胃肠道间质瘤中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达及其DNA甲基化

目的 检测胃肠道间质瘤(GIST)组织及瘤旁组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)的表达,并研究整体DNA甲基化。方法 选取包头医学院第二附属医院2017年1月至2020年1月内镜下切除的GIST组织30例及瘤旁组织30例,应用免疫组化和qRT-PCR方法检测GIST组织和瘤旁组织中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白和mRNA的表达情况;应用亚硫酸氢盐限制性酶切分析技术(COBRA)分析重复序列LINE-1的甲基化水平。结果 GIST中DNMT1 mRNA的表达与瘤旁组织比较,差异无统计学意义(P0.05);GIST中的DNMT3a mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中的DNMT3b mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001)。DNMT1蛋白在GIST及瘤旁组织中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=1.000);DNMT3a蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.045);DNMT3b蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.017)。GIST中LINE-1序列的甲基化水平低于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中LINE-1序列的非甲基化水平高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的异常表达与GIST的发生发展有密切关系,具体机制可能与降低整体甲基化水平有关。     

DNMT1、DNMT3b在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）和DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）在胃癌中的表达及其临床病理意义。方法应用免疫组化和RT-PCR方法检测93份胃癌组织、93份胃癌癌旁组织及90份正常胃组织中DNMT1和DNMT3b蛋白和mRNA的表达情况,分析两者与临床病理特征之间的关系。结果DNMT1蛋白在胃癌及癌旁组织阳性表达分别为88．17％和68．89％,明显高于正常胃组织内的阳性表达13．33％;DNMT3b在胃癌中阳性表达为18．28％和45．16％,明显低于正常胃组织内的阳性表达96．67％,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。且DNMT1和DNMT3b与胃癌的病理分化类型、肿瘤大小及胃液的幽门螺杆菌阳性有关（均P〈0．05）。结论DNMT1和DNMT3b的异常表达与胃癌的发生发展有紧密的关系,为基因治疗开辟新的途径。     

甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a及DNMT3b在子宫内膜异位症中的表达

目的:检测DNA甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a, DNMT3b在子宫内膜异位症(dendometriosis, EMs)异位内膜、在位内膜及正常对照子宫内膜的表达。方法:收集子宫内膜异位症巧克力囊肿20例为实验组,行输卵管吻合术者、宫颈病变行手术者20例为对照组,抽提总RNA,反转录制备cDNA。采用real-time RT-PCR 检测DNMT1,DNMT3a及DNMT3b基因的表达,并通过免疫荧光验证DNMTI在EMs异位内膜和在位内膜以及正常对照组子宫内膜中的表达。结果:Real-time RT-PCR检测表明DNMT1, DNMT3a和DNMT3b 在EMs异位内膜和在位内膜的表达较正常内膜低(P<0.05)。DNMT1, DNMT3a和DNMT3b在异位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.44,0.12和0.27;三者在在位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.27,0.13和0.15;三者在异位内膜与在位内膜的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测结果表明DNMT1蛋白在EMs患者异位内膜及在位内膜中表达显著降低。结论:DNMT1,DNMT3a 及DNMT3b在EMs中的异常低表达可能导致患者表观遗传学异常,参与EMs的发病。     

DNMT3a和HDAC2在胃癌组织中的表达及临床相关性分析

目的:检测DNA甲基转移酶3a(DNA methltransferase 3a,DNMT3a)和组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)在人胃癌组织中的表达,分析其与临床特征的相关性?方法:应用Western blot方法检测30例配对人胃腺癌和癌旁组织中DNMT3a和HDAC2表达的差异;免疫组织化学方法检测90例胃腺癌患者手术切除癌组织中DNMT3a和HDAC2的表达水平,并分析其表达与临床病理学指标的关系?结果:Western blot检测结果显示癌组织中DNMT3a和HDAC2蛋白表达量明显高于癌旁组织(P < 0.01);90例胃癌标本中,免疫组化结果显示DNMT3a阳性表达率为79%(71/90),HDAC2蛋白表达阳性率为86%(77/90),癌组织中DNMT3a表达强度与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关(P < 0.05),HDAC2表达强度与肿瘤浸润深度?病理学大体分型?TNM分期和淋巴结转移相关(P < 0.05)?DNMT3a与HDAC2在胃癌组织中的表达呈正相关(P < 0.05)?结论:DNMT3a与HDAC2是胃腺癌发生发展中的危险因素之一,一定程度上能反映胃腺癌的恶性程度,对预后的判断有一定价值,是一项有潜在价值的肿瘤相关标志物?     

DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒的构建及鉴定

目的:构建DNA甲基转移酶(DNMT1)、DNMT3b微干扰RNA(siRNA)重组质粒,并鉴定其正确性。方法:构建DNMT1siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒各4种,分别用BamHⅠ和PstⅠ酶切、测序、鉴定。结果:用BamHⅠ和PstⅠ进行双酶切后所有质粒均为阳性重组载体,每一种载体选择两个克隆进行测序鉴定,测序结果与插入的寡核苷酸的序列完全相符。结论:DNMT1 siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒正确,可用于后续实验。     

DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌组织和细胞中的表达及意义

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人膀胱癌组织和人膀胱癌细胞系BIU-87中的表达及意义.方法 用免疫组织化学法分别检测DNMT1和DNMT3b蛋白在24例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中的阳性表达率;用RT-PCR和Western blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌细胞系BIU-87中mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 在24例膀胱癌组织中,DNMT1阳性表达率为(75.29±2.51)%,而在10例正常膀胱组织中的阳性表达率为(12.61±1.57)%,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.05);DNMT3b在24例膀胱癌组织中的阳性表达率为(70.91±2.86)%,在10例正常膀胱组织中的阳性表达率仅为(10.16±1.22)%,二者差异亦具有显著性意义(P<0.05);在人膀胱癌细胞系BIU-87中,通过RT-PCR和Western blot均检测到DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白的表达.结论 在膀胱癌组织中,DNMT1和DNMT3b蛋白的表达较正常膀胱组织明显增加,说明DNMT1和DNMT3b的高表达可能与膀胱癌的发生发展有关;DNMT1和DNMT3b在人膀胱癌细胞系BIU-87中存在表达.     

HDAC1、DNMT1、RECK在宫颈癌中的研究进展

目的探讨HDAC1、DNMT1、RECK在宫颈癌中的表达及临床意义。方法采用论文回顾性调查,对国内外在HDAC1、DNMT1、RECK与宫颈癌方面的研究进行归纳、分析与整理。结果 HDAC1与DNMT1在宫颈癌组织中呈高表达,而RECK在宫颈癌组织中呈低表达。结论 HDAC1、DNMT1、RECK与宫颈癌的发生发展密切相关。     

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

肺癌组织中MTA1,HDAC1,HIF-1α蛋白表达的相关性研究

目的：探讨肺癌组织中转移相关蛋白1（MTA1）,组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）,低氧诱导因子（HIF-1α）蛋白表达三者之间的相互关系.方法：采用免疫组织化学染色方法检测59例肺癌组织中MTA1,HDAC1及HIF-1α的表达情况,并分析三者之间的相关性.结果：MTA1蛋白的表达与HIF-1α的表达呈显著正相关（r=0.418,P〈0.05）,且HIF-1α表达与MTA1/HDAC1染色水平明显相关.结论：HIF-1α,MTA1/HDAC1复合物在人类肺癌的发展中有重要意义.HIF-1α和HDAC1/MTA1可能是针对这种致死性疾病而发展的新治疗方式的一个有前途的靶点.     

人前列腺癌组织中DNMT1、GSTP1和APC的表达

目的:检测人前列腺癌(PCa)组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、谷胱甘肽s转移酶P1(GSTP1)和结肠腺瘤性息肉病基因(APC)的表达.方法:采用免疫组织化学方法检测56例前列腺癌(高分化癌9例、中分化癌17例、低分化癌30例)组织和10例良性前列腺增生(BPH)组织中DNMT1、GSTP1和APC的表达.结果...     

胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤组织DNMT1和HDAC1的表达及意义

目的：观察胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤（IPMNs）组织DNA甲基化转移酶1（DNMT1）和组蛋白去乙酰化酶（HDAC1）的表达，探讨其可能的临床意义。方法：免疫组织化学SP法检测DNMT1、HDAC1蛋白在48例IPMNs和54例胰腺导管腺癌（PDAC）组织中的表达并进行统计学分析。结果：DNMT和HDAC1阳性表达率在由正常胰腺导管→IPMA，IPMB→IPMC→PDAC的逐级进展过程中均逐渐升高，二者在IPMNs不同亚型中均有阳性表达。结论：DNMT1和HDAC1高表达是胰腺癌的早期事件，二者的表达水平能够反映IPMNs的恶性进展，但不能作为IPMNs的组织分型标志。     

胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤组织DNMT1和HDAC1的表达及意义

目的:观察胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMNs)组织DNA甲基化转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶(HDACI)的表达,探讨其可能的临床意义.方法:免疫组织化学SP法检测DNMT1、HDAC1蛋白在48例IPMNs和54例胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达并进行统计学分析.结果:DNMT和HDAC1阳性表达率在由正常胰腺导管→1PMA,IPMB→IPMC→PDAc的逐级进展过程中均逐渐升高,二者在IPMNs不同亚型中均有阳性表达.结论:DNMT1和HDAC1高表达是胰腺癌的早期事件,二者的表达水平能够反映IPMNs的恶性进展,但不能作为IPMNs的组织分型标志.     

Ⅱb/Ⅲa期非小细胞肺癌患者肿瘤RRM1蛋白的表达意义

目的：研究核苷酸还原酶M1亚基（Ribonucleotide reductase subunit M1,RRM1）蛋白在Ⅱb/Ⅲa期非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）术后患者中的表达及RRM1蛋白表达对辅助化疗无疾病生存期（Disease free survival,DFS）的影响。方法：采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶染色（Streptavidin-perosidase,SP）法回顾性检测100例Ⅱb/Ⅲa期NSCLC根治术后患者肿瘤组织RRM1蛋白表达,分析其表达状况与患者临床特征之间的关系,并使用SPSS 13.0进行统计,研究分析其对患者预后的影响。结果：（1）RRM1蛋白在不同的性别、吸烟状况、分化程度、病理分期及不同治疗组中表达无明显差异（P >0.05）,RRM1蛋白表达在鳞癌患者中高于非鳞癌患者,但无统计学差异（44.1%/30.3%,P=0.172）;（2）在入组患者中,RRM1蛋白低表达较RRM1蛋白高表达患者DFS时间明显延长（中位时间,14月/8月,P=0.019 4）;（3）亚组分析中,吉西他滨/顺铂方案辅助化疗组,鳞癌患者较非鳞癌患者DFS时间明显延长（中位时间,14月/11月,P=0.011 9）;接受吉西他滨/顺铂方案辅助化疗组的患者中,RRM1蛋白低表达患者DFS较高表达患者明显延长（中位时间,13月/6月,P=0.021 7）,但在单纯接受手术组的患者中不同RRM1蛋白表达的患者中DFS无明显差异（中位时间,15.5月/13月,P >0.05）;（4）COX多因素分析显示只有RRMl蛋白表达和病理类型是Ⅱb/Ⅲa期NSCLC的独立影响因素（P均<0．005）。结论：在Ⅱb/Ⅲa 期NSCLC患者中,RRM1蛋白可能是患者吉西他滨/顺铂辅助化疗方案疗效的预测因子。     

人DNMT3B1原核表达载体的构建和表达

目的构建人DNMT3B1原核表达载体,并进行初步表达。方法据Genebank中人DNMT 3B1 cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT 3B1,并将扩增产物克隆到原核表达载体PGEX-4T.3中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果 PCR扩增得到人DNMT 3B1的cDNA片段大小为2.6 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到原核表达载体PGEX-DNMT3B1I,PTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21（DE3）中高效表达,相对分子质量约为100 kd。结论成功构建了人DNMT3B1原核表达载体并完成其在E.coli BL21（DE3）中的诱导表达,为进一步在体外研究DNMT3B异构体提供了条件。     

IGF-1和IGFBP-3在肺癌患者血清中的表达及临床意义

目的:检测Insulin-like growth factor 1(IGF-1)与Insulin like growth factor binding protein 3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌患者血清中的表达,并探讨其在肺癌诊断及预后中的临床意义。方法:运用免疫放射法(immunoradiometric assay,IRMA)检测80例非小细胞肺癌患者,14例健康人外周血血清中IGF-1I、GFBP-3的水平。结果:肺癌组血清IGF-1表达显著高于健康组(P<0.01),IGFBP-3表达显著低于健康组(P<0.05),同时IGF-1/IGFBP-3升高(P<0.01)。IGF-1,IGF-1/IGFBP-3在有淋巴结转移、远处转移及TNMⅢ～Ⅳ的肺癌患者中明显高于无转移者及TNMI-II期者(P<0.05),而IGFBP3下降明显高于无转移者及TNMⅠ-Ⅱ期者(P<0.05)。肺癌组IGF-1与IGFBP-3浓度呈负相关P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者血清IGF-1I、GFBP-3表达在非小细胞肺癌的发生、发展及远处转移中有重要意义,检测其水平变化是肺癌的诊断、判断预后的有用的指标。     

肺癌组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白的表达

目的:研究肺癌组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白表达的情况。方法:采用免疫组化法检测67例肺癌患者的肺癌组织及癌旁正常组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白的表达,并分析Keap1、Nrf2和NQO1蛋白的表达与肺癌临床病理特征的关系。结果:Keap1蛋白在肺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期鳞癌和Ⅲ期、Ⅳ期腺癌中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);Nrf2蛋白在肺Ⅰ期鳞癌和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期腺癌中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05);NQO1蛋白在肺Ⅰ期鳞癌中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05),在Ⅱ期腺癌中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。3种蛋白的表达与肺癌患者的临床分期和是否侵及胸膜有关(P<0.05)。结论:肺癌组织中Keap1、Nrf2、NQO1蛋白表达异常,提示Keap1-Nrf2/ARE通路在肺癌的发生发展中可能发挥重要的作用。     

胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin的表达

目的:研究胃癌中miR-148a与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制?方法:通过qRT-PCR或Western blot检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics 提高miR-148a的表达水平,转染DNA化转移酶1(DNMT1)siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制?结果:与正常胃黏膜相比,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平在胃癌组织中显著下调,并与miR-148a的表达呈正相关?去甲基化药物5-aza-dC处理后,胃癌细胞MGC-803及SGC-7901中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升?胃癌细胞转染miR-148a mimics后,E-cadherin的蛋白表达水平明显提高,并且干扰DNMT1的表达后,E-cadherin的蛋白表达水平也显著上调?结论:miR-148a能通过DNMT1进一步调控E-cadherin的表达?     

肺癌组织中WISP-1 mRNA和蛋白的表达

目的:探讨人肺癌组织中WNT诱导的分泌型蛋白-1(WISP-1)基因的表达与临床病理因素的关系.方法:采用real-time PCR和免疫组化法检测原发性肺癌患者的癌组织和癌旁正常肺组织中 WISP-1 mRNA和蛋白的表达.结果:肺癌组织和正常肺组织中WISP-1 mRNA的相对表达量分别为(-3.09±3.53)μg/L和(-5.82±3.67)μg/L,WISP-1蛋白阳性率分别为63.3%和39.2%,肺癌组织中WISP-1 mRNA的相对表达量和蛋白阳性率均高于正常肺组织(P均＜0.05).肺癌组织中WISP-1 mRNA的表达与病理学类型、年龄有关(P＜0.05).多元线性回归分析显示:病理类型、年龄、家族史、转移、性别等对WISP-1 mRNA的表达有影响.结论:WISP-1基因可能是原发性肺癌发生发展过程中的重要生物学标志物,WISP-1基因表达的蛋白产物可作为临床干预治疗的重要靶蛋白.     

维生素C对牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6表达的影响

目的:探究维生素C对牙周膜干细胞组蛋白去乙酰化酶（HDAC）1和HDAC6表达的影响。方法:收取临床上因正畸需要拔除的无龋坏前磨牙,分离并培养人牙周膜干细胞。流式细胞仪测定牙周膜干细胞表面标志物。qPCR检测添加5、20、80、320 mmol/L维生素C后,人牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6 mRNA的表达情况。结果:维生素C促进HDAC1（F=45.76,P<0.01）、HDAC6（F=119, P<0.01）的表达,且随着浓度的增加,HDAC1、HDAC6表达显著增加。结论:维生素C促进牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6表达。     

不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达

目的:分析不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达水平。方法:选取114例结直肠癌前病变患者为研究对象,均行肠镜和病理检查,并检测血浆Septin9甲基化水平和病变组织CEA、DNMT3b蛋白水平,比较不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9甲基化水平和病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达水平。结果:肠镜和病理检查结果显示,114例结直肠癌前病变患者中,结直肠腺瘤43例,腺瘤病30例,炎症性肠病相关异型增生41例;腺瘤病患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白相对表达量均高于腺瘤及炎症性肠病相关异型增生患者,且腺瘤患者高于炎症性肠病相关异型增生患者,差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌前病变组织中CEA与DNMT3b蛋白均呈高表达,尤以腺瘤病患者最为明显,CEA蛋白表达部位以细胞膜为主,DNMT3b蛋白表达部位以细胞质为主。结论:不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平、病变组织CEA与DNMT3b蛋白相对表达量均存在差异,以腺瘤病患者最高,腺瘤患者次之,炎症性肠病相关异型增生患者最低。