。本文结果提示在甲状腺疾病中TMA，TGA的阳性结果存在相互重叠现象，与T3、T4联检并结合临床表现进行综合分析有助于甲状腺疾病的鉴别诊断并正确指导治疗。     

亮氨酸甲基酯处理法制备抗人肾癌单克隆抗体

以本所自建的肾癌细胞株（ＧＲＣ－１）作为免疫原，用亮氨酸甲基酯（ＬｅｕＯＭｅ）处理免疫后的脾细胞，可以显著细胞融合率，并且筛选到４株抗人肾癌单克隆抗体（ＭＡｂ）。ＹＤ－５为其中特异性较好的１株，属ＩｇＧ１亚类，在正常肾组织的肾小管、大多数肾癌（１３／１５）组织中表达，且与其它被检正常组织叉反应少，当以某些肿瘤细胞株作为免疫原且融合率很低时，用ＬｅｕＯＭｅ处理法来提高融合率是很有意义的。     

抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的制备及鉴定

利用牛源微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)超声粉碎物免疫BALB C小鼠 ,取脾细胞与SP2 0细胞融合 ,经 3～ 5次有限稀释克隆化 ,获得 4株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 1D5 ,2E9,3D6和 4G4。经检测 ,其分泌的抗体亚类 3株为IgG1,1株为IgM。通过免疫荧光鉴定 ,4株单抗均作用于子孢子抗原 ,其中 2株针对子孢子表膜。对杂交瘤细胞株的染色体计数 ,结果染色体均数为 90～ 98条。ELISA检测细胞培养上清效价分别为 1∶16 0 ,1∶32 0 ,1∶32 0和 1∶6 4 0 ,诱生小鼠腹水的抗体效价分别为 1∶4 0 9,6 0 0 ,1∶819,2 0 0 ,1∶819,2 0 0和 1∶1,6 38,4 0 0 ,特异性试验结果显示 ,4株单抗均不与贾第虫滋养体和结肠小袋纤毛虫发生交叉反应。     

视网膜神经节细胞诱向因子独特型抗体的制备及其受体的识别

本实验用Phast system电泳法,从大鼠视网膜神经节细胞诱向因子(retinal ganglion neuronotrophic factor,RGNTF)单克隆抗体(RGNTF-McAb)中,分离出一种免疫球蛋白lgG,免疫Balb/c小鼠,制备了抗RGNTF-McAb的独特型单克隆抗体。用MTT微量比色法,对该独特型单克隆抗体进行筛选。结果表明,独特型单克隆抗体G_4能特异性地和RGNTF单克隆抗体D_3结合,中和D_3对成视网膜细胞瘤(Rb)细胞的抑制作用;具有RGNTF的生物学效应,能促进Rb细胞的生长。用免疫组织化学方法证明,Rb细胞、大鼠胚胎视网膜节细胞、新生大鼠的视网膜节细胞都可对G_4独特型抗体发生阳性免疫反应,阳性颗粒较粗,主要分布在Rb细胞和视网膜节细胞的胞膜上,这些阳性颗粒可能是RGNTF的膜受体。所以我们认为,G_4单克隆抗体不仅是独特型抗体,而且是对位型的独特型抗体。它的产生对深入研究RGNTF的作用机制具有重要意义,亦有广阔的应用前景。     

rHuIL-6和rHuIL-2对人杂交瘤细胞增殖、克隆化以及抗体产生的影响

rHuIL6对人一鼠杂交瘤86—1、87—3和人—(人×鼠)杂交瘤C_的增殖、克隆化和抗体分泌均有明显的促进作用。rHuIL-2能提高C_8杂交瘤的增殖水平。rHuIL-6和rHuIL-6和rHuIL-2同时应用对人—鼠杂交瘤86—1和87—3细胞的克隆化效率和抗体分泌水平有明显的协同作用。     

HIT^＋4细胞的分布及增殖特性的研究

观察了ＨＩＴ４＋细胞在正常人外周血ＣＤ４和ＣＤ８亚群中的分布及ＣＤ４＋ＨＩＴ４＋、ＣＤ４＋ＨＩＴ４－细胞的增殖特性。结果发现：１．ＨＩＴ４＋细胞在ＣＤ４和ＣＤ８亚群所占的百分率分别为３６．９±６．６％和１９．７±４．８％。２．ＣＤ４＋ＨＩＴ４＋细胞对ＣｏｎＡ、ＴＴ、ＰＰＤ和Ａｕｔｏ－Ｂ刺激的增殖反应明显低于ＣＤ４＋ＨＩＴ４－细胞，而后者与总ＣＤ４亚群的增殖反应水平接近。将ＨＩＴ４＋细胞和ＨＩＴ４－细胞的分布与增殖特性与已报道的Ｔ亚－亚群细胞比较，提示ＨＩＴ４可能为识别Ｔ亚－亚群的一个新标志。