Ras/NF-IL-6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM-3中的IL-6生物学效应

目的　研究人骨髓瘤细胞KM 3中的IL 6信号转导途径与生物学效应之间的关系。方法　分别采用MTT、凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)、免疫沉淀方法检测IL 6对KM 3细胞生长状态的影响、参与IL 6信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在KM 3细胞中的诱导激活状态。结果　IL 6可明显促进KM 3细胞增殖 ,并可引发Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但Jak/STAT信号途径没有激活。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对KM 3细胞的生长促进作用     

酪氨酸蛋白激酶JAK1 在IL-6诱导JAK/STAT 途径活化中的作用

目的 酪氨酸蛋白激酶JAK1和转录因子STAT3为参与IL－6诱导的JAK／STAT信号转导途径的两种主要的信号蛋白分子。本研究试图揭示JAK1在JAK／STAT途径诱导活化中的作用。方法 分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）法观察IL－6刺激作用下STAT3和JAK1在3种骨髓瘤细胞系（XG－7，KM－3和Sko-007)中的诱导活化状态。采用RTPCR和Western-blot法检测这两种信号蛋白分子在以上3株靶细胞中的表达情况。结果 尽管SAT3在3株靶细胞中都能够正常表达，但只有Sko-007细胞中出现IL－6刺激作用下STAT3的诱导活化。在XG－7细胞中，既没有检测到JAK1的表达，也没有观察到JAK1的活化。尽管JAK1在KM－3细胞中能够正常表达，但不能被IL－6诱导激活。Sko-007细胞中则同时出现JAK1的表达及IL－6刺激后的诱导活化。结论 JAK1的正常表达和激活是IL－6刺激作用下JAK／STAT信号转导途径在骨髓瘤细胞中诱导活化的前提条件。     

IL—6诱导人骨髓瘤细胞表达CD45

目的：研究髓瘤细胞系Sko-007中IL－6信号途径活化与CD45诱导表达之间的关系。方法：首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测参与IL－6信号转导功能的转录因子STAT3和NF－IL－6在Sko-007细胞中的诱导活化情况并确定该细胞中IL－6信号转导途径;进而采用RT－PCR和FACS方法检测CD45mRNA和蛋白在IL－6刺激作用下的诱导表达情况;最后采用以上两种方法观察CD45诱导表达与I－6信号途径活化之间的关系。结果：①两种主要的IL－6信号转导途径JAK／STAT和Ras/NF-IL-6都能够在Sko-007细胞中诱导激活;②CD45mRNA和蛋白的表达量在IL－6刺激作用下明显增加;③STAT3反义表达质粒导入Sko-007细胞后JAK／STAT途径活化信号减弱,同时CD45mRNA诱导表达量下降。结论：Sko－007细胞中JAK／STAT途径的诱导激活介导了CD45的诱导表达。     

两条IL-6信号转导途径在人骨髓瘤细胞系U266中的相互拮抗作用

目的 研究人骨髓瘤细胞系U266中白细胞介素6（IL－6）信号转导途径及彼此之间的相互调控方式。方法 首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法观察分别参与两条IL－6信号转导途径的转录因子STAT3和NF－IL－6在U266细胞中的诱导激活状态并确定该细胞中的IL－6信号转导通路;继而采用转基因或化学试剂处理方法,特异性上调或下调其中一条IL－6信号途径的化,并同时观察另外一信号途径的激活状态。结果 1、以上两种转录因子分别参与的IL－6信号转导途径－－JAK／STAT和Ras/NF-IL-6,它们都能够在U266细胞中诱导激活;2、在高剂量IL－6（1－100ng/ml）刺激范围之内,一条IL－6信号途径活化水平的升高可同时导致另一条信号途径活化水平的下降。结论 在一定IL－6刺激剂量范围内,U266细胞中两条IL－6信号途径的诱导激活存在着相互拮抗作用。     

Ras/MAPK/NF-IL-6信号途径在IL-6促7TD1细胞增殖中的作用

为探讨IL 6促进 7TD1细胞增殖的机制 ,本研究采用凝胶阻滞电泳方法比较IL 6对核因子STAT3(代表JAK STATs通路 )、NF IL 6 (代表Ras/MAPK/NF IL 6通路 )的激活方式 ,以反义寡核苷酸 (ASODNs)阻断IL 6对核因子的激活 ,检测ASODNs对IL 6效应的影响 ,并采用MEK特异性抑制剂PD0 980 5 9阻断Ras/MAPK通路的激活 ,观测Ras/MAPK通路的功能意义。结果发现STAT3与NF IL 6都可被低剂量IL 6激活 ,但NF IL 6激活后持续的时间比STAT3长。STAT3ASODN对IL 6效应的影响很弱 ,而NF IL 6ASODN可显著拮抗IL 6的促增殖作用。PD0 980 5 9的作用同NF IL 6ASODN相似。这些结果说明在 7TD1细胞中 ,Ras/MAPK/NF IL 6途径介导IL 6的促增殖信号。     

IL-13对肾小球系膜细胞NF-κB的抑制作用

为了观察IL 13对肾小球系膜细胞核因子 κB (NF κB )活性的影响 ,探讨IL 13抑制免疫及炎症反应的分子机制。体外培养的大鼠系膜细胞经LPS激活及不同浓度IL 13处理后 ,利用凝胶电泳迁移率试验 (EMSA )检测系膜细胞NF κB的活性。在含 5 %FCS的RPMI 1640培养状态下的肾小球系膜细胞存在一定的NF κB活性 ;LPS激活后系膜细胞NF κB活性显著增高 ;IL 13可抑制基础状态及LPS激活的系膜细胞NF κB活性。结果表明 ,IL 13可抑制体外培养系膜细胞的NF κB活性。从而抑制NF κB参与调控的细胞因子的表达而最终对系膜细胞炎症效应产生调节作用。     

IL-1受体相关激酶1和2协同调控IL-1诱导的NF-κB活化

目的　研究白细胞介素 1受体相关激酶 1(IRAK 1)和IRAK 2在白细胞介素 1(IL 1)诱导核因子 κB(NF κB)活化中的作用。方法　Lipofectin介导反义IRAK 1寡核苷酸和反义IRAK 2寡核苷酸转染HepG2细胞。用逆转录PCR法检测IRAK 1mRNA和IRAK 2mRNA表达水平 ,以夹心ELISA法检测NF κB的活化。结果　 (1)反义IRAK 1寡核苷酸和反义IRAK 2寡核苷酸分别抑制IRAK 1mRNA和IRAK 2mRNA表达。 (2 )反义IRAK 1寡核苷酸或反义IRAK 2寡核苷酸部分抑制NF κB活化 ,最高抑制率分别为 (34 6± 0 9) %和 (5 4 5± 0 2 ) %。 (3)反义IRAK 1寡核苷酸与反义IRAK 2寡核苷酸共转染HepG2细胞对NF κB的抑制作用明显增强 ,抑制率达 (77 5± 0 9) %。结论　IRAK 1或IRAK 2调控NF κB活化 ,但不能完全激活NF κB ;IRAK 1和IRAK 2协同调控IL 1诱导的NF κB活化。     

IL-6抑制地塞米松诱导的人骨髓瘤细胞凋亡

目的 :研究地塞米松 (Dexamethasone ,DEX)诱导人骨髓瘤细胞系Sko 0 0 7凋亡的分子机制及IL 6对此凋亡作用的抑制效应。方法 :MTT法观察DEX对Sko 0 0 7细胞生长的影响 ;碘化丙腚 (propidiumiodide ,PI)染色和流式细胞术分析Sko 0 0 7细胞经DEX处理后的凋亡情况 ;免疫印迹法检测Bcl 2家族抗凋亡蛋白———Bcl 2、Bcl XL 和Mcl 1在Sko 0 0 7细胞凋亡过程中的表达情况。结果 :DEX能够抑制Sko 0 0 7细胞增殖并诱导其发生凋亡 ;同时促进胞内Bcl 2降解。IL 6抑制DEX诱导的Sko 0 0 7细胞凋亡 ,并使Bcl 2表达水平恢复。结论 :IL 6可通过调节Bcl 2表达而实现其对DEX诱导的骨髓瘤细胞凋亡的抑制作用。     

NF-κB的生物学功能

NF κB因其广泛参与机体的免疫及其它应激反应而受到人们的关注 ,其常见的形式是由p5 0和p6 5组成的异源二聚体。细胞受到外部因素刺激后 ,NF κB由细胞质转移到细胞核中 ,并发生磷酸化和乙酰化 ,启动相关基因的表达。目前研究表明受NF κB调节的基因有 2 0 0多种 ,其激活因子不少于 15 0种 ,所以对NF κB在各种条件下的激活过程及信号传导网络的研究具有重要的意义。本文综合了当前关于NF κB研究的最新进展 ,着重阐述了由TNF α、IL 1及LPS刺激而引起NF κB激活的信号传导通路 ,并进一步阐述了其在人类某些疾病当中的生物学功能     

IL-1R相关激酶-1和磷脂酰肌醇3-激酶协同调控IL-1诱导的NF-κB活化

为研究IL 1R相关激酶 1(IRAK 1)和磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI 3 激酶 )在IL 1诱导NF κB活化中的作用 ,本文采用Lipo fectin介导反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸转染HEpG2细胞后 ,用Western杂交检测IRAK 1和PI 3 激酶表达水平 ,以SandwichELISA法检测NF κB的活化。结果表明 ,①反义IRAK 1寡核苷酸和反义PI3 激酶寡核苷酸分别抑制IRAK 1和PI3 激酶表达 ;②反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸部分抑制NF κB活化 ;③与反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸单独转染HEpG2细胞相比 ,反义IRAK 1寡核苷酸和反义PI 3 激酶寡核苷酸共转染HEpG2细胞对NF κB的抑制作用明显增强。表明IRAK 1或PI3 激酶调控NF κB活化但不能完全激活NF κB ,IRAK 1和PI3 激酶在调控NF κB活化时协同作用。     

cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用

目的 研究ＰＫＡ途径激活（或胞内ｃＡＭＰ水平升高）后对人骨髓瘤细胞的ＩＬ－６信号转导功能及细胞生长的影响。方法 采用ＰＫＡ途径激动剂Ｆｏｓｋｏｌｉｎ（ＦＫ）和ｃＡＭＰ类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ刺激人骨髓瘤细胞骨－Ｓｋｏ－００７,分别通过ＭＴＴ方法和凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ,ＥＭＳＡ）方法检测ＦＫ和８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对Ｓｋｏ细胞的生长及其Ｉ     

未知酪氨酸激酶对骨髓瘤细胞中IL—6诱导Ras／MAPK／NF—IL—6途径活化的调节作用

目的 研究两条主要的IL-6信号转导途径-JAK/STAT和Ras/MAPK/NFG-IL-6在人骨髓瘤细胞系KM-3中的诱导活化情况和调控机制。方法 首先分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）方法检测参与 IL-6信号转导功能的转录因子（STAT3、NF-IL-6）和蛋白激酶（JAK1、MAPK）在KM-3细胞中的诱导活化情况。然后采用特异性酢氨酸蛋白激酶 抑制剂Genistein作用于KM-3细胞,观察酢氨酸磷酸化作用对KM-3细胞中IL-6信号转导功能的影响。结果 IL-6刺激后,KM-3细胞中只出现了Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径的诱导激活,而JAK/STAT途径则不参与IL-6在KM-3细胞中的信号转导功能。Gwenistein的作用可明显抑制Ras/MAPK/NF-IL-6途径的活化。结论 一种目前尚无法确定的非JAK1酪氨酸蛋白激酶可参与并调节Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径在KM-3细胞中的诱导活化。     

IL—6在人骨髓瘤细胞U266中的信号转导途径与细胞增殖促进效应之间的关系

目的：研究人骨髓瘤细胞U266中IL－6信号转导途径激活与细胞增殖促进效应之间的关系。方法：首先分别采用MTT、凝胶阻滞电泳（electrwophoretic mobility shift assay, EMSA）和免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）方法观察IL－6对U266细胞生长的影响及两条IL－6信号转导途径在U266细胞中的诱导激活状态;然后采用化学试剂处理或转基因方法观察信号途径活化状态变化与IL－6效应变化之间的关系。结果：IL－6可明显促进U266细胞增殖,并在不同剂量下诱导JAK／STAT和Ras/NF-IL-6途径活化;Ras途径活化被特异性上调和下调时,IL－6对U266细胞的生长促进效应分别得以增强和减弱;而JAK／STAT途径活化受抑时,IL－6的促细胞生长效应反而加强。结论：Ras途径的诱导激活介导了IL－6对U266细胞的增殖促进效应;而JAK／STAT途径活化介导了与IL－6促细胞增殖相反的生物学效应。     

Molecular events underlying interleukin‐6 independence in a subclone of the CMA‐03 multiple myeloma cell line

We explored the molecular mechanisms involved in the establishement of CMA‐03/06, an IL‐6‐independent variant of the multiple myeloma cell line CMA‐03 previously generated in our Institution. CMA‐03/06 cells grow in the absence of IL‐6 with a doubling time comparable with that of CMA‐03 cells; neither the addition of IL6 (IL‐6) to the culture medium nor co‐culture with multipotent mesenchymal stromal cells increases the proliferation rate, although they maintain the responsiveness to IL‐6 stimulation as demonstrated by STAT1, STAT3, and STAT5 induction. IL‐6 independence of CMA‐03/06 cells is not apparently due to the development of an autocrine IL‐6 loop, nor to the observed moderate constitutive activation of STAT5 and STAT3, since STAT3 silencing does not affect cell viability or proliferation. When compared to the parental cell line, CMA‐03/06 cells showed an activated pattern of the NF‐κB pathway. This finding is supported by gene expression profiling (GEP) analysis identifying an appreciable fraction of modulated genes (28/308) in the CMA‐03/06 subclone reported to be involved in this pathway. Furthermore, although more resistant to apoptotic stimuli compared to the parental cell line, CMA‐03/06 cells display a higher sensibility to NF‐κB inhibition induced by bortezomib. Finally, GEP analysis suggests an involvement of a number of cytokines, which might contribute to IL‐6 independence of CMA‐03/06 by stimulating growth and antiapoptotic processes. In conclusion, the parental cell‐line CMA‐03 and its variant CMA‐03/06 represent a suitable model to further investigate molecular mechanisms involved in the IL‐6‐independent growth of myeloma cells. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.