角质形成细胞凋亡与银屑病病情的关系

目的：探讨角质形成细胞（KC）凋亡与银屑病病情的相关性。方法：比色法检测30例银屑病患者皮损中活性半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）的含量;TUNEL技术检测KC凋亡并计算凋亡指数（AI）;采用银屑病皮损面积和严重性指数（PASI）及局部病变的严重程度评分对其中26例寻常型银屑病患者予以病情程度评分。结果：30例银屑病中,脓疱型银屑病AI高于寻常型银屑病（P〈0．05）;26例寻常型银屑病患者中,进行期患者AI、活性caspase-3的含量均显著高于静止期和消退期（P〈0．05）;而静止期和消退期患者之间差别无统计学意义（P〉0．05）;PASI评分与AI及活性caspase-3含量之间均无直线相关性（P〉0．05）;银屑病皮损局部病变的严重程度评分与AI、活性caspase-3含量均呈直线正相关（P〈0．05）。结论：KC凋亡的程度与银屑病的不同型别、疾病的不同分期有关,与局部病变的严重程度有关,与银屑病病情严重性指数无关。     

芳维A酸乙酯对银屑病皮损角质形成细胞凋亡和bax表达的影响

目的：探讨芳维A酸乙酸通过诱导细胞凋亡在银屑病治疗中发挥的作用,方法：用脱氧核苷转移酶介导的d-UTP－生物素缺口末端标记技术（TUNEL法）和免疫组化方法检测芳维A酸乙酯治疗前和治疗15天,治疗30天时银百闻不如一见 皮损细胞凋亡和bax的表达,结果：芳维A酸乙酯治疗第15天和第30天,银屑病皮损细胞凋亡及bax表达均明显增加,图像定量分析和治疗前相比,均有显著性增加（P＜0．01）,细胞凋亡的程度与bax表达高度相关（ r=0.91),结论：诱导细胞凋亡可能是芳雅A酸乙酸治疗银屑病的重要机制之一,其作用与诱导凋亡基因bax的表达有关。     

角质形成细胞凋亡的研究进展

角质形成细胞的凋亡在维持皮肤正常生理功能过程中起着重要作用，其发生与发展受到多种因素的影响；皮肤中角质形成细胞的凋亡与增殖处于一种动态平衡，如平衡被打破则出现多种与之相关的皮肤疾病。现主要就角质形成细胞凋亡的途径及其调控，并结合临床常见的与角质形成细胞凋亡相关皮肤病研究进展进行综述。     

组胺对人角质形成细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的探讨组胺对体外培养人角质形成细胞（HKC）增殖、凋亡和分化的影响及其机制.方法采用MTT法和蓝染色法检测组胺对HKC体外生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡,细胞DNA梯度降解法检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针技术检测HKC胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）,SABC免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10（K10）及内披蛋白表达.结果高浓度组胺抑制HKC生长,以10^-4 mol/L抑制率最大（细胞存活率65.6%）;低浓度组胺则促进HKC生长,以10^-8mol/L作用显著（细胞存活率130.7%）.10^-4mol/L组胺致HKCG0/G1期比例增高30.97%,S期比例减少73.81%,抑制G1/S期转换,并明显促进细胞凋亡,早期凋亡率18.64%明显高于对照组（5.60%,P＜0.05）.10^-4mol/L组胺使HKC[Ca^2＋]i上升58.9%,H2组胺受体拮抗剂西咪替丁则使[Ca^2＋]i下降24.5%.10^-4mol/L组胺下调HKC K10及内披蛋白表达,但与对照组无显著性差异（P＞0.05）.结论高浓度组胺阻抑HKC细胞周期进程、诱导[Ca^2＋]i增加及其显著的促凋亡作用可能是使HKC体外生长受抑的部分机制.在生理条件下,组胺可能具有调节表皮组织更新的作用;在炎症、损伤等病理条件下,大量的组胺可能抑制表皮的再生和KC的分化.     

系统性红斑狼疮皮损角质形成细胞体外培养及细胞学观察

【目的】体外培养系统性红斑狼疮(SLE)皮损部位角质形成细胞(KC),观察其细胞学特性&#65377;【方法】 原代培养SLE皮损和正常皮肤的角质形成细胞,倒置显微镜观察细胞的形态特点,免疫荧光法进行角蛋白检测并计算细胞纯度;两步消化法纯化细胞;CCK-8(cell counting Kit-8)评价细胞的增殖情况,绘制生长曲线&#65377;流式细胞仪观察细胞的生长周期和凋亡情况&#65377;【结果】使用K-SFM(serum-free keratinocyte medium)无血清培养基能成功体外培养SLE皮损的角质形成细胞,呈铺路石样&#65377;结合人工纯化,能达到 > 95%的纯度;与正常对照相比,SLE皮损角质形成细胞进入指数生长期较迟(7 d vs. 4 d),但进入后增长迅速,S期比例为: (40.68 ± 1.81)% vs. (34.43 ± 1.24)%(P < 0.05);凋亡率高:(6.08 ± 0.72)% vs. (4.32 ± 0.44)%(P < 0.05)&#65377;【结论】 SLE皮损角质形成细胞培养难度大,细胞的生物学行为存在异常,可能为SLE发病的独立&#65380;始发因素,其致病机制值得深入研究和探讨&#65377;     

白疕软膏对豚鼠银屑病样模型影响的研究

目的：探讨白疕软膏治疗银屑病的药效及作用机理。方法：采用5%心得安乳剂建立豚鼠银屑病样模型,观察白疕软膏对豚鼠银屑病样模型组织病理改变的影响;采用放射免疫法检测豚鼠银屑病样模型皮损中细胞因子IL-2、IL-6、IL-8的水平,观察白疕软膏对豚鼠银屑病样模型皮损中细胞因子的影响。结果：白疕软膏对豚鼠银屑病样模型组织病理改变有治疗作用。结论：白疕软膏对豚鼠银屑病样模型的治疗作用机理可能是通过对角质形成细胞增殖的抑制及对细胞因子的调节而发挥作用。白疕软膏是治疗银屑病的有效外用制剂,值得进一步研究和推广。     

三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡的实验研究

目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡的可能机制.方法 TCE处理NHEK后,分光光度法测细胞上清中半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8和9的活性,膜联蛋白V/碘化丙啶(PI)双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡,Rh123/PI双染后FCM测线粒体膜电位(△Ψm);用Caspase-3抑制剂或Caspase-9抑制剂预处理NHEK 1 h,验证Caspase的活化.结果 不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,Caspase-3和9活性呈剂量和时间依赖的升高,培养12、24 h,各TCE处理组Caspase-3和9活性与溶剂对照比差异均有统计学意义(均P<0.05),而Caspase-8活性变化不明显.0.125、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L TCE处理NHEK 4 h后培养12 h,膜联蛋白V~+/PI~-为(20.1±4.1)%、(30.0±7.5)%、(42.1±8.2)%、(56.0±6.1)%和(79.1±4.3)%,除0.125 mmol/L组外,其余组与溶剂对照组(9.4±3.0)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).膜联蛋白V~+/PI~-与Caspase-3和9活性都呈正相关(r=0.786、0.736,均P<0.05),Caspase-3活性与Caspase~活性也呈正相关(r=0.845,P<0.05),膜联蛋白V~+/PI~-和Caspase-3活性均与Caspase-8活性无相关.100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理使2.0 mmol/L TCE处理的NHEK中Caspase-3活性从(0.963±0.043)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1)下降为(0.349±0.045)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),膜联蛋白V~+/PI~-从(80.0±5.5)%下降为(16.3±3.2)%(P<0.01),Caspase-9活性变化不大(P>0.05).100μmol/L的Z-LEHD-FMK预处理不仅使得2.0 mmol/L TCE处理的NHEK中Caspase-3活性下降为(0.338±0.011)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),膜联蛋白V~+/PI~-下降为(16.1±1.7)%,而且Caspase-9活性也从(0.821±0.031)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1)下降为(0.240±0.043)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),差异有统计学意义(P<0.01).2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4 h后,Rh123荧光强度在培养4、8、12、24 h时均明显低于0 h(18.7±0.5,均P<0.01);0.125、0.5和2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4 h后培养8 h,Rh123荧光强度为16.1±0.5、12.1±0.6和8.1±0.6,均低于溶剂对照组(18.1±0.5,均P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,包括线粒体膜电位下降和Caspse-9依赖的Caspase-3的激活在内的内部凋亡途径可能发挥重要作用.     

银屑病PBMCs和角质形成细胞对胃蛋白酶消化前后的β-溶血型链球菌的反应

目的 :探讨链球菌M蛋白在银屑病发病中的可能机制。方法:以胃蛋白酶消化前后的链球菌悬液作用于银屑病外周血单一核细胞 (PBMCs) ,用MTT方法检测细胞的增殖反应 ;应用3H -TdR掺入法检测链球菌对人角质形成细胞株Colo -16的作用。结果:银屑病患者PBMCs对胃蛋白酶消化后链球菌悬液的增殖反应明显下降 (P<0.05) ,然而 ,即使是消化后的链球菌也可以引起银屑病PBMCs增殖反应 (P<0.05) ,而正常对照组没有发现有统计学意义的增殖反应。胃蛋白酶消化前的链球菌可以抑制角质形成细胞DNA合成 ,消化后的链球菌对角质形成细胞没有明显的作用。结论:银屑病患者存在M蛋白反应性T淋巴细胞 ,但也存在其他菌体蛋白参与发病过程的可能     

IFN-α对体外银屑病角质形成细胞分泌IL-10的影响

目的:观察IFN-α对银屑病角质形成细胞分泌IL-10的影响并探讨其在银屑病发病机制中的作用.方法:分别取银屑病患者的皮损(试验组,n＝28)及正常人的健康皮肤(对照组,n＝28),进行体外原代细胞培养获得角质形成细胞,然后加入高(100万单位 mL-1)、低(10万单位 mL-1)浓度的IFN-α进行培养,并设空白对照组,用ELISA法测定IFN-α作用96 h后培养液中IL-10水平.结果:试验组中高、低浓度IFN-α作用后角质形成细胞培养液中IL-10水平均低于空白对照组(P均＜0.05).对照组中高、低浓度IFN-α作用后培养液中IL-10水平均低于空白对照组(P均＜0.05).高浓度IFN-α作用后,实验组IL-10水平较对照组低(P＜0.05).结论:IFN-α可降低银屑病角质形成细胞分泌IL-10.     

组胺对人角质形成细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的 探讨组胺对体外培养人角质形成细胞(HKC)增殖、凋亡和分化的影响及其机制。方法 采用MTT法和蓝染色法检测组胺对HKC体外生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡,细胞DNA梯度降解法检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针技术检测HKC胞内游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i),SABC免疫细胞化学法检测HKC分化标志物角蛋白10(K10)及内披蛋白表达。结果 高浓度组胺抑制HKC生长,以10^-4mol/L抑制率最大(细胞存活率65.6%);低浓度组胺则促进HKC生长,以10^-8mol/L作用显著(细胞存活率130.7%)。10^-4mol/L组胺致HKCG0/G1期比例增高30.97%,S期比例减少73.81%,抑制G1/S期转换,并明显促进细胞凋亡,早期凋亡率18.64%明显高于对照组(5.60%,P<0.05)。10^-4mol/L组胺使HKC[Ca²⁺]_i上升58.9%,H2组胺受体拮抗剂西咪替丁则使[Ca²⁺]_i下降24.5%。10^-4mol/L组胺下调HKCK10及内披蛋白表达,但与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论 高浓度组胺阻抑HKC细胞周期进程、诱导[Ca²⁺]_i增加及其显著的促凋亡作用可能是使HKC体外生长受抑的部分机制。在生理条件下,组胺可能具有调节表皮组织更新的作用;在炎症、损伤等病理条件下,大量的组胺可能抑制表皮的再生和KC的分化。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡及相关凋亡基因的实验研究

目的从细胞凋亡角度探讨当归的成分当归多糖(ASP)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25μg/ml、250μg/ml、2500μg/mlASP,分别于第2、4、6d取细胞,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,观察细胞形态改变,免疫组织化学检测bc12、cmyc基因的表达。结果2500μg/ml的ASP对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系;ASP诱导细胞后bc12、cmyc均明显降低(P<0.05)。结论ASP对白血病细胞株K562细胞增殖具有显著抑制作用,bc12、cmyc表达降低可能是ASP诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

枸杞多糖抗家兔动脉粥样硬化的实验研究

目的:探讨枸杞多糖对新西兰兔动脉粥样硬化形成的作用及机制。方法:将40只雄性新西兰兔随机分为4组,每组10只,对照组喂普通饲料;模型组,普通饲料加质量分数为1.5%胆固醇喂养;枸杞多糖(LBP)组,普通饲料加质量分数为1.5%胆固醇喂养,同时按体重腹腔注射LBP(3.0mg/kg);卡托普利组,普通饲料加质量分数为1.5%胆固醇喂养,同时按体重灌喂卡托普利(15.0 mg/kg)。10周后,测定各组空腹血清三脂酰甘油(TG)、总胆固醇(TCh)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)、C反应蛋白(CRP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性,计算主动脉内膜粥样斑块面积并观察主动脉形态学变化。结果:模型组与对照组比较,TG、TCh、NO、MDA、ET-1、CRP明显升高(P<0.01),HDL-C/TCh、SOD活性明显下降(P<0.01),主动脉内膜粥样斑块面积较大;而LBP组与模型组比较,TG、CRP、NO、ET-1、MDA明显下降(P<0.01),TCh无明显变化,HDL-C/TCh比值、SOD活性明显升高(P<0.01),主动脉内膜粥样斑块面积明显减少(P<0.01),模型组与卡托普利组各项指标无差异。结论:枸杞多糖对动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,其机制可能与抗氧化、调节免疫、提高HDL-C/TCh有关。     

黄芪多糖在宿主抵抗李斯特菌中的作用

目的:观察黄芪提取物注射小鼠后,对小鼠抵抗单核细胞增生李斯特菌能力的影响。方法:水煮法提取黄芪多糖,配成悬液,腹腔注射感染李斯特菌的小鼠,并设对照,每组20只昆明鼠,观察小鼠的生存时间,脾脏的重量指数,脏器菌落计数,检测小鼠血清中抗体IgG水平,利用ELISA法测定小鼠脾脏释放的细胞因子。结果:注射黄芪多糖的小鼠,在30d观察期结束后仍有12只存活,而对照组只有2只存活。黄芪多糖组小鼠脾脏的重量指数(5.2±1.2),菌落计数(4.1±1.5)均比对照组的重量指数(11.0±0.9),菌落计数(8.8±1.3)明显降低。黄芪多糖组小鼠血清中抗体滴度(OD490)为0.38±0.05,对照组的抗体滴度为0.18±0.07。ELISA法测的黄芪多糖组小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ为(240±15)ng/L,对照组为(150±19)ng/L。结论:黄芪多糖能够增强宿主的体液免疫和细胞免疫来保护宿主抵抗胞内菌的感染。     

当归对心肌梗塞后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的:探讨当归对大鼠心肌梗塞后梗塞灶边缘区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、心梗组(MI组)、当归干预组(MI+Angelica 组)。经结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型,MI+Angelica组于造模24 h后,每日每只大鼠腹腔注射50%当归注射液3.5~4.0ml(含生药量1.75~2 g),MI组和 Sham组注射同等剂量的生理盐水,术后 1, 2, 3, 4 周处死动物。分别采用TUNEL染色及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡数、心肌细胞凋亡加速基因 Bax和凋亡抑制基因 Bcl 2 的蛋白表达水平。结果:① MI组和MI+Angelica组梗塞灶边缘区均有心肌细胞凋亡; 但MI+Angelica组心肌细胞凋亡数明显低于MI组(P< 0.01); ②与Sham组相比,MI组和MI+Angelica组Bax和Bcl 2基因的蛋白表达均明显升高,加入当归干预后,进一步增加Bcl 2基因的表达(与MI组比, P< 0.01),明显抑制Bax基因的表达(与MI组比, P< 0.01)。结论:心肌梗塞后梗塞灶边缘区有大量的心肌细胞凋亡,当归通过上调凋亡抑制基因Bcl 2和下调凋亡加速基因Bax的表达, 而抑制该区的心肌细胞凋亡, 进而减少梗塞灶边缘区心肌细胞的坏死, 有助于心肌梗塞的治疗和预防心肌梗塞后并发症的发生。     

当归多糖对小鼠实验性肝损伤的影响

目的观察当归多糖 (angelicasinensispolysaccharide ,ASP)对小鼠实验性肝损伤的影响。方法采用 5 0 %四氯化碳灌胃 (0 .1ml/ 10g) ,建立实验性肝损伤模型 ,分别测定对照组、四氯化碳组、大蒜素阳性对照组、当归多糖治疗组血清AST、GST活性及肝组织中MDA含量。结果当归多糖及大蒜素均能逆转四氯化碳肝损伤小鼠血清AST及肝组织内MDA升高 (均P <0 .0 1) ,而恢复到正常水平 ,并明显降低肝损伤小鼠血清GST活性 (P <0 .0 1) ;与大蒜素相比 ,当归多糖降低小鼠血清AST及GST活性更为显著 (P <0 .0 1)。结论当归多糖对小鼠四氯化碳肝损伤有良好的保护作用。当归多糖疗效优于大蒜素。     

软骨细胞三种凋亡模型的建立

为了观察药物对骨关节炎中软骨细胞凋亡的影响，建立了软骨细胞三种凋亡模型。将硝普钠(SNP)、全反式维甲酸(ATRA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分别加入软骨细胞培养体系，建立三种不同药物诱导的软骨细胞凋亡模型，采用Annexin v／PI双参数法以及透射电镜对软骨细胞凋亡进行定量、定性检测。在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol／L SNP，10^-4mol／L ATRA24h后，在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30μg／L人TNF-α24h后，均可成功建立软骨细胞凋亡模型。提示硝普钠、全反式维甲酸、肿瘤坏死因子-α加入软骨细胞培养体系中，可建立软骨细胞凋亡模型。     

枸杞多糖对人白血病K562细胞株凋亡作用的基础研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）抑制人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞增殖的作用机制,研究LBP-X对K562细胞凋亡的影响,探讨LBP-X与三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡的剂量对应关系.方法 用LBP-X、As2O3处理K562细胞,四氮甲唑蓝（MTT）比色法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例.结果 LBP-X对K562细胞的IC50约为227.50 μg/ml,经LBP-X作用后,K562细胞呈现凋亡的形态学改变.流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为8.43%-57.92%.结论 LBP-X对K562细胞有抑制作用,并能诱导其发生凋亡.LBP-X对K562细胞的效能和效价强度约为As2O3的1/1 000.     

中药干预对剥夺性豚鼠近视动物模型的实验研究

目的：观察在中医理论指导下应用中药方剂对小样本实验性豚鼠近视眼的影响。方法：将15只豚鼠随机分为正常对照组（Ⅰ组）3只、单纯近视诱导组（Ⅱ组）5只、中药喂养近视诱导组（Ⅲ组）7只。Ⅱ、Ⅲ组缝合豚鼠单眼诱导形觉剥夺性近视眼模型;A超测量眼球各项指标、免疫组织化学荧光染色和Western blot印迹法检测基质金属蛋白酶-2在视网膜中的含量。结果：三组间双眼前房深度（AC）,晶体厚度（L）,玻璃体腔深度（V）及眼轴长度（AL）值比较,右眼（近视诱导眼）V及AL值有显著性差异;三组豚鼠右眼V及AL值两两比较发现,各组间均有显著性差异。结论：中药干预可减轻豚鼠形觉剥夺性近视的进展,其途径可能是直接或间接诱导视网膜色素上皮-脉络膜层MMP-2表达减少,从而抑制或减少了巩膜细胞外基质降解,中医阴阳辨证理论对近视眼的研究有一定指导意义。     

丹参注射液对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的 研究丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响.方法 将72只健康豚鼠随机分成正常组、假手术组、丹参干预假手术组、模型组和干预组,采用组织化学法观察缺血再灌注不同时间点耳蜗各部位的组织学改变;用原位凋亡法观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况.结果 正常组、假手术组、丹参干预假手术组豚鼠内耳罕见凋亡细胞.模型组Corti器、血管纹、螺旋神经节在缺血及再灌注各个时间点上均有细胞凋亡;干预组Corti器、血管纹、螺旋神经节在缺血及再灌注各个时间点上均有细胞凋亡,凋亡指数较模型组降低(P＜0.05).结论 丹参使凋亡细胞减少,对缺血再灌注损伤后的耳蜗起保护作用.     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察

目的观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因毛细胞凋亡或毛细胞坏死.