构建细小核糖核酸病毒活疫苗的策略

利用感染性cDNA克隆,已构建了若干1型脊髓灰质炎病毒Mahoney有毒株与sabin1减毒株之间的重组病毒。这些重组病毒的猴体神经毒力试验表明,病毒颗粒的表面结构与神经毒力表型有些相关,神经毒力强的决定簇位于5′端非编码序列。这些结果产生了两种构建活的小核糖核酸病毒减毒株的可能的策略。一种是利用Sabin 1株作为携带外来抗原的载体:另一种是在5′端非编码序列引入突变来构建减毒的细小核糖核酸病毒。Sabin 1株的抗原性成功地改变为脊髓灰质炎病毒其他血清型的抗原性,而疫苗质量不降低。还证明,在Sabin 1株和Mahoney株基因组的5’端非编码序列引入缺失突变可构建具有弱神经毒力表型的病毒。     

新一代脊髓灰质炎疫苗

1953年Salk研制了脊髓灰质炎灭活疫苗,嗣后Sabin研制成功了减毒活疫苗,使本病的发生得以控制。但服用Sabin疫苗后,儿童及与服苗儿童密切接触者中分别有1/800万及1/550万的疫苗相关病例发生。三个型Sabin弱毒株中,Ⅱ及Ⅲ型遗传学上不稳定,特别是Ⅲ型,易发生毒力回升。因而疫苗生产中对原种毒株的传代次数有所限制,而在Ⅲ型则更严格。各国均在试图以Ⅲ型Sabin株以外的Ⅲ型病毒生产疫苗。现将新疫苗的研究进展简述如下: 1.新疫苗株病毒的研究:最近各型Sabin病毒及其相应的强毒株的RNA碱基序列     

三价Sabin脊髓灰质炎灭活疫苗:首次临床试验和血清免疫力观察

最近,Lederle药厂研制成功新型三价Sabin脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)。新疫苗与其他IPV制剂的不同点在于其D抗原含量和种子病毒株。应用减毒的Sabin株可消除制备过程和免疫接种时接触野病毒的危险性。病毒在恒河猴肾细胞中培养,过滤去除细胞碎片,超滤浓缩,并以凝胶过滤和离子交换层析纯化。病毒经福尔马林灭活11天以上。1、2和3型的D抗原含量分别为40∶25∶75U/ml。本文报道了对疫苗安全性和免疫原性的试验结果。作者对39名既往有口服脊髓灰质炎疫苗     

全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗获批上市

本刊讯2015年1月14日,国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(单苗)的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株(Sabin株),经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的感染,它的上市将对我国彻底消灭脊髓灰质炎发挥至关重要的作用。脊髓灰质炎是一种由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒引起的急性传     

简讯

2015年1月14日,国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(单苗)的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株(Sabin株),经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的     

从1名健康疫苗接种者分离到的重组3型/2型脊髓灰质炎病毒及其包含的嵌合核壳VP1的鉴定

从接种口服脊髓灰质炎疫苗后约 1 2周的 1名 2岁男孩的粪便标本中分离到Sabin3/Sabin2 /Sabin3( S3/2 /3)型间重组脊髓灰质炎病毒。　　由于该分离株的初步鉴定为嵌合 Sabin3/Sabin2核壳结构 ;从而使作者进一步研究了这个病毒的整个基因组序列、抗原特性和温度敏感性。　　研究表明 ,第 1个重组连接位于编码VP1核壳蛋白的基因区 ,在 32 74和 32 85位核苷酸之间 ;第 2个连接则位于 RNA聚合酶区域 ( 6 82 4和 6 82 5位核苷酸 )。重组把 6个 Sabin2衍生氨基酸引入 Sabin3核壳中的VP1羧基末端。重组病毒的全基因组与其亲代 Sabin株在 33…     

全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗获批上市

本刊讯2015年1月14日,国家食品药品监督管理总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(单苗)的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株(Sabin株),经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗     

原代猴肾细胞或Vero细胞制备的OPV的遗传稳定性:在细胞培养和人胃肠道中传代的影响[英]

作者用肠道和细胞培养进行疫苗株传代,通过测定与减毒和毒力回复密切相关碱基的回复率,比较了利用原代猴肾(VK)细胞或Vero细胞制备的口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)的遗传稳定性.对21名未接种过OPV的健康婴儿,接种用VK或Vero细胞制备的OPV,其中三型病毒量之比为10:1:3.所用减毒株为1型LS-c,2ab/KP_2(P1/Sabin);2型 P712,Ch,2ab/KP_2(P2/Sabin);3型Leon 12a_1b/KP3(P3/Sabin).分别在接种后 2、7、14和 21天收集粪便样品.     

Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株间的重组病毒可作为候选Ⅲ型活疫苗株

本文报道在脊髓灰质炎病毒Mahoney株与和减毒Ⅰ型Sabin株间进行重组,应用感染性cDNA克隆构建了4个重组病毒:PV1(SM)IC-8b、PV1(SM)IC-11b、PV1(SM)IC-8a和PV1(SM)IC-11a。这4个重组病毒与其亲本株Mahoney和Ⅰ型Sabin株进行比较,包括猴神经毒力试验和体外表型特征试验。结果表明,主要编码病毒核壳蛋白的基因区段与神经毒力或减毒表型几乎没有关系,影响Ⅰ型病毒神经毒力或减毒表型的主要位点在基因组5′端非编码区。编码核壳蛋白的基因区域表现出对Ⅰ型病毒的神经毒力和减毒表型仅有微弱影响,     

从1名健康疫苗接种者分离到的重组3型／2型脊髓灰质炎病毒及其包含的嵌合核壳VP1的鉴定

从接种口服脊髓灰质炎疫苗后约12周的1名2岁男孩的粪便标本中分离到Sabin3／Sabin2／Sabin3(S3／2／3)型问重组脊髓灰质炎病毒。     

美国口服脊髓灰质炎疫苗:Sabin 3型疫苗病毒经肠道繁殖后的分子生物学特征

由于发达国家野毒株引起的脊髓灰质炎基本消灭,故人们的兴趣趋向该疫苗的遗传稳定性研究。作者选择8名2月龄婴儿,服用由猴肾细胞生产的Sabin三价活疫苗。然后采用指纹图谱、序列分析及猴体神经毒力试验对从粪便分离的3型病毒,着重研究了RNA5′端非编码区与减毒表型相关的472位核苷酸的突变。服苗后2天内全部标本均分离出3型病毒,个别于服后10小时即检出病毒。然而排毒持续时间不尽相同,短至1周,长达5周以上。许多资料表明,服苗者排出的3型病毒RNA5′端非编码区472位核苷酸突变与毒力     

抗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体的产生及其特性

作者分别用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株、MEF-1及Saukett株作免疫原,通过26次融合,用中和试验筛选出350株能稳定地分泌抗脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.其中分泌抗Ⅰ型病毒的McAb55株,Ⅱ型180株、Ⅲ型115株.先用各型的2个参考毒株检测McAb的中和活性,若为阳性,再与每个血清型已知特性的5个类疫苗株(VL)及5个     

脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫原性和保护性评价:预测疫苗效力的新方法[英]

用对脊髓灰质炎病毒敏感的转基因(Tg)小鼠评价脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)保护性的分析方法已经建立,并针对2型IPV进行了优化。美国食品和药物管理局Dragunsky等用这种方法来比较由减毒Sabin株生产的实验性IPV(sIPV)和由野生型(wt)脊髓灰质炎病毒MEF-1株生产的传统IPV(cIPV)的免疫     

又一种HIV疫苗将进入临床试验

美国加利福尼亚大学旧金山分校的研究人员研制出一种能防止猴免疫缺陷病毒( SIV)阴道传播的疫苗 ,SIV通常在暴露后 1年内引起艾滋病样疾病。目前正计划对该疫苗的 HIV形式进行临床试验。　　为研制 SIV疫苗 ,研究人员用脊髓灰质炎病毒 Sabin 1和 Sabin 2疫苗株构建了新型病毒载体 ,用以产生一系列含有 SIV pol、gag、env、nef和 tat重叠片段的新病毒。对 7只食蟹猴滴鼻接种两种含 2 0种转基因脊髓灰质炎病毒的混合物 ,5个月后加强 1次。由于 Sabin疫苗株太小 ,无法携带大部分 SIV基因组 ,因此 ,为包含多种SIV片段 ,采用多成分混合…     

脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫原性和保护性评价：预测疫苗效力的新方法

用对脊髓灰质炎病毒敏感的转基因（Tg）小鼠评价脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV）保护性的分析方法已经建立，并针对2型IPV进行了优化。美国食品和药物管理局Dragunsky等用这种方法来比较由减毒Sabin株生产的实验性IPV（sIPV）和由野生型（wt）脊髓灰质炎病毒MEF-1株生产的传统IPV（cIPV）的免疫原性和保护性。     

在分子遗传学基础上研制新脊髓灰质炎病毒疫苗

本文报道用电子计算机分析3个型的脊髓灰质炎病毒(PV)Sabin疫苗株和Ⅰ型Mahoney株[PVI(M)]毒粒RNA全部核苷酸序列的结果,并讨论病毒的基因结构与其生物学性质之间的关系。病毒基因组序列分析方法:从纯化的PV毒粒RNA合成病毒基因组的双链cDNA,经HindⅢ酶处理,并嵌入到PBR322克隆载体的适宜位置,筛选克隆,用Maxam等法测定克隆cDNA核昔酸序列,对非克隆DNA基因组的5′末端序列也作了测定。结果:Ⅰ型脊髓灰质炎Sabin株[PV1(sab)]的毒粒RNA分子有7,441个核苷酸长度,PV2(sab)有7,439个,PV3(sab)有7,434     

与口服Ⅲ型脊髓灰质炎减毒疫苗基因组非编码区一个核苷酸改变有关的神经毒力增强

对口服Ⅲ型脊髓灰质炎减毒疫苗(Sabin疫苗)病毒的原神经毒株P3/Leon/37、Sabin疫苗株本身P3/Leon/12a_1b和从服苗引起脊髓灰质炎死亡病例脑组织中分离的回复型毒株P3/119的核苷酸顺序研究表明,仅5'端非编码区472位上的一个核苷酸改变与神经毒力表型相关.在这一位置上P3/Leon/37和P3/119的472位是胞苷(C),而P3/Leon/12a_1b     

口服SabinⅢ型脊髓灰质炎疫苗减毒的基因基础

作者分析了SabinⅢ型脊髓灰质炎疫苗P3/利昂/12a_1b株及其神经毒子代P3/利昂/37株核酸序列中10个位点突变的差异并进行了比较.作者按常规方法从P3/利昂/12a_1b株和P3/利昂/37株中获得cDNA克隆,用限制性核酸内切酶切割对减毒表型重要的突变位点,经琼脂凝胶电泳和酚抽提纯化后,由T4DNA连接酶连接形成重组质粒转化到大肠杆菌JA221中,重组质粒经CsCl梯度离心     

通过在基因组5′端非编码区顺序中引入缺失构建低神经毒力脊髓灰质炎病毒

降低病毒复制中某些关键步骤的效率可能引起病毒减毒,作者用病毒株传染性cDNA克隆,在Ⅰ型脊髓灰质炎病毒的Mahoney和Sabin株的基因组的5'端非编码区742个核苷酸长的顺序中引入缺失,从而在体外构建低神经毒力脊髓灰质炎病毒株.     

脊髓灰质炎病毒嵌合体诱生广泛反应性HIV-1中和抗体

1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)包膜蛋白(env)具有广泛的序列异质性和抗原变异性,也存在着抗原性保守位点.理想的疫苗应含有此保守位点,以便诱生能与许多病毒分离株起反应的抗体.作者选用HIV-1跨膜糖蛋白gp41(组特异性抗原决定簇),以Ⅰ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株为表达载体(pCASl),用DNA重组技术构建成脊髓灰质炎病毒/HIV-1抗原嵌合体Sl/env/3.