Notch信号通路调控CD4+T细胞分泌IL-22在Vogt-小柳原田综合征中的作用

目的：观察Notch受体和IL-22在Vogt-小柳原田(VKH)综合征患者中的表达变化,探讨Notch信号通路对VKH综合征患者CD4⁺T细胞分泌IL-22的调控作用。

方法：选取VKH综合征患者35例(活动期15例和静止期20例)和健康对照者12例,分选血浆和CD4⁺T细胞,qRT-PCR和Western blot法检测Notch受体,ELISA法检测血浆IL-22表达,流式细胞术检测Th17和Th22的比例。观察抑制Notch信号通路对VKH综合征患者CD4⁺T细胞转录因子相对表达量和IL-22分泌水平的变化。

结果：活动期VKH综合征患者CD4⁺T细胞中Notch1～3较静止期和健康对照者显著升高。活动期VKH综合征患者血浆IL-22及Th17、Th22水平高于静止期和健康对照者。抑制Notch信号通路可导致活动性VKH综合征患者CD4⁺T细胞中AhR mRNA降低,分泌IL-22水平降低。

结论：Notch-AhR-IL-22信号通路可能参与了VKH综合征的发病。     

细胞因子信号抑制因子在Vogt-小柳原田病患者外周血单个核细胞的表达

目的 探讨Vogt-小柳原田病(Vogt-Koyanagi-Harada,VKH)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)细胞因子信号抑制因子(suppressor of eytokine signaling,SOCS)的表达.方法 本研究设计为病例对照研究.抽取15例VKH活动期患者、17例静止期患者和16例正常人的外周血,用酶联免疫吸附测定方法检测血清中细胞因子IL-4、IL-12、IFN-γ的水平;用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法检测外周血单个核细胞内SOCS基因和蛋白的表达,对三组实验结果数据采用方差分析中的两两比较进行统计.结果 活动期和静止期VKH患者及正常对照组血清中IL-4水平分别为(28.40±5.93)、(34.5±9.47)和(11.25±4.43)ng/L,ID-12的水平为(24.33±8.55)、(11.53±6.11)和(5.19±2.43)ng/L,IFN-γ的水平为(18.05±2.23)、(15.53±2.63)和(1.61±3.47)ng/L,IL-4、IL-12和IFN-γ在活动期和静止期VKH患者血清中的水平均较正常对照组显著升高(P<0.01).IL-4在静止期患者较活动期患者水平升高(P<0.01).IL-12和IFN-γ在静止期患者较活动期患者水平低(P<0.01,P<0.05).SOSC基因表达的检测结果显示含SH2结构的细胞因子诱导蛋白(cytokine inducible SH2 containing protein,CIS)、SOCS1、SOCS2、SOCS3、SOCS5 mRNA在VKH活动期患者PBMC内的表达分别是正常对照组的0.72、4.92、1.09、0.75和1.15倍,静止期患者是正常对照组的1.15、2.25、1.40、0.69和1.16倍.蛋白免疫印迹结果显示活动期患者的CIS水平显著低于静止期患者和正常人(P<0.01),静止期和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);SOCS1在活动期患者体内显著高于静止期患者和正常对照组(P<0.01,P<0.05),静止期和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);SOCS2在患者和正常人之间无明显差别(均P>0.05);活动期和静止期患者的SOCS3均明显较正常对照组降低(P<0.05);SOCS5在两组患者体内的水平均高于正常对照组(P<0.01),且静止期患者的水平显著高于活动期(P<0.05).结论 VKH患者PBMC内SOCS1和SOCS5水平升高、CIS和SOCS3水平降低与VKH发生过程中的Th1型反应增强有关.SOCS5在葡萄膜炎发生过程中可能起保护作用.临床上静止期的葡萄膜炎患者体内的免疫环境仍处于异常状态,这可能是葡萄膜炎易复发和慢性化的原因.     

角膜移植患者外周血中T细胞CD28分子的表达及其意义

目的　探讨角膜移植患者外周血T细胞及亚群CD2 8分子表达的变化及其意义。方法　于术前1d、术后第1、2、3、4周,应用流式细胞仪检测2 5例角膜移植患者外周血中CD2 8分子表达水平的变化。结果　角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD2 8分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高,也比术前明显增高(P <0 .0 1) ;6例发生排斥反应的患者均出于高血管化植床组;术后早期外周血T细胞中以CD4 + 细胞为主。结论　外周血T细胞CD2 8分子表达与角膜移植排斥反应关系密切,检测角膜移植患者外周血中的CD2 8分子表达可更早监测免疫排斥反应的发生     

异种角膜基质作为生物角膜载体的免疫学研究

目的探讨异种(猪)角膜基质组织免疫原性,以评价其作为角膜重建载体材料的可行性。方法将新鲜、脱水2种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间,术后12d、90d抽取外周血,行抗CD25·FITC和抗CD4/CD8·PE双色免疫荧光标记,流式细胞仪测定分析。结果测得新鲜组、脱水组大鼠术后12d外周血T淋巴细胞表面抗原CD4 和CD25 、CD8 和CD25 双阳性表达率(1.53%±0.47%,2.13%±0.53%与0·57%±0.20%,0.67%±0.18%)及CD4 /CD8 比值(1.43±0.28,1.69±0.18)与同基因移植组(1.78%±0.36%,1.50±0.19)、阴性对照组(2.06%±0.52%,1.44±0.32)比较无显著性差异(P>0.05)。术后90d,新鲜组、脱水组大鼠外周血T淋巴细胞表面抗原CD4 和CD25 、CD8 和CD25 双阳性表达率(1.48%±0.39%,1.50%±0.46%与0·55%±0.15%,0·58%±0·11%)及CD4 /CD8 比值(1.43±0.51,1.36±0.59)与同基因移植组(1.32%±0·75%,1.31±0.29)、阴性对照组(1.34%±0.18%,1.44±0.42)比较,也无显著性差异(P>0.05)。结论异种(猪)角膜基质免疫原性低,是一种理想的角膜体外重建载体材料。     

Behcet病患者外周血淋巴细胞共刺激分子的表达

目的观察Behcet病患者外周血淋巴细胞CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD28、CTLA-4分子的表达。方法采用流式细胞三色直接免疫荧光标记法，对24例Behcet病患者(Behcet病组)和20个正常人(对照组)外周血T、B淋巴细胞亚群的共刺激分子CD80、CD86、CD28和CTLA-4的表达进行检测。结果Behcet病患者外周血CD ⁴⁺ T细胞表面 CTLA-4 分子的表达[(3.18±1.18)%]高于对照组[(1.73±0.66) %]，两者差异有显著性的意义(t=-3.722,P<0.01)；CD19⁺ B细胞表面CD86分子的表达[(4.49±1.73)%]高于对照组[(2.40±1.49) %]，两组比较差异有显著性的意义(t=－2.071,P<0.05)。比较两组间其它分子的表达，差异均无显著性的意义。结论Behcet病患者 B7、 CD28的相互作用促进了葡萄膜炎的发生，阻断其相互作用可能为今后葡萄膜炎的治疗提供一种新思路。(中华眼底病杂志,2003,19:357-359)     

细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白抑制鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的　探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4 Ig)对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用及局部抗免疫排斥反应机制。方法　建立 5 0只BALB/c小鼠穿透性角膜移植动物模型。治疗组 (2 5只 ) :取C5 7BL/ 6小鼠角膜片 ,放置于 10 μg/mlCTLA4 Ig保存液中浸泡 2 4h后 ,移植到BALB/c小鼠。对照组 (2 5只 ) :植片不行任何处理。术后每 3d用裂隙灯显微镜检查植片情况 ,每周应用组织学和免疫组织化学方法检测植片中各种炎性细胞和淋巴细胞的变化。对出现排斥反应的角膜植片应用逆转录PCR(RT PCR)方法检测部分细胞因子的表达。另外 ,选择经CTLA4 Ig治疗、植片保持透明 6周以上的小鼠作为受体 ,接受来自C5 7BL/ 6小鼠皮肤的移植 ,当移植皮肤发生排斥时 ,进行迟发性超敏反应 (DTH)分析。结果　CTLA4 Ig治疗组角膜植片保持透明 >10 0d。对照组小鼠术后 14d内均发生免疫排斥反应。组织病理学检查显示 ,角膜移植术后 2周 ,CTLA4 Ig治疗组植片保持正常细胞结构 ,无明显炎性细胞和T淋巴细胞浸润 ;对照组的排斥植片有大量炎性细胞和T淋巴细胞浸润 (包括CD 4 ,CD 8及CD 11细胞 )。术后 2周发生免疫排斥的角膜植片中检测到白细胞介素 10 (IL 10 ) ,肿瘤坏死因子α(TNF α) ,γ干扰素 (IFN γ) ,B7及C     

伏格特-小柳-原田综合征患者外周血淋巴细胞Fas和FasL mRNA的表达

目的 探讨Fas、FasL mRNA在伏格特-烛柳-原田(Vogt-Koyanagi-Harada,VKH)综合征患者外周血淋巴细胞的表达。方法 于2000年1～6月抽取16例VKH综合征患者和19例正常人的外周血,提取淋巴细胞的总RNA,将RNA逆转录为cDNA,然后用荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)的方法实时检测Fas、FasL PCR扩增的全过程,计算样本中Fas、FasL mRNA的表达量。结果 VKH综合征患者外周血淋巴细胞的Fas mRNA的表达量[(1.6±2.0)×106]显著高于正常对照组[(5.7±2.0)×105](t=4.50,P<0.05),FasLmRNA的表达量[(1.8±1.5)×106]也显著高于正常对照组[(4.8±3.5)×105](t=9.57,P<0.05)。结论 VKH综合征患者外周血中长期存在的大量Fas、FasL mRNA高表达的活化自身免疫性淋巴细胞,可能是其炎性反应反复发作、病情迁延不愈的重要原因之一。(中华眼科杂志,2004,40:507-509)     

系统性红斑狼疮患者眼表损害及相关抗体检测

目的　探讨系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythemaitosus ,SLE)活动期与干燥性角结膜炎 (keratoconjunctivitiessicca ,KCS)、继发性干燥综合征及相关抗体的相关性。方法　对 90例SLE患者和 10 0例正常对照组的眼表检查及抗体检测资料进行分析。结果　眼表损害在所研究的SLE患者中的发生率为 2 5 6% ( 2 3 /90 ) ,正常对照组为 3 0 % ( 3 /10 0 ) ;且活动期发生率 3 4% ( 17/5 0 )明显高于非活动期的 15 % ( 6/4 0 ) ,P <0 0 5。抗dsDNA抗体、抗SSA抗体及抗SSB抗体在SLE患者的阳性率为 5 7 8% ( 5 1/90 )、 43 3 % ( 3 9/90 )及 2 8 9% ( 2 6/90 ) ,而正常对照组均阴性 ;且SLE患者活动期阳性率均明显高于非活动期患者 ,分别为 74% ( 3 7/5 0 )VS3 7 5 % ( 15 /4 0 ) ,P <0 0 1;5 6% ( 2 8/5 0 )VS2 7 5 % ( 11/4 0 ) ,P <0 0 1;以及 3 8% ( 19/5 0 )VS17 5 % ( 7/4 0 ) ,P <0 0 5。 2 3例SLE合并干燥性结角膜炎的患者抗SSA、SSB抗体阳性率分别为 10 0 0 % ( 2 3 /2 3 )和 91 3 % ( 2 1/2 3 )。 11例SLE继发性干燥综合征的患者抗SSA、SSB抗体阳性率分别为 10 0 0 % ( 11/11)和 90 9%( 10 /11)。结论　SLE活动期患者KCS发病率及抗dsDNA、SSA、SSB抗体阳性率明显高于SLE非活动期患者。抗SSA、SS     

伏格特-小柳-原田综合征患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例变化

目的 观察伏格特-小柳-原田（VKH）综合征患者治疗前以及治疗1个月后外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例变化。方法 采集15例VKH综合征患者治疗前以及系统的糖皮质激素治疗1个月后的外周血，分离淋巴细胞。采用细胞表面标志物CD4、CD25以及特征性的细胞核内转录因子叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)的抗体标记CD4⁺CD25⁺调节性T细胞，流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例，并与15例以健康志愿者为正常对照组的外周血中的该亚群细胞水平进行比较。结果 外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞占CD4⁺细胞的比例，治疗前患者组为（0.30±0.19）%，正常对照组为（1.41±0.52）%，二者比较，差异有统计学意义（t＝7.665，P＜0.01）；治疗1个月后，患者组为（1.28±0.54）%，接近正常对照组。另有2例患者在治疗1个月后外周血中CD4⁺CD25⁺ T细胞比例异常升高。结论 VKH综合征患者外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T细胞的比例治疗前显著低于正常对照组，治疗后与正常对照组接近，表明VKH综合征的发病可能与患者外周血中天然性CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的比例下降有关。     

异体角膜对人外周血T细胞及其亚群CD69分子表达的体外调节

目的 观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD69分子表达的调节。方法 应用异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养和流式细胞分析技术(FACS)。结果 对照组T细胞CD69表达为10．3％；受角膜或佛波醇脂(PDB)激活后，T细胞CD69表达分别为31.6％和53.8％；受角膜激活后，CD4和CD8T淋巴细胞CD69表达分别为47.3％和30．3％。结论 角膜组织体外能够刺激人外周血T细胞CD69的表达和T细胞活化，早期以CD4T细胞活化更明显。     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.