半乳糖结合点封闭式免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的选择性杀伤研究

应用异型双功能基化合物N-羟琥珀酰亚胺碘乙酸酯(NHSIA)与蓖麻毒素(Ricin)反应,产生碘乙酰毒素,再与暴露巯基的单克隆抗体(McAb)-PDP反应,通过Sephadex G-200及Sepharose-4B分离,得到缺乏半乳糖结合点免疫毒素。该结合物对人肝癌细胞株Bel7404具有良好的导向杀伤作用,在10~(-9)mol/L浓度时杀伤率为44.1％,非常显著地高于对非靶细胞HeLa的杀伤力(P<0.01)。在10~(-7)mol/L浓度时,对HeLa的杀伤率为39.7％,0.1mol/L半乳糖能够降低这一杀伤作用。     

免疫毒素对胃癌细胞的特异杀伤

在成功构建３Ｈ１１单链抗体（ＳｃＦｖ）并证明其具有结合肿瘤细胞活性的基础上,将３Ｈ１１ＳｃＦｖ基因与绿脓杆菌外毒素ＰＥ３８基因重组,获得免疫毒素,并对其细胞毒活性进行了研究。根据３Ｈ１１ＳｃＦｖ的ＤＮＡ序列,设计合成一对引物,两端分别引入ＨｉｎｄⅢ和...     

Daunomycin免疫毒素对体外人癌细胞的杀伤作用

本文报告一种抗TF抗原的McAb 49H·8—顺式鸟头酰基—道诺霉素免疫配接物(49H.8-CA-DM)对体外某些人癌细胞相对特异的细胞毒性作用。     

抗直肠癌免疫毒素HCMcAb83：Ricin的制备及其特异杀伤作用

抗肿瘤单克隆抗体与各种毒蛋白或其A链结合,可制成对肿瘤细胞具有强烈杀伤作用的导向药物—免疫毒素(Immunotoxin,简称IT)。作者用50%硫酸铵分段盐析结合DE-52离子交换层析法从腹水中纯化了抗直肠癌单克隆抗体HCMcAb83(图1)。并借SPDP为交联剂,按     

紫杉醇免疫脂质体的制备及其对大肠癌细胞的杀伤作用

紫杉醇免疫脂质体的制备及其对大肠癌细胞的杀伤作用方瑾王芸庆宋今丹紫杉醇是近十年发现有希望的抗癌药之一，对多种肿瘤具有良好的治疗作用。为降低毒性，提高疗效，增加其主动靶向性，本文采用新型偶联剂ＳＡＴＡ（琥珀酰亚胺Ｓ－乙酰硫代乙酸脂），将抗人体大肠癌细胞...     

抗人结肠癌相关抗原单克隆抗体的制备及初步研究

目的：制备抗人结肠癌相关抗原的单克隆抗体4D10，运用组织芯片技术研究其与人结肠癌组织反应的情况。方汪：用人结肠癌细胞株LOVO免疫小鼠，用间接细胞ELISA和免疫组化的方法筛选抗结肠癌相关抗原的单抗。结果：获得一株能够稳定分泌抗人结肠癌相关抗原的杂交瘤细胞株。4D10能够与不同分期的结肠癌组织切片反应，且与正常组织和其他癌组织几乎不反应。结论：4D10对结肠癌的病理分期及预后结果都具有一定的临床参考价值。     

抗宫颈癌细胞株免疫毒素的研究

免疫毒素(Immunotoxin,IT)系指由具有导向能力的抗体和具有杀伤能力的毒素或药物偶联形成的复合物。这种“生物导弹”在肿瘤治疗上的作用已引起人们极大的重视,将免疫毒素引入宫颈癌的治疗国内外均未见报道。     

间接免疫毒素的制备及肝癌单抗介导杀伤瘤细胞作用

许多研究表明免疫毒素对瘤细胞的毒性不很稳定,且免疫毒素的制备过程是一项耗时费力的工作。为推广免疫毒素的应用,提高其对瘤细胞的杀伤作用,本试验制备了兔抗小鼠IgG抗体和蓖麻毒素A链的结合物即间     

含蓖麻毒素A链的抗膀胱癌免疫毒素的制备及其抗肿瘤活性

含蓖麻毒素Ａ链的抗膀胱癌免疫毒素的制备及其抗肿瘤活性赵 ，王玲，谢蜀生，龙振洲（北京医科大学免疫学教研室，北京１０００８３）膀胱癌属腔内肿瘤。用抗膀胱癌单抗与蓖麻责素（Ｒｉｃｉｎ，ＲＴ）全分子偶联制备的免疫毒素（Ｉｍ－ｒｎｕｎｏｔｏｘｉｎ，ＩＴ）与高?..     

磁性纳米颗粒对癌细胞杀伤有效

<正>据Apostolov A 2019年3月11日[Eur Phy J,2019,92(3):58-58.]报道,保加利亚研究人员利用磁性材料将热量传递给肿瘤,发现肿瘤细胞对破坏性热的特定吸收率取决于纳米粒子的直径和组成。传统的癌症治疗如胰腺、脑肿瘤或肝脏肿瘤等,采用化学治疗、放射治疗和手术治疗,但患者的存活率低。研究人员使用交变磁场激活靠近肿瘤细胞递送的磁性纳米颗粒。如果纳米粒子被肿瘤细胞很好地吸收而不是被健康组织中的细胞吸收,则热疗是有效的。因此,其有效性取决于具体的吸收率。研究人员研究了几种由铁氧体的氧化铁     

抗CMG2单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备鼠抗人毛细血管形态发生基因2(CMG2)单克隆抗体,并将其初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。方法重组表达CMG2胞外区肽段,免疫Balb/c小鼠,常规制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选目标克隆,制备小鼠腹水并经蛋白A亲和纯化获得相应抗体。间接ELISA法鉴定抗体的亚类类型及亲和力;抗原竞争性抑制实验鉴定抗体的特异性。用候选抗体建立流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹及免疫组织化学方法,初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。结果共获得3株针对CMG2胞外区的杂交瘤细胞株,其中以8F3单克隆抗体的亲和力和特异性最好,亚型为Ig G1。8F3单抗能用于胃癌细胞株CMG2表达的流式细胞术和免疫荧光检测以及胃癌组织的免疫组织化学检测。结论成功制备出高效价高特异性的鼠抗人CMG2单克隆抗体,为CMG2的基础和临床应用研究提供了有用工具。     

抗膀胱癌重组免疫毒素的可溶性表达及其抗肿瘤活性

目的 :构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的可溶性表达载体 ,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白。方法 :将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的基因片段 ,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK中 ,构建重组共表达载体pTMFK IT。以重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) Star,共表达目的蛋白与FkpA。表达产物以镍离子金属螯合层析柱及抗PE抗体亲和柱层析进行纯化。用ELISA检测免疫毒素的抗原结合活性 ,用噻唑蓝(MTT)法进行体外细胞杀伤实验。结果 :成功地构建了抗膀胱癌免疫毒素基因与FkpA基因的共表达载体 ,并获得纯度较高的目的表达产物。纯化后的表达产物与BIU 87膀胱癌细胞膜抗原具有良好的特异性结合活性 ,对BIU 87膀胱癌细胞有明显的体外特异性杀伤作用。结论 :获得了对膀胱癌细胞具有显著特异性杀伤活性的免疫毒素 ,为将其进一步应用于膀胱癌的靶向治疗研究奠定了基础     

SPD-TRAIL基因修饰间充质干细胞及其杀伤肺腺癌细胞的研究

目的通过基因工程手段构建了可高表达十二聚体TRAIL的间充质干细胞(MSC),以期为临床应用以MSC为载体的肿瘤靶向治疗提供新的实验方法。方法通过基因工程手段改造TRAIL基因序列,在其N-末端增加肺表面活性蛋白-D(SPD)结构域,使其形成稳定构象的十二聚体TRAIL蛋白,采用慢病毒载体基因转染间充质干细胞,得到可高表达TRAIL蛋白的SPD-TRAIL-MSC种子细胞。在此基础上对基因修饰细胞进行功能学检测。结果基因修饰后MSC流式表型、分化能力均未有显著变化;SPD-TRAIL-MSC及TRAIL-MSC(对照组细胞)均可高表达TRAIL蛋白,而SPD-TRAIL-MSC表达的TRAIL蛋白显著高于对照组细胞(P 0.001);通过肿瘤杀伤实验发现,SPD-TRAIL-MSC对肺癌细胞系A549具有更显著的增殖抑制(P 0.01)及促凋亡作用。结论SPD-TRAIL基因修饰的MSC可稳定高表达TRAIL蛋白,并对肺癌细胞系具有显著杀伤作用,为肺癌治疗提供了新的思路。     

阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究

目的:探讨阿托伐他汀对人NK 细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制。方法:不同浓度的阿托伐他汀作用于3 株结肠癌细胞(HCT-116、SW-480、Caco-2),CCK-8 法测定阿托伐他汀对结肠癌细胞生长抑制率的影响。SCGM 培养基体外扩增人NK 细胞,自动生化分析仪测定NK 细胞对3 株结肠癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测结肠癌细胞MICA/ B 的表达率。结果:(1)NK 细胞的培养:培养前CD3- CD56+的NK 细胞占外周血单个核细胞的比例为4.5%,培养10 d 时NK 细胞的比例增至93.1%。(2)阿托伐他汀对3 株结肠癌细胞生长抑制率的影响:阿托伐他汀作用48 h 后,在浓度5 ~40 μmol/ L 的4 个实验组中,HCT-116 细胞的生长抑制率较对照组升高(P<0.05)。作用96 h 后,在1.25 ~ 40 μmol/ L 的所有浓度组(6 个)中,HCT-116 细胞的生长抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。另外, HCT-116 细胞的生长抑制率随着阿托伐他汀浓度的升高而逐渐上升,相关分析显示,阿托伐他汀的浓度与HCT-116 细胞的生长抑制率呈正相关(r[48 h] = 0.13,r[96 h] = 0.22,P<0.05)。(3)NK 细胞经阿托伐他汀作用96 h 后,除浓度为20 μmol/ L 和40 μmol/ L 时抑制率高于对照组,其他各组对NK 细胞生长无明显影响。(4)阿托伐他汀对NK 细胞杀伤结肠癌细胞活性的影响:NK 细胞对HCT-116 细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度2.5 ~10 μmol/ L 组均显著高于对照组,对SW-480 的杀伤活性在5 ~20 μmol/ L 组较对照组明显升高,对Caco-2 的杀伤活性在2.5 ~20 μmol/ L 组显著高于对照组(P<0.05),其中同一浓度时对HCT-116 细胞杀伤作用最强。(5)阿托伐他汀对结肠癌细胞MICA/ B 表达的影响:在阿托伐他汀浓度2.5 μmol/ L 及5 μmol/ L 组,HCT-116 细胞MICA/ B 的表达率与对照组比较显著升高(P <0.05),在10 μmol/ L 及20 μmol/ L 组,SW-480 细胞MICA/ B 表达率显著高于对照组(P <0.05),在2.5 ~40 μmol/ L 组,Caco-2 细胞MICA/ B 的表达率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论:(1)阿托伐他汀能够呈剂量依赖性抑制结肠癌细胞HCT-116、SW-480 及Caco-2 的生长;(2)阿托伐他汀能够增强NK 细胞对结肠癌细胞的杀伤活性,可能与阿托伐他汀上调结肠癌细胞MICA/ B 的表达有关;(3)阿托伐他汀可以上调3 株结肠癌细胞MICA/ B 的表达率,提高结肠癌细胞的免疫原性。     

含有篦麻毒素和阿霉素的双弹头免疫毒素的构建及其杀伤活性

本文用化学偶联方法,将篦麻毒素(RiCin)及阿霉素(Adriamycin,Adr)同时偶联到抗人膀胱癌单克隆抗体分子上,构建了第一个具有“双单头”的抗肿瘤导向药物。经间接免疫荧光检测以及放射竞争结合试验证明,这个免疫毒素保持了原抗体活性的70%。体外杀伤试验的结果表明,这个双单头免疫毒素在0.1M半乳糖存在的条件下,对膀胱癌细胞BIU-87的体外杀伤作用比单抗-阿霉索强30000倍;比单抗-篦麻毒素强10倍。对无关的人直肠癌LoVo细胞无明显的杀伤作用。     

DCX的制备及其对肿瘤细胞的体外杀伤作用

本文报道粘质沙雷氏菌细胞壁含有大量ＤＣＸ成分，用多种有机溶剂反复抽提可使ＤＣＸ产率达８．５％。体外细胞毒实验发现微量ＤＣＸ（４ηｇ／ｍｌ）３～４ｈ即可直接杀伤ＳＭＭＣ－７７２１细胞株、ＨｅＬａ细胞株、ｋＭ３细胞株和Ｓ０肉瘤细胞株，而对纤维母细胞３Ｔ３株和大鼠肝细胞等则无明显的影响，表明ＤＣＸ能够直接杀伤体外培养的肿瘤细胞，是一种能够选择性地杀伤肿瘤细胞的生物制剂。     

抗人B因子单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

本文以人B因子免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得六株(A_2、B_2、B_7、C_9、F_9、F_(10))分泌抗人B因子单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞系。用ELISA检测细胞培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)—10~(-5)。抗原阻断试验结果,说明这些单抗是B因子特异的。经取代试验和ACH_(50)抑制试验,提示B因子具有耐热和不耐热二组抗原决定基。A_2和B_2针对不耐热抗原决定基,能抑制补体旁路途径活化;B_7和C_9针对耐热抗原决定基,不影响补体旁路途径活化;F_9和F_(10)则既能与耐热决定基发生反应,也具有抑制补体旁路活化的功能。用固相抗原竞争抑制试验,分析B因子的抗原表位,发现6株单抗可识别4个抗原决定基。这些单抗对B因子结构与功能的研究,B因子在补体旁路活化过程中与有关补体成分之间的相互关系的研究,都是很有意义的。