不同品种灵芝中三萜类化合物的比较研究

本研究利用HPLC对同一灵芝菌种不同生长阶段及不同品种灵芝子实体中三萜类化合物的含量和图谱进行了分析.结果表明在液体发酵7天左右的灵芝菌丝体中灵芝三萜类化合物的含量极低,而不同生长阶段的灵芝子实体中的三萜类化合物的变化较小,孢子粉中三萜类化合物的含量较子实体中低.不同品种的灵芝子实体中三萜类化合物的种类和含量存在差异,黑芝中几乎不含三萜类化合物.     

2个灵芝菌株子实体和孢子粉活性成分比较研究

目的:研究分析2个灵芝菌株(A1、A2)子实体和孢子粉中活性成分含量差异,筛选出适宜北京地区栽培的优质高产灵芝菌株。方法:采用分光光度法及超高效液相色谱(UPLC)法分别对2个灵芝菌株子实体和孢子粉中多糖、总三萜和3种灵芝酸(灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2)含量进行检测。结果:灵芝A2菌株孢子粉中多糖含量显著高于A1菌株,A1菌株子实体所含总三萜和3种灵芝酸含量均高于A2菌株。结论:综合比较分析,在北京地区以获得优质灵芝子实体为目的,栽培A1菌株更适合,以孢子粉为主要生产目的,适宜栽培A2灵芝菌株。     

灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和VEGF表达的比较研究

目的:比较灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用C_(57)BL/6小鼠左前肢腋下皮下接种建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉各设3、2、1g/kg三个剂量组,连续灌胃给药18天。给药期间观察小鼠体重,记录肿瘤体积变化;末次给药后处死,取肿瘤、胸腺和脾脏,称重并计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数;HE染色观察肿瘤组织病理状况;Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤组织VEGF表达。结果:灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉均有抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的作用,但破壁灵芝孢子粉(3、2g/kg)在提高荷瘤小鼠体重、脾指数、抑制肿瘤生长方面的效果优于灵芝孢子粉;破壁灵芝孢子粉能诱导肿瘤细胞凋亡,降低VEGF蛋白表达。结论:破壁灵芝孢子粉抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的效果优于灵芝孢子粉,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、降低VEGF表达有关。     

灵芝孢子粉对HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响

目的:观察灵芝孢子粉对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法研究灵芝孢子粉对HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果:MTT实验结果表明高剂量的灵芝孢子粉对HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,2500μg/m l的灵芝孢子粉作用于HepG2细胞72h后,对细胞生长的抑制率最高可达51.4%;流式细胞术实验结果表明,灵芝孢子粉浓度为3mg/m l时,可使肿瘤细胞生长G2期减小,浓度为6 mg/m l时,可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论:灵芝孢子粉具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,并可作用于细胞周期的G2期,高剂量的灵芝孢子粉还可使肿瘤细胞发生凋亡。     

灵芝孢子粉提取物对裸鼠移植性人肝癌血管生成的抑制作用

目的:研究灵芝孢子粉提取物对裸鼠移植性人肝癌血管生成的影响,并初步探讨其抑瘤机制.方法:建立裸鼠移植性人肝肿瘤模型,采用随机区组设计法随机分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组及灵芝孢子粉提取物组,观察裸鼠肿瘤生长.采用苏木精-伊红染色法、SP免疫组织化学法及病理Imagepro Plus 5.0彩色图像定量分析法检测裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD).结果:灵芝孢子粉为2.1 g生药/kg时,对裸鼠移植瘤的抑制率为57.0%,与空白对照组比较有极显著差异(P<0.01).镜下观察,灵芝孢子粉组与空白对照组相比,肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.灵芝孢子粉组VEGF、MVD表达水平较空白对照组有明显下降.结论:高浓度及大剂量的灵芝孢子粉对肝肿瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,其机制可能与对VEGF表达的抑制有关.     

光质对灵芝生长及抗氧化酶系统的影响

目的 以飞船搭载的灵芝Ganoderma lucidum菌株为材料,研究不同光质对灵芝生长形态及抗氧化酶活性的效应,找出适于灵芝生长的最佳光质,为光质选择提供理论依据.方法 栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化,并测定抗氧化酶体系中主要酶活性.结果 不同光质处理的弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹数与对照差异显著.不同光质处理对灵芝子实体产量和灵芝孢子粉产量均有影响.红色、蓝色光质处理提高了过氧化物酶( POD)、过氧化氢酶(CAT)活性.蓝色光质处理提高了可溶性蛋白量,并且使丙二醛(MDA)在生长末期保持相对较低水平,从而延缓了灵芝子实体衰老.绿色、黄色光质抑制了抗氧化酶活性,导致灵芝子实体可溶性蛋白量下降及MDA量上升,加速了灵芝子实体的衰老过程.结论 蓝色光质可以使灵芝子实体维持较高的抗氧化酶水平,促进可溶性蛋白合成,从而增强灵芝代谢,延缓灵芝衰老.     

赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究

目的:揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法:收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体,分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果:全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%~2.25%,总三萜为1.36%~3.15%,总蛋白为0.74%~1.91%;浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%~1.42%,0.44%~1.42%,1.82%~3.67%,未破壁孢子粉分别为0.41%~0.91%,0.09%~0.12%,0.78%~0.90%,破壁孢子粉分别为1.03~2.25%,1.89%~3.15%,0.96%~1.04%。结论:全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异,浙江产区总多糖和总三萜含量较高,福建产区总蛋白含量较高;浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高,沪农1号总多糖含量较高;破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体,子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖,菌盖中总三萜含量显著高于菌柄;2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位,但总三萜含量大多低于1潮;孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。     

变温压差脆化破壁灵芝孢子技术考察

目的:研究灵芝孢子破壁的工艺,提高灵芝孢子粉破壁率。方法:以灵芝孢子粉的含水量和影响破壁的硬度为指标,选取脆化温度、抽空干燥温度、抽空干燥时间为考察因素,采用L9(34)正交设计优选变温压差脆化条件;制得的脆化样品与超微粉碎进行破壁率比较。结果:最佳脆化条件为脆化温度100℃,抽空干燥温度80℃,抽空干燥时间1 h。在此条件下,灵芝孢子粉含水量3.0%,破壁硬度3.7 kg。脆化、干燥后的灵芝孢子粉经超微粉碎50 min,破壁率可达99.5%。结论:变温压差脆化结合超微粉碎技术可提高灵芝孢子破壁率。     

灵芝孢子粉化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物（Q-Marker）预测分析

灵芝孢子粉是灵芝的生殖细胞，包含灵芝所有的化学成分，主要含有灵芝三萜类、多糖类、甾体类、脂肪酸类和蛋白质类等多种化合物。灵芝孢子粉具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、保护心血管、保肝护肝等药理作用。《中国药典》2020年版对灵芝孢子粉的质量控制标准尚未明确规定，就灵芝孢子粉化学成分和药理作用研究进展进行综述，并基于质量标志物（quality marker，Q-Marker）理论，从植物亲缘性与特有性、有效性、可测性、临床应用、可入血成分等方面进行Q-Marker预测分析，初步推测多糖类、灵芝酸、甾醇类（麦角甾醇）、不饱和脂肪酸（油酸）等成分为其Q-Marker，为规范灵芝孢子粉质量研究和建立、完善灵芝孢子粉质量标准提供参考。     

灵芝生长过程中灵芝多糖含量变化规律研究

目的：对灵芝人工袋料栽培生长过程中灵芝多糖的含量变化情况进行跟踪测量，研究灵芝多糖在灵芝生长过程中的含量变化规律。方法：采用硫酸一苯酚法对不同生育时期的灵芝培养基和子实体样品中灵芝多糖的含量进行测定，比较不同生育时期灵芝多糖含量的变化规律。结果：在灵芝培养基中，随着灵芝菌丝的生长和成熟，灵芝多糖的含量逐步增加，直到开伞期达到最高值，从孢子弹射期后，灵芝多糖含量急剧下降。在灵芝子实体中，从灵芝现蕾开始，灵芝多糖含量逐步增加，到孢子弹射前达到最高值，孢子弹射后，含量急剧下降。从子实体和培养基中灵芝多糖含量的对比情况来看，在孢子弹射前，子实体中灵芝多糖含量远高于培养基；但在孢子弹射后，子实体和培养基中灵芝多糖含量均急剧下降，二者的灵芝多糖含量没有极显著差异。结论：在灵芝生产中，应该选择在开伞期后、孢子弹射前采收子实体为宜。这时采收的灵芝子实体产品灵芝多糖含量最高，品质最好。将灵芝采收后的培养基用于灵芝多糖的提取，进行合理的开发利用，可以大力提高灵芝生产的经济效益。     

光质对灵芝生长与灵芝多糖含量的影响

目的:研究不同光质对灵芝生长发育和灵芝多糖含量的影响,为灵芝优质高产栽培提供理论依据。方法:栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化并测量多糖含量。结果:不同光质处理形态上弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹的数目与对照差异显著,灵芝多糖含量出现最高值时期不同。蓝色光质处理在现蕾期、开伞期、弹孢后期多糖含量均高于对照,且差异显著。绿色光质处理有助于生长末期多糖积累。不同光质处理对灵芝子实体产量与灵芝孢子粉产量均有影响。结论:对照处理灵芝子实体产量高,性状好;蓝色光质处理可以提高灵芝多糖含量。     

Comparative studies on the immunomodulatory and antitumor activities of the different parts of fruiting body of Ganoderma lucidum and Ganoderma spores

Ganoderma lucidum (GL, Lingzhi) has been suggested as a candidate for immunomodulation and cancer treatment. The present study aimed at comparing the different parts of the fruiting body (whole fruiting body, pileus and stipe) of GL as well as Ganoderma spores (sporoderm-broken and -unbroken), with regard to their antitumor and immunomodulatory activities in S-180 sarcoma-bearing mice. The hot water extracts of different parts of GL or the Ganoderma spores were orally administered to the sarcoma-bearing mice. The results showed that GL whole fruiting body, stipe and sporoderm-broken spore possessed stronger inhibitory activities on sarcoma growth when compared with the pileus extract. Higher immunomodulatory activities in terms of enhancing the proliferative responses and the cytokines (IFN-gamma, IL-4 and IL-6) production of spleen lymphocytes were also found in GL stipe and sporoderm-broken spore treatment groups. The sporoderm-broken spores had higher stimulatory effects on mitogen-activated spleen lymphocytes of healthy mice than those of sarcoma-bearing mice. In addition, the immunostimulatory activities of GL hot water extracts and Ganoderma spores were shown to be comparable; hence the latter did not show superiority in efficacy. This is the first comparative study on the immunomodulatory activities of Ganoderma spores and the fruiting body extracts.     

赤芝不同部位油脂组成分析

收集不同产地、品种、采收部位和潮次的赤芝孢子粉和子实体,对其含油率、脂肪酸组成进行测定分析,结果表明:全国不同产地的破壁孢子粉含油率为23.61%~34.17%;浙江主栽赤芝品种子实体含油率为0.81%~1.87%,未破壁孢子粉为0.07%~0.24%,破壁孢子粉为27.54%~34.17%,赤芝孢子粉含油率远远大于子实体,破壁加工可提高孢子粉中油脂提取率150~340倍。赤芝孢子油主要由不饱和脂肪酸组成,其中油酸和亚油酸质量分数分别为53.26%~58.16%,10.69%~16.87%;偏最小二乘法判别分析显示,孢子粉和子实体的脂肪酸组成存在明显差异,通过测定脂肪酸组成,尤其是油酸、硬脂酸、棕榈酸的含量,可以鉴别赤芝类产品来源的组织类型。研究还发现同一品种赤芝1潮孢子粉和子实体中含油率和脂肪酸含量均高于2潮。     

Inhibitive effect on apoptosis in splenic lymphocytes of mice pretreated with Lingzhi (Ganoderma Lucidum) spores

Objective

To investigate how the pretreatment of mice with Ganoderma spores affected the apoptosis of their splenic lymphocytes induced by dexamethasone after 19 days treatment.

Methods

Sixty Kunming mice were randomly divided into six groups: blank control groupdrenched with normal saline; a drug control group drenched with 150 mg/mL Ganoderma spores; a model group treated with saline; a low dose group with 50 mg/mL Ganoderma spores; a moderate dose group with 100 mg/mL Ganoderma spores; and a high dose group with 150 mg/mL Ganoderma spores. The effect of Ganoderma spores on apoptosis in spleen lymphocytes was analyzed. All groups were treated for 19 days. On day 20, the model group and the 3 treatment groups were intraperitoneally injected dexamethasone to induce apoptosis. Splenic index and apoptosis indes were employed to measure cell apoptosis.

Results

The results showed that Ganoderma spores reduced the splenic index to different degrees in each group and the best effect was seen in the high dose group (P<0.05). Terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated 2′-Deoxyuridine 5′-Triphosphate nick end labeling staining revealed that the apoptotic index in all groups administered Ganoderma spores differed significantly from the model group, and a dose-response was observed. Flow cytometric analysis indicated that spleen lymphocyte apoptosis in the model group was extensive. Each dose of Ganoderma spores inhibited dexamethasone-induced apoptosis in spleen lymphocytes, and a dose-response was observed as well. The highest dose of Ganoderma spores decreased Malondialdehyde content in serum induced by dexamethasone (P<0.05).

Conclusion

The findings imply that the pretreatment of the mice with Ganoderma spores could reduce the apoptosis rate induced by dexamethasone in their splenic lymphocytes.     

不同生长阶段灵芝中微量元素与重金属含量分析

利用ICP-MS、AFS和AAS对同一菌种灵芝深层发酵菌丝体、不同生长阶段的子实体及孢子粉中微量元素与重金属含量进行分析。发酵菌丝体、子实体及孢子粉中均含有生物必需微量元素和重金属,以孢子粉中含量相对较高。硒的含量在各个阶段几乎相同,而锗的含量则呈现生物富集的现象。     

灵芝破壁孢子与不破壁孢子的显微镜观察与生化测定比较研究

首次对灵芝破壁孢子与不破壁孢子进行了初步的比较研究。显微镜下观察，破壁孢子粉与不破壁孢子粉的形态明显不同，采取水提、酸提、水煮三种不同的提取方式，破壁孢子粉提取液中还原糖与多肽含量都明显高于不破壁孢子粉，结果提示经过破壁处理后，灵芝孢子中的化学成分更容易被提取出来。     

Anti-angiogenic and inhibitory activity on inducible nitric oxide production of the mushroom Ganoderma lucidum

Fresh fruit bodies of Ganoderma lucidum were extracted with 70% ethanol at room temperature. The extract (GL) showed significant anti-angiogenic activity, which was detected using a chick embryo chorioallantoic membrane assay. GL significantly inhibited LPS-induced NO production in RAW 264.7 macrophages. These results support the anti-tumor effect of Ganoderma lucidum.     

稀土对灵芝生长影响的初步研究

 目的：研究在灵芝培养料中添加稀土元素对灵芝的菌丝生长、子实体的鲜重和干重的影响。方法：采用稀土拌料的方法。结果：稀土的浓度对灵芝菌丝的生长均有一定程度的抑制作用,抑制率在7.49％～10.96％之间;稀土浓度对灵芝的菌丝均有增白作用,洁白度随稀土浓度的增加而降低。稀土在100,150μg·g^-1时,灵芝子实体的干重和鲜重有显著增加。在50μg·g^-1时,虽灵芝子实体的鲜重有所减少,但其干重却增加2.0％。结论：稀土浓度在100～150μg·g^-1时,灵芝的产量增加显著,可供生产使用。